钙蛋白酶-1在胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤组织中的表达及其对U87胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 收集2015年1月至2018年3月手术切除的胶质瘤组织和瘤旁正常脑组织各57例。体外培养U87细胞，将阴性对照小干扰RNA（NC组）和钙蛋白酶-1小干扰RNA（钙蛋白酶-1组）转染至人胶质瘤细胞株U87，以未转染的U87细胞为对照组。采用RT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达水平，Transwell实验检测U87细胞侵袭能力，划痕实验评估U87细胞迁移能力。结果 胶质瘤组织钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平均显著高于瘤旁正常脑组织（P<0.05）。钙蛋白酶-1组U87细胞钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率以及转化生长因子-β、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9 mRNA表达水平均明显低于对照组和NC组（P<0.05），而对照组和NC组均无统计学差异（P>0.05）。结论 钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤中表达升高，而抑制钙蛋白酶-1表达可能通过影响上皮间质转化，抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。     

过表达TBX2对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨TBX2表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 采用RT-qPCR和免疫印迹法检测53例胶质瘤组织和瘤旁组织TBX2mRNA和蛋白表达水平。体外培养胶质瘤细胞（U251、U87和SHG-44）和正常星型胶质细胞（HA1800）,采用RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平。构建TBX2过表达或低表达U251细胞株,分别采用WST-1法检测胶质瘤细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 胶质瘤组织TBX2 mRNA和蛋白表达水平明显高于瘤旁组织（P<0.05）,而且,高级别胶质瘤TBX2表达水平显著高于低级别胶质瘤（P<0.05）。相比于人正常星型胶质细胞系HA1800,胶质瘤细胞系U251、U87、SHG-44细胞TBX2 mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）;而且,U251细胞TBX2表达水平显著高于U87和SHG-44细胞（P<0.05）,因此使用U251细胞进行后续实验。过表达TBX2显著增加U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）,低表达TBX2显著抑制U251细胞增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论 胶质瘤TBX2呈高表达,与胶质瘤增殖、侵袭能力有关。     

FOXC2过表达通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胶质瘤U87细胞增殖、迁移

目的 探讨FOXC2过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其机制。方法 体外培养人脑胶质瘤U87细胞和人脑胶质细胞HEB。U87细胞随机分为空白组（未转染任何质粒）、空载体组（转染pcDNA3.1空载体质粒）、FOXC2过表达组（转染pcDNA3.1-FOXC2过表达质粒）、FOXC2+抑制剂组[转染pcDNA3.1-FOXC2质粒+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535（20 μmol/L）]。采用qRT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性,克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 与HEB细胞比较,U87细胞FOXC2 mRNA表达水平显著升高（P<0.05）。FOXC2过表达,显著促进U87细胞增殖、侵袭、迁移（P<0.05）,显著增加Vimentin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平以及细胞克隆形成率（P<0.05）,显著降低E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。抑制Wnt/β-catenin信号通路,显著抑制FOXC2过表达对U87细胞的作用（P<0.05）。结论 FOXC2过表达可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进U87细胞发生上皮间质转化,从而增加胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

下调RNA甲基化酶NSUN2表达对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2(NSUN2)表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法体外培养正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系（A172、U251、U87）,免疫印迹法检测NSUN2蛋白表达水平;用shNSUN2慢病毒（sh-NSUN2组）及shRNA scramble慢病毒（sh-CON组）感染U87细胞下调NSUN2表达,用CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB相比,胶质瘤细胞系A172、U251、U87的NSUN2蛋白表达量均明显增高（P<0.05）。与sh-CON组比较,sh-NSUN2组NSUN2蛋白表达水平、细胞增殖活力、侵袭能力和迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 胶质瘤NSUN2呈高表达,下调其表达明显抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA ZNF674-AS1过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）ZNF674-AS1过表达对胶质细胞瘤增殖、侵袭、迁移的影响。方法 体外培养正常星形胶质细胞（HA1800）和胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）,RT-PCR检测lncRNA ZNF674-AS1表达水平。将ZNF674-AS1 mimics转染U87细胞上调ZNF674-AS1表达,以转染阴性对照序列为对照,CCK8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。Starbase软件预测lncRNA ZNF674-AS1靶基因并应用双荧光素酶报告基因实验验证。结果 与正常星形胶质细胞（HA1800）比较,胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）lncRNA ZNF674-AS1的表达水平均明显降低（P<0.05）,其中U87细胞表达水平最低。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达,明显抑制U87细胞增殖、侵袭、迁移能力（P<0.05）。Starbase软件预测显示lncRNA ZNF674-AS1与性别决定区 Y 框蛋白 9（SOX9）基因有结合位点,双荧光素酶报告基因实验结果显示,SOX9基因是lncRNA ZNF674-AS1靶基因。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达的同时沉默SOX9基因表达,明显增强U87细胞增殖、侵袭和迁移能力（P<0.05）。结论 胶质瘤lncRNA ZNF674-AS1呈低表达,可能通过靶向下调SOX9基因表达,促进胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

槐定碱通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭

目的 探讨槐定碱对人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法 体外培养人胶质瘤U87细胞,加入槐定碱[0 mg/ml（对照组）,1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,3.0 mg/ml]共培养24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法检测细胞β-catenin、E-cadherin、Vimentin和MMP-9蛋白表达,RT-PCR检测细胞Vimentin、MMP-9 mRNA表达。结果 槐定碱明显抑制U87细胞迁移、侵袭能力（P<0.001）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.001）。槐定碱明显抑制U87细胞β-catenin蛋白、Vimentin和MMP-9 mRNA和蛋白表达（P<0.01）,明显增强E-cadherin蛋白表达（P<0.01）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.01）。结论 槐定碱能抑制人胶质瘤U87细胞的迁移和侵袭,机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性,阻断细胞上皮间质转化过程。     

STIP1对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）表达对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，及其对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。方法 免疫印迹法检测体外培养的正常胶质细胞（SVG）和人胶质瘤细胞（U251、U87和U37）STIP1蛋白表达水平。NC-siRNA或STIP1-siRNA质粒转染U251细胞，CCK-8法检测U251细胞增殖；Transwell实验检测U251细胞侵袭能力；流式细胞术检测U251细胞凋亡率；免疫印迹法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。结果 与正常胶质细胞SVG比较，胶质瘤细胞U251、U87和U373的STIP1蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较，STIP1-siRNA组STIP1蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞侵袭力明显明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显增高（P<0.05），而且，p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 STIP1在胶质瘤细胞中呈高表达，抑制STIP1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭、促进凋亡，机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

芹菜素对脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 探讨芹菜素对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法 体外培养脑胶质瘤U87细胞,加入20、40、80 μmol/L芹菜素干预,以培养基作为空白对照组。使用MTT法检测U87细胞的增长抑制率,使用Hocst染色法观察细胞凋亡情况;使用Transwell检测U87细胞侵袭能力;划痕实验法检测U87细胞迁移能力;使用免疫印迹法检测U87细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、Bak1、Caspase-3表达水平。结果 与空白对照组比较,芹菜素组细胞抑制率显著增加（P<0.05）、细胞凋亡数目明显增加（P<0.05）、细胞侵袭数目显著下降（P<0.05）、细胞迁移数目明显减少（P<0.05）,U87细胞MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达显著下降（P<0.05）,Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.05）;而且均呈浓度依赖性。结论 芹菜素可有效抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、促进凋亡,可能与下调MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达水平,上调Caspase-3表达有关。     

CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制

目的 探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（CREPT）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44，并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞；免疫印迹法检测蛋白表达水平；CCK-8法检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 U251细胞CREPT蛋白表达水平最高，SHG44细胞最低。沉默CREPT后，U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05），p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降（P<0.05）。过表达CREPT后，U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05），p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响（P<0.05）。结论 CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA LINC00689靶向调控miRNA-634促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链基因间非蛋白编码RNA689（LINC00689）对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 RT-PCR实验检测正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞系A172、U251、U87、SHG-4中LINC00689和miRNA-634的表达。将si-NC、si- LINC00689、miRNA-634 mimics、miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-NC、si- LINC00689+anti-miRNA-634质粒转染至U251细胞中；CCK-8实验检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移。结果 与正常胶质细胞HEB比较，胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-4的LINC00689表达水平较高，而miRNA-634表达水平较低（P<0.05）。与si-NC组比较，si-LINC00689组LINC00689表达水平、细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显较低（P<0.05）。与miRNA-NC组比较，miRNA-634 mimics组miRNA-634表达水平明显增高（P<0.05），细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显降低（P<0.05）。与si- LINC00689+anti-miRNA-NC组比较，si- LINC00689+anti-miRNA-634组细胞增殖活力、侵袭和迁移细胞数明显增高（P<0.05）。结论 LINC00689可以促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，其机制可能与靶向调控miRNA-634有关。     

胶质瘤干细胞外泌体通过PI3K/Akt信号通路促进胶质瘤U87细胞侵袭、迁移

目的 探讨胶质瘤干细胞（GSCs）外泌体（exo）对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移的影响。方法 取对数生长期U87细胞,应用干细胞培养液分离、培养胶质瘤U87细胞中GSCs并提取、鉴定GSCs-exo。取对数生长期U87细胞随机分为4组:对照组和高、中、低GSCs-exo浓度组（分别加入20、40、80 μg/ml的GSCs-exo）。Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验检测U87细胞迁移能力,免疫印记法检测U87细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、L1CAM的表达水平。结果 成功分离GSCs并获得GSCs-exo。GSCs-exo组U87侵袭细胞数、细胞迁移率明显高于对照组（P<0.05）,L1CAM、PI3K及p-AKt/Akt表达水平明显高于对照组（P<0.05）,而且均呈浓度依赖性（P<0.05）。结论 GSCs-exo可促进胶质瘤侵袭与转移,其机制可能与上调L1CAM、PI3K表达,促进Akt磷酸化有关。