VEGF治疗退变性膝关节炎的动物实验研究

目的 通过观察血管内皮生长因子(VEGF)对动物膝骨关节炎(OA)软骨的影响,探讨OA的发病机制及VEGF不同给药方式对其治疗作用.方法 20只新西兰大白兔随机分为4组:正常对照组(A组),模型对照组(B组), VEGF膝关节腔注射组(C组), VEGF腹腔注射组(D组).手术建立OA模型,第8天开始D组腹腔注射VEGF 每天1次,C组关节腔每7 d注射VEGF 1次,给药12周后处死动物,切取胫骨平台关节软骨大体观察,行苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色检查,检测血清、关节液及滑膜中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO).结果 A组动物模型关节软骨正常;B、D两组动物模型关节软骨缺损部分修复;C组动物模型关节软骨缺损完全修复.与B组比较,C组关节软骨形态学上明显改善,血清及关节液中SOD明显升高(F=11.43,P<0.01),NO、MDA均明显降低(F=16.23,P<0.01),而D组则未见明显改善.结论 VEGF能有效防治实验性OA;关节腔注射VEGF治疗OA的疗效明显优于腹腔注射.     

反义VEGF 165基因关节腔注射抑制大鼠胶原性关节炎形成的病理观察

目的:观察反义血管内皮生长因子(VEGF)165基因体内转染对大鼠类风湿关节炎形成的影响.方法:Wistard大鼠30只,关节炎诱导2周后随机等分为3组,并分别给予相应处理:A组(关节腔注射100 μl生理盐水)、B组(关节腔注射100 μl空病毒载体)和C组(关节腔注射100 μl反义VEGF165重组腺病毒); 4周后处死大鼠,对关节炎的发病情况、病理评分、X线放射学评分结果进行对比研究.结果:给药4周后,C组大鼠的关节肿胀程度明显轻于A、B组; C组的病理评分低于A、B组;藏红花红染色显示C组关节软骨多糖破坏轻于A、B组.结论:腺病毒介导的反义VEGF基因转染可以有效地减轻胶原性关节炎的症状,减轻滑膜血管翳对关节软骨的破坏和病理改变.     

PDTC关节腔注射对兔创伤性OA软骨MMP-1、MMP-9 mRNA表达的影响

目的:观察吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)关节腔注射对兔创伤性骨关节炎(os-teoarthritis,OA)软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达及NF-κBp65活性的影响,探讨PDTC对兔创伤性OA软骨退变进程的影响。方法:取20只新西兰兔行右膝横断前交叉韧带术(ACLT),术后1周随机分为对照组和PDTC组,每组10只。PDTC组关节腔注射PDTC2mg(/只.次),每周2次,连续8周,对照组同一时间点关节腔注射等容量生理盐水。末次用药3天后处死白兔,解剖显微镜下观察股骨内髁软骨的形态学变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测股骨内髁软骨中MMP-1、MMP-9mRNA表达量,免疫组化检测股骨内髁软骨中NF-κBp65蛋白表达。结果:形态学示PDTC组软骨退变明显轻于对照组(P<0.05),RT-PCR示PDTC组MMP-1、MMP-9mRNA表达量均低于对照组(P<0.01),免疫组化示PDTC组NF-κBp65活性系数明显低于对照组(P<0.01)。结论:PDTC关节腔注射可能通过阻断创伤性OA软骨中NF-κB激活,进而抑制MMP-1、MMP-9mRNA表达,发挥软骨保护作用。     

强力霉素与透明质酸钠对兔骨关节炎的影响及其作用机制的研究

[目的]研究口服强力霉素(doxycycline,DOX)和关节腔内注射透明质酸钠(hyaluronic acid,HA)对兔骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨退变的影响及其作用机制。[方法]成年新西兰白兔25只随机分为DOX组、HA组、DOX+HA组、模型组和正常组,每组5只。除正常组外,所有动物均用切断双侧膝关节前、后交叉韧带的方法建立OA模型。术后第9周起,DOX组予DOX 40 mg/(kg.d)灌胃治疗,HA组予HA每周5 mg膝关节腔内注射,DOX+HA组予DOX 40 mg/(kg.d)灌胃+HA每周5 mg膝关节腔内注射,模型组和正常组不予任何治疗。第17周处死各组动物,对各组膝关节进行大体情况观察,行Pelletier JP评分,并用ELISA法检测关节负重区软骨细胞中β-连环蛋白(β-catenin)表达情况。[结果]模型组关节退变较正常组严重,β-连环蛋白的表达水平较正常组明显升高(P<0.01)。DOX组、HA组和DOX+HA组三组关节退变较模型组减轻,β-连环蛋白的表达水平也较其明显降低(P<0.01);DOX+HA组β-连环蛋白表达水平低于DOX组和HA组(P<0.01),但后两组间β-连环蛋白表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。[结论]口服DOX和关节腔内注射HA均可通过抑制β-连环蛋白的生成来阻止OA病变进展,但两药联合使用效果更好。     

骨关节炎软骨中血管内皮生长因子mRNA表达

目的:检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)在骨关节炎(OA)软骨中的mRNA表达.方法:16只大耳白兔随机分为实验组和对照组,实验组行单膝前交叉韧带切断术,对照组不做处理,术后9周处死动物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR方法检测软骨中VEGF的mRNA表达.结果:实验组软骨中VEGF的mR...     

灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的 检测灯盏花素对实验性糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长冈子(VEGF)表达的影响,探讨灯盏花抑制糖尿病视网膜病变的可能机制.方法 采用链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(10只×2)和注射用灯盏花素治疗组(10只×2),另取等量正常大鼠做对照组.治疗组在出现糖尿病表现后按每日20 mg/kg腹腔注射灯盏花素溶液,糖尿病组和对照组同期注射等量生理盐水.注射后2、8周取左眼视网膜行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),右眼行免疫组化分别观察VEGF mRNA和蛋白的变化.结果 2周糖尿病组VEGF mRNA较对照组明显增加(P<0.05),蛋白表达无明显变化;灯盏花素治疗组VEGF较糖尿病组无明显变化.8周糖尿病组VEGF mRNA和蛋白表达均较2周时明显增加(P<0.05),而治疗组两者较糖尿病组明显减少(P<0.05).结论 灯盏花素明显抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF表达,提爪灯盏花素nf能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF而缓解其糖尿病视网膜病变.     

去势兔血清雌二醇与关节液中透明质酸的相关性研究

目的:观察雌激素水平变化对膝关节软骨及关节液中透明质酸的影响.方法:40只雌兔随机分为3组,A组正常对照,B组关节固定(为OA模型组),C组切除卵巢.分别于2、4、6、8周抽血和关节液,测定雌二醇和HA水平,并取右股骨内侧髁软骨组织进行光镜观察.结果:B、C组关节液中HA均下降,与A组比较有差异(P＜0.05,P＜0.01),C组随着雌二醇水平降低,透明质酸呈下降趋势;标本观察显示,B、C两组关节软骨均有OA改变.结论:雌激素水平下降,致软骨退变,关节液中HA下降,血清雌二醇与关节液中HA有相关性.     

当归、阿魏酸钠对骨关节炎软骨退变与自由基的影响

目的:探讨当归、阿魏酸钠关节腔注射对大鼠骨性关节炎(OA)软骨退变与自由基的影响。方法:4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后48只大鼠分成6组:正常组,模型组,25%、5%当归治疗组,0.5%、0.1%阿魏酸钠治疗组,分组后即开始用不同浓度的当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.1 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、关节液检测SOD、MDA,切取关节,大体及组织学观察。结果:两药在高浓度可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低关节液、血浆的MDA水平(均P<0.01),增加SOD活性(均P<0.05);两药在低浓度时SOD升高不明显(均P>0.05),但阿魏酸钠仍可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低MDA的水平(P<0.01,P<0.05)。结论:当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复,阿魏酸是当归注射液治疗OA的有效的单体成份之一。     

二十碳五烯酸对大鼠角膜新生血管血管内皮生长因子及其受体表达的抑制作用

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1表达的影响及作用机制.方法 78只SD大鼠按随机数字表法分为碱烧伤0.02 mg EPA治疗组(A组, 24只)、碱烧伤0.03 mg EPA治疗组(B组, 24只)、碱烧伤对照组(C组, 24只)、正常组(D组, 6只), 除正常组外,均选用右眼制作碱烧伤模型.A、B、C组碱烧伤后立即分别球结膜下注射0.02 mg/0.04 ml EPA、0.03 mg/0.04 ml EPA、0.04 ml生理盐水.每日裂隙灯显微镜下观察角膜水肿、新生血管情况.碱烧伤后1、4、7、14 d,用免疫组织化学方法检测角膜新生血管内皮细胞CD34表达,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法分别检测角膜VEGF的mRNA表达及Flk-1的蛋白表达.结果 碱烧伤7 d和14 d,角膜新生血管相对面积A组:(15.80±6 43)%、(11.06±2.14)%, B组:(16.10±7.41)%、(11.06±2.51)%,均显著少于C组:(84.74±7.77)%、(89.63±7 50)% (P<0.05).碱烧伤后7 d,C组CD34在CNV内皮细胞强阳性表达,A、B组未见CNV内皮细胞,CD34无表达.C组Flk-1蛋白及VEGF的mRNA表达,碱烧伤后1 d最高,持续高表达至4 d,随后逐渐下降.碱烧伤4 d,A、B组VEGF的mRNA表达及Flk-1的蛋白表达显著低于C组(P<0.05).结论 EPA能通过VEGF途径,抑制VEGF及其受体Flk-1的表达,从而显著抑制角膜新生血管的生长.     

透明质酸钠关节腔内注射对膝骨性关节炎患者关节滑液中细胞因子水平的影响及疗效观察

目的 探讨透明质酸钠关节腔内注射对膝骨性关节炎(OA)患者关节滑液中细胞因子水平的影响及疗效观察.方法 70例膝关节OA患者随机分为透明质酸钠组和对照组.透明质酸钠组予以关节腔内注射透明质酸钠2.5 mL/次,每周1次,连用4周.对照组予以口服芬必得胶囊0.3 g,2次/d,连用4周.结果 治疗4周后,透明质酸钠组关节滑液中IL-1、IL-6和IL-8水平下降的幅度明显优于对照组(P＜0.05);透明质酸钠组的临床总有效率明显优于对照组(x2=7.65,P＜0.01),药物不良反应的发生率明显低于对照组(x2=6.29,P＜0.05).结论 透明质酸钠关节腔内注射治疗膝关节OA疗效确切,安全性较好,作用与降低关节滑液中IL-1、IL-6和IL-8水平相关.     

Effects of intra-articular injection of p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor on matrix metalloproteinase in articular cartilage of a rat model of osteoarthritis

OBJECTIVE: To observe the effect of intra-articular injection of SB203580, a selective p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor, on the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-3, MMP-13 in a rat model of osteoarthritis (OA) and to explore the relationship between the MMP-3/MMP-13 expressions and the severity of OA. METHODS: Fourty SD rats underwent unilateral anterior cruciate ligament transection (ACLT) and then randomly divided into four groups, with 10 rats in each group. Group A received 0.1 ml intra-articular injection of SB203580 at a high concentration of 100 micromol/L (once a week) immediately after surgery, and group B were treated under the same condition using SB203580 with a low concentration of 10 micromol/ L Group C received 0.1 ml intra-articular normal saline, and group D were not injected as controls after ACLT. All rats were sacrificed seven weeks after the surgery. Macroscopic and immunohistochemical studies were performed on the cartilage. Protein expressions of MMP-3 and MMP-13 were determined by Western blot. RESULTS Cartilage degradation was significantly milder in group A and group B than in the control groups, as shown by morphological studies (P < 0. 05) and immunohistochemical studies (P < 0. 05). The protein expressions of MMP-3 and MMP-13 in cartilage were significantly lower in groups A and B than in groups C and D (P < 0.01). CONCLUSION: SB203580 can inhibit the expressions of MMP-3 and MMP-13 and thus protect the cartilage.     

Acupotomy versus sodium hyaluronate for treatment of knee osteoarthritis in rabbits

Objective

To investigate the possible advantages of acupotomy over sodium hyaluronate injection for the treatment of knee osteoarthritis (KOA).

雌、孕激素对兔膝关节滑膜中金属蛋白酶及其组织抑制物和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的 观察雌性新西兰兔膝骨关节炎(OA)模型在去势后给予不同剂量雌激素或联合应用孕激素,对OA关节滑膜中金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1和白细胞介素(IL)-1βmRNA表达水平的影响。方法对65只雌性新西兰兔采用膝关节伸直位石膏固定5周制成兔膝OA模型,随机抽取5只兔以过量麻醉法处死以检测动物模型是否成功;剩余60只兔随机分为A、B、C、D、E、F共6组,每组10只,对A—E组行去势手术,F组行假去势手术。之后给予口服戊酸雌二醇(E2V)或联合应用安宫黄体酮(MPA)共16周,A组E2V1．8mg／d,B组E2V3．6mg／d,c组E2V7．2mg／d,D组E2V3．6mg／d MPA3．6mg/d,E组和F组均不用药。于用药8周和16周时分批处死兔,采用RT-PCR法对兔膝关节滑膜组织中MMP-1、MMP-3、IL-1β和TIMP-1mRNA表达水平进行半定量测定,观察雌、孕激素对OA滑膜中上述指标的影响。结果去势后兔膝OA滑膜组织中MMP-1、MMP-3和IL-1βmRNA表达增加,给予雌激素后三者的表达均有抑制,加用孕激素可使这一抑制作用增强。低剂量雌激素可使MMP-1／TIMP-1和MMP-3／TIMP-1比值降低,加用孕激素后可使这两个比值进一步降低,而高剂量雌激素可使这两个比值增加,但仍低于不用药组。结论低剂量雌激素或合适比例的雌孕激素协同作用对于维持关节软骨正常生理功能至关重要,雌激素水平过高或过低均会对关节软骨产生不利影响,以雌激素缺乏产生的损伤作用更重。     

关节腔内注射贝伐单抗治疗兔膝骨性关节炎

目的：评估关节腔内注射贝伐单抗治疗兔膝骨性关节炎的效果。方法： 24只新西兰兔制造原发性骨关节炎模型后随机分入贝伐单抗组、透明质酸钠(sodium hyaluronate, SH)组和对照组,每组8只。贝伐单抗组和对照组关节腔各自注射4.0 mg贝伐单抗和生理盐水,每3周1次,连续实验6周,各组分别注射2次;SH组进行SH关节腔内注射,每周1次,连续实验6周,共6次。6周后观察各组软骨和滑膜组织病理切片,滑膜电子显微镜及血管免疫组织化学SP法染色,软骨大体观察评分,MMP-1的免疫组织化学表达,以及Mankin’s评分。结果：病理切片显示贝伐单抗组较SH组和对照组血管生成明显减少,抑制滑膜增生,改善了软骨结构及基质成分;滑膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)阳性细胞百分数、平均光密度值、软骨MMP-1细胞百分数、Mankin’s评分及软骨大体评分均显示贝伐单抗组小于SH组和对照组（P<0.05）,SH组小于对照组（P<0.05）。结论：贝伐单抗能减少血管生成,抑制滑膜增殖,减少MMP-1的生成,对软骨有保护作用,并且优于SH,对兔膝原发性骨性关节炎有治疗作用,这为临床膝原发性骨性关节炎关节腔内药物治疗提供了一种可能的方案。     

透明质酸钠对兔颞下颌关节软骨急性损伤治疗的效果

①目的 观察局部应用透明质酸钠对兔颞下颌关节软骨急性损伤的治疗效果。②方法 选用成年健康新西兰大白兔17只，雌雄不限，随机分成3组。第1组（n=8)，兔颞下颌关节髁突软骨全层损伤后局部应用透明质酸钠5mg，第2组（n=8)；兔颞下颌关节髁突软骨全层损伤手术对照组；第3组（n=1)：正常对照组。分别于术后第1，4，8，12周处死大白兔，对髁突软骨及其修复组织进行大体形态学及组织学检查。③结果 第1组术后细胞和少量的软骨样细胞。第2组术后12周时，软骨缺损未能修复，仅填充部分纤维组织，并且在整个观察期间未见修复组织内有软骨细胞分化现象，第1组髁突软骨的退行性改变较第2组明显减轻。④结论 透明质酸钠能促进颞下颌关节髁突软骨损伤的修复，并能明显减轻邻近关节软骨的退行性改变程度。     

兔膝骨性关节炎治疗中透明质酸钠与曲安奈德对滑膜和软骨的影响

目的：评估透明质酸钠与曲安奈德对兔膝骨性关节炎中关节滑膜及软骨的影响。方法24只新西兰兔制造骨关节炎模型后按数表法随机分为对照组、透明质酸钠(SH)组、曲安奈德(TA)组,每组各8只,分别进行关节腔注射生理盐水0.4 mL、SH 0.4 mL、TA 0.4 mL,每周一次,每组6次。6周后观察每组兔膝关节滑膜组织病理切片、血管滑膜SP法染色、软骨AB-PAS染色及MMP-1免疫组化。结果滑膜病理切片显示,SH组滑膜增生最少, TA组滑膜增生较少,对照组滑膜增生明显;滑膜SP法染色显示SH组、TA组VEGF阳性细胞百分数较对照组减少[(42.50±5.29)%、(50.80±5.24)%vs (53.38±4.75)%,P<0.05],SH组、TA组平均光密度值较对照组减少[(0.32±0.02)、(0.43±0.04) vs (0.48±0.05),P<0.05],TA组较SH组和对照组内软骨细胞减少,软骨基质成分减少,SH组、TA组较对照组软骨表层破坏减少。SH组、TA组软骨MMP-1细胞百分数评分优于对照组[(61.25±4.06)%、(76.27±4.68)%vs (87.13±3.64)%,P<0.05];SH组、TA组软骨Mankins评分优于对照组[(6.88±1.25)分、(7.27±0.68)分vs (8.13±0.83)分, P<0.05]。结论透明质酸钠和曲安奈德均能抑制滑膜炎增生,减少兔膝关节腔内的炎性细胞因子,减少了软骨基质的破坏,且透明质酸钠要优于曲安奈德。     

高脱乙酰度羧甲基壳聚糖对兔骨关节炎软骨MMP-1,3表达的作用

目的 :观察高脱乙酰度羧甲基壳聚糖 (CMCTS)经关节腔注射对实验性兔膝骨关节炎软骨退变的影响。方法 :18只大白兔行右膝关节前交叉韧带切断术 ,随机分为 2组 ,每组 9只 ,实验组于术后第 0 ,2 ,4周经关节腔内注射 3%高脱乙酰度CMCTS 0 .15mg·kg-1,对照组同一时间点注射等容生理盐水 0 .15mg·kg-1。于第 6周全部处死大白兔 ,对比两组大白兔股骨髁关节软骨的大体改变和病理变化 ,并用免疫组化的方法对比两组的基质金属蛋白酶 1(MMP 1)及基质金属蛋白酶 3(MMP 3)的表达情况。结果 :实验组退变软骨的大体评分及病理变化轻于对照组 ,免疫组化方法显示MMP 1,3的表达明显低于对照组。结论 :高脱乙酰度CMCTS能明显降低骨关节炎软骨中MMP 1,3的表达水平 ,延缓软骨的退变程度 ,具有软骨保护作用 ,值得进一步深入研究。     

兔骨关节炎模型的建立以及关节炎软骨组织中MMP-1/-13的表达

目的评价家兔膝关节前交叉韧带切断（ACLT）及内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎（OA）模型方法的可行性,同时探索关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶（MMP）-1,MMP-13的基因表达、蛋白表达水平的变化情况。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4周、8周、12周处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12周处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用实时定量PCR（Real-time PCR）及Western blot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1和MMP-13的mRNA和蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分有统计学差异。MMP-1的mRNA表达和蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4周开始升高,到第8周及第12周持续升高,且mRNA表达和蛋白表达升高的趋势相同;MMP-13在造模4周时表达开始升高,mRNA表达和蛋白表达趋势相同,造模第8周时持续升高,但在造模第12周时MMP-13mRNA表达和蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,二者调控通路可能存在差异。MMP-13的mRNA表达的变化趋势与其蛋白水平的变化趋势相符合,说明引起MMP-13在OA病程中晚期下降的调控发生在翻译前水平。