牡蛎共生菌Chaetomium globosum ML-4发酵液的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备薄层色谱和高效液相色谱等方法对牡蛎共生菌Chaetomium globosum ML-4发酵液的化学成分进行分离纯化,获得5个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin V(1),chaetoglobosin Vb(2),tyrosol(3),5-methyluracil(4),uracil(5)。采用MTT法测定化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外细胞毒活性,结果发现,化合物1对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制活性,其IC50为60.5 mg·L-1,阳性对照药顺铂的IC50为19.96 mg·L-1。进一步研究发现,化合物1可引起SMMC-7721细胞G2期细胞周期阻滞,并能诱导SMMC-7721细胞凋亡;SMMC-7721细胞中Bcl-2/Bax的比值下降,Caspases-3,-8,-9的表达增加,Akt蛋白的表达和磷酸化水平下降。上述结果表明,化合物1对SMMC-7721细胞的体外抗肿瘤活性与诱导细胞周期G2期阻滞以及细胞凋亡相关;其诱导凋亡作用同时涉及线粒体途径和死亡受体途径,且与PI3K/Akt信号通路活性下降相关。     

C-3芳节叉基噻二唑并均三唑酮氧氟沙星衍生物的合成及抗肿瘤活性

目的发现氟喹诺酮由抗菌活性向抗肿瘤活性转化的有效结构修饰策略。方法基于药效团和骨架迁越药物设计原理,用均三唑杂环和α,β-不饱和酮分别作为C-3羧基的等排体和稠合修饰基,设计合成了C-3噻二唑并均三唑不饱和酮目标化合物(6a^61)。用元素分析和光谱数据确证化合物的结构,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)方法评价了目标化合物体外对SMMC-7721、Capan-1和HL603种癌细胞株的抗增值活性。结果合成了12个新结构的C-稠杂环不饱和酮化合物,体外抗肿瘤活性显著强于母体化合物1,其中含氟苯基和邻甲氧苯基化合物的活性与对照抗肿瘤药多柔比星相当。结论噻二唑并均三唑不饱和酮骨架替代氟喹诺酮C-3羧基有利于提高其抗肿瘤活性。     

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目的 为发现抗菌氟喹诺酮向抗肿瘤活性转化的有效修饰策略。方法 以均三唑为氧氟沙星C-3羧基的等排体、通过缩环合反应设计了C-3噻二唑并均三唑稠杂环目标化合物(5a~5l,6a~6l)。用元素分析和光谱数据确证化合物的结构,用MTT方法评价了目标化合物对体外培养的SMMC-7721、Capan-1和HL60 3种癌细胞株的抗增值活性。结果 合成了12个新型结构的C-3稠杂环目标化合物,体外抗肿瘤活性强于母体1和相应中间体硫醚酮5的活性,但弱于硫醚酮缩氨基硫脲化合物6的活性。结论 C-3稠杂环等排体的结构修饰值得进一步研究。     

2-羟基查耳酮类衍生物的合成与抗肿瘤活性筛选

目的设计2-羟基查耳酮类衍生物的合成路线,并对其进行体外抗肿瘤活性实验。方法以2,4-二羟基苯乙酮为原料,经过4步反应得到13个5-哌啶基甲基-4-乙氧基-2-羟基-查耳酮类化合物。用MTT法检测13个目标化合物对对数生长期的人胃癌细胞株SGC-7901、人结肠癌细胞株SW-480、人白血病细胞株L1210、人乳腺癌细胞株MCF-7等4种癌细胞株增殖的抑制作用,以研究目标化合物体外抗肿瘤活性。结果合成了13个目标化合物,结构均经过1H-NMR确证。体外抗肿瘤活性筛选表明,这一类化合物具有良好的抗肿瘤活性。结论该合成路线反应温和、操作简便、对环境友好,目标化合物有较强抗肿瘤活性,可进行深入研究。     

藏药镰形棘豆的化学成分及其抗肿瘤活性研究

目的:研究藏药镰形棘豆Oxytropis falcata的化学组成及其抗肿瘤活性.方法:通过硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化镰形棘豆的化学成分,通过NMR等波谱技术解析鉴定化合物结构,通过MTT法研究化合物1,3,5抑制人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16F10、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HuH7以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖影响.结果:从镰形棘豆乙醇提取物中分离得到了5个化合物,分别为7-甲氧基二氢黄酮(7-methoxy flavanone,1),7-羟基二氢黄酮(7-hydroxy flavonone,2),2′,4′-二羟基查耳酮(2′,4′-dihydroxy chalcone,3),2′,4′-二羟基-4′-甲氧基查尔酮(2′,4′-dihydroxy-4′-methoxy chalcone,4),N-(2-苯乙基)肉桂酰胺(N-2-phenylethyl cinnamamide,5).四甲基偶氮唑盐比色(MTT)结果表明化合物3具有较好的抗肿瘤活性,其IC50分别为68.60,169.67,105.88,175.18,172.37μmol·L-1.结论:其中化合物5为首次从该种属中分离得到,化合物3对5种肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用.     

水翁花黄酮DMC诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的机制研究

目的:研究水翁花黄酮类化合物2’,4’-二羟基-6’-甲氧基-3’,5’-二甲基查耳酮(DMC)体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用及其分子机制。方法:采用改进的Sellins-Cohen方法检测不同浓度的DMC对SMMC-7721细胞DNA片段化的影响。用PCR-ELISA法测定肿瘤细胞的端粒酶活性,用半定量RT-PCR法测定c-myc和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的mRNA表达量,Western blot法检测c-myc及hTERT蛋白的表达。结果:DMC作用于人肝癌SMMC-7721细胞后,引起SMMC-7721细胞DNA片段化率增大,片段化率效果有明显的浓度依赖性。与对照组相比,20μmol·L-1DMC处理48 h后,肝癌细胞的端粒酶活性下降了(66.2±2.1)%。c-myc和hTERT的mRNA表达水平分别下降了(67.3±2.1)%,(64.4±2.3)%,c-myc和hTERT的蛋白表达水平分别下降了(69.6±1.9)%,(71.3±2.4)%。结论:DMC能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制可能与c-myc基因和hTERT的mRNA以及蛋白的表达降低有关。     

3-芳苄叉基噻唑酮-氟喹啉-4-酮氧氟沙星衍生物的合成及抗肿瘤活性

目的 进一步发现氟喹诺酮的有效结构修饰策略以提高其抗肿瘤活性。方法 基于药效团拼合药物设计原理,用噻唑酮作为氧氟沙星C-3羧基的等排体、芳苄叉基为其修饰基,构建了新的3-芳苄叉噻唑酮-氟喹啉-4-酮的氧氟沙星衍生物(6a~6l),其结构经用元素分析和光谱数据确证。MTT方法评价了体外对SMMC-7721、Capan-1和HL60这3种癌细胞株的抗增值活性。结果 12个新结构的氟喹诺酮-3-噻唑不饱和酮目标化合物被合成,其活性显著强于母体氧氟沙星1,其中卤苯基化合物强于其他取代基的活性,尤其是氯苯基化合物(6k)对Capan-1细胞的活性与对照抗肿瘤药多柔比星相当。结论 芳苄叉基噻唑酮替代氟喹诺酮C-3羧基有利于提高其抗肿瘤活性。     

青龙衣中二芳基庚烷类成分研究

目的:研究青龙衣中具有抗肿瘤活性的二芳基庚烷类成分。方法:采用硅胶柱色谱和大孔吸附树脂等色谱方法对药材抗肿瘤活性部位即乙酸乙酯部位和氯仿部位进行目的性分离。结果:共分离得到5个二芳基庚烷类化合物。利用核磁共振波谱方法确定了化合物的结构,分别为1-(4’-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基-4″-羟基苯基)-4-烯-3-庚酮(I),1-(4’-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基-4″-羟基苯基)-5-甲氧基-3-庚酮(Ⅱ),1-(4’-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基苯基)-2-羟基-3’,4″-环氧-3-庚酮(Ⅲ),4″-epoxy-1-(4’-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基苯基)-3’,4″-环氧-3-庚醇(Ⅳ),galleon(V)。结论:其中化合物Ⅰ,Ⅱ为首次从青龙衣中分离得到的线型二芳基庚烷类化合物。     

具有双迈克尔受体结构单元的齐墩果酸衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性

目的:设计、合成具有双迈克尔受体结构单元的齐墩果酸衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。方法:以齐墩果酸为原料,经过酰化、酯化、水解、氧化以及醇醛缩合反应得到目标化合物;采用MTT法在白血病HL-60,肝癌SMMC-7721,肺癌A-549,乳腺癌MCF-7,结肠癌SW480细胞株上进行了体外抗肿瘤活性的测试。结果:合成了一个具有双迈克尔受体结构单元的新齐墩果酸衍生物,并经过1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS确证了化学结构。结论:初步的体外抗肿瘤活性显示,该化合物具有较好的抗肿瘤活性,在结肠癌SW480细胞株上较为明显。     

山麻黄内生菌Myrothecium roridum LLY的化学成分及其体外细胞毒活性研究

目的研究山麻黄Ephedra equisetina内生真菌Myrothecium roridum LLY固体发酵产物的化学成分,并进行体外细胞毒活性研究。方法采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱法进行分离纯化,利用高分辨质谱、核磁共振谱等方法鉴定化合物的结构。MTT法进行化合物体外细胞毒活性筛选,并采用流式细胞术和Western blotting法进行化合物细胞毒活性机制初步研究。结果从M.roridum LLY固体发酵产物中分离得到9个化合物,分别鉴定为吩嗪-1-羧酸(1)、1-甲氧基吩嗪(2)、N-methyl-1H-indole-2-carboxamaide(3)、甲基硫赭曲菌素(4)、ditryptophenaline(5)、7,8-二甲基异咯嗪(6)、deoxyleporin B(7)、尿嘧啶(8)和胸腺嘧啶(9)。MTT测定发现,化合物3对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖具有一定的抑制活性,其IC50值为38.0μg/m L,阳性对照顺铂的IC_(50)值为11.5μg/m L。细胞周期分析发现,化合物3可导致SMMC-7721细胞S期阻滞;Western blotting分析发现,化合物3可使SMMC-7721细胞中细胞周期负调控蛋白p27的表达上调,并且Cleaved-PARP蛋白被明显活化。结论化合物7为1个新的天然产物。化合物3能诱导SMMC-7721细胞凋亡;其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与S期细胞周期阻滞相关,并受到p27蛋白的调控。     

草豆蔻种子化学成分及其NF-κB的激活抑制作用与抗肿瘤活性

目的:研究草豆蔻Aplinia katsumadai化学成分及其NF-κB的激活抑制作用与抗肿瘤活性。方法:采用硅胶和Sephadex LH-20等色谱手段进行化合物的分离纯化,通过波谱方法结合理化性质鉴定其化学结构,采用High-Content Screening(image-based)免疫荧光法对所得到化合物进行TNF诱导人肺癌细胞A549的NF-κB的激活抑制实验,采用MTT法进行体外抗肿瘤活性检测。结果:从草豆蔻乙酸乙酯部位分离得到12个化合物,分别鉴定为(3S,5S)-trans-3,5-dihydroxy-1,7-diphenyl-hept-1-ene(1),(3R,5S)-trans-3,5-dihydroxy-1,7-diphenyl-hept-1-ene(2),5-hydroxy-1,7-diphenyl-hepta-6-en-3-one(3),豆蔻明(4),山姜素(5),乔松素(6),球松素(7),柚皮素(8),(+)-儿茶素(9),白杨素(10),芦丁(11),2,4-二羟基-6-苯乙基-苯甲酸甲酯(12);化合物1～4具有NF-κB激活抑制作用,IC50值分别为14.8,16.5,23.2,7.5μmol.L-1;化合物4对人白血病K562和肝癌SMMC-7721的IC50分别为3.2,3.5 mg.L-1;化合物6对肝癌SMMC-7721显示中等活性,IC50为18.3 mg.L-1。结论:化合物7～12均首次在该种中分离得到,12为山姜素属中首次发现,查耳酮类化合物4具有较强的NF-κB激活抑制作用和细胞毒活性,二苯基庚烷类成分(1～3)具有一定NF-κB激活抑制作用。     

金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ,瑞香素对SMMC-7721和 MCF-7细胞作用的研究

目的 研究金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ(E002)、瑞香素(E003)抗肿瘤活性,为进一步研究抗肿瘤机制提供依据.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度E002、E003对SMMC-7721和MCF-7细胞的抑制率.结果 ①E002、E003浓度为250～1.95 μg/ml时,作用SMMC-7721细胞,两者的抑制率为:(86.9±2.2)%～(50.8±0.6)%. ②E002浓度为250～62.5 μg/ml时,作用MCF-7细胞,其抑制率为:(72.3±2.1)%～(52.48±1.65)%. ③E002对SMMC-7721和MCF-7细胞的IC50值分别为:(1.96±0.03)和(22.89±3.04) μg/ml;E003对SMMC-7721细胞的IC50值为:(1.23±0.11) μg/ml.结论 金边瑞香活性成分瑞香黄烷-Ⅰ对SMMC-7721、MCF-7细胞,瑞香素对SMMC-7721细胞的增殖均有显著抑制作用,且呈现良好的剂量依赖性.     

毛排钱草的化学成分分析及其抗肿瘤活性研究

目的 对毛排钱草地上部分的化学成分及其抗肿瘤活性进行研究.方法 对干燥的毛排钱草地上部分以甲醇于50℃下萃取浓缩,以水溶解滤过得水溶及水不溶性两部分,水可溶部分用正丁醇提取化合物.通过波谱解析、对照品比较及与文献报道对比鉴定其化学结构.并对得到的化合物进行了细胞毒活性研究.结果 正丁醇提取物分离纯化后得到8个化合物.经鉴定为N,N-二甲基色胺(J)、5-甲氧基-N,N-二甲基色胺(Ⅱ)、柠檬酚(Ⅲ)、异柠檬酚(Ⅳ)、(Z)-1-(4-羟基-2,3-二甲氧苯基)-3-(4-羟基苯)丙烯(Ⅴ)、(Z)-1-(3-羟基-2,4-二甲氧苯基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯(Ⅵ)、原儿茶酸甲酯(Ⅶ)、香橙素[(2R,3R)-2,3-二氢-3,5,7-三羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-1苯并吡喃-4-酮,Ⅷ].结论 8个化合物均为首次从该植物中分得,在MTT抗肿瘤实验中,化合物Ⅰ,Ⅲ～Ⅵ均具有一定的细胞毒活性.     

竹叶兰中联苄类化学成分和抗肿瘤活性研究

目的:进行竹叶兰干燥根茎中的化学成分和体外抗肿瘤活性研究。方法:乙醇提取,硅胶、SephadexLH-20及ODS柱色谱分离,采用UV,NMR和MS等方法确定化合物的结构。采用MTT法测试化合物对人肝癌细胞Bel-7402和人胃癌细胞BGC-823抗肿瘤药理活性。结果:分得6个化合物,分别为2,7-二羟基-1-(对-羟基苄基)-4-甲氧基-9,10-二氢菲(2,7-di-hydroxy-1-(p-hydroxylbenzyl)-4-methoxy-9,10-dihydrophenanthrene,1),4,7-二羟基-1-(对-羟基苄基)-2-甲氧基-9,10-二氢菲[4,7-dihydroxy-1-(p-hydroxylbenzyl)-2-methoxy-9,10-dihydrophenanthrene,2],3,3’-二羟基-5-甲氧基-联苄(3,3’-dihydroxy-5-me-thoxybibenzyl,3),反式阿魏酸二十四烷酯[(2E)-2-propenoic acid,3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-tetracosyl ester,4],反式阿魏酸二十五烷酯[(2E)-2-propenoic acid,3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-pentacosyl ester,5],十五烷酸(pentadecyl acid,6)。体外抗肿瘤实验表明,联苄类化合物具有一定的抗肿瘤活性。结论:除化合物3外,另5个化合物均为首次从竹叶兰中分离得到,联苄类化合物均表现出一定的体外细胞毒活性,开环型联苄类化合物3的抗肿瘤活性强于闭环型联苄类化合物1和2。     

大叶蛇葡萄提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究大叶蛇葡萄叶及嫩茎提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,筛选其有效抗肿瘤活性物质。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的大叶蛇葡萄石油醚萃取物部位、乙酸乙酯萃取物部位及水溶性物部位,以及该植物中含有的蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、大黄素及槲皮素分别作用24、48、72 h后对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。结果:乙酸乙酯萃取物部位和大黄素均能不同程度地抑制SMMC-7721细胞增殖,乙酸乙酯萃取物部位对细胞的抑制作用在100μg·mL~(-1)时具有一定的时效关系,大黄素对细胞的抑制作用在40、80、160μmol·L~(-1)时也具有一定的时效关系,乙酸乙酯萃取物部位和大黄素作用SMMC-7721细胞72 h的IC_(50)分别为110.81μg·mL~(-1)和53.20μmol·L~(-1)。结论:大叶蛇葡萄提取物具有较好的体外抗肿瘤活性。     

槐果碱肉桂酸酯衍生物的合成与抗肿瘤活性研究

目的合成槐果碱肉桂酸酯衍生物,并对衍生物进行体外抗肿瘤活性评价。方法以槐果碱为起始原料,通过氧化、酯化、N-烷基化、还原、缩合、水解、成盐等反应得到目标化合物。采用噻唑蓝(MTT)法考察所合成的目标化合物对HeLa、Hep G2和A-549 3种肿瘤细胞的体外抗增殖活性。结果合成了11个槐果碱肉桂酸酯衍生物,其结构经1H-NMR、13C-NMR及HRMS确定,活性测试结果表明,部分衍生物表现出良好的抗肿瘤活性,其中,化合物5g对3种肿瘤细胞均表现出良好的抗肿瘤活性,且活性优于阳性对照药顺铂。结论部分衍生物表现出良好的抗肿瘤活性,化合物5g具有进一步研究价值。     

甘草次酸C3、C30衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的：设计并合成甘草次酸C3、C30衍生物,并对其体外抗肿瘤活性进行研究。方法以甘草次酸为先导化合物,对其C3位羟基、C30位羧基进行结构修饰,并采用SRB法对目标化合物进行体外抗肿瘤活性研究。结果设计合成了12个新型甘草次酸衍生物,并利用MS、1H-NMR及元素分析确证了结构;体外实验中,目标化合物对MCF-7和A549肿瘤细胞的抑制活性均明显强于甘草次酸,其中化合物GA-I1、GA-I2和GA-II1对MCF-7和A549两种细胞表现出很好的抑制活性,明显高于对照药吉非替尼。结论甘草次酸衍生物具有良好的抗肿瘤活性,值得进一步研究。     

番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的构效关系研究

研究12种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的作用,并初步探究其构效关系。实验利用实时荧光定量PCR法检测12种番荔枝内酯类化合物:annosquamin A(1),annosquamin B(2),annotemoyin~(-1)(3),uvariamicinⅡ(4),annosquacin D(5),annosquacin B(6),isodesacetyluvaricin(7),uvarigrandin A(8),squamostatin D(9),squamostatin E(10),squamostatin A(11),12,15-cis-squamostatin A(12)对SMMC-7721/ADR细胞中相关基因NDUFV2的表达量。该研究发现所有受试化合物均使SMMC-7721/ADR中NDUFV2表达量有所下调,邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最强,而间双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最弱。内酯环与邻近的四氢呋喃环间碳数越少,作用越强;对于邻双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越多,化合物作用可能越强;对于间双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物,链上含有的羟基个数越少,化合物作用可能越强;且受试化合物中均是含有3个羟基取代的化合物作用较强;相对构型为苏式的番荔枝内酯的作用比赤式的强,四氢呋喃环为顺式构型的番荔枝内酯的作用比反式的强;在其他基团完全相同的情况下,长链烷基端部与邻近的四氢呋喃环之间的碳数越少,作用越强。     

4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酰甘氨酸的合成研究

目的　合成 4 -羟基 - 3,5 -二甲氧基苯甲酰甘氨酸。方法　以丁香酸为起始原料 ,经乙氧羰基化、酰氯化、酰胺化、水解四步反应制得。结果　经波谱数据及元素分析认为合成的产物为目标产物。结论　所得化合物作为 N- (4 -羟基 - 3,5 -二甲氧基苯甲酰基 ) -甘氨酰正丁基胍的中间体 ,实验还需进一步探讨改进     

羟基喜树碱纳米晶体抗肿瘤作用及其机制评价

目的:利用体外细胞试验评价羟基喜树碱纳米晶体hydroxycamptothecin nanocrystals,HCPT-NCs)抗肿瘤作用及其机制。方法:以羟基喜树碱注射液(hydroxycamptothecin injection,HCPT-I)对肝癌SMMC-7721细胞的干预作用作为对照,应用MTT法检测羟基喜树碱纳米晶体对肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR方法检测survivin基因表达的变化。结果:与对照制剂HCPT-I相比,HCPT-NCs对SMMC-7721肿瘤细胞生长抑制和杀伤作用,促凋亡能力和对survivin基因靶向作用,有显著性差异(p 0.05)。结论:HCPT-NCs对SMMC-772细胞的生长有较明显的抑制作用,促进SMMC-7721细胞凋亡可能和下调survivin的表达有关,和HCPT-I相比作用明显。