大连地区汉族人群HPA-15基因多态性分析

目的分析大连地区汉族人群血小板特异性抗原HPA-15基因多态性,探讨其在血小板输注中的临床意义。方法采用PCR-SSP法对大连地区100名汉族无血缘关系血小板捐献者的HPA-15系统进行基因分型。结果大连地区汉族人群HPA-15aa、HPA-15ab、HPA-15bb基因型频率分别为0.3600、0.4400、0.2000。HPA-15a、HPA-15b的基因频率分别为0.5800、0.4200。与我国其他地区汉族人群比较,分布差异无统计学意义。在随机输血中,HPA-15抗原不配合概率为0.3685。结论在随机输血中,HPA-15抗原不配合概率高,在血小板输注中应加以重视。     

使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1～5、15分型体系

目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1～5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1～5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异。结论上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充。     

大连地区汉族人群血小板捐献者HPA基因多态性研究

目的 对大连地区汉族人群血小板捐献者HPA-1～17基因多态性进行分析,建立本地化的血小板捐献者HPA分型资料库.方法 应用PCR-SSP技术,对257名大连地区45岁以下的汉族无血缘关系的血小板捐献者HPA1～ 17系统基因进行分型.结果 大连地区汉族人群血小板捐献者的HPA基因频率如下:1a和1b分别为0.972 ...     

HPA-1-28w基因分型检测技术体系的建立和广西瑶族、汉族人群HPA-1-28w基因多态性研究

目的建立HPA-1-28w基因分型检测技术体系并用以研究广西瑶族和汉族人群的血小板抗原(HPA)-1-28w基因多态性。方法通过设计序列特异性引物和优化PCR反应条件,摸索HPA-1-28w基因分型检测技术体系,其组成包括前期已建立的HPA-1-17w多重PCR-SSP技术和新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法 2部分组成。使用10例已预先测序确定HPA-18-28w基因型和20例已预先使用商品试剂盒检测HPA-18-21w基因型的本研究广西瑶族标本,对新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法做验证。应用所建立的HPA-1-28w基因检测技术对广西地区无血缘关系的1424名健康瑶族人和908名健康汉族人做HPA-1-28w基因分型和多态性分析。结果所建立的HPA-1-28w基因分型技术系统,不仅对HPA-18-28w基因的分型结果与对验证用标本的测序分型结果完全一致,而且对HPA-18-21w基因的分型检测结果与商品试剂盒的分型结果完全一致。广西瑶族人群的HPA各等位基因频率分别为:HPA-1a 0.998 2、1b 0.001 8,2a 0.874 6、2b 0.125 4,3a 0.661 5、3b 0.338 5,5a 0.996 8、5b 0.003 2,6a 0.9786、6bw 0.021 4,15a 0.407 7、15b 0.592 3;汉族人群HPA各等位基因频率分别为:HPA-1a 0.998 3、1b 0.001 7,2a0.957 6、2b 0.042 4,3a 0.532 5、3b 0.467 5,4a 0.999 4、4b 0.000 6,5a 0.984 0、5b 0.016 0,6a 0.989 0、6bw 0.011 0,15a 0.534 1、15b 0.465 9;广西瑶族和汉族人群的HPA-7-14w、HPA-16-28w基因均以aa纯合子形式存在。在本组广西瑶族人群中发现2例罕见的HPA-6bb纯合子基因型个体,而在汉族人群中发现了1例中国人群中罕见的HPA-4ab基因型个体。结论建立了完善的HPA-1-28w PCR-SSP基因分型检测技术体系,并成功应用于广西瑶族和汉族人群的HPA-1-28w基因筛查和分型研究;广西瑶族、汉族人群HPA基因频率分布在HPA-2,-3,-5,-15系统和HPA-6w等均不同(P0.05),藉此有助于了解广西瑶族和汉族人群HPA的免疫学特点。     

广州地区汉族人群血小板抗原基因多态性及频率分布

目的 探讨广州地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)-7Hita及HPA-12,-18,-19,-20,-21等位基因多态性及其频率分布情况.方法 选取2010年9月至2011年9月于广州血液中心参与志愿无偿献血,且符合《献血者健康要求(GB18467-2001)》的广州地区汉族献血者中,采用系统随机抽样方法随机选择95例献血者作为研究对象.采集并留取献血者血液标本;分别采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)及序列特异性引物-多重聚合酶链反应(multi-PCR-SSP)对研究对象血液标本进行HPA-7Hita及HPA-12,-18,-19,-20,-21等位基因分型检测,并对广州地区汉族人群HPA-7Hita及HPA-12bw、-18bw、-19bw、-20bw、-21bw等位基因频率与不同国家、地区人群进行比较.结果 ①95例广州汉族志愿无偿献血者均为HPA-7a、-12a、-18a、-19a、-20a、-21a,等位基因频率均为100％,均未发现HPA-7Hita及HPA-12bw、-18bw、-19bw、-20bw、-21bw等位基因;②进一步分析调查结果显示,广州地区汉族人群中HPA-7Hita等位基因频率低于日本人群,且差异有统计学意义(P＜0.05),HPA-12bw等位基因频率亦低于德国人群,且差异有统计学意义(P＜0.05);HPA-18bw、-19bw、-20bw、-21bw等位基因频率则分别与法国、巴西、中国、日本的报道相符.结论 本研究初步获得广州地区汉族人群HPA-7Hita及HPA-12,-18,-19,-20,-21等位基因频率分布情况,为临床相关疾病的诊治及预测提供一定实验数据基础及检测方法.     

新疆汉族人群血小板抗原1—5、15系统基因多态性分析

目的调查研究与血小板输注无效关系密切的人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1—5及15系统基因在新疆汉族人群中的遗传多态性。方法采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法对101例无血缘关系的新疆汉族血样进行HPA基因分型。结果新疆汉族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、15a基因频率分别是0.9851、0.9208、0.5446、1、0.9505、0.4653,HPA-1b、2b、3b、4b、5b、15b基因频率分别是0.0149、0.0792、0.4554、0、0.0495、0.5347,新疆汉族HPA基因频率与维吾尔族人群相比,HPA-1a、1b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,HPA-3、15系统具有高度多态性。     

山东淄博地区汉族人群HLA-A、B、DRB1基因频率调查

目的 调查山东淄博地区汉族人群HLA基因多态性的分布。方法 采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）方法,对HLA-A、B、DR位点进行低分辨基因分型;用直接计数法进行抗原频率和基因频率计算。结果 得到一组抗原频率和基因频率资料。结论 山东淄博地区汉族人群HLA基因具有多态性,PCR-SSP方法进行HLA分型的结果准确可靠。     

乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群HPA-15基因多态性分析

目的分析乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群血小板特异性抗原HPA-15基因多态性,为临床血小板输注提供依据。方法采用聚合酶链-序列特异性引物技术(PCR-SSP)对乌鲁木齐地区100名无血缘关系的哈萨克族献血者的HPA-15系统进行基因分型,计算基因型频率和基因频率。结果哈萨克族献血人群HPA-15a/15a、HPA-15a/15b、HPA-15b/15b基因型频率分别为0.21、0.53、0.26。HPA-15a、HPA-15b的基因频率分别为0.475和0.525。HPA-15a、HPA-15b抗原不配合率分别为0.1997和0.1747。结论乌鲁木齐地区哈萨克族HPA-15抗原不配合概率高,可能导致产生同种免疫性血小板抗体的概率增加,在临床血小板输注中的作用值得重视。     

河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究

摘要：目的：研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。 方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。 结果：HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5; 2a 0.946 9,2b 0.053 1; 3a 0.590 6,3b 0.409 4; 4a 0.996 9,4b 0.003 1; 5a 0.990 6,5b 0.009 4; 6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。 HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ²检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。 结论:河南汉族人HPA-15 和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。     

河北地区汉族人群人类血小板同种抗原等位基因频率研究

目的 调查河北地区汉族人群人类血小板同种抗原(HPA)系统等位基因频率.方法 该地区汉族人群血小板捐献者血液样本765份,采用PCR-SSP方法检测HPA1-17基因型,统计基因频率.结果 河北地区汉族人群中除HPA-1、2、3、4、5、6、15基因系统有b基因型别外,其他HPA基因系统均为a/a纯合子,HPA-3、15抗原不配合概率较高,分别为0.369 4、0.374 8.结论 在河北汉族人群中,HPA-3、15抗原不配合概率高,推测HPA-3、15是引起本地区血小板输注反应的主要原因,在血小板输血中应加以重视.     

人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立

本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会（ISBT）血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2＋离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术。该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照。应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型。结果表明：基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致。50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G＆T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率：HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900。结论：本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。     

Rapid and reliable genotyping of human platelet antigen (HPA)-1, -2, -3, -4, and -5 a/b and Gov a/b by melting curve analysis

BACKGROUND: The probability for occurrence of neonatal alloimmune thrombocytopenic purpura (NAITP) depends largely on the frequency of each individual phenotype in various populations. In caucasians, antibodies to human platelet antigen (HPA)-1a are the major cause of neonatal alloimmune thrombocytopenic purpura, whereas in the Japanese population, antibodies to HPA-4b is most frequently involved in NAITP. Conventional PCR techniques for platelet antigen genotyping rely on sequence-specific primers (SSPs) and detection by gel electrophoresis, a method which is laborious and time consuming. New PCR technology, measuring the match of a hybridization probe with its target and thereby allowing simultaneous detection of both alleles, provides an efficient tool for genotyping of the HPA systems. STUDY DESIGN AND METHODS: A total of 105 healthy blood donors were genotyped for HPA-1, -2, -3, -4, and -5 a/b and Gov a/b with new primers and probes designed for mutation detection by melting curve analysis (using LightCycler technology). Donor DNA was independently genotyped by an allele-specific assay, using SSPs, in a reference laboratory. RESULTS: There was full concordance between the two genotyping methods, and genotype frequencies were comparable with previous studies in caucasians. CONCLUSION: We present rapid and reliable detection systems for HPA-1, -2, -3, -4, and -5 a/b and Gov a/b based on mutation detection of both alleles simultaneously by melting curve analysis. As the Gov system has been reported to have similar frequency of involvement in alloimmune thrombocytopenia as HPA-5, the opportunity for genotyping should aid the diagnosis of such patients.     

Multicolor real-time polymerase chain reaction genotyping of six human platelet antigens using displacing probes

BACKGROUND: Several genotyping methods for six clinically relevant human platelet antigens (HPAs) have been reported. A four-color real-time polymerase chain reaction (PCR) method using displacing probes for genotyping of the six HPAs is described. STUDY DESIGN AND METHODS: Primers and four differently fluorophor-labeled displacing probes were designed and synthesized to detect single-nucleotide polymorphisms responsible for each of the HPA-1, -2, -3, -4, -5, and -15 genotypes. Two HPA systems were analyzed in a single PCR procedure. After validation with samples of known genotypes, a total of 150 blood samples from healthy donors were genotyped. The results were compared with PCR with sequence-specific primers (SSP), PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP), and/or direct DNA sequencing. The frequencies of each HPA allele were calculated. RESULTS: Unequivocal real-time PCR genotyping results were obtained with minimal manual manipulation and carryover contamination. All 150 blood samples were correctly genotyped as confirmed by PCR-SSP, PCR-RFLP, and/or direct DNA sequencing. The allelic frequencies of HPA-1 through -5 and -15 among the Chinese population in Xiamen were comparable with those previously reported with Chinese living in other territories. For each specimen, genotyping of all six HPA biallelic systems was achieved in three tubes of PCR within 90 minutes and with material cost of no more than $1. CONCLUSION: Genotyping of HPA with real-time PCR using displacing probes is more rapid and reliable compared with PCR-SSP and PCR-RFLP methods and is more affordable than existing real-time PCR-based HPA genotyping assays. Thus, our approach is more suitable for routine HPA analysis and ideal for both urgent clinical testing and high-throughput screening.     

青岛地区汉族人群HPA-1—5,15多态性分布研究

目的研究青岛地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-5,15抗原分布多态性。方法采用PCR-SSP方法对青岛地区918名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-5及HPA-15系统的基因分型.结果各被检系统等位基因频率分别是1a=0.9940,1b=0.0060,2a=0.9319,2b=0.0681,3a=0.5822,3b=0.4178,4a=0.9897,4b=0.0104,5a=0.9804,5b=0.0196,15a=0.4913,15b=0.5087;HPA基因频率分布与国内资料比较,HPA-1与北方人群(河南),HPA-2与南方人群(四川)差异有统计学意义;与台湾人群HPA-2,-4,与日本人群HPA-2,-3,-5,与美国黑人HPA-1,-2,-5,与白人HPA-1,-4,-5,-15分别有统计学显著性差异。结论青岛地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点。本组HPA数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,可以作为北方汉族人群HPA基因分布频率数据库和青岛本地化血小板供者HPA资料库。     

血小板谱抗原的建立及其在鉴定血小板特异性抗体中的应用

目的 建立血小板谱抗原,鉴定引起血小板输注无效和新生儿血小板减少性紫癜的血小板特异性抗体,为血小板血型研究和临床治疗提供依据。方法根据中国人群人类血小板同种抗原(HPA)-1-HPA-16等位基因频率分布资料,利用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)技术对O型血小板供者进行HPA-1-HPA-6、HPA-15分型,筛选合适的供者,组成血小板谱抗原。通过建立的血小板谱抗原,利用简易致敏红细胞血小板血清学技术(SEPSA)鉴定同种免疫反应产生的血小板抗体的特异性。结果从O型血小板供者中筛选出11名供者,建立了血小板特异性抗体鉴定谱抗原。其可鉴定HPA-1-HPA-6,HPA-15抗体的特异性。在所筛检1 120份样本中,有3例患者检出HPA抗体,其中HPA-4b(Penb)抗体1例,HPA-15a(Govb)抗体2例。结论通过血小板谱抗原鉴定血小板抗体的特异性,对提高临床输注血小板的安全性和有效性,以及预防新生儿血小板减少性紫癜有积极的意义.     

中国汉族人群人类血小板抗原HPA-15(Gov)多态性调查

目的研究中国汉族人群人类血小板抗原HPA15(Gov)系统多态性,评估其在血小板配型输注中的作用。方法采用PCRSSP技术对1000名来自不同省份汉族无关献血者进行HPA15系统基因分型。结果HPA15在所调查的7个省份汉族人群中的分布差异无显著性意义,在1000名汉族中HPA15a和15b基因频率分别为0.5320和0.4680,与HardyWeinberg平衡吻合;与其它种族的HPA15分布相比较,也无显著性差异。在随机输血中HPA15a和15b抗原不配合的机会分别为0.1711和0.2029。结论本调查数据表明,随机输血中供受者HPA15抗原不配合比例在中国汉族人群中高达37%,这对研究同种免疫血小板减少症和开展血小板同型输注具有指导意义。     

浙江汉族人群血小板抗原1-16多态性调查

目的了解浙江汉族人群血小板抗原1-16多态性分布。方法采用PCR-SSP方法对120份浙江无血缘关系汉族样本作HPA-1—16等位基因分型。结果HPA-1b、-2b、-3b、-6bw、-15b的基因频率分别为0.0125、0.0542、0.3833、0.0125、0.4833,未检出HPA-4b、-5b、-7bw、-8bw、-9bw、-10bw、-11bw、-12bw、-13bw、-14bw、-16bw等位基因。浙江汉族人群HPA-3、15抗原系统血小板随机输注错配概率分别为0.36、0.37。结论浙江汉族人群HPA多态性分布与中国其他地区汉族人群比较没有差异,HPA-3和15系统多态性较丰富,因此在随机血小板输注或胎母之间比较容易发生同种免疫反应。     

云南汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA基因多态性的分析

目的研究云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B基因和HPA1-17基因多态性,建立已知型血小板献血者基因数据库。方法分别采用PCR-SSOP和PCR-SSP方法对1 000名云南地区无血缘关系的汉族血小板献血者做HLA-A、B和HPA1-17系统基因分型,计算基因型频率、基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出HLA-A位点14个,HLA-B位点35个。A*02(35.81%)、A*11(35.42%)和A*24(17.72%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.87%)、B*40(60)(10.83%)和B*15(62)(9.78%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-B座位的主要等位基因。每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a、17a基因;HPA-4a、7a-14a、16a、17a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、2、5、6主要以a/a纯合子居多,a/a基因型频率分别是0.989、0.960、0.990、0.980,没有b/b纯合子出现。在HPA1-17中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.392、0.360、0.248;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.339、0.467、0.194。经χ2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA1-17基因频率与南方汉族接近,也呈现其自身特点。应建立本地区的血小板供者分型数据库。