上海市吴淞地区大气PM2.5两种提取成分的细胞毒性研究

[目的]研究上海市吴淞地区大气细颗粒物（PM2.5）两种提取成分（有机和无机提取成分）的细胞毒性。[方法]采用滤膜法采集上海市吴淞地区大气中PM2.5，以中国仓鼠肺成纤维细胞（chinese hamsterfibroblast cell line，CHL）为靶细胞研究PM2.5，有机及无机提取成分对细胞活力、代谢的影响及氧化损伤毒性，具体包括细胞形态、活力和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平的测定。[结果]上海市吴淞地区大气PM2.5的有机和无机两种提取成分分别以10、50、100、200μg/ml浓度染毒CHL细胞10h，结果显示随着染毒剂量的增加细胞形态损伤加剧，细胞存活率、SOD含量呈下降趋势，LD和MDA则呈上升趋势，LDH则呈现先升后降趋势。与阴性对照组相比，200μg／ml染毒组的LD含量的升高同100、200μg/ml组的LDH和MDA含量的升高及SOD水平的下降均具有统计学显著性（P〈0．05）～除200μg/ml染毒组，有机提取成分要高于无机提取成分所染毒细胞的生长抑制率外，其他各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在两种染毒成分之间尚不能认为有差别。[结论]上海市吴淞地区PM2.5，的有机及无机提取成分均具有一定的细胞毒性。     

乌鲁木齐市大气细颗粒物水溶成分和非水溶成分对人正常肺上皮细胞的毒性作用

目的用大气细颗粒物(PM_(2.5))染毒人正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞),探讨大气细颗粒物(PM_(2.5))不同成分对人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)的细胞毒性和氧化损伤。方法采集乌鲁木齐市大气细颗粒物(PM_(2.5)),实验细胞为人正常肺上皮细胞株BEAS-2B细胞。为比较细颗粒物不同成分对细胞毒性的大小,超声震荡洗脱石英纤维滤膜中的细颗粒物,分析其水溶成分和非水溶成分的毒性。结果对PM_(2.5)中水溶成分和非水溶成分进行剂量为50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L的浓度染毒,结果显示水溶成分的细胞毒性高于非水溶成分(P0.01)。结论大气细颗粒物(PM_(2.5))可导致细胞损伤,并且组成成分的不同可以导致其对细胞毒性的差异。     

柴油车尾气颗粒物提取物对V79细胞内游离钙离子的影响

目的 探讨柴油车尾气颗粒物有机提取物（DEPE）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）胞内游离Ca^2＋[Ca^2＋]i的影响及其机制.方法 采用Ca^2＋指示剂Fura-2/AM荧光负载检测技术,研究DEPE对细胞内[Ca^2＋]i浓度的影响.结果 在一定剂量范围内,随着DEPE染毒剂量增加或时间延长,细胞内[Ca^2＋]i浓度升高,与胞内钙库释放和胞外Ca^2＋内流有关,并以胞外Ca^2＋内流为主.结论 DEPE能致细胞内[Ca^2＋]i升高,氧化损伤是导致细胞内[Ca^2＋]i升高的机制之一.     

醋酸铅染毒对TK6细胞氧化损伤作用及亚硒酸钠的保护效应

目的 研究亚硒酸钠对醋酸铅致TK6细胞氧化应激损伤的保护效应。方法 培养TK6细胞,调整细胞密度为1×106/ml,试验分3组,正常对照组、醋酸铅染毒组和亚硒酸钠干预组,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测细胞内丙二醛（MDA）含量和高度水溶性四唑盐（WST-1）法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 在醋酸铅染毒和0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,3组细胞内ROS含量、MDA含量和SOD含量的比较,差异均有统计学意义(F 分别为36.706,0.050,23.051,均P＜0. 01),其中醋酸铅染毒后,TK6细胞内ROS含量和MDA含量增高,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,细胞内ROS含量和MDA含量下降,与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;醋酸铅染毒后,TK6细胞内SOD含量降低,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,SOD含量上升,与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 醋酸铅染毒对TK6细胞有氧化损伤作用, 0.01 μg/ml亚硒酸钠对醋酸铅氧化损伤毒性具有拮抗作用。     

牛磺酸对甲基汞致大鼠脑氧化损伤的保护作用

[目的]探讨甲基汞致大鼠脑氧化损伤及牛磺酸对氧化损伤的保护作用。[方法]将24只健康清洁级Wistar大鼠按体质量随机分为4组,每组6只,分别为对照组、低剂量染汞组、高剂量染汞组和牛磺酸干预组。周一至周五每天进行染毒,对照组腹腔注射生理盐水,低剂量染汞组腹腔注射4μmol/kg氯化甲基汞,高剂量染汞组和牛磺酸干预组腹腔注射12μmol/kg氯化甲基汞;每周一、三、五染毒前2h进行预处理,对照组、低剂量染汞组和高剂量染汞组皮下注射生理盐水,牛磺酸干预组皮下注射1mmol/kg的牛磺酸;连续进行4周,最后一次染毒后,处死大鼠。取大脑皮质测定：活性氧（ROS）、巯基、羰基、丙二醛（MDA）的含量,超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的活性及细胞凋亡率。[结果]与对照组比较,低、高汞组大鼠的体质量增长幅度降低（P〈0.05,P〈0.01）;ROS分别是其1.8和3.9倍（均P〈0.01）;SOD和GSH-px的活性均降低;巯基的含量降低;羰基的含量升高;MDA增加;细胞凋亡率分别升高3.4和10.0倍。牛磺酸干预组与高剂量染汞组比较,ROS的生成量降低了17%;SOD、GSH-px的活性有不同程度的升高;巯基、羰基和MDA的含量也有不同程度的改变;细胞凋亡率为高汞组的44%。[结论]甲基汞可导致脑氧化损伤,牛磺酸对甲基汞所致氧化损伤具有一定的保护作用。     

污灌玉米中有机污染物对小鼠的遗传毒性及氧化损伤作用

[目的]研究污灌玉米中有机污染物对小鼠的遗传损伤及其氧化损伤机制。[方法]选取某污灌农田产出的玉米为研究对象,地下水灌溉的玉米为对照,采用超声振荡法提取玉米中的有机污染物,对小鼠灌胃法染毒（共分为5组,每组8只：试剂对照组、对照区低剂量组、对照区高剂量组、污灌区低剂量组、污灌区高剂量组）。每日染毒1次,染毒剂量：低剂量组相当于10g玉米干重／（kg·d）,高剂量组相当于60g玉米干重／（kg·d）。连续染毒2周后,进行单细胞凝胶电泳试验、微核试验并测定总超氧化物歧化酶（T—SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛（MDA）含量。[结果]与试剂对照组比较,对照区各组的T-SOD活力均降低（P〈0．05）;污灌区拖尾率、拖尾长度及微核率均增高,且高于对照区（P〈0．05）;污灌区T—SOD和GSH-PX活力均降低（P〈0．05和P〈0．01）,且低于对照区（P〈0．05）。[结论]该污灌区玉米有机提取物中含有致小鼠遗传毒性及氧化损伤的有机污染物,其毒性强于对照区。     

大气细颗粒物及其水提物对人支气管上皮细胞的氧化损伤效应

目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)及其水提物对人支气管上皮细胞(HBE)的毒性和氧化应激效应。方法采集杭州地区某地PM2.5并提取其中水溶性成分,分别用0、100、250、500、1 000、1 500和2 000μg/m L PM2.5及其水提物对HBE细胞进行染毒,采用CCK-8法检测细胞毒性。通过对染毒后细胞匀浆液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的测定,评估PM2.5及其水提物对HBE细胞氧化损伤效应及氧化应激反应的影响。结果随着PM2.5及其水提物染毒剂量的增加,HBE细胞活力逐渐下降,并具有明显的剂量-效应关系(P0.05)。在相同剂量下,PM2.5的细胞毒性大于其水提物毒性(P0.05)。与阴性对照组相比,PM2.5 200、400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05);而水提物400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05)。结论 PM2.5及其水提物对HBE细胞均具有细胞毒性作用,并且能引起细胞的氧化应激反应。     

介孔纳米SiO2致小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞毒性与氧化损伤

[目的]探讨介孔纳米SiO2对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞的毒性和氧化损伤作用。[方法]设4个浓度组（2.5、10、50、100I.tg／mL）和生理盐水对照组,染毒24h后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法观察细胞毒性,并根据染毒后细胞的总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的变化情况分析介孔纳米SiO2的细胞毒性和氧化损伤作用。[结果]10、50和100μg／mL浓度组细胞存活率随着染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义;50、100μg／mL浓度组细胞及其上清液中TP、LDH、NO和MDA含量随染毒浓度增加而升高,而GSH和SOD含量降低;而且与细胞发生融解破碎、间隙加大等形态学改变情况相符。[结论]介孔纳米SiO2对体外培养巨噬细胞株RAW264.7具有细胞毒性和氧化损伤作用,且随剂量的加大而增强。     

污灌土壤中有机污染物对小鼠肝肾组织的氧化损伤

[目的]研究污灌土壤中有机污染物对小鼠肝肾组织的氧化损伤。[方法]选取某污灌农田土壤为研究对象（下称“污灌区”）,地下水灌溉农田的土壤为对照（下称“对照区”）,采用超声振荡法提取土壤中的有机污染物,对小鼠实验灌胃法染毒,共分为5组：试剂对照组（用二甲基亚砜染毒）,对照区低、高剂量组,污灌区低、高剂量组,每日染毒1次,连续染毒2周。测定肝、肾组织的总超氧化物歧化酶（T-SOD）,丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）。[结果]污灌区高剂量组肝组织的MDA含量（中位数为1．18nmol／mg）,GSH-Px活性（中位数为239．97U／mg蛋白质）,低、高剂量组T-SOD活性（中位数分别为119．70U／mg蛋白质和76．72U／mg蛋白质）及肾组织的GSH-Px活性（中位数为133．12U／mg白质）均低于试剂对照组（P〈0．05或P〈0．01）。[结论]该污灌区土壤有机提取物可导致小鼠肝肾组织的氧化损伤。     

滴滴涕与纳米二氧化钛对人胚肝细胞DNA损伤作用的协同效应

[目的]观察滴滴涕（DDT）及纳米二氧化钛（nano-TiO2）单独及联合体外染毒对人胚肝细胞株（L-02）内活性氧（ROS）含量及DNA损伤的影响。[方法]生长良好的L-02细胞,分别加入0.001、0.01、0.1μmol/L的DDT,0.01、0.1、1μg/mL的nano-TiO2,以及上述各浓度的DDT和nano-TiO2联合剂量,染毒时间均为24 h;运用DCFH-DA作为荧光探针,采用流式细胞检测技术检测DDT与nano-TiO2联合作用下L-02细胞内ROS含量,运用碱性和中性两种彗星试验检测各组DNA断裂损伤程度。[结果]0.01μmol/L以上浓度组DDT单独作用24 h引起ROS升高（P〈0.05）和DNA损伤增加（P〈0.05）;各浓度nano-TiO2单独染毒均不能引起DNA损伤增加（P〉0.05）,但1μg/mL单独染毒可引起ROS升高（P〈0.05）。各剂量组单独染毒24 h后均无明显的DNA双链损伤（P〉0.05）,但可导致DNA单链断裂损伤。析因分析结合反应曲面模型显示两种受试物联合染毒可协同增加ROS水平与DNA损伤作用（P〈0.05）。[结论]DDT和nano-TiO2联合作用可协同增加各自对DNA单链断裂水平的影响,诱导产生ROS导致DNA损伤是DDT和nano-TiO2引起机体损伤的主要机制之一。     

富勒烯对中国仓鼠肺成纤维细胞的氧化损伤作用

目的探讨富勒烯（C60）对中国仓鼠肺成纤维（CHL）细胞的氧化损伤作用。方法用不同浓度的C60（0、1．25、2．5、5、10、20和40μg／mL）染毒24h,四甲基偶氮唑盐实验检测C60对CHL细胞的增殖抑制作用,并检测细胞内LDH释放率及SOD、CAT活性和GSH、MDA、ROS含量。结果C60染毒组细胞生存率下降,10、20、40μg／mLC60染毒组细胞存活率与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。CHL细胞中LDH释放量上升,且各染毒组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．01）。各染毒组随染毒浓度增加SOD、CAT活性降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．01）。GSH含量降低,但仅C6040μg／mL染毒组,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。MDA含量增加,10、20、40μg／mL剂量组,与对照组比较差异均具有统计学意义（P〈0．01）。ROS含量有不同程度的升高,与对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论C60可引起中国仓鼠肺成纤维细胞损伤,可能是通过氧化应激介导。     

单壁碳纳米管诱导人支气管上皮细胞的氧化损伤和凋亡

[目的]研究单壁碳纳米管（single-walled carbon nanotubes,SWCNTs）对人源支气管上皮细胞株（BEAS-2B）氧化应激和细胞凋亡的影响。[方法]采用生长状态良好的BEAS．2B,分别以含0、10、50、100、200μg／mLSWCNTs的培养液处理24、48h。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测SWCNTs对BEAS-2B细胞活力的影响;采用荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸（DCFH-DA）进行活性氧（ROS）检测;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用可见光法测定过氧化氢酶（CAT）活性;采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）的含量;采用二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;采用阳离子荧光染料罗丹明123测定线粒体膜电位;采用pNA法检测细胞内caspase-3的蛋白活性;Real-timePCR测定细胞内bax和bcl-2基因的表达变化。[结果]当处理浓度大于10p#mL时,SWCNTs可诱导BEAS-2B细胞存活率下降,细胞内ROS含量增加,线粒体膜电位减低,MDA升高,抗氧化酶系（SOD、CAT、GSH-Px）酶活性降低,caspase-3蛋白活性增加,bax在转录水平上表达量增加,bcl-2表达量降低,各实验结果均呈效应随浓度变化的趋势（P〈0．05）。[结论]SWCNTs能够诱导BEAS-2B细胞的氧化损伤和细胞凋亡。     

汽车尾气对大鼠肺脏的氧化应激和遗传毒性作用

[目的]探讨汽车尾气对大鼠肺脏生物大分子的氧化损伤作用。[方法]将汽车尾气的颗粒物、冷凝物和半挥发性有机物的二氯甲烷提取物（extracts of gasoline engine exhaust,EGE）减压挥干后用二甲亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）定容到200L／mL。将40只SD大鼠分为5组,每组8只。以DMSO为溶剂对照,以汽车尾气0、5．6、16．7、50．0L／kg的剂量经气管滴注染毒,每周1次,共4次,末次染毒24h后处死,测定肺脏脏器系数以及肺组织内丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羰基蛋白（carbonyl protein,CP）含量以及超氧化物岐化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH—Px）活力;并用彗星试验检测肺组织细胞中DNA的损伤程度。[结果]各组动物体重和肺脏脏器系数与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;16．7、50．0L／kg剂量组肺组织中MDA含量分别达到了4．57、4．48nmol／mg蛋白,故对照组明显升高（P〈0．05）;CP含量在50．0L／kg剂量组为8．91μmol／mg蛋白,较对照组明显增加（P〈0．05）;SOD和GSH—Px活力在50．0L／kg剂量组分别为1697．61NU／mg蛋白和14．80U／mg蛋白,与对照组比较均明显降低（P〈0．05）。在16．7L／kg和50．0L／kg组,肺组织细胞的拖尾率与对照组比较均明显增加（P〈0．05）,但各组尾长的增加无统计学意义。[结论]汽车尾气可诱导大鼠肺组织生物大分子的氧化损伤和DNA单链断裂。     

五味子乙素对苯并芘致HTR8-SVneo细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究环境污染物苯并芘（BaP）致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo氧化损伤的作用机制,探讨五味子乙素（Sch B）的可能保护作用。方法：本实验分为空白组、BaP组、Sch B不同浓度组（0.1,0.5,2.0 μmol/L）,以HTR8-SVneo 细胞为载体,构建BaP氧化应激损伤模型,测定氧化和抗氧化指标。结果：与空白组比较,BaP组超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的浓度显著降低,而乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的浓度明显增加（P＜0.05）。不同剂量Sch B组SOD、GSH-Px的浓度明显提高,LDH、MDA、NO、iNOS的浓度减少,与BaP组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Sch B能调节BaP所致的HTR8-SVneo细胞氧化系统和抗氧化系统的失衡,从而预防BaP致HTR8-SV neo细胞的氧化损伤。     

纳米二氧化钛颗粒诱导人肺Ⅱ型上皮细胞活性氧的研究

[目的]观察纳米二氧化钛（Nano-TiO2）颗粒诱导细胞内活性氧（ROS）的产生情况。[方法]采用直径5nm锐钛型Nano-TiO2颗粒和直径〈10nm、长度40nm金红石型Nano-TiO2颗粒为研究材料,选择细胞质和线粒体部位ROS特异荧光探针二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）及双氢罗丹明123（DHR123）,用流式细胞仪测定10、20、40gg／mL不同晶型和粒径的Nano-TiO2颗粒在人肺Ⅱ型上皮（A549）细胞作用不同时间所产生的荧光强度。并在5～1600g／mL浓度下,用中性红方法测定两种Nano-TiO2颗粒的细胞毒性。[结果]锐钛型Nano-TiO2颗粒和金红石型Nano-TiO2颗粒诱导细胞质和线粒体内ROS结果基本相同,作用5min就可检测到ROS,一直持续到2h,而高剂量组诱导ROS大于低剂量组。锐钛型Nano-TiO2颗粒产生ROS峰值在30min,而金红石型Nano-TiO2颗粒产生ROS峰值在60min。用流式细胞仪检测ROS实验中意外出现纳米颗粒峰,峰值高低与纳米颗粒诱导ROS荧光强度反应一致,表明ROS反应与染毒剂量成正比关系,可在同一检测中得到证明。而在实验中未发现两种Nano-TiO2颗粒存在细胞毒性。[结论]Nano-TiO2颗粒可以诱导细胞质和线粒体内ROS产生。     

多壁碳纳米管致大鼠急性肺毒性

[目的]探讨多壁碳纳米管（multi-wall carbon nanotubes，MWCNTs）对Wistar大鼠的急性肺毒性作用。[方法]用脱氧核苷酸钠盐（deoxyribonucleic acid sodium salt，DNA钠盐）提高MWCNTs的分散度，设3个浓度组（2、10、20mg／mL）和空白对照组及溶剂对照组，采用气管滴注的方法染毒，一次滴注量为1．5mL／kg体重，每天1次，连续滴注3d，染毒结束后24h，计算肺灌洗液中各类白细胞百分比，测定乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、灌洗液中总蛋白（TP）等细胞毒性及谷胱苷肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物岐化物（SOD）等细胞氧化损伤指标，并观察肺病理改变。[结果]中、高剂量染毒组肺灌洗液中细胞分类计数中性粒细胞和淋巴细胞较对照组有不同程度的升高，差异有统计学意义；随着染毒剂量的增加，肺泡灌洗液中TP、AKP、LDH和MDA含量随之升高，而GSH和SOD含量随之降低，且各个指标的变化呈一定的剂量-效应关系。肺组织病理显示炎症性病变，主要表现为单核细胞和淋巴细胞浸润，尘细胞聚集，黏膜损伤和血管出血等。[结论]MWCNTs具有致大鼠急性肺毒性的作用。     

锌硒锰镁联合拮抗二氧化硅致肺泡巨噬细胞毒性的作用

[目的]观察葡萄糖酸锌（ZnG）、亚硒酸钠（Na2SeO3）、氯化锰（MnCl2）和硫酸镁（MgSO4）联合作用对二氧化硅（SiO2）致肺泡巨噬细胞（AM）中过氧化氢（H2O2）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）水平变化的影响，寻找4者的最佳剂量组合。[方法]采用大鼠肺灌洗法纯化获得AM（1×10^9个／mL），同时加入SiO2及不同浓度的ZnG＋Na2SeO3＋MnCl2＋MgSO4溶液组合，另设不加组合溶液的SiO2对照组和阴性对照组。37℃，5％CO2培养箱培养18h后，检测上述5种指标。[结果]与SiO2对照组比较，ZnG、Na2SeP3、MnCl2与MgSO4联合使用均可明显降低AM中H2O2、MDA含量，升高GSH—Px、SOD和CAT的活性（P〈0．01），且以1．5mg／L的ZnG、1．0μmol／L的Na2SeO3、1．0mg／L的MnCl2、和0．5μmol／L的MgSO4联合作用效果最好。极差分析结果表明，对GSH—Px、SOD的影响，Na2SeO3的作用强于ZnG、MnCl2和MgSO4；对H2O2、MDA的影响，ZnG的作用强干Na2SeO3、MnCl2与MgSO4；对CAT的影响，MnCl2、ZnG的作用则要强于Na2SeO3与MgSO4。[结论]ZnG、Na2SeO3、MnCl2与MgSO4联合应用可明显拮抗SiO2粉尘所致AM的氧化损伤。