锌指基因ZNF569的转录活性分析

目的构建GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒。通过它控制报告基因的表达情况来确定它的转录激活/抑制活性以及它是否参与了细胞信号途径调控。结果GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒转染细胞后发现ZNF569具有转录抑制活性并能抑制SRE和AP-1的转录活性。对ZNF569的分段结构域的转录活性分析表明ZNF569的KRAB结构域和C2H2锌指结构域都具有抑制转录因子转录活性的作用。结论由此笔者得出结论认为ZNF569的KRAB框和C2H2锌指都具有抑制因子作用,为进一步研究ZNF569在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。     

转录因子ZNF24在肿瘤中的研究进展

转录因子 ZNF24（也称 ZNF191 或 KOX17）是类 Krüppel 锌指转录因子家族成员，N 端有富含亮氨酸（Leu）的 SCAN 结构域（又称 LeR 结构域），C 端有 4 个连续的典型的类 Krüppel样锌指模体。ZNF24参与激酶转录活性调控、血管增生、发育等，尤其在肿瘤发生或发展中起着重要的作用，是多功能的转录因子。ZNF24通过调控不同靶基因（如VEGF、Wnt8B、Twist1、β-catenin和DGL1等）的转录表达以及竞争性结合蛋白因子（如β-catenin），在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移中起着重要复杂的两面性作用（促进和抑制）。因此阐明ZNF24在肿瘤中的作用机理，将为肿瘤的治疗提供线索与思路。本文将对ZNF24在肿瘤中的研究进展作一综述。     

锌指蛋白ZNF185对粒细胞白血病细胞增殖的影响及表达调控研究

目的检测锌指蛋白ZNF185对粒细胞白血病细胞增殖的影响,探讨调控ZNF185表达的分子机制。方法采用Western-blot检测ZNF185的表达。克隆ZNF185编码序列,转染粒细胞白血病细胞,检测细胞增殖。采用甲基化特异PCR检测ZNF185基因的甲基化。结果 ZNF185在人正常中性粒细胞中高表达,而在粒细胞白血病细胞中表达显著降低;过表达ZNF185显著抑制白血病细胞增殖;ZNF185在粒细胞白血病细胞中的甲基化显著增加。结论 DNA甲基化抑制ZNF185在白血病细胞中的表达进而促进细胞增殖。     

胚胎发育相关基因stk40的蛋白表达和生物信息学分析

目的 检测胚胎发育相关基因 stk40 的表达,并对其进行生物信息学分析.方法 取小鼠早期各发育阶段的胚胎样本,用Western blot方法检测stk40的蛋白表达.用生物信息学软件或数据库分析预测stk40基因及其编码蛋白的基因结构、染色体定位、蛋白质理化性质、二级结构、疏水性/亲水性及结构域.结果 证实stk40蛋白在小鼠8细胞发育阻滞胚胎中的表达显著低于发育正常的早期胚胎.生物信息学分析显示,stk40基因mRNA全长3877 bp,开放阅读框长1350 bp,编码449个氨基酸,相对分子质量50563.9;定位于染色体4D2.2区域,含13个外显子和12个内含子.蛋白结构域分析提示,stk40基因编码蛋白存在-STYKc结构域,可能与细胞有机体的发生有关.结论 stk40基因编码蛋白的成功检测及生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础.     

ZNF300基因在肝癌耐药细胞HepG2/VCR中的表达及功能初探

目的建立人肝癌HepG2/VCR耐药细胞株,检测ZNF300基因在HepG2/VCR中的表达并初步分析其在肝癌多药耐药(MDR)中发挥的功能。方法采用体外低浓度梯度递增的诱导方法建立长春新碱(VCR)获得性HepG2/VCR耐药细胞株。MTT法检测确定HepG2/VCR耐药细胞株对VCR的耐药性,用Western blot方法检测人锌指蛋白ZNF300基因编码的ZNF300及多药耐药基因编码的P糖蛋白(P-gp)在HepG2和HepG2/VCR细胞中的表达差异;在HepG2/VCR细胞中转染ZNF300基因正向或反向cDNA质粒后,MTT法检测VCR对耐药细胞IC50值的变化,Westernblot方法检测细胞内P-gp表达的影响。结果 MTT检测确认HepG2/VCR耐药细胞构建成功,Western blot检测发现耐药细胞中ZNF300及P-gp的表达相对于HepG2细胞明显增高。在HepG2/VCR细胞中转染正向ZNF300 cDNA质粒后,MTT和Western blot检测发现ZNF300过表达可使VCR对耐药细胞的IC50值增高,并使细胞内P-gp表达上调;在转染反向cDNA质粒Knockdown ZNF300基因表达后得到相反的结果。结论 ZNF300基因在HepG2/VCR耐药细胞中表达明显增高,并能通过上调耐药蛋白P-gp的表达促进肝癌细胞耐药性,可以作为逆转肝癌多药耐药的分子作用靶点。     

肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨肝癌患者锌指蛋白281（ZNF 281）的表达水平,并分析其对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法 收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281 mRNA的表达情况;采用沉默RNA （siRNA） ZNF 281转染人肝癌细胞HepG2,根据转染情况分为空白对照组（正常培养的HepG2）、阴性对照组、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后HepG2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织（P<0.05）;肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74.39%,高于癌旁正常肝组织的18.0%（P<0.05）,且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径>5 cm,TNM为Ⅲ~Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65.57%、73.77%、45.90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38.10%、38.10%、14.29%（P<0.05）。siRNA ZNF 281组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;空白对照组和阴性对照组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 肝癌组织中ZNF 281蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,诱导其凋亡。     

人类多重剪接RNA结合蛋白类基因的克隆和分析

目的 通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因.方法 采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群.通过UCSCGenome Blat Server分析,确定RBPMS2基因的染色体定位,SMART网上分析工具进行结构域预测,Unigene数据库进行表达谱分析.结果 电子克隆到人类RBPMS2新基因cDNA序列,含完整的开放阅读框(ORF).RBPMS2基因编码的多肽由209个氨基酸组成,分子量22.5 KDa,等电点8.63.SMART分析显示RBPMS2蛋白包含1个RNA识别模体(RRM)结构域.RBPMS2基因位于第15号染色体,定位在15q22.31,由7个外显子和6个内含子组成.电子表达谱分析显示RBPMS2在卵细胞、受精卵、囊胚、不同发育阶段的胚胎、膀胱、肾脏等组织中高表达.结论 分析并克隆到了一个新的人类RBPMS2基因.     

GATA-4、NKx2-5转录因子的研究进展

转录因子GATA家族是能与核酸共同序列(A/T)GATA(A/G)结合的细胞核转录因子,包括6个成员,即GATA-1、-2、-3、-4、-5和-6。1995年Huang等[1]通过筛查人类心脏cDNA文库首次克隆出人类GATA-4 cDNA,以后相继在人类肺、肝脏和小肠等器官中检测到GATA-4 mRNA和蛋白的表达。人们应用果蝇同源结构域(homeodomain,HD)寡核苷酸探针筛查果蝇cDNA文库,克隆出NK型同源盒基因,随后分离出一种与果蝇背侧血管/心脏发育密切相关的果蝇NK-2型基因tinman基因。GATA-4和NKx2-5是目前研究较多的与心脏发育密切相关的转录因子。     

锌指蛋白185 对胶质瘤细胞增殖影响的研究

目的 探讨锌指蛋白 ZNF185 在人脑胶质瘤细胞增殖中的作用。方法 标本取自 2011 年 1 月-2013 年12 月于唐山市工人医院就诊, 经病理确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织, 以瘤旁组织作对照。提取不同组织总蛋白,Western-blot 检测 ZNF185 的表达。提取瘤旁组织总 RNA, 反转录扩增 ZNF185 编码序列并克隆至 pEGFPC2 质粒,构建 ZNF185 表达载体。采用 Lipofactamine2000 将 ZNF185 表达载体转染人胶质瘤细胞系 SF767, 以转染 pEGFPC2空载体细胞作为对照。采用流式细胞仪检测细胞周期变化; MTT 法检测细胞增殖活性。结果 与瘤旁组织相比,ZNF185 在人脑胶质瘤组织中表达显著降低（P < 0.01）; 转染 ZNF185 表达载体的胶质瘤细胞与对照细胞比ZNF185 的表达显著增加（P < 0.01）; 过表达 ZNF185 导致 SF767 细胞 G0~G1 期细胞比例显著增加（P < 0.05）, 而 S期细胞比例减少（P < 0.05）。同时, 过表达 ZNF185 也导致 SF767 细胞的增殖速度显著降低（P < 0.05）。结论ZNF185 在人脑胶质瘤细胞中发挥抑制细胞增殖的作用。     

转录因子FoxO1在神经元凋亡中的作用

Forkhead转录因子（Fox蛋白家族）是2000年才正式统一命名的一个新的转录因子家族．自20世纪90年代首次在果蝇中发现该基因以来,其家族已先后发现100多个Fox基因。该家族的共同特征是具有一个长110个氨基酸的保守的DNA结合结构域,称为Fox（Forkheadbox）结构域,含有一个螺旋-转角－螺旋基序,     

胰岛素强化治疗2型糖尿病合并冠心病心衰的临床观察

目的观察胰岛素强化治疗对2型糖尿病合并冠心病心衰患者的影响。方法选取焦作市第四人民医院2009年1月至2012年6月住院治疗的2型糖尿病合并冠心病心衰患者107例,随机分为治疗组、对照组,治疗组给予胰岛素泵持续皮下注入门冬胰岛素,对照组给予精蛋白锌胰岛素30R皮下注入,观察患者血糖达标时间、糖化血红蛋白、血脂、左室射血分数的变化。结果治疗后血糖达标时间治疗组（5．20±1．38）d,对照组（8．14±1．47）d;糖化血红蛋白：治疗组（7．23±1．08）％,对照组（7．87±1．23）％;左室射血分数t治疗组（57．31±4．26）％,对照组（50．28±5．12）％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胰岛素强化治疗2型糖尿病合并冠心病心衰,血糖达标时间短,心功能改善明显。     

颈动脉瞬时减速度波强对糖代谢异常患者早期左室舒张功能的评估价值

目的本研究应用瞬时波强（wave intensity,WI）技术了解心脏及血管功能的状态,评价其在研究2型糖尿病患者早期左室舒张功能中的使用价值。方法参照1999年WHO标准,根据血糖结果将门诊病人分为正常组（A组）、糖尿病前期组（B组）、糖尿病组（C组）,均测量颈总动脉瞬时减速度波强（W2）、二尖瓣血流舒张早期峰值速度（E）和舒张晚期峰值速度（A）及其比值（E/A）、二尖瓣瓣环舒张早期峰值速度（Em）和舒张晚期峰值速度（Am）及其比值（Em/Am）,并进行方差分析及各参数间的相关性分析。结果C组与A组比较,各参数差异显著（P〈0.05）;B组与A组比较,Em、Em/Am、Sm差异显著（P〈0.05）。E/Em、E/A与Em/Am在各组中均显著分别呈负相关和正相关;W2与Em/Am仅在糖代谢异常组中显著呈负相关。结论 E/Em、Em/Am、E/A能较好地反映左室舒张功能,但对左室松弛功能的评价仍有局限性,W2评价左室舒张功能值得做更进一步的研究。     

血清维生素D与2型糖尿病相关性研究

目的研究血清维生素D与2型糖尿病的关系。方法对乌鲁木齐市水磨沟区糖尿病高危人群(569名)进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),取数据完整的555名受试者,按照1999年世界卫生组织(WHO)糖尿病的诊断标准分为2型糖尿病组和正常糖代谢的对照组,比较两组间血糖、血脂、血压、血清维生素D等指标的差异,并对血清维生素D与上述指标进行相关性分析。结果 2型糖尿病组的空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、按HO-MA模型估计的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2型糖尿病组的血清25(OH)D3、按HOMA模型估计的β细胞功能指数(HOMA-IS)均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清25(OH)D3与收缩压(SBP)、FPG、2hPG均呈负相关(P<0.05),与HOMA-IS呈正相关(P<0.05)。结论血清维生素D可能通过直接或间接作用影响胰岛β细胞功能,导致血糖升高。     

重组甘精胰岛素与低精蛋白胰岛素联合格列美脲治疗2型糖尿病的疗效观察

目的观察重组甘精胰岛素（长秀霖）与低精蛋白胰岛素（诺和灵30R）联合格列美脲治疗2型糖尿病的有效性和安全性。方法将60例糖尿病患者随机分为长秀霖组和诺和灵30R组,每组30例。长秀霖组每天晚上18∶00点注射长秀霖,诺和灵30R组每天早、晚餐前2次皮下注射诺和灵30R,2组每天早餐前30mim均口服格列美脲3mg。观察2组患者空腹血糖（FPG）、平均餐后2h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1C）、C肽水平及低血糖事件的发生率。结果 2组治疗后FPG、2hPG、HbA1C水平均有明显下降（P〈0.05）,但2组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;且长秀霖组治疗后C肽升高（P〈0.05）,且于高于诺和灵30R组C肽水平（P〈0.05）。长秀霖组低血糖事件发生率为6.7%低于诺和灵30R组的23.3%（P〈0.05）。结论该2种治疗方法的疗效大致相同,但长秀霖联合格列美脲治疗2型糖尿病低血糖事件发生率低,并有可能改善β细胞功能,故更具有选择优势。     

胰岛素3种强化治疗方案的疗效及安全性比较

目的比较基础+餐时人胰岛素、基础+餐时胰岛素类似物及胰岛素类似物泵3种胰岛素强化治疗方案对2型糖尿病患者血糖控制的有效性及安全性。方法将120例2型糖尿病患者随机分为A,B,C 3组,A组(n=60)采用诺和平+诺和锐于睡前及三餐时皮下注射,B组(n=60)采用诺和锐泵持续24 h皮下泵入,C组(n=60)采用诺和灵N+诺和灵R,于睡前及三餐前30 min皮下注射,并在治疗达标后观察三餐前及睡前指尖血糖、糖化血红蛋白、72 h动态血糖变化、患者低血糖发生率及体重变化。结果A组在患者血糖控制水平、糖化血红蛋白达标率、72 h动态血糖波动、低血糖发生率及体重变化方面与B组和C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论诺和平+诺和锐胰岛素强化治疗方案对2型糖尿病血糖水平控制长效而稳定,不易引起低血糖反应发生,引起体重增加量少。     

金银花抗氧化作用的分子学机理研究

目的探讨金银花抗氧化作用分子学机理。方法采用过氧化氢（H2O2）作用于人正常RBL肝细胞，制作氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞分为四个实验组：正常对照组（C），H2O2损伤组（H2），金银花前保护组（Jb），金银花后保护组（Ja）。采用TUNEL和DNA Ladder法，检测各组细胞凋亡情况。应用免疫组化和Western blot观察各组细胞的HSP-70、NF-kB、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达及免疫反应活性。应用MTT实验检测RBL细胞的生存率。结果Jb组的细胞凋亡率明显低于H2和Ja组，Bcl-2表达增高，HSP-70、NF-kB、Bax和Caspase-3的表达降低。结论金银花对RBL细胞氧化应激损伤具有一定保护作用．且前保护作用效果好于后保护作用，其保护作用机理可能是通过抑制HSP-70和NF-kB的表达，阻抑NF-kB信号传导途径并提高细胞内抗氧化防御酶系水平。     

贝那普利合用益肾固精活血中药保护糖尿病肾病Ⅲ期患者残存肾功能的临床研究

目的 探讨2型糖尿病肾病Ⅲ期患者残存肾功能的保护方法.方法 选择2型糖尿病肾病Ⅲ期患者70例,将其随机分为观察组38例和对照组32例;观察组给予贝那普利合用益肾固精活血中药煎剂治疗,对照组单用盐酸贝那普利片治疗.结果 观察组治疗前后以及治疗后观察组与对照组半胱氨酸蛋白酶抑制剂C水平比较差异均有显著[前者:(1.62±0.59) mg/L vs.(1.29±0.38) mg/L,t=2.899,P=0.005;后者:( 1.29±0.38) mg/L vs.( 1.51±0.43) mg/L,t=2.272,P=0.026].两组肾脏生存曲线无交叉,观察组肾脏生存率(92.1％)优于对照组肾脏生存率(75.0％)(Log-rank检验,x2=4.227,P=0.040).结论 贝那普利合用益肾固精活血中药治疗对2型糖尿病肾病Ⅲ期患者残存肾功能可能有更好的保护作用.