下调RNA甲基化酶NSUN2表达对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2(NSUN2)表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法体外培养正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系（A172、U251、U87）,免疫印迹法检测NSUN2蛋白表达水平;用shNSUN2慢病毒（sh-NSUN2组）及shRNA scramble慢病毒（sh-CON组）感染U87细胞下调NSUN2表达,用CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB相比,胶质瘤细胞系A172、U251、U87的NSUN2蛋白表达量均明显增高（P<0.05）。与sh-CON组比较,sh-NSUN2组NSUN2蛋白表达水平、细胞增殖活力、侵袭能力和迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 胶质瘤NSUN2呈高表达,下调其表达明显抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA ZNF674-AS1过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）ZNF674-AS1过表达对胶质细胞瘤增殖、侵袭、迁移的影响。方法 体外培养正常星形胶质细胞（HA1800）和胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）,RT-PCR检测lncRNA ZNF674-AS1表达水平。将ZNF674-AS1 mimics转染U87细胞上调ZNF674-AS1表达,以转染阴性对照序列为对照,CCK8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。Starbase软件预测lncRNA ZNF674-AS1靶基因并应用双荧光素酶报告基因实验验证。结果 与正常星形胶质细胞（HA1800）比较,胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）lncRNA ZNF674-AS1的表达水平均明显降低（P<0.05）,其中U87细胞表达水平最低。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达,明显抑制U87细胞增殖、侵袭、迁移能力（P<0.05）。Starbase软件预测显示lncRNA ZNF674-AS1与性别决定区 Y 框蛋白 9（SOX9）基因有结合位点,双荧光素酶报告基因实验结果显示,SOX9基因是lncRNA ZNF674-AS1靶基因。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达的同时沉默SOX9基因表达,明显增强U87细胞增殖、侵袭和迁移能力（P<0.05）。结论 胶质瘤lncRNA ZNF674-AS1呈低表达,可能通过靶向下调SOX9基因表达,促进胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA SNHG16对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA核内小RNA宿主基因16（SNHG16）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR检测正常胶质细胞HEB、NHA和胶质瘤细胞A172、U251、U87、SHG-4中SNHG16的表达。用siRNA沉默U251细胞SNHG16的表达,分为NC-siRNA组和SNHG16-siRNA组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。结果 与正常胶质细胞HEB和NHA比较,胶质瘤细胞A172、U251、U87和SHG-4的SNHG16表达水平明显升高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较,SNHG16-siRNA组细胞增殖能力、细胞侵袭能力和细胞迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 SNHG16在胶质瘤细胞中高表达,特异性沉默SNHG16基因可以抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

LncRNA HNF1A-AS1在胶质瘤中的表达及功能研究

目的 研究长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA) HNF1A-AS1在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 运用实时定量PCR技术检测HNF1A-AS1在胶质瘤组织与正常脑组织以及胶质瘤细胞与正常胶质细胞之间的表达差异。利用特异小干扰RNA (si RNA)构建低表达的胶质瘤细胞系A172和U251。通过CCK-8实验、EDU实验、Transwell、流式实验研究胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡情况,Western blot研究与细胞迁移、侵袭及凋亡相关蛋白的表达变化。结果 LncRNA HNF1A-AS1在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中高表达。抑制HNF1A-AS1表达后,胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,细胞凋亡率增加。Western Blot结果显示:抑制HNF1A-AS1表达后,一些与细胞迁移、侵袭、凋亡相关蛋白的表达水平明显改变。结论 LncRNA HNF1A-AS1在胶质瘤中高表达,抑制HNF1A-AS1表达能降低胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,同时增加胶质瘤细胞的凋亡比率。因此,HNF1A-AS1可以作为脑胶质瘤的潜在治疗靶点。     

Evi1基因对胶质瘤细胞株U87/U251增殖、侵袭的影响

目的探讨Evi1基因在不同级别胶质瘤组织中的表达,以及调控该基因对胶质瘤细胞株U87和U251细胞增殖、细胞周期和侵袭影响,为靶向癌基因治疗胶质瘤提供客观依据。方法首先通过实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测人脑不同级别胶质瘤组织以及U87和U251细胞株中Evil基因的表达水平。用合成的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰下调U87和U251细胞Evi1基因表达作为干扰组,同时设空白和阴性对照组。qRT-PCR检测转染前后Evi1基因在U87和U251细胞中的表达和转染效率。CCK-8法检测实验组细胞的增殖能力,流式细胞仪分析Flow Cytometer(FCM)其细胞周期。Transwell以及划痕试验检测各组U87和U251的侵袭和迁移能力。以及用qRT-PCR分析下调Evi1基因后U87和U251细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达水平。结果 Evi1基因在胶质瘤组织中呈现高表达,且随着胶质瘤级别程度增加其表达水平亦上升,其中Ⅲ和Ⅳ级的胶质瘤组织以及U87、U251细胞Evi1基因表达明显高于非瘤脑组织(均P0.05)。通过siRNA下调Evi1基因后,胶质瘤细胞株U87和U251的增殖减缓(均P0.05),其侵袭和迁移能力明显下降(均P0.01),并能阻滞其细胞周期G1期(P0.05)。干扰组U87和U251细胞MMP2表达水平明显降低(均P0.01)。结论 Evi1基因在胶质瘤中呈高表达,干扰U87和U251细胞Evi1基因可抑制胶质瘤的增殖和侵袭。     

lncRNA LINC00689靶向调控miRNA-634促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链基因间非蛋白编码RNA689（LINC00689）对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 RT-PCR实验检测正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系A172、U251、U87、SHG-4中LINC00689和miRNA-634的表达。将si-NC、si- LINC00689、miRNA-634 mimics、miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-634质粒转染至U251细胞中;CCK-8实验检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB比较,胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-4的LINC00689表达水平较高,而miRNA-634表达水平较低（P<0.05）。与si-NC组比较,si-LINC00689组LINC00689表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显较低（P<0.05）。与miRNA-NC组比较,miRNA-634 mimics组miRNA-634表达水平明显增高（P<0.05）,细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显降低（P<0.05）。与si- LINC00689+anti-miRNA-NC组比较,si- LINC00689+anti-miRNA-634组细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显增高（P<0.05）。结论 LINC00689可以促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与靶向调控miRNA-634有关。     

过表达TBX2对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨TBX2表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 采用RT-qPCR和免疫印迹法检测53例胶质瘤组织和瘤旁组织TBX2mRNA和蛋白表达水平。体外培养胶质瘤细胞（U251、U87和SHG-44）和正常星型胶质细胞（HA1800）,采用RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平。构建TBX2过表达或低表达U251细胞株,分别采用WST-1法检测胶质瘤细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 胶质瘤组织TBX2 mRNA和蛋白表达水平明显高于瘤旁组织（P<0.05）,而且,高级别胶质瘤TBX2表达水平显著高于低级别胶质瘤（P<0.05）。相比于人正常星型胶质细胞系HA1800,胶质瘤细胞系U251、U87、SHG-44细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）;而且,U251细胞TBX2表达水平显著高于U87和SHG-44细胞（P<0.05）,因此使用U251细胞进行后续实验。过表达TBX2显著增加U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）,低表达TBX2显著抑制U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论 胶质瘤TBX2呈高表达,与胶质瘤增殖、侵袭能力有关。     

Wip1基因在人脑胶质瘤细胞恶性增殖中的作用及其机制

目的研究Wip1基因在人脑胶质瘤细胞增殖的作用及机制。方法构建人Wip1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默胶质瘤细胞U251及U87-MG细胞的Wip1基因表达,检测细胞增殖能力。流式细胞术PI单染法检测Wip1基因沉默后细胞周期分布。实时定量PCR法及Western blotting分别检测差异性基因m RNA及蛋白表达。结果胶质瘤细胞Wip1基因表达被有效沉默。Wip1基因沉默的胶质瘤细胞增殖变慢,在U87-MG细胞更加明显。细胞周期分析显示:Wip1基因沉默对U251细胞周期无明显影响,而U87-MG细胞则在10 d时出现明显S期增多和G1、G2期细胞减少。Wip1基因沉默后,U251细胞中CDKN2A和p14ARF基因表达下调,而在U87-MG细胞中表达均上调。Western blotting结果显示:在U251与U87-MG胶质瘤细胞中p38MAPK表达均上调。在U87-MG细胞中p53及p-p53(Ser 15)表达均上调,但在U251细胞中无明显变化。结论 Wip1对胶质瘤细胞增殖具有重要作用。在U87-MG细胞增殖作用主要与其调节p53功能有关。     

Hax-1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用

目的 探讨造血干细胞特异性相关结合蛋白-1（Hax-1）对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择2018年9月至2019年6月手术切除并得到术后病理证实的胶质瘤组织35例和颅脑损伤内减压术切除的正常脑组织35例,采用qRT-PCR检测Hax-1 mRNA水平;同时检测胶质瘤细胞系（U87、A172、T98及U343）和人星形胶质细胞（NHAs）Hax-1 mRAN水平。使用Lipofectamine 2000法将Hax-1 siRNAs和阴性对照siRNA转染U87细胞构建Hax-1低表达细胞株,将Hax-1高表达质粒和PCDNA3.1空载质粒转染U343细胞构建Hax-1过表达细胞株,使用蛋白印迹法验证转染效果,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平（NF-κB、CCND1、C-myc、MMP-2、MMP-9）。结果 胶质瘤组织Hax-1 mRNA水平明显高于正常脑组织（P<0.05）;胶质瘤细胞系（U87、A172、T98及U343）Hax-1 mRNA水平明显高于人星形胶质细胞（P<0.05）,其中U87细胞Hax-1 mRNA水平最高,U343细胞最低。U343细胞转染Hax-1过表达质粒后,Hax-1蛋白水平显著增高（P<0.05）,细胞增殖、侵袭、迁移能力均明显增强（P<0.05）,NF-κB p65及IκBα蛋白磷酸化水平以及CCND1、C-Myc、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。U87细胞转染Hax-1 siRNA后Hax-1蛋白水平显著降低（P<0.05）,细胞增殖、侵袭、迁移能力均明显降低（P<0.05）,NF-κB p65及IκBα蛋白磷酸化水平以及CCND1、C-Myc、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 胶质瘤组织Hax-1呈高表达,明显促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与激活NF-κB信号通路有关。     

RNA结合蛋白RBM38表达对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的探讨RNA结合蛋白RBM38(RNA结合基序蛋白38,RNA-binding motif protein 38)在胶质瘤组织和细胞中的表达水平及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调节作用。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测胶质瘤组织和瘤旁正常组织的RBM38表达水平。采用q RT-PCR和Western blot检测胶质瘤细胞U87、U251和正常星形胶质细胞HA1800的RBM38表达水平。用免疫组化染色检测59例胶质瘤组织的RBM38表达水平,并分析其与临床病理资料的关系。将靶向RBM38的特异性小干扰RNA运用脂质体介导转染法转染至胶质瘤细胞U87和U251。应用CCK-8(cholecystokinin-8)增殖实验、划痕实验、Transwell小室实验、流式细胞仪测凋亡细胞,检测RBM38对于胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。采用q RT-PCR检测抑制RBM38表达后肿瘤细胞P53基因的表达水平。结果相较于瘤旁的脑组织,胶质瘤组织RBM38的表达量明显升高(P 0. 05)。胶质瘤细胞中的RBM38表达水平明显高于正常胶质细胞(均P 0. 001)。免疫组化结果显示,与低级别胶质瘤相比,高级别胶质瘤的RBM38表达水平更高(P 0. 05)。抑制RBM38的表达后,胶质瘤细胞U87和U251的增殖速率明显下降、迁移距离变短、能透过生物膜的细胞数目明显下降(均P 0. 05)。下调了RBM38的表达后胶质瘤细胞的凋亡比率升高(P 0. 05)。被抑制了RBM38表达的胶质瘤细胞P53基因的表达水平升高(P 0. 05)。结论 RBM38在胶质瘤组织及细胞系中呈高表达,RBM38的高表达与胶质瘤的临床分级密切相关。下调RBM38的表达后能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进细胞的凋亡,并使P53基因的表达水平增高;可能为临床诊断和治疗胶质瘤提供新的靶点。     

沉默HIF-1α基因对U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响

目的 观察沉默低氧诱导因子1α(HIF-1a)基因后对胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响.方法 实验分3组,干扰组(转染表达HIF-1α-shRNA的质粒)、对照干扰组(转染阴性对照shRNA序列)及未处理组.干扰组利用前期构建的HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,构建HIF-1α-shRNA慢病毒表达载体,在脂质体介导下转染人胶质母细胞瘤细胞U87.采用RT-PCR和Western blotting检测HIF-1α基因干扰效率,MTT法检测细胞生长增殖能力,迁移实验检测细胞的体外迁移能力,Transwell小室模型检测细胞的体外侵袭及转移能力.结果 RT-PCR和Western blotting实验证实,与对照干扰组及未处理组比较,干扰组细胞HIF-1αmRNA表达水平明显下降,蛋白条带明显减弱.MTT细胞增殖实验显示,干扰组细胞增殖水平较其他2组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell小室侵袭实验中,未处理组、对照干扰组、干扰组穿膜细胞数分别为(125.2±10.8)个、(118.3±8.3)个、(60.9±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α-shRNA能有效抑制U87细胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表达,并能抑制U87细胞的增殖、侵袭及转移能力.

Abstract：

Objective To observe the influence of silencing hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)gene on the proliferation, invasion and metastasis of glioblastoma U87 cells. Methods The samples were divided into 3 groups: blank group: samples without giving any treatments, control group: cells with empty shRNA vector, and experimental group: cells with HIF-1α-shRNA transfection complex. HIF-1α gene was silenced by shRNA constructed in early time; and HIF-1α-shRNA lentivirus vector was constructed in the experimental group, and then transfected into glioblastoma U87 cells with the mediation of liposome. The interference efficiency was detected by using RT-PCR and Western blotting, and cell proliferation was measured by MTT assay; cell migration in vitro was observed by migration test, and invasion and metastasis abilities were detected by Transwell booth model. Results As compared with those in cells of the control and blank groups, the mRNA and protein expressions of HIF-1α in cells of the experimental group were significantly decreased; MTT assay showed that the cell proliferation in the experimental group was significantly lower than that in the other 2 groups (P<0.05). The number of penetrating cells of the blank group, control group and experimental group in Transwell chamber invasion assay were (125.2±10.8), (118.3±8.3), (60.9±5.4), respectively, and significant differences were noted between each 2 groups (P<0.05). Conclusion The mRNA and protein levels of HIF-1α in U87 cells are efficiently depressed by HIF-1α-shRNA, and so are the proliferation, invasion and metastasis abilities of U87 cells.     

CXCR4表达上调对U251细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨CXC趋化因子-4受体（CXCR4）表达上调对U251细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法 构建携带CXCR4基因的质粒,采用电转染法将携带CXCR4基因的质粒整合到胶质瘤U251细胞的基因组中,然后将细胞分为空白对照组、阴性对照组和CXCR4上调组,分别从mRNA水平和蛋白水平检测CXCR4及其他相关基因的表达;MTT试验检测细胞增殖能力的改变;划痕试验检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭性的变化。结果 与空白对照组和阴性对照组相比,CXCR4上调组U251细胞CXCR4在mRNA和蛋白水平上表达都增强,细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强;而空白对照组和阴性对照组之间并无明显变化。结论 CXCR4在胶质瘤的增殖、侵袭、迁移行为中发挥着重要的作用,可以被视为胶质瘤治疗的靶向基因。     

Effect of silencing HIF-1α on proliferation, invasion and migration of glioblastoma U87 cells

The objective of the study was to evaluate the effect of silencing hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α) on proliferation, invasion, and migration of glioblastoma U87 cells. HIF-1α-shRNA lentiviral vector was designed for liposome-mediated transfection into U87 cells. The efficiency of interference was assessed by RT-PCR and Western blot. Cell proliferation was measured by MTT assay. Cell migration was observed by the migration test. The capabilities of invasion and migration were detected using the Transwell model. The research involved experiments in the interference group (shRNA transfected), the control interference group (empty vector transfected), and the untreated (non-transfected) group. Compared with the control interference group and the untreated group, the expressions of HIF-1α mRNA and protein were significantly down-regulated, and the proliferation and invasion of U87 cells were significantly inhibited in the interference group. HIF-1α mRNA and protein are effectively suppressed by HIF-1α-shRNA in U87 cells, which appears to inhibit proliferation, invasion, and migration of U87 cells.     

芹菜素对脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 探讨芹菜素对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法 体外培养脑胶质瘤U87细胞,加入20、40、80 μmol/L芹菜素干预,以培养基作为空白对照组。使用MTT法检测U87细胞的增长抑制率,使用Hocst染色法观察细胞凋亡情况;使用Transwell检测U87细胞侵袭能力;划痕实验法检测U87细胞迁移能力;使用免疫印迹法检测U87细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、Bak1、Caspase-3表达水平。结果 与空白对照组比较,芹菜素组细胞抑制率显著增加（P<0.05）、细胞凋亡数目明显增加（P<0.05）、细胞侵袭数目显著下降（P<0.05）、细胞迁移数目明显减少（P<0.05）,U87细胞MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达显著下降（P<0.05）,Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.05）;而且均呈浓度依赖性。结论 芹菜素可有效抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、促进凋亡,可能与下调MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达水平,上调Caspase-3表达有关。     

FOXC2过表达通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胶质瘤U87细胞增殖、迁移

目的 探讨FOXC2过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其机制。方法 体外培养人脑胶质瘤U87细胞和人脑胶质细胞HEB。U87细胞随机分为空白组（未转染任何质粒）、空载体组（转染pcDNA3.1空载体质粒）、FOXC2过表达组（转染pcDNA3.1-FOXC2过表达质粒）、FOXC2+抑制剂组[转染pcDNA3.1-FOXC2质粒+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535（20 μmol/L）]。采用qRT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性,克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 与HEB细胞比较,U87细胞FOXC2 mRNA表达水平显著升高（P<0.05）。FOXC2过表达,显著促进U87细胞增殖、侵袭、迁移（P<0.05）,显著增加Vimentin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平以及细胞克隆形成率（P<0.05）,显著降低E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。抑制Wnt/β-catenin信号通路,显著抑制FOXC2过表达对U87细胞的作用（P<0.05）。结论 FOXC2过表达可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进U87细胞发生上皮间质转化,从而增加胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

β-TrCP1和HAUSP影响胶质母细胞瘤细胞增殖和侵袭并调控UHRF1蛋白水平

目的分析β-转导重复相容蛋白（β-TrCP1）和疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶（HAUSP）对胶质母细胞瘤增殖和侵袭能力以及表观遗传调控因子UHRF1表达的影响。 方法胶质母细胞瘤U87细胞内分别转染N1空质粒（NC组）和β-TrCP1-N1过表达质粒（β-TrCP1组）,以及分别转染无意义siRNA序列（siRNA阴性对照,si-NC组）和靶向HAUSP mRNA的siRNA（si-HAUSP组）。RT-qPCR法和Western blot法分别检测各组细胞中β-TRCP1、HAUSP和UHRF1的mRNA以及蛋白水平。CCK8法和基质胶-transwell侵袭实验分别检测各组细胞的增殖和侵袭能力。 结果质粒转染后第4天和第5天,β-TrCP1组细胞的增殖能力显著低于同时期的NC组细胞（均P<0.05）;转染第4天,β-TrCP1组穿过基质胶的细胞数显著低于NC组细胞（P<0.05）。转染siRNA后第4天和第5天,si-HAUSP组细胞的增殖能力显著低于同时期si-NC组细胞（P<0.05）;转染si-HAUSP 4 d,si-HAUSP组穿过基质胶的细胞数显著低于si-NC组（P<0.05）。此外,过表达β-TrCP1和敲低HAUSP均不影响UHRF1的mRNA水平（均P>0.05）,但均可降低UHRF1蛋白水平（均P<0.05）。 结论过表达β-TrCP1和敲低HAUSP均可抑制胶质母细胞瘤U87细胞的增殖和侵袭能力,同时降低UHRF1蛋白水平。UHRF1蛋白水平改变可能是β-TrCP1和HAUSP影响胶质母细胞瘤增殖和侵袭能力的机制之一。     

RNA干涉CD44基因抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖与侵袭性研究

目的通过合成靶向分化抗原簇44(CD44)基因的siRNA片段,下调CD44在脑胶质瘤细胞U251中的表达,揭示其在胶质瘤增殖、迁移和侵袭中所起的作用。方法根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段转染U251细胞,利用荧光实时定量(qRT-PCR)检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;蛋白印迹实验(Western blot)检测CD44基因蛋白水平的变化;四甲基偶氮唑蓝染色(methyhhiazolyl tetrazolium,MTT)法检测U251细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U251细胞的迁移与侵袭能力变化。结果体外合成的CD44-siRNA能有效抑制U251细胞中CD44基因在mRNA水平与蛋白水平的表达(P0.05),并抑制细胞的增殖(P0.05)和迁移侵袭能力(P0.05)。结论 CD44-siRNA能够有效抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的肿瘤基因治疗奠定了基础。     

钙蛋白酶-1在胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤组织中的表达及其对U87胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 收集2015年1月至2018年3月手术切除的胶质瘤组织和瘤旁正常脑组织各57例。体外培养U87细胞,将阴性对照小干扰RNA（NC组）和钙蛋白酶-1小干扰RNA（钙蛋白酶-1组）转染至人胶质瘤细胞株U87,以未转染的U87细胞为对照组。采用RT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验评估U87细胞迁移能力。结果 胶质瘤组织钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平均显著高于瘤旁正常脑组织（P<0.05）。钙蛋白酶-1组U87细胞钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率以及转化生长因子-β、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9 mRNA表达水平均明显低于对照组和NC组（P<0.05）,而对照组和NC组均无统计学差异（P>0.05）。结论 钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤中表达升高,而抑制钙蛋白酶-1表达可能通过影响上皮间质转化,抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。