南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增导致的吉非替尼耐药体外研究

目的研究南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增所致吉非替尼耐药机制。方法应用MTT法检测不同浓度南方红豆杉水提物(0.25、0.5、1、2、4 mg/mL)和吉非替尼(3、6、12、18、30μmol/L)对H1975、H820细胞株增殖的影响,根据结果筛选最佳后续实验药物浓度,计算各组半数抑制浓度(IC_(50))和两药联合指数(CI);将对照组(1640培养液)、南方红豆杉组(0.25μmol/L)、吉非替尼组(3μmol/L)及联合组(南方红豆杉0.25μmol/L+吉非替尼3μmol/L)H1975和H820细胞药物处理72 h后,采用Western Blot检测EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达,采用qRT-PCR检测EGFR、PI3K及AKT mRNA表达。结果在H1975和H820细胞中联合组达到IC_(50)所需的吉非替尼浓度明显小于吉非替尼组,且CI1。在H1975细胞中,与对照组比较,南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低(P0.01,P0.05),吉非替尼组AKT蛋白表达降低(P0.05),联合组EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达降低(P0.01,P0.05)。与吉非替尼组比较,南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、p-AKT蛋白表达降低(P0.01),联合组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。在H820细胞中,与对照组比较,南方红豆杉组EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达下调(P0.01),联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。与吉非替尼组比较,南方红豆杉组EGFR、p-AKT蛋白表达降低(P0.01,P0.05),联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。在H1975及H820细胞中,与对照组比较,吉非替尼组AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01,P0.05),南方红豆杉组及联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01)。与吉非替尼组比较,联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01)。结论南方红豆杉水提物能增强吉非替尼对H1975、H820细胞增殖抑制作用,可抑制T790M突变和c-MET扩增所致的吉非替尼耐药,其机制与抑制EGFR/PI3K/AKT通路有关。     

熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的 研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法 以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/...     

基于PI3K/AKT信号通路的谷红注射液抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的基于PI3K/AKT信号通路,探讨谷红注射液(guhong injection,GHI)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法培养H9c2心肌细胞,CCK-8比色法筛选GHI实验剂量。将细胞随机分为8组:正常组、模型组、GHI低、中、高剂量组(30、60和90μL·mL^-1)、阳性药组(维拉帕米注射液7.5μL·mL^-1)、GHI+LY294002(PI3K抑制剂)组和LY294002组。除正常组外,其他组均建立缺氧4 h复氧16 h的H/R损伤模型。ELISA检测各组细胞内肌酸激酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测各组细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT及GSK-3β蛋白表达水平。结果与模型组相比,各给药组LDH、CK-MB均降低(P<0.05),MDA降低(P<0.01)、SOD升高(P<0.01)。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均升高(P<0.01)。给予LY294002后,与模型组相比,LDH、CK-MB、MDA及SOD无显著性差异,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论GHI可以明显减轻H/R对H9c2心肌细胞造成的损伤,表现出抗氧化应激与抗凋亡的作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制研究

目的探究苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制。方法对人肺癌A549细胞进行培养,培养后分为对照组、低浓度组、中浓度组以及高浓度组,对照组中加入生理盐水,分别向低浓度组、中浓度组以及高浓度组,加入浓度为30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L的苦参碱,作用48小时后采用流式细胞仪及MTT检测法检测A549细胞凋亡情况,计算生长抑制率,并采用Western Blotting和real time PCR检测PI3K、p-AKT蛋白以及PI3K、AKT mRNA表达水平,比较四组之间的差异。结果高浓度组、中浓度组、低浓度组生长抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),且随着浓度的升高生长抑制率和凋亡率显著升高(P0.05);高浓度组、中浓度组、低浓度组PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.05),且随着浓度的升高PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论苦参碱可诱导肺癌A549细胞凋亡,推测其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

川陈皮素调控PI3K/AKT信号通路抑制心肌肥大的机制研究

目的 探讨川陈皮素（Nobiletin, NOB）通过调控PI3K/AKT信号通路抑制心肌肥大的分子机制。方法 在培养的H9C2心肌细胞中,建立PE诱导的心肌细胞肥大模型,给予NOB处理,采用qRT-PCR检测心肌肥大相关标记物ANF、BNP、β-MHC的mRNA表达水平,利用免疫荧光检测H9C2心肌细胞表面积,并用Western Blotting的方法检测PI3K、AKT蛋白的表达。结果 与对照组相比,PE处理过的H9C2心肌细胞肥大基因显著激活,心肌表面积增大;NOB处理后可抑制PE诱导的肥大基因激活和心肌表面积增大。此外,Western Blotting结果显示,PE处理过的H9C2心肌细胞p-PI3K、p-AKT表达水平下降(P <0.05),NOB治疗后的H9C2心肌细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT水平明显升高(P <0.05)。结论 NOB可抑制PE诱导的心肌细胞肥大,其机制可能是通过调控PI3K/AKT信号通路实现的。     

β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其机制研究＊

目的 探究β-榄香烯对非小细胞肺癌细胞迁移的影响及其作用机制。方法 将人非小细胞肺癌A549细胞分为5组：空白对照组、β-榄香烯低、中、高剂量组（10 μg·mL^-1、25 μg·mL^-1、50 μg·mL^-1）、顺铂（Cisplatin，CDDP，20 μmol/L）组。根据分组，分别用对应的药物处理细胞。Hoechst 33258染色观察细胞凋亡；Transwell小室检测细胞迁移；Western blot检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（Phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K）与磷酸化蛋白激酶B（Phosphorylated protein kinase B，p-AKT）表达水平。结果 与空白对照组相比，β-榄香烯高剂量组A549细胞出现凋亡现象，各β-榄香烯组的A549细胞迁移数量均显著减少（P < 0.05），β-榄香烯中、高剂量组A549细胞E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P < 0.05），Vimentin、p-PI3K与p-AKT蛋白表达水平明显降低（P < 0.05）。结论 β-榄香烯能诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡，抑制上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT）过程，进而减弱迁移能力，其作用机制可能与干扰PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。     

二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的：研究二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤的影响并探讨其机制。方法：建立棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤细胞模型,采用CCK-8法筛选二氢石蒜碱的最佳给药浓度。将培养的H9c2细胞随机分为正常对照组、模型组、LY294002组、雷帕霉素组及二氢石蒜碱低、中、高浓度组。蛋白免疫印迹法检测H9c2细胞中TLR4、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达;免疫荧光染色及流式细胞术检测二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平的影响。结果：采用棕榈酸100μmol/L建立H9c2细胞炎性损伤模型,CCK-8实验筛选出二氢石蒜碱组在1、10、50μmol/L下细胞存活率都在80%以上,分别确定为低、中、高给药浓度。蛋白免疫印迹实验表明,二氢石蒜碱预处理能显著下调棕榈酸诱导下H9c2细胞的TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达(P<0.05或P<0.01),其作用呈浓度依赖性;PI3K/AKT抑制剂LY294002可抑制p-AKT蛋白表达,mTOR抑制剂雷帕霉素可抑制p-mTOR蛋白表达(P<0.01)。免疫荧光染色及...     

大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制。方法：分别以二甲基亚砜（空白对照组）、大蒜素（12.5、25、50 μg/mL）和LY294002 5 μg/mL干预对数生长期Ishikawa细胞。48 h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡状况,Western Blotting法检测p-PI3K、p-AKT、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与空白对照组比较,经大蒜素12.5、25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率;经大蒜素25、50 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够下调p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与LY294002组比较,经大蒜素50 μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率,下调p-PI3K、p-AKT表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：大蒜素能够诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化而使其下游促凋亡蛋白表达上调有关。     

心肾相交与心肾不交

心肾相交包括心肾水火相交、心肾阴阳相交、心肾之气相交三个方面的内容，其具体实现途径是心肾之气的升降相交，在此过程中心肾阴阳和水火完成各自的相交。这三个方面任何一方面的平衡协调关系被破坏，均会导致心肾不交的病理变化。     

带教老师影响带教质量因素的分析及对策

目的：分析临床带教中带教老师影响带教质量的因素,寻找改进带教质量的对策。方法：采取护士长及带教组长提出的方法、设置医生问卷调查和开座谈会听取护生的意见等,以全面详细的了解临床带教情况。结果：调查结果显示带教老师工作中存在着带教老师只是层次偏低、用力过大、专业思想不稳定、带教内容缺乏规范等问题。结论：带教老师应有责任心、基础理论知识扎实、临床经验丰富、擅长归纳总结的高年资护士担任。并与科实通过加大带教老师培训力度,建立资格带致制度,规范带教内容及带教制度的实施并与被带教人员建立良好的关系,形成教学相长的局面,提高临床带教质量。     

任脉、冲脉概念的形成与演变

通过史学研究的方法对“任脉”“冲脉”概念的形成及演变过程进行了系统的考察,并分析其演变的原因，从而能更准确地理解任脉、冲脉学说正确评价其价值，     

神与脏腑关系研究概述

神是人体生命活动的总概括,是一切生命活动的外在表现。它是中医学对生命最本质的理解。人体是以脏腑系统为核心的有机整体。唯有各脏腑都运作正常才能神情精彩。因此,正确理解神与脏腑的关系非常重要。笔者认为神与脏腑的关系并不是简单的哪一脏主神,而是以脏腑为核心,诸脏腑协同作用,为神提供物质基础、调摄、控制等。心-脑-肾为神的调节脏腑,此三脏既有神之源、又有藏神之府、亦有调神之枢;而脾胃又为神的表现提供物质基础。因而在诸脏腑中神又与心、脑、肾、脾关系尤为密切。     

运气研究不能囿于七政七要素

目前,在运气学说预测气候与实际气候的印证性研究方面,存在较大分歧;在运气学说预测与实际疫病流行的比对研究方面,也存在相关、不相关两种截然不同的观点。该文提出:研究运气学说中气候变化的成因,必须突破"七政"。研究运气学说中气候相关性疾病的成因,必须突破"七要素"。将研究重心放在对运气学说的理论内涵研究,尤其是研究对象的拓展及运气学说在疾病的诊断、治疗方面的运用上来。     

再论青霉素的过敏反应及防治

青霉素类是目前临床应用最广泛的抗菌素之一。青霉素的毒性虽极低，但最易引起过敏反应，严重的过敏性休克如抢救不及时会有死亡的危险。近年来，青霉素过敏性休克的发生有逐年上升的趋势，特别是在使用的过程中。为发挥其优势，达到安全用药之目的，故再将青霉素的过敏反应及防治进行讨论。     

试论脾胃的升降机能

脾胃，人体中焦之脏腑，承上启下，受纳运化，长养全身。然而其诸多功能，无一不与升降有关，故本文试从体现中医特色的整体观念这一角度出发，对其形成内容和意义进行探讨。     

谈“证候要素”与“方剂要素”

基于证候要素(证素)理论,提出方剂要素(方素)的概念,并在方证对应的辨证论治原则基础上,提出方-证要素对应的方剂组成原则,进而探讨方-证要素对应与君臣佐使方剂组成原则的关系,认为两种配伍原则存在着纵横呼应的内在联系,二者相互补充、相辅相成,对于充实方剂配伍规律的理论内涵,指导中医临床实践等,均具有一定的积极意义。     

影响肿瘤患者护患沟通的因素及应对措施

影响肿瘤患者护患关系的因素有恶性肿瘤分布广、危害大,发病的年龄跨度大,恶性肿瘤的治疗效果不确定,护理人员业务能力和自身素质,患者及家属的影响因素等,通过正确运用沟通技巧和方法、满足患者及家属需求、有针对性进行健康指导、提高护理质量等措施可提高患者满意度。