目的 研究MicroRNA-219-5p（miR-219-5p）靶向E-钙黏蛋白（E-Cadherin）调控上皮间质转化（EMT）抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法 首先通过生物信息学方法,寻找与E-Cadherin结合特异性最好、稳定性强的miRNAs。在30例肝癌组织和20例癌旁肝组织中,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-Cadherin的表达水平;实时荧光定量PCR检测（qRT-PCR）miR-219-5p表达,分析两者之间的相关性。在高转移和低转移的肝癌细胞株中,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin表达。采用Lipofectamine 2000将miR-219-5p 模拟子（mimic）、抑制子（inhibitor）、阴性对照组（negative contral）转染到肝癌HepG2细胞系,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin的表达;Transwell方法检测miR-219-5p表达改变对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。结果 生物信息学发现miR-219-5p与E-Cadherin结合最稳定,且特异性最好。肝癌组织中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达,而癌旁组织中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达。高转移细胞株中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达而N-cadherin高表达,在低转移细胞株中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达而N-cadherin低表达（P <0.05）。miR-219-5p水平表达增高,引起E-Cadherin表达下调,N-cadherin高表达;miR-219-5p表达下调,可引起E-Cadherin表达上调,N-cadherin低表达（P <0.05）;HepG2-miR-219-5p 模拟子细胞株中侵袭细胞计数为（24±3）个/高倍镜视野,明显低于对照组细胞株（P <0.05）。结论 miRNA-219-5p可通过靶向结合E-Cadherin,调控EMT信号通路,抑制肝癌细胞的侵袭转移。
相似文献摘要：目的 研究瑞舒伐他汀是否可以抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）表型转化及其机制。方法 SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。用不同浓度的瑞舒伐他汀干预VSMCs,Western blot检测各组标本中骨骼肌肌动蛋白（SM-actin）、平滑肌22α（SM-22α）、滑肌肌球蛋白重链（SM- MHC）、骨桥蛋白（OPN）的表达,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况,划痕试验观察细胞迁移情况。通过免疫组织化学法（ICC）检测SM-actin的表达从而观察VSMC的形态。转染过表达KLF-4或空白对照质粒至离体培养的VSMCs中,用瑞舒伐他汀干预,并采用上述实验方法检测VSMCs表型转化情况。结果 MTT结果显示,与对照组比较,瑞舒伐他汀组VSMCs增殖能力降低,差异有统计学意义（P <0.05）。划痕试验结果显示,与对照组比较,他汀组VSMCs迁移减少,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blot检测显示,与对照组比较,他汀组VSMCs中SM-22α、SM-MHC、OPN表达增多,差异有统计学意义（P <0.05）。ICC结果显示,与对照组VSMCs的细胞形态比较,他汀组VSMCs形态变细、变长。转染KLF-4过表达质粒后,与对照组比较,转染KLF-4过表达质粒可以增加VSMCs的增殖和迁移,差异有统计学意义（P <0.05）,逆转他汀对VSMCs表型转化有抑制作用。结论 瑞舒伐他汀通过下调KLF-4,抑制大鼠主动脉VSMCs表型转化。
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目的 研究microRNA-599（miR-599）在曲张静脉中的表达，探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B（PDGF-BB），抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化。方法 收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本，通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达；Western blot检测两组标本中SM- actin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达；在细胞实验中，转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中，Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达，噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移，利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果 相比于正常静脉组织，miR-599在曲张静脉中的表达降低（F =73.012，P =0.001）。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较，差异无统计学意义。相比于正常静脉组织，曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低（P <0.05），OPN的表达升高（F =56.414，P =0.009）；在细胞实验中，相比于对照组，miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高（P <0.05），OPN的表达降低（F =27.353，P =0.022），细胞增殖减少（F = 37.824，P =0.016），迁移减少（F =69.365，P =0.001），PDGF表达量减少（F =55.345，P =0.004）。荧光素酶试验结果显示，miR-599能够降低PDGF-3''-UTR质粒的荧光素活性（F =21.429，P =0.036）。结论 在曲张静脉组织中，miR-599低表达。在VSMCs中，miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。
相似文献目的 探讨microRNA-132（miR-132）对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用。方法 通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验。以细胞计数检测（CCK-8）、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响。结果 LOVO细胞中，外源性过表达miR-132能够抑制其生长，且抑制率呈时间、浓度依赖性，50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后，抑制率达30%。流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡。miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力。体外平板克隆形成实验显示，miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21%降至7%。划痕修复实验结果显示，高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低。结论 miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖，还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力。
相似文献摘要：目的 探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果 CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论 miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。
相似文献目的 观察microRNA-200b（简称miR-200b）在上皮性卵巢癌（EOC）患者卵巢组织以及血浆中的表达水平，探讨miR-200b对卵巢癌细胞侵袭迁移的影响。方法 选取2014年12月-2015年12月郑州澍青医学高等专科学校附属医院经病理确诊为EOC患者36例（EOC组），另选取同期因子宫肌瘤或子宫腺肌病及其他非卵巢病变行手术切除者共20例作为对照组。采用实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测EOC患者和正常对照组卵巢组织中及血浆中miR-200b表达水平，人卵巢癌细胞SK-OV-3转染miR-200b抑制物后，采用transwell法观察细胞侵袭能力，并采用qRT-PCR和Western blot检测MMP-9的mRNA及蛋白表达水平。结果 miR-200b在上皮性卵巢患者卵巢组织及血浆中的表达水平均显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P <0.01）；miR-200b抑制物可明显降低SK-OV-3细胞迁移能力，差异有统计学意义（P <0.01）；且MMP-9的mRNA及蛋白水平均明显降低（P <0.01）。结论 miR-200b在上皮性卵巢癌组织中高表达，miR-200b可能通过影响MMP-9来促进卵巢癌细胞的侵袭迁移。
相似文献目的 探讨microRNA-134（miR-134）在乳腺癌中的表达及其影响乳腺癌迁移、侵袭能力的分子机制。方法 选取2013年1月-2015年2月于本院乳腺病科行手术切除并经病理检查证实的乳腺导管内原位癌组织30例、乳腺浸润性导管癌组织35例及正常乳腺组织15例。通过实时定量聚合酶链式反应法分别检测miR-134在肿瘤和正常乳腺组织中的表达,统计分析miR-134表达与患者临床特征间的相关性;通过miR-134模拟物转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用细胞划痕愈合试验评价过表达miR-134对细胞迁移能力的影响,采用Transwell侵袭小室试验评价过表达miR-134后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化。通过免疫组织化学染色检测miR-134与下游潜在靶点叉头框蛋白M1蛋白表达关系,实时定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹检测转染miR-134模拟物后其下游潜在靶点叉头框蛋白M1及下游效应分子人基质金属蛋白酶2的表达变化。结果 miR-134在正常乳腺组织、乳腺导管内原位癌组织及乳腺浸润性导管癌组织中的表达量依次降低（P <0.05）。乳腺癌组织中低水平的miR-134与肿瘤淋巴结转移及高TNM分期显著相关（P <0.05）;在体外试验中,过表达miR-134能够显著降低MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）;免疫组织化学染色结果证实miR-134与叉头框蛋白M1蛋白的表达呈负相关关系（P <0.05）;实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印记结果显示,过表达miR-134后可显著抑制乳腺癌细胞中叉头框蛋白M1及人基质金属蛋白酶2的表达水平（P <0.05）。结论 miR-134在乳腺癌组织中表达下调,miR-134可能通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2的表达来抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭。
相似文献目的 研究microRNA-195（miR-195）在患者血清及胃癌组织中的表达水平,并探讨其表达水平与胃癌临床病理的关系。方法 选取该院62例胃癌患者为研究组,同期来该院体检的36例健康人群为对照组,采用RT-PCR法检测两组人群血清中以及胃癌组织及对应癌旁组织中的miR-195的表达水平,并探讨miR-195与临床病理参数的相互关系。结果 研究组血清中miR-195的表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。miR-195在胃癌组织中的表达水平亦显著低于对应的癌旁组织,差异有统计学意义（P <0.05）;相关分析结果显示,miR-195的低表达与胃癌浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移相关,差异有统计学意义（P <0.05）,而与肿瘤部位均无相关（P >0.05）。结论 miR-195在胃癌患者中的低表达可能对胃癌的发生发展有一定的促进作用。
相似文献目的 检测姜黄素对结肠癌细胞中微小RNA 211（microRNA 211,miR-211）表达的影响并探讨miR-211调控结肠癌细胞增殖和凋亡的可能机制。方法 使用MTT法和流式细胞术检测不同浓度姜黄素在不同时间点对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响;使用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测不同浓度姜黄素对结肠癌细胞中miR-211表达的影响;使用生物信息学预测miR-211下游靶基因TP53INP1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合;用miR-211模拟物（miR-211 mimics）检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖的影响,同时使用Western blot法检测其对TP53INP1蛋白表达的影响;用TP53INP1小干扰RNA检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果 相较于未处理组,姜黄素在10～50 μmol/L浓度可抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡（P <0.05）。姜黄素可抑制肿瘤细胞中miR-211的表达,并具有时间和剂量依赖性（P <0.05）;此外,miR-211下游靶基因TP53INP1蛋白表达量上调（P <0.05）。用miR-211转染结肠癌细胞可逆转姜黄素对其增殖的抑制作用,并且TP53INP1表达下调（P <0.05）;用TP53INP1小干扰RNA可逆转姜黄素对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响（P <0.05）。结论 姜黄素可通过下调miR-211抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并且TP53INP1是miR-211下游调控蛋白之一。
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