应用荧光斑点法筛查葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏

目的：建立适于葡萄糖6－磷酸脱酸酶（G6PD）缺乏新生儿筛查的检测方法。方法：用荧光斑点法（FST）对新生儿筛查滤纸干血片标本进行检测,对阳性者召回,抽静脉血以G6PD／6PGD比值法进行确诊,结果：用FST测定11437份新生儿筛查滤纸干血片标本的G6PD活性,其筛查阳性率4．2％,确诊检出率3．7％。与G6PD／6PGD比值法的符合率为86．8％,重度G6PD缺陷者符合率达100％,具有高敏感性和特异性,结论：FST准确性高,简便、快捷、费用低廉,可以滤纸干血片标本进行大规模的筛查检测, 适宜在高发区开展G6PD缺乏的新生儿筛查和早期诊断及防治工作中应用。     

血红蛋白S病17例临床与实验诊断分析

目的:总结17例血红蛋白S病(HbS)各种分型的实验数据,以提高临床实验室诊断各类型HbS的水平。方法:对所有病例行血常规检测并作Hb区带定量;采用红细胞镰变试验、红细胞高铁血红蛋白还原试验(MHb-RT)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(G6PD/6PGD)的直接比值法(紫外比值法)检测G6PD缺陷症。结果:所检测的17例HbS患者中新生儿4例,儿童和成人共13例。发现杂合子16例,纯合子1例,其中HbS合并α-Thal状态者4例。新生儿或成人患者与正常组比较,在血常规和Hb电泳中都有明显区别。17例HbS患者中有6例同时合并G6PD缺陷症。结论:HbS为正色素性贫血。Hb电泳区带定量是诊断HbS的重要方法,镰变试验是鉴别HbS与HbD的确诊试验。G6PD缺陷症在非洲裔HbS患者中有较高的发生率,若2种遗传病集于一身,将会加重贫血症状。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性检测标本的相关探讨

目的探讨不同抗凝剂、不同保存温度等标本相关因素与全血葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性检测的相关性,确定G6PD活性检测的标本最适条件。方法采集血液标本20例、分别用枸橼酸葡萄糖(ACD)、枸橼酸钠和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K_2)3种抗凝剂抗凝,测定其G6PD活性及G6PD活性浓度;同一例血标本用ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2抗凝剂分别抗凝,分成2～8℃保存组及常温保存组,分别在第1～34天测定其G6PD活性浓度。结果 ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2 3种不同抗凝剂抗凝全血标本测得的G6PD活性差异有统计学意义(P0.05),但G6PD酶活性浓度的检测结果差异无统计学意义(P0.05);3种抗凝剂的标本在2～8℃保存条件下34 d内测得的G6PD活性浓度差异无统计学意义(P0.05),标本在常温保存条件下,34 d内测得的G6PD活性浓度检测结果差异有统计学意义(P0.05)。结论 ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2 3种抗凝剂抗凝全血标本用于G6PD活性浓度检测时,其检验结果具有良好的一致性;在2～8℃保存条件下,3种抗凝剂抗凝全血标本用于G6PD活性浓度检测可保存34 d。     

龙岗区孕前人群G6PD缺乏症的分子流行病学研究

目的通过研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因在龙岗区孕前人群中的主要突变类型、分布特点及表型,为该病在本地区的诊断及预防提供实验依据。方法收集龙岗区孕前优生健康检查10075例血标本,利用G6PD/6PGD比值法进行葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性常规检测。对437例G6PD/6PGD比值法阳性及535例阴性样本,采用PCR+导流杂交法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变类型。结果采用G6PD/6PGD比值法筛查,酶活性异常检出率为4.34%。酶学筛查阳性样本基因突变检出率为97.25%,酶学阴性样本基因突变检出率为44.67%。基因检测共检出21种突变类型,包含多种复合突变,常见突变型为1376GT、1388GA、1311CT及95AG。结论分子水平的检测可以显著提高女性杂合子G6PD缺陷症的检出率。     

高铁血红蛋白还原试验在G6PD缺乏症女性杂合子筛查中的应用价值

目的探讨筛查G6PD缺陷症特别是女性杂合子的较好筛查方法,以提高诊断率,以期对因G6PD缺陷而造成的新生儿黄疸、核黄疸实施早期干预。方法应用高铁血红蛋白还原试验(MHB-RT)和荧光斑点法对2019年5月-9月在我院孕检的妊娠妇女进行G6PD筛查检测,荧光PCR熔解曲线法确诊。结果女性G6PD缺陷症总检出率为12.36%(259/2096),在女性G6PD缺乏纯合子及双重杂合子检测中,MHB-RT法和荧光斑点法均可100%检出。在女性杂合子检测中,MHB-RT法的假阳性率为1.2%,假阴性率为14.3%。荧光斑点法的假阳性率为0.5%,假阴性率81.9%。结论应用MHB-RT法作为初筛实验联合高分辨荧光熔解曲线法确诊实验可大大提高女性杂合子检出率,降低因G6PD缺乏引起的新生儿黄疸的漏诊率,对临床有重要指导意义,客观准确的诊断G6PD缺陷症并找出本地区的优势突变,对于基层医院实验室也有重要的实用价值。     

应用荧光法筛查葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏

目的建立适于葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏筛查的检测方法。方法用荧光法对新生儿筛查滤纸干血片标本进行检测,对阳性者召回抽静脉血以G6PD/6PGD比值法进行确诊。结果用荧光法测定7780份新生儿筛查滤纸血片标本的G6PD活性,阳性358例,阳性率为4.6%(358/7780),对召回的358例阳性以比值法进行确诊试验,阳性315例,阳性率为4.0%,两者符合率为87.9%(315/358)。结论荧光法是一种半定量的方法,具有较高的特异性和准确性,且操作简便、检测快速、成本低廉,适合用滤纸干血片标本进行大规模的新生儿筛查。     

冰冻干燥G6PD反应试剂的制备及应用

根据葡萄糖一个磷酸脱氢酶（G6PD）荧光斑点试验方法,制备冰冻干燥G6PD反应试剂,观察冰冻干燥试剂在保存中的稳定性,用该试剂定性测定正常人和挑N缺乏者酶活性,并与G6血活性定量测定结果比较。结果冻干G6PD反应试剂在4℃至少能稳定6mo。与G6PD活性直接测速结果比较,检测G6PD活性正常者标本,符合率为92％～96％,男性G6PD缺乏者,符合率为100％。G6PD反应试剂经冰冻干燥后有利于贮存,且不影响试剂的检测效果。有条件的实验室可以批量生产,并可提供给基层医疗单位开展G6PD缺乏症的筛选。     

定量检测G6PD酶活性的可靠性分析

目的探讨G6PD酶活性的定量检测的可靠性。方法选取177例标本为检测标本，采用G6PD／6PGD比值法测定抗凝血G6PD／6PGD比值，同时采用全自动化生化仪定量检测标本G6PD酶活性，比较两种方法测定结果。结果G6PD／6PGD比值法测定抗凝血G6PD／6PGD比值检出45例缺乏（〈1．0）；全自动化生化仪定量检测标本G6PD酶活性，也同样检出对应的45例缺乏（成人〈1300．OU／L，儿童〈1700．OU／L。新生儿脐血〈2500．OU／L）；两种方法符合率为100％。结论全自动化生化仪定量检测标本G6PD酶活性准确性高、简单、快捷、自动化程度高，可对高发地区进行G6PD缺乏症的大规模筛查。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶三种测定方法的比较

目的对目前我科所开展的三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定方法进行比较。方法选择我院门诊育龄夫妇和住院新生儿血标本共480例。其中成年男性血标本184例,成年女性血标本184例,新生儿血标本112例,分别按不同要求,用高铁血红蛋白还原试验、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性检测、改良G6PD定量比值法三种方法进行测定。结果三种方法的总检出率分别为7.70%、6.20%和6.20%,其中后两种方法有显著的一致性。结论G6PD酶法和定量比值法联合测定,可以取代高铁血红蛋白还原试验,是G6PD缺乏较理想的筛查方法。     

河源市新生儿期遗传代谢缺陷病的选择性筛查分析

目的明确河源市新生儿期遗传代谢缺陷病的选择性筛查结果。方法选取2011年1月1日~2014年1日期间河源市新出生儿出生3天时的足跟血滤纸干血斑标本,检测G6PD活性筛查G6PD缺乏症,检测甲状腺素筛查先天性甲状腺功能低下,检测苯丙氨酸筛查苯丙酮尿症,对筛查为阳性患儿进行确诊和治疗。比较筛查结果为阳性患儿和阴性患儿的智力发育情况。结果研究3年期间每年的筛查的医院和筛查的产儿覆盖率分别为77.69%、91.13%、90.63%和65.22%、81.58%、71.05%,G6PD缺乏症缺陷、先天性甲状腺功能低下、苯丙酮尿症和总缺陷检出率分别为30.08%、0.31%、0.03%和30.56%。筛查结果为阳性和阴性患儿智力正常、低于正常和智力低下患儿比例分别为86.84%、12.49%、4.47%和98.56%、1.27%和0.17%,筛查结果为阴性患儿中智力正常的患儿比例高于筛查结果为阳性患儿,智力低于正常和智力低下患儿比例则低于于筛查结果为阳性患儿(P0.05)。结论河源市新生儿G6PD缺乏症缺陷、先天性甲状腺功能低下和苯丙酮尿症的检出率较高,遗传代谢缺陷可影响患儿的智力水平,及早进行遗传代谢缺陷病的筛查可提高出生人口素质。     

某地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶筛查结果分析

目的了解广西地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发病情况,为患该病新生儿的防治提供参考依据。方法采用荧光法对本筛查中心的30 556例新生儿进行G6PD筛查检测,对可疑患儿召回并用G6PD/6PGD比值法进行确诊。结果所有被检测的新生儿中G6PD缺乏症的初筛阳性率是7.36%,其中男性为10.89%,女性为2.86%;对民族进行分组,汉族G6PD缺乏症的初筛阳性率是5.29%,壮族为9.54%,其他少数民族为5.42%。对可疑患儿召回确诊发现荧光法与G6PD/6PGD比值法的符合率为97%,重度G6PD缺陷者符合率达100%。结论荧光法准确性高、简便、快捷、费用低廉,广西壮族自治区作为G6PD缺乏症的高发区,应常规开展新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的筛查工作,使G6PD缺乏症患者能够及时采取预防性措施。     

云南省部分县/市新生儿G6PD缺乏症筛查结果及阳性临界值分析

目的回顾性分析昆明医科大学第一附属医院新生儿遗传代谢病筛查中心6年来葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症筛查结果,同时对其筛查阳性临界值进行探讨。方法采用荧光分析法,对新生儿G6PD水平进行筛查检测,用G6PD/6PGD定量比值法对筛查阳性患儿进行确诊,采用受试者工作特征曲线确认筛查阳性临界值。结果2013-2018年,共筛查155880例G6PD标本(男性81390例,女性74490例),筛查率为16.74%。确诊患儿1187例(男性1063例,女性124例),G6PD缺乏症的发病率为0.76%(男性1.31%,女性0.16%),男性、女性发病率比较,差异有统计学意义(χ^2=349.71,P<0.001)。男性、女性的G6PD缺乏症筛查阳性临界值分别为2.25、2.45 U/gHb。结论该中心的G6PD缺乏症筛查率较低,后续要加强宣传进一步提高筛查率。确定适宜的筛查阳性临界值能够最大限度地避免假阳性结果和漏筛情况的发生。     

间接法建立上海地区新生儿G6PD筛查临界值的可行性

目的 探讨间接法建立上海地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)筛查临界值的可行性.方法 收集134747名新生儿的G6PD检测数据,采用Kolmogorov-Smirnov检验分析数据分布.偏态分布数据采用Box-Cox转换成近似正态分布.采用四分位间距(Turkey)法剔除离群值后建立参考区间,以参考区间下限[...     

Rapid detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase gene mutations by denaturing high-performance liquid chromatography

OBJECTIVES: Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency is a common inherited disorder worldwide. Different kinds of G6PD mutations may result in variable severity of clinical onset in G6PD-deficient individuals. In this study, a reliable molecular diagnostic method was developed for rapid detection of G6PD gene mutation. DESIGN AND METHODS: Primers were designed to amplify G6PD gene fragments that were subjected to mutation screening using denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) analysis. Mutations were identified by their distinct elution peak patterns and were confirmed by DNA sequencing. The assay was further validated against 29 samples from individuals with G6PD deficiency. RESULTS: A DHPLC-based assay for G6PD mutation detection was established. The 9 common G6PD mutations in the Taiwanese and Chinese population could be distinguished through the analysis of DNA elution patterns. During the validation test with the 29 G6PD deficiency specimens, two additional rare mutations, T517C and C519G, were unveiled. Overall, the DHPLC-based mutation detection was 100% concordant with the DNA sequencing results. CONCLUSION: Compared to other genotyping techniques, this method requires significantly less technical time to perform and has a greatly increased throughput capacity. Hence, the DHPLC method represents a major technical advance for G6PD genotyping and should benefit G6PD-deficient individuals for proper clinical care.     

梧州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查结果分析

目的 了解梧州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的筛查情况,为患该病新生儿的防治提供参考依据.方法 采用G6PD定量(连续监测速率法)对3 235例新生儿G6PD活性进行检测,并对筛查结果进行分析.结果 所有被检测的新生儿中G6PD缺乏症的发病率是10.88%,其中男性的发病率为12.21%,女性的发病率为9.33%.结论 梧州市作为G6PD缺乏症的高发区,应常规开展新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的筛查工作,对G6PD缺乏症患者及时采取预防性措施,避免因出现核黄疸而造成的智力低下或死亡等后果,确保新生儿的生命质量,从而提高优生优育的水平.     

G6PD缺乏症基因型检测新方法的建立及分子流行特征分析

目的建立葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因型检测的新方法及深入了解梅县地区大学生G6PD缺乏症的流行特征。方法经G6PD酶活性定量测定法确诊为G6PD缺乏症患者,用高分辨率熔解曲线法检测基因突变类型,对所有样本进行DNA测序验证。结果G6PD缺乏症的发病率为7．5％。共发现17种不同的基因型,其中最常见的2种基因型是G6PD Canton（1376G〉T）和G6PDKaiping（1388G〉A）,占70％以上;接下来的是G6PDGaohe（95A〉G）、G6PD Union（1360C〉T）、G6PD Chinese．4（392G〉T）、G6PD Chinese-5（1024C〉T）。此外,5．33％（4／75）的G6PD缺乏症患者没有发现任何突变。结论高分率熔解曲线（high—resolution melting,HRM）是一种陕速、廉价、有效的G6PD基因型筛查方法。     

β-地中海贫血复合α-地中海贫血同时合并葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷症242例血液学分析

目的 分析广东地区β-地中海贫血复合α-地中海贫血同时合并葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）缺陷症的检出率及其血液学特点。方法 对2006年11月至2009年5月经金域医学检验中心基因诊断室通过地中海贫血基因确诊的242例β-地中海贫血复合α-地中海贫血[GAP-PCR法检测α-Thal基因;反向点杂交（RDB）法检测β-Thal基因]通过G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）两个酶的活性直接比值（定量比值法）来正确判断G6PD是否缺乏,并进行血液学分析。结果 242例β-地中海贫血复合α-地中海贫血当中检测出21例G6PD缺陷症,占8.7%（21/242）,β-地中海贫血复合α-地中海贫血同时又合并G6PD缺陷症患者与单纯β-地中海贫血复合α-地中海贫血的各项红细胞参数比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 广东是地中海贫血和G6PD缺陷症的高发区,β-地中海贫血复合α-地中海贫血同时又合并G6PD缺陷症与单纯β-地中海贫血复合α-地中海贫血的血液学表现相似。育龄妇女做地中海贫血检查同时应进行G6PD/6PGD比值法测定,可使部分地中海贫血合并G6PD缺陷女性杂合子避免漏诊。     

成都市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查分析

目的 了解成都地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的发病分布情况.方法 采用NADP＋氧化还原酶法,对11 085例（男6 440例,女4 645例）就诊患儿进行红细胞中G6PD活性的定量检测.结果 在11 085例受检者中,检出G6PD缺乏者677例,总检出率6.1%.其中男婴545例,占男婴检查人数的8.46%（545/6 440）;女婴132例,占女婴检查人数的2.84%（132/4 645）.结论 成都地区G6PD缺乏症检出率较高,应在新生儿期常规开展G6PD检测,及早诊断,采取有效防范措施,预防由G6PD缺乏引起的新生儿高胆红素血症及核黄疸的发生.     

Molecular genotyping of G6PD mutations for neonates in Ningbo area

The aim of this study is to determine the cut‐off value of glucose‐6‐phosphate dehydrogenase (G6PD) activity and the mutation spectrum of G6PD gene in neonates with G6PD deficiency at Ningbo. Around 82233 neonatal blood samples were measured to determine G6PD activity. The positive samples were further detected with gene analysis. A total of 445 neonates were confirmed as G6PD deficiency, and the incidence in Ningbo was 1/185. 17 types of G6PD gene mutations were found, including 11 single‐site mutations and 6 double‐site mutations. Considering the significant differences in G6PD activity, the cut‐off value was detected to be 2.35 and 3.65 U/gHb for males and females, respectively. Significant differences in G6PD activities were noted and found to be varied from 4.61 to 6.02 U/gHb in different seasons (p < 0.0001). G6PD deficiency screening is a significant detection test for neonatal G6PD deficiency prevention. Our study highlights that the screening should be done using different cut‐off values according to the sexes in different seasons.