黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用研究

[目的]观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.[方法]48只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、 UUO组和UUO 黄芪治疗组(AM)、 UUO 氯沙坦治疗组(ARB).在造模后7、14d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中纤连蛋白(FN)和胶原I (col I)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠FN mRNA和col I mRNA表达量.[结果]与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,FN和col I表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的FN和col I明显降低(P<0.05),与ARB作用相似(P>0.05).[结论]黄芪可能通过抑制肾小管间质细胞外基质积聚,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

黄芪对UUO大鼠肾间质纤维化拮抗作用

[目的]观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,探讨其拮抗纤维化分子作用机制.[方法]48只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、 UUO组和UUO 黄芪治疗组(AM)、 UUO 氯沙坦治疗组(ARB).在造模后7、14d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化和Westem blot方法检测梗阻侧肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)表达.[结果]与Sham组比较,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,TGF-β1表达增高(P<0.05);AM治疗后可减低UUO大鼠肾小管损伤及肾间质相对面积,使肾组织中高表达的TGF-β1降低(P<0.05),与ARB作用相似(P>0.05).[结论]黄芪可能通过下调肾组织TGF-β1表达,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的研究阿魏酸哌嗪对单侧榆尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化是否有抑制作用及其肾脏保护作用的机制。方法75只SD大鼠设对照组（A组），结扎左侧输尿管（B组），分别给予阿魏酸哌嗪（C组），依那普利（D组），两者合用（E组）灌胃。术后第3、7和第14天测肾组织中羟脯氨酸含量，免疫组化测肾组织血管内皮生长因子（VEGF）、骨形成蛋白-7（BMP-7）、CD34表达（计算肾小管周围毛细血管指数，PCI）。结果各治疗组胶原含量明显减少，E组起效最早。UUO术后BMP-7、VEGF表达和PCI：B组逐渐减少，3个治疗组则明显上调。BMP-7、VEGF阳性面积和PCI与肾组织中胶原含量呈负相关（r=-0．68，-0．49，-0．52P〈0．01），VEGF阳性面积与PCI呈正相关（r=0．53，P〈0．01）。结论阿魏酸哌嗪通过上调肾组织中BMP-7、VEGF及PCI，抑制UUO大鼠肾间质纤维化，其疗效与依那普利相似，两药联合应用优于单独用药。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肝细胞生长因子和转化生长因子β1的调控

目的动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾小管间质纤维化大鼠肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和模型+黄芪治疗组。在造模后第3、7和14天处死动物,观察肾脏病理改变。采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1、HGF表达。用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠HGF mRNA和TGF-β1mRNA表达量。用Western blot检测大鼠HGF和TGF-β1蛋白表达量。结果与假手术组相比,各时间点的模型组大鼠肾脏病理损害进行性加重,黄芪治疗后可明显减轻模型组大鼠的肾小管损伤及肾间质纤维化程度(P<0.05)。随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾组织TGF-β1表达逐渐增加;HGF表达呈现先升高后下降的表达规律,在UUO术后第7天达高峰,此后大幅回落;与模型组各对应时间点比较,黄芪治疗后可使肾组织中的HGF表达显著增高,TGF-β1表达明显降低(P<0.05)。结论黄芪可能通过诱导HGF表达上调及抑制TGF-β1表达,减轻肾间质纤维化。     

超大剂量氯沙坦对肾间质纤维化中TGF-β1表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦对大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化中TGF-β1的影响,探讨超大剂量能否优于常规剂量起到更多的肾脏保护作用。方法建立大鼠UUO模型术后3d常规剂量治疗组、超大剂量治疗组、手术组和假手术组。药物干预组分别每天给予氯沙坦50mg.kg-1、氯沙坦500mg·kg-1灌胃,假手术组及手术组每天给予同体积生理盐水灌胃。观察模型第7、14和21d鼠尾袖带血压(TCP)、肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度(%INT)和转化生长因子(TGF)-β1mRNA的表达。结果随着梗阻时间延长,UUO组TCP逐渐增高、%INT、肾小管损害程度显著增加,TGF-β1 mRNA含量明显增加,与其余各组相比有显著差异(p<0.05)。结论超大剂量氯沙坦组相对与常规剂量,能更有效的控制血压,减轻肾小管损害和肾间质纤维化,显著抑制TGF-β1 mRNA表达,表明超大剂量氯沙坦能更充分地通过抑制TGF-β1的表达,减轻肾间质纤维化。     

补体C5aR受体在UUO大鼠模型肾组织中的表达

目的动态检测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中补体C5a受体（C5aR）的表达变化,从而探讨其在肾小管间质纤维化发展中的可能作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为UUO组及假手术（SOR）组,每组18只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第5、10、15天分别处死每组中6只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化检测肾组织C5aR的表达,RT-PCR检测C5aR的基因表达情况。结果UUO组第5天肾小管扩张,小管间质细胞部分变性,梗阻后第10天小管间质细胞可见坏死,间质纤维增多,第15天可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点显著高于SOR组（P〈0．01）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中仅有少量C5aR表达,UUO组术后第5、10及15天C5aR表达[（7．94±2．67）IOD,（12．39±2．64）IOD,（13．37±0．98）IOD]显著高于对应时间点的SOR组[（4．50±2．32）IOD,（5．69±1．73）IOD,（4．30±1．45）IOD]（P〈0．05,P〈0．01）,术后第10天明显高于第5天（P〈0．01）,而从第10天到第15天仅稍有增高。C5aRmRNA在UUO组从术后第5天到第10天梗阻侧肾脏C5aRmRNA表达明显增多（0．10±0．02到0．34±0．10）,而从第10天到第15天表达未见明显增多,甚至有降低的趋势（第15天为0．32±0．06）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中C5aR的表达在早期随着梗阻时间延长而上调,晚期则增多缓慢,其基因水平表达情况同蛋白基本一致,提示C5aR可能在肾脏局部通过与循环系统中的C5a结合在肾间质纤维化早期起作用。     

单侧输尿管梗阻大鼠Smad3,7的表达及肾通胶囊的影响

目的研究大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后TGF-β1,Smad3,7在肾组织的表达及肾通胶囊的影响.方法将24只中16只行左侧输尿管结扎,另8只行假手术,结扎后大鼠随机分为手术组、肾通治疗组,术后第8d观察梗阻肾组织病理改变,纤维化程度通过测定肾间质纤维化的面积变化,应用免疫组织化学检测肾组织TGF-β1,Smad3,7的表达.结果手术组TGF-β1、Smad3的表达增加,Smad7的表达减少,与假手术组相比有显著差异(P＜0.01),肾通治疗组与手术组相比,TGF-β1、Smad3的表达下调,Smad7的表达上调,差异显著(P＜0.05).结论肾通胶囊通过促进Smad7、抑制Smad3的表达,从而抑制TGF-β1的表达而阻抑肾间质纤维化.     

霉酚酸酯对UUO大鼠肾间质MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的通过霉酚酸酯（MMF）干预UUO大鼠模型，动态观察单核细胞趋化因子（MCP-1）、TGF-β1在梗阻侧肾组织中的表达。方法54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和MMF治疗组。于术后第7天、14天、21天每组分别处死6只大鼠。免疫组织化学染色观察MCP-1和TGF-β1在肾间质中的表达。结果在正常肾间质中，MCP-1和TGF-β1均只有少量表达，两者在UUO模型组中的表达均显著增高，MMF治疗组各时间点与相应UUO模型组比均有不同程度降低。结论MMF能部分延缓UUO模型肾间质纤维化的进展，可能与其早期下调MCP-1在肾间质中的表达抑制炎症反应，进而抑制致纤维化的关键因子TGF-β1表达有关。     

绞股蓝总皂甙对梗阻性肾病大鼠TGF-β/Smad信号通路及CTGF表达的影响

目的研究单侧输尿管结扎大鼠(UUO)肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、Smad7表达与肾间质纤维化之间的关系,以及绞股蓝总皂甙(GPs)对Smad7、CTGF的影响。方法采用UUO大鼠模型,将大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、GPs组。假手术组和模型组仅给予标准饲料30 g,GPs组于术前3 d至术后14 d每天给予GPs 200 mg.kg-1.d-1灌胃,分别于第3、7、14 d处死各组大鼠。免疫组化法检测各组肾组织CTGF和Smad7的表达;RT-PCR方法检测各组Smad7 mRNA、CTGF mRNA含量;Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组CTGF的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而Smad7表达明显低于假手术组(P<0.01);GPs组CTGF及肾小管间质损伤指数随治疗时间降低,第7天下降最明显,而Smad7表达随时间增高,第7天升至最高。与模型组相比,各时间段均有显著差异(P<0.01)。结论UUO大鼠肾组织中CTGF的表达可能通过TGF-β/Smad信号通道进行调节;绞股蓝总皂甙可以通过上调Smad7的表达来抑制结缔组织生长因子表达,进而遏制肾纤维化的进展。     

前列腺素E1对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E1（PGE1）拮抗肾间质纤维化的作用。方法：建立单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾小管间质病变模型，应用原位杂交、病理形态学观察、生化分析等技术，研究PGE1用药后肾组织中转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA的表达，肾小管间质病变及羟脯氨酸含量的变化。结果：大鼠UUO术后3d，肾间质水肿、单个核细胞浸润；14d后肾小管萎缩，间质纤维增生，间质面积增宽，伴随肾皮质中羟脯氨酸含量升高及TGFβ1mRNAg表达增多。后者的峰值出现先于羟脯氨酸峰值及间质面积增宽。PGE1可下调TGFβ1mRNA表达及羟脯氨酸含量，抑制间质中单个核细胞浸润。结论：PGE1改善UUO大鼠肾间质纤维化的原因至少与抑制单个核细胞浸润及TGFβ1mRNA表达有关。     

参麦注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激作用研究

目的探讨参麦注射液在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化进程中的可能作用。方法成年SD大鼠54只,随机分为假手术组、模型组和参麦治疗组。假手术组仅完成开腹过程,不结扎输尿管;模型组和参麦治疗组行左侧输尿管结扎术,术后参麦治疗组每天腹腔注射参麦注射液3ml/(kg.d),假手术组与模型组则每天腹腔注射等量生理盐水。各组分别于实验的d7、d14、d21处死动物6只,取左肾组织行HE染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检查,并测定梗阻侧肾组织中SOD和MDA含量。结果与模型组比较,参麦治疗组肾小管间质病理改变明显减轻,肾间质α-SMA表达减少;肾组织中SOD活性增加,MDA含量下降。结论参麦注射液可通过减少氧化应激,减少肾间质α-SMA表达而抑制肾间质纤维化进程。     

p21和p53在肾间质纤维化大鼠中表达的研究

目的动态观察p21和p53在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达,以及依那普利对其表达的调节。方法将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）、单侧输尿管结扎组（UUO组）和依那普利治疗组（EnT组）,每组30只。用Masson染色的方法动态观察梗阻侧肾脏病理变化,用RT—PCR的方法检测梗阻肾皮质p21mRNA和p53mRNA的变化;并观察依那普利对肾皮质p21和p53表达的调节。结果在UUO大鼠模型早期,肾皮质p21mRNA和p53mRNA的表达即有明显增高,随着梗阻时间的延长,p21和p53的表达逐渐增强,二者具备相关性;依那普利能明显抑制p21和p53的表达。结论p21和p53在UUO大鼠肾皮质呈高表达,依那普利可抑制其表达。p21可能通过p53参与介导了。肾小管间质纤维化的发病过程。     

桂枝茯苓胶囊对肾小管间质纤维化大鼠骨调素和CD44表达的影响

目的观察桂枝茯苓胶囊对小管间质纤维化（TIF）大鼠OPN和CD44表达的影响。方法利用SD大鼠行单侧输尿管梗阻（UUO）诱导建立TIF动物模型，72只SD大鼠随机分为假手术组（24只）、模型组（24只）和预防组（24只）。预防组接受桂枝茯苓胶囊管理（500mg·k^-1·d^-1），模型组、假手术组则以等体积生理盐水。3组分别于实验第7、14和21天3个时间点收获动物各8只。检测上述时间点各组动物肾脏小管损伤、间质炎症细胞浸润和纤维化等肾脏组织病理学变化特点。采用免疫组化观察和评价OPN／CD44在梗阻肾中表达以及桂枝茯苓胶囊对OPN／CD44表达的影响。结果梗阻肾在上述三个时间点小管间质损伤呈进行性加重。免疫组化结果显示OPN／CD44在TIF中呈高表达，且随着TIF的进展不断上升。桂枝茯苓胶囊可以降低OPN／CD44在TIF中的表达，与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。OPN／CD44在TIF中的表达同小管间质损伤程度呈正相关（r=0．78，0．77．P〈0．01）。结论桂枝茯苓胶囊部分通过下调OPN／CD44在梗阻肾中的表达，起到延缓小管间质纤维化进展的作用。     

单侧输尿管梗阻对肾脏水通道蛋白表达的影响及临床意义

目的 探讨单侧输尿管梗阻解除前后肾脏水通道蛋白(AQP)变化与尿液浓缩功能障碍之间的联系.方法 56只体重180～200 g成年雄性SD大鼠随机分为实验组(n=48只)和对照组(n=8只).实验组大鼠通过手术建立单侧输尿管梗阻模型并于相应时间点解除梗阻,对照组接受假手术.于相应时间点检测尿液渗透压改变,处死动物取出肾脏后通过Western blot检测梗阻前后AQP1、AQP2蛋白表达的变化,免疫组化观察蛋白表达部位.结果 梗阻后1、2 d及解除梗阻后1d,患侧AQP1、AQP2的表达随时间延长进行性下降,解除梗阻后7d其表达有所回升,AQP2于梗阻解除后14 d内恢复正常水平,而AQP1则在梗阻解除后21 d内达到正常水平.同时AQPs的变化趋势与患侧尿液渗透压改变趋势相同.梗阻解除前AQP2分布于集合管主细胞的胞浆及管周膜,解除梗阻后其表达更多的集中于管周膜.结论 AQP表达下降是造成梗阻性肾积水中尿液浓缩功能障碍的重要原因,同时梗阻解除后AQP2接受ADH的调节.     

单侧输尿管梗阻对肾脏水通道蛋白表达的影响及临床意义

目的 探讨单侧输尿管梗阻解除前后肾脏水通道蛋白（AQP）变化与尿液浓缩功能障碍之间的联系.方法 56只体重180～200 g成年雄性SD大鼠随机分为实验组（n=48只）和对照组（n=8只）.实验组大鼠通过手术建立单侧输尿管梗阻模型并于相应时间点解除梗阻,对照组接受假手术.于相应时间点检测尿液渗透压改变,处死动物取出肾脏后通过Western blot检测梗阻前后AQP1、AQP2蛋白表达的变化,免疫组化观察蛋白表达部位.结果 梗阻后1、2 d及解除梗阻后1d,患侧AQP1、AQP2的表达随时间延长进行性下降,解除梗阻后7d其表达有所回升,AQP2于梗阻解除后14 d内恢复正常水平,而AQP1则在梗阻解除后21 d内达到正常水平.同时AQPs的变化趋势与患侧尿液渗透压改变趋势相同.梗阻解除前AQP2分布于集合管主细胞的胞浆及管周膜,解除梗阻后其表达更多的集中于管周膜.结论 AQP表达下降是造成梗阻性肾积水中尿液浓缩功能障碍的重要原因,同时梗阻解除后AQP2接受ADH的调节.     

阿托伐他汀对肾间质纤维化大鼠间质巨噬细胞增殖的影响

目的 探讨阿托伐他汀对间质纤维化大鼠肾间质巨噬细胞积聚的影响及其可能的机制。方法 21只大鼠随机分为假手术、单侧输尿管梗阻（UUO)、UUO 阿托伐他汀治疗组，分别用免疫组化染色检测巨噬特异性抗原CD68和巨噬细胞集露刺激因子(M—CSF)以确定肾间质巨噬细胞数和M—CSF的量，并常规查各组血脂。结果 单侧输尿管梗阻第10d肾间质巨噬细胞积聚和M—CSF表达明显增加，阿托伐他汀治疗后二者均明显减少。模型组和治疗组巨噬细胞积聚程度与小管间质M—CSF表达呈正相关。各组血脂无显著性差异。结论 阿托伐他汀可显著减少肾间质巨噬细胞积聚程度，这可能与其下调小管间质M—CSF表达有关。     

Protective Effects of Nootkatone on Renal Inflammation,Apoptosis, and Fibrosis in a Unilateral Ureteral Obstructive Mouse Model

Nootkatone is one of the major active ingredients of Alpiniae oxyphyllae, which has been used as both food and medicinal plants for the treatment of diarrhea, ulceration, and enuresis. In this study, we aimed to investigate whether nootkatone treatment ameliorated the progression of chronic kidney diseases (CKD) and clarified its underlying mechanisms in an obstructive nephropathy (unilateral ureteral obstructive; UUO) mouse model. Our results revealed that nootkatone treatment preventively decreased the pathological changes and significantly mitigated the collagen deposition as well as the protein expression of fibrotic markers. Nootkatone could also alleviate oxidative stress-induced injury, inflammatory cell infiltration, and renal cell apoptotic death in the kidneys of UUO mice. These results demonstrated for the first time that nootkatone protected against the progression of CKD in a UUO mouse model. It may serve as a potential therapeutic candidate for CKD intervention.