沉默CFTR对H_2O_2诱导的大鼠神经元细胞凋亡的影响

目的探讨沉默囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)对大鼠过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的神经元细胞凋亡的影响。方法 48只新生SD大鼠取其脑组织分离海马神经元,分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)、CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA),CFTR siRNA组再分为50MOI亚组(转染50MOI CFTR siRNA)和100MOI亚组(转染100MOI CFTR siRNA)。各组采用Western blot法测定神经元细胞CFTR蛋白表达量,将生长良好的神经元细胞分为对照组(不转染、不加H_2O_2培养)、H_2O_2组(不转染、加H_2O_2培养)、H_2O_2+阴性对照组(转染阴性对照siRNA、加H_2O_2培养)、H_2O_2+CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA、加H_2O_2培养),采用流式细胞仪测定神经元细胞凋亡率。结果 100MOI亚组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量(0.32±0.05)低于50MOI亚组(0.58±0.06)(P0.05),50MOI和100MOI亚组低于空白对照组(1.00±0.02)和阴性对照组(1.04±0.08)(P0.05),空白对照组与阴性对照组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);H_2O_2组、H_2O_2+阴性对照组、H_2O_2+CFTR siRNA组神经元细胞凋亡率[(23.25±4.28)%、(22.07±3.67)%、(53.62±6.79)%]明显高于对照组(4.31±0.64)%(P0.05),H_2O_2+CFTR siRNA组高于H_2O_2组和H_2O_2+阴性对照组(P0.05),H_2O_2组与H_2O_2+阴性对照组神经元细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默CFTR可降低大鼠海马神经元细胞中CFTR蛋白表达,促进H_2O_2诱导的神经元细胞凋亡。     

囊性纤维化跨膜传导调节因子对脑缺血再灌注损伤小鼠线粒体功能及氧化应激的影响

目的探讨囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)对脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)小鼠线粒体功能及氧化应激的影响。方法 60只C57BL小鼠随机分为对照组、IRI组、Forskolin(FSK)组和FSK+IRI组各15只。IRI组和FSK+IRI组采用改良四血管闭塞法制备脑IRI模型,对照组和FSK组仅手术、不制备脑IRI模型。模型制备成功后,FSK+IRI组、FSK组腹腔注射FSK 2mg/kg,IRI组、对照组腹腔注射等量生理盐水;缺血再灌注后48h,检测4组线粒体膜电位、线粒体呼吸控制率(respiratory control rate,RCR)以及线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)水平、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)水平,计算GSH/GSSG;检测线粒体呼吸链complexⅠ和complexⅢ蛋白相对表达量、complexⅠ和complexⅢ活性。结果 IRI组和FSK+IRI组小鼠线粒体膜电位[(224.18±24.51)、(341.46±32.57)mV]、ATP水平[(6.52±1.03)、(13.24±1.65)mol/g]、RCR(2.12±0.64、3.97±0.86)均低于对照组[(437.15±53.14)mV、(19.47±2.64)mol/g、7.84±1.21]和FSK组[(441.05±56.43)mV、(18.93±2.71)mol/g、7.73±1.15](P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);IRI组和FSK+IRI组小鼠线粒体ROS(2.29±0.56、1.64±0.43)、H2O2(2.24±0.77、1.41±0.52)水平高于对照组(1.28±0.27、0.97±0.35)和FSK组(1.31±0.32、1.03±0.36)(P0.05),且IRI组高于FSK+IRI组(P0.05);IRI组和FSK+IRI组线粒体GSH[(0.51±0.24)、(0.94±0.31)nmol/μg]和GSH/GSSG值(0.17±0.04、0.81±0.27)低于对照组[(1.35±0.42)nmol/μg、1.38±0.35]和FSK组[(1.42±0.38)nmol/μg、1.45±0.41](P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);4组线粒体complexⅠ和complexⅢ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);IRI组和FSK+IRI组线粒体complexⅠ活性低于对照组和FSK组(P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);4组线粒体complexⅢ活性比较差异无统计学意义(P0.05)。结论激活CFTR可减轻脑IRI小鼠线粒体氧化应激,保护线粒体功能,发挥脑保护作用。     

自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制研究

目的研究自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制。方法将人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为杂化siRNA组(对照无关序列片段siRNA转染细胞)、杂化siRNA+顺铂组(对照无关序列片段siRNA转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)、沉默Pink1+顺铂组(Pink1沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)和沉默Parkin+顺铂组(Parkin沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)。培养12 h后,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定各组细胞存活率,JC-1法检测线粒体膜电位,荧光法检测各组细胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量,Western blotting和免疫荧光探针检测自噬相关蛋白的相对表达。结果杂化siRNA+顺铂组的细胞存活率为(88.2±2.7)%,显著低于杂化siRNA组[(101.3±3.1)%](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的存活率为(80.1±2.3)%、(79.4±3.0%),显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的线粒体膜电位和ATP含量为(0.90±0.01)、(0.82±0.01)nmol/mg,显著低于杂化siRNA组[(1.01±0.02)、(1.00±0.04)nmol/mg](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的线粒体膜电位(0.79±0.02、0.77±0.02)和ATP[(0.66±0.05)、(0.66±0.02)nmol/mg]含量显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.68±0.04、1.80±0.05、1.87±0.05、2.01±0.04)显著高于杂化siRNA组(1.00±0.04、1.00±0.05、1.01±0.01、1.04±0.02)(P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.17±0.05、0.69±0.05、1.37±0.05、1.43±0.02;1.22±0.04、0.57±0.06、1.39±0.03、1.38±0.10)显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的自噬阳性点数为(12.2±0.7)个,显著多于杂化siRNA组[(2.4±0.3)个](P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的荧光点数[(5.3±0.8)、(5.6±0.5)个]显著少于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。结论顺铂处理可诱导HK-2细胞的线粒体自噬作用,从而改善顺铂引起的肾小管细胞毒性损伤和线粒体功能,其作用机制可能与Pink1/Parkin蛋白的表达情况有关。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

WWOX对胰腺癌细胞活性、凋亡及ATP含量影响及机制初步研究

目的研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响。方法在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组。荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P0.05)。高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P0.05)。结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关。     

siRNA干扰β-catenin基因表达情况与喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的关系

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰β-链蛋白(β-catenin)基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法前瞻性选取喉癌Hep-2细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和干扰组,其中干扰组转染靶向β-catenin的siRNA,阴性对照组转染空白siRNA。采用荧光定量PCR和Western-blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transell法观察细胞侵袭能力。结果干扰组β-catenin mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.304±0.015)和(0.234±0.065),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组培养48 h和72 h吸光值分别为(0.721±0.250)和(0.942±0.321),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组细胞凋亡率为(19.10±1.24)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组穿膜细胞数为(22.41±3.25)个,明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论干扰β-catenin基因,可抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

艾地苯醌对癫痫大鼠模型神经元线粒体功能、能量代谢及抗氧化作用机制研究

目的 建立癫痫模型,研究艾地苯醌（Idebenone）的抗癫痫作用机制。方法 30 只SD 大鼠,分为空白对照组（正常大鼠）、建模组和建模+ 艾地苯醌干预组（每组10 只）,建模组和干预组均采用经典氯化锂- 匹罗卡品的癫痫诱导方法建立癫痫大鼠模型,艾地苯醌干预30 天后检测大鼠血清、海马体组织中超氧化物歧化酶活性（superoxidedismutase, SOD）和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量的变化,通过Nissl 染色评估艾地苯醌对神经元的保护作用。利用CCK-8 明确艾地苯醌对癫痫细胞模型的最低适用浓度。在无镁诱导的癫痫细胞模型中检测ATP 生成和线粒体膜电位,评价艾地苯醌对神经元线粒体产能功能的影响。结果 建模组大鼠血清SOD 活性为190.25±18.17 U/ml, 较对照组（467.22±23.43 U/ml）降低,建模组海马组织中SOD 活性（107.34±9.33 U/ml）较对照组（298.77±15.32 U/ml）降低,差异均具有统计学意义（t=-22.10,-16.30,均P ＜ 0.05）;艾地苯醌干预后大鼠血清和海马组织中SOD 活性有所恢复（384.79±29.21 U/ml,212.08±24.32 U/ml）,与建模组相比升高,差异具有统计学意义（t=21.06, 13.62,均P＜ 0.05）。MDA 的检测结果表明,与对照组相比（7.33±0.87 nmol/L）,建模组大鼠血清中MDA 含量增加（14.01±0.93nmol/L）,海马组织中MDA 含量（23.47±1.89 nmol/L）也较对照组（11.03±1.28 nmol/L）升高,差异具有统计学意义（t=5.72,9.19,均P ＜ 0.05）;艾地苯醌干预后癫痫鼠血清与海马组织中MDA 含量均下降（9.35±0.83 nmol/L,13.77±1.34 nmol/L）,与造模组相比差异具有统计学意义（t=-17.68,-22.87,均P ＜ 0.05）。Nissl 染色提示艾地苯醌干预后活性神经元数目增加（1 977±200 个/mm2）, 与造模组(1 387±146 个/mm2) 相比差异具有统计学意义（t=3.32,P ＜ 0.050）。细胞学实验表明,艾地苯醌干预能够提高线粒体ATP 产能（0.92±0.14 vs 0.58±0.04）,差异具有统计学意义（t=3.75, P=0.000）;四甲基罗丹明甲酯（TMRM）荧光强度检测表明艾地苯醌干预后线粒体膜电位显著提高（0.97±0.1vs 0.48±0.06）, 差异具有统计学意义（t=6.59, P=0.000）。结论 适量艾地苯醌可能通过保护线粒体功能,降低氧化应激对神经元的损伤发挥抗癫痫作用。     

TPX2-siRNA干扰对食管鳞癌EC9706细胞侵袭能力和细胞凋亡的影响

目的观察TPX2基因经特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)作用后对食管鳞癌细胞系EC9706的侵袭能力和细胞凋亡的影响。方法用脂质体lipofectamine 2000介导TPX2-siRNA(siTPX2)转染EC9706细胞,实验分为空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组。用western blot检测siRNA干扰效率,Boyden chamber法检测细胞侵袭能力,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测细胞凋亡情况。结果有效转染siTPX2 72 h后,siRNA干扰组TPX2蛋白表达水平为0.39±0.12,低于空白对照组1.00±0.01和阴性对照组0.98±0.11,P<0.05;Boyden chamber法检测结果,siRNA干扰组穿膜细胞数为45.30±8.08,少于空白对照组129.40±10.58和阴性对照组121.90±7.83,t分别为8.17和7.90,P<0.05;siRNA干扰组细胞侵袭抑制率为(71.42±9.12)%,明显高于阴性对照组(5.65±3.55)%,t=14.256,P<0.01。TUNEL结果表明,干扰组细胞凋亡指数为18.28±0.35,高于空白对照组4.07±0.26和阴性对照组4.13±0.22,t分别为60.61和53.32,P<0.01。结论 siRNA可以有效抑制EC9706细胞侵袭和转移,促进细胞凋亡,有望作为食管癌治疗的新途径。     

小干扰RNA抑制成纤维细胞激活蛋白3的表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancerstem cells,CSCs)。将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒)。采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72h后对细胞增殖的影响;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况;采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响。结果:转染48h和72h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)%,(53.98±3.75)%]大于阴性对照组[(3.76±0.88)%,(4.53±1.01)%]及空白对照组[(2.34±0.41)%,(3.28±0.65)%],差异均有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P<0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)%]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)%]和空白对照组[(83.86±10.11)%],差异有统计学意义(P<0.01)。结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力。     

冠心病患者血浆氧化还原状态的改变及其临床意义

目的 探讨冠心病患者血浆氧化还原状态的改变及其临床意义.方法 采用心导管冠状动脉造影技术,将144例拟诊或可疑冠心病患者分为冠心病组59例,冠心病前期组53例,冠状动脉正常组32例.测定所有患者血浆还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)、氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL-C)和丙二醛(MDA)浓度.根据Nernst方程计算GSH/GSSG氧化还原电位,对GSH/GSSG氧化还原电位与oxLDL-C、冠状动脉狭窄程度行相关分析.结果 随着冠状动脉狭窄程度增加(冠状动脉正常组、冠心病期组、冠心痛组),GSH、GSH/GSSG渐次减低[分别为(321.27±56.80)、(309.52±44.97)、(285.71±38.38)μmoL/L;10.56±1.70,9.86±1.58,8.65±1.18;F值分别为29.49和26.18,P均<0.05].GSH/GSSG氧化还原电位渐次升高[(-142.23±1.35)、(-140.41±1.13)、(-136.61±1.21)mV;F:20.69,P<0.05],向氧化方向偏移;氧化应激损伤产物oxLDL-C、MDA亦随着冠状动脉狭窄程度增加明显增加[分别为(417.24±126.64)、(557.45±171.85)、(691.96±203.56)μg/L;(2.39±1.24)、(3.25±1.37)、(4.39±1.52)μmol/L;F值分别为26.28和25.39,P均<0.05];GSH/GSSG氧化还原电位与oxLDL-C成显著正相关(r=0.798,P<0.05).结论 氧化还原态失衡、向氧化方向偏移与冠状动脉粥样硬化的发生、发展可能有某种紧密的内在联系.     

氧化还原态失衡与冠状动脉粥样硬化性心脏病

目的探讨氧化还原态失衡与冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的关系。方法根据冠状动脉造影结果,将123例疑似冠心病住院患者分为冠心病组（A组）41例,冠状动脉粥样硬化组（B组）45例,冠状动脉正常组（C组）37例。取所有研究对象静脉血,测血浆还原型谷胱甘肽（GSH）与氧化型谷胱甘肽（GSSG）,氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）和丙二醛（MDA）浓度。计算GSH／GSSG氧化还原电位,与冠状动脉斑块积分及oxLDL行相关性分析。结果随冠状动脉斑块积分增高（从C组-A组）,GSH、GSH／GSSG逐次减低,分别为（321．27±56．89）μmol／L,（309．52±44．56）μmol／L,（285．71±38．23）μmol／L（P〈O．05）;10．56±1．70,9．86±1．58,8．65±1．18（P〈0．05）;GSSG、GSH／GSSG氧化还原电位逐次升高,分别为（30．42±1．53）μmol／L,（31．39±1．64）μmol／L,（33．03±1．75）μmol／L（P〈0．05）;（-142．39±1．33）mV,（-140．18±1．12）mV,（-136．17±1．01）mV（P〈0．05）;氧化应激损伤产物oxLDI、MDA亦随冠状动脉斑块积分增高而增加,分别为（417．22±126．61）μg／L,（557．24±171．83）μg／L,（691．96±203．55）μg／L（P〈0．05）;（2．39±1．24）μmol／L,（3．25±1．37）μmol／L,（4．39±1．52）μmol／L（P〈0．05）;GSH／GSSG氧化还原电位与oxLDL呈明显正相关（r=0．823,P〈0．001）。结论随着冠状动脉斑块积分增高,血浆GSH／GSSG氧化还原态向氧化方向明显偏移,这可能与动脉粥样硬化的发生发展有关。     

Glutathione status in liver and plasma during development of biliary cirrhosis after bile duct ligation

We do not know much about the changes that occur in reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in the development of liver cirrhosis. Therefore, we investigated the glutathione redox system during development of liver cirrhosis after bile-duct ligation in rats. We compared the GSH and GSSG content of liver and plasma between bile-duct-ligated rats and sham-operated controls 6 and 24 h and 5, 15, 23, and 38 days after operation. Compared to controls (x±SD: 6.07±0.52 μmol/g wet wt.), liver GSH significantly increased 24 h (+37%) and 5 days (+53%) after bile-duct ligation. Thereafter, GSH continuously declined to 4.25±0.64 μmol/g (?31%; P<0.001) at the end of the observation period after 38 days. The GSH turnover in 5-day bile-duct-ligated rats with high GSH concentrations was not significantly different than in shamoperated controls (16 nmol/min per g after bile-duct ligation and 15 nmol/min per g in controls). GSSG (211±42 nmol/g wet wt. in controls) was significantly lower 6 and 24 h after bile-duct ligation (?34% and ?43%, respectively). Thereafter, GSSG increased and was about 100% higher than in controls after 23 and 38 days. The relation of GSSG to GSH in liver continuously increased from 3.4 to 20.5% after bile-duct ligation. The course of plasma GSH (9.57±0.79 μmol/l) paralleled hepatic GSH on a lower level: +14% at day 5, ?41% at day 15 and ?51% at the end of the observation period. Plasma GSSG (0.99±0.31 μmol/l) was inversely related to liver GSSG: there were increased concentrations early after bile duct ligation (day 5: +91%) and reduced concentrations (?44%) at the end of the observation period. Dynamic changes of the glutathione status occur in the development of liver cirrhosis after bile-duct ligation. These changes are consistent with increased oxidative stress in the liver and a deficit of transporting GSSG from the cells into plasma.     

腹腔镜卵巢子宫内膜异位囊肿水分离剥除联合缝合止血法对卵巢功能的保护作用

目的探讨腹腔镜下水分离剥除联合缝合止血法对双侧卵巢子宫内膜异位囊肿(ovarian endometriotic cyst,OEC)剥除术后卵巢储备功能的保护作用。方法选取2016年1月至2018年1月上海市嘉定区中医医院行腹腔镜下双侧OEC剥除术的患者60例,根据随机数字表法分为研究组(水分离剥除联合缝合止血组)和对照组(直接剥除联合电凝止血组)各30例,比较两组患者手术时间、手术前后血红蛋白水平的变化及术前和术后1、3、6个月基础状态的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)及抗苗勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)水平。结果研究组手术时间为(47.52±10.11)min、手术前后血红蛋白下降量为(0.55±0.26)g/L、住院时间为(6.1±0.3)d,对照组分别为(48.01±10.24)min、(0.56±0.25)g/L、(6.2±0.4)d,两组比较差异均无统计学意义(t值分别为0.056、0.964、0.863,P均>0.05)。研究组手术前FSH、E2、LH及AMH水平分别为(6.15±2.31)U/L、(152.41±41.40)nmol/L、(5.44±1.52)U/L、(2.21±0.13)μg/L;术后1个月分别为(6.21±2.24)U/L、(150.63±40.33)nmol/L、(5.13±1.58)U/L、(2.18±0.16)μg/L;术后3个月分别为(6.52±2.41)U/L、(149.57±42.37)nmol/L、(5.30±1.45)U/L、(2.17±0.15)μg/L;术后6个月分别为(6.53±2.44)U/L、(151.36±41.54)nmol/L、(4.98±1.61)U/L、(2.20±0.08)μg/L。对照组患者手术前FSH、E2、LH及AMH水平分别为(6.14±2.21)U/L、(153.31±40.39)nmol/L、(5.51±1.46)U/L、(2.23±0.13)μg/L;术后1个月分别为(8.11±2.44)U/L、(131.43±41.23)nmol/L、(5.92±1.64)U/L、(1.58±0.14)μg/L;术后3个月分别为(8.42±2.35)U/L、(135.67±40.38)nmol/L、(6.12±1.51)U/L、(1.54±0.16)μg/L;术后6个月分别为(9.17±2.64)U/L、(133.66±40.44)nmol/L、(6.28±1.74)U/L、(1.51±0.13)μg/L;研究组患者术前FSH、E2、LH和AMH水平与术后第1、3、6个月比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照组患者术前FSH水平与术后1、3、6个月比较差异均有统计学意义(P均<0.05);对照组术前E2水平与术后1个月比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组术前AMH水平与术后1、3个月比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。术后6个月研究组患者FSH、LH、E2、AMH水平均优于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论腹腔镜水分离剥除联合缝合止血法剥除双侧OEC不增加手术时间及术中出血量,不影响术后卵巢储备功能。     

甲巯咪唑对甲状腺功能亢进症患者甲状腺激素水平及肝功能的影响研究

目的探讨分析甲巯咪唑对甲状腺功能亢进症患者甲状腺激素水平及肝功能的影响。方法前瞻性选择2016年1月至2019年1月在四川省林业中心医院就诊的86例甲状腺功能亢进症患者为研究对象,按随机数字表法分为研究组(n=43)与对照组(n=43)。其中对照组予以丙硫氧嘧啶治疗,研究组予以甲巯咪唑治疗。观察比较2组患者的临床疗效、治疗前和治疗后12个月的甲状腺激素[总三碘甲腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)]水平变化及肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)]指标变化情况、肝功能损伤发生率与发生时间。结果研究组总有效率为95.35%,明显高于对照组的83.72%,差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者治疗前的甲状腺激素和肝功能指标水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组治疗后12个月的TT3、TT4、FT3、FT4水平分别为(1.92±0.51)nmol/L、(120.58±10.26)nmol/L、(5.26±1.33)pmol/L、(17.35±3.84)pmol/L,均明显低于对照组[(2.73±0.62)nmol/L、(149.35±13.62)nmol/L、(9.25±1.89)pmol/L、(21.87±4.36)pmol/L],而TSH(2.84±0.75)nmol/L明显高于对照组(2.32±0.53)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组治疗后12个月的ALT、AST、ALP、TBIL水平分别为(45.26±7.33)U/L、(50.22±6.96)U/L、(150.34±26.34)U/L、(16.03±3.98)μmol/L,均明显低于对照组[(54.66±8.24)U/L、(59.64±7.15)U/L、(181.42±28.45)U/L、(21.39±4.13)μmol/L],差异有统计学意义(P<0.05)。研究组肝功能损伤发生率为9.30%,明显低于对照组的18.60%(P<0.05);肝功能损伤发生时间为(20.64±4.26)d,明显早于对照组的(38.25±6.39)d(P<0.05)。结论与丙硫氧嘧啶相比,甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症疗效确切,可有效改善甲状腺激素水平,且对肝功能的影响小,肝功能损伤发生率低,但肝功能损伤发生时间较早。     

siRNA沉默肾上腺髓质素基因对A375黑素瘤细胞周期的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默A375黑素瘤细胞肾上腺髓质素(ADM)基因对其细胞周期的影响。方法利用人工合成的ADM靶向小分子干扰RNA转染A375细胞,采用实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)筛选出有效的siRNA,用选出的干扰效果最好的siRNA转染的A375细胞为实验组;转染非特异序列的细胞为阴性对照组;未转染的细胞为空白对照组。流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞周期的情况。结果 FCM结果显示,siRNA干扰组G2/M期细胞比率为(11.360±1.224)%,明显高于未转染组的(1.020±0.990)%和非特异序列转染组的(4.150±1.032)%,差异有统计学意义(P0.05);未转染组与非特异序列转染组差异无统计学意义(P0.05)。而siRNA干扰组G1/G0、S期细胞比率分别为(69.443±2.023)%、(19.197±0.890)%,与未转染组(68.567±3.653)%、(30.417±4.582)%和非特异序列转染组(70.530±3.008)%、(23.313±4.645)%比较,差异均无显著性(P0.05)。结论 ADM能够将黑素瘤细胞阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖。     

山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌注后脑线粒体损伤的保护作用

背景山莨菪碱是从茄科唐古特莨菪中提取的一种生物碱,是一种良好的细胞保护剂.而线粒体功能变化是反映细胞损伤的最敏感指标之一.目的观察山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌流后脑线粒体损伤的影响,探讨山莨菪碱的脑保护作用.设计完全随机对照实验.单位华中科技大学同济医学院附属同济医院.材料实验于2002-09/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成.选择30只健康家兔,随机分为假手术组、缺血再灌流组、山莨菪碱组,每组10只.方法采用"结扎双侧椎动脉和夹闭双侧颈总动脉+体循环低血压"建立全脑缺血再灌流模型,缺血20 min,再灌流2 h.山莨菪碱组于再灌流前1 min由股静脉给予山莨菪碱,剂量为10 mg/kg,并以5 mg/h速度维持治疗2 h.缺血再灌流组再灌流期间给予等量生理盐水治疗;假手术组只接受手术,但不结扎和夹闭血管.①采用氧化电极法测定脑线粒体呼吸功能,包括呼吸控制率,磷氧比,氧化磷酸化效率.②采用氧电极法测定脑线粒体内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶,琥珀酸氧化酶,细胞色素C氧化酶活性.③采用原子吸收光谱法测定脑线粒体钙含量.④采用改良八木国夫法测定脑线粒体丙二醛含量.主要观察指标①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸功能、呼吸链氧化酶活性变化.②各组家兔大脑皮质线粒体内钙和丙二醛含量.结果30只家兔均进入结果分析.①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸控制率、磷氧比、氧化磷酸化效率缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组[烟酰胺腺嘌呤二核苷酸链呼吸控制率2.34±0.18,3.58±0.29,4.07±0.38,P＜0.05～0.01;磷氧比1.77±0.10,2.23±0.14,2.41±0.17,P＜0.05～0.01;氧化磷酸化效率(527±0.78),(8.03±1.30),(9.63±1.50)μkat/g,P＜0.05～0.01;黄素腺嘌呤二核苷酸链呼吸控制率1.47±0.23,2.53±0.28,2.84±0.36,P＜0.05～0.01;磷氧比0.88±0.09,1.58±0.11,1.73±0.17,P＜0.05～0.01;氧化磷酸化效率(6.05±1.13),(7.47±1.40),(8.62±1.60)μkat/g,P＜0.05～0.01],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P＜0.01).②各组家兔大脑皮质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶活性缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组[还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶(2.62±0.35),(4.55±0.48),(5.07±0.60)μkat/g;琥珀酸氧化酶(1.48±0.17),(1.83±0.22),(2.10±0.28)μkat/g;细胞色素C氧化酶(5.03±1.12),(7.62±1.23),(9.00±1.53)μkat/g,(P＜0.05～0.01)],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P＜0.01).③各组大鼠脑线粒体钙和丙二醛含量缺血再灌流组和山莨菪碱组高于假手术组[钙(2.36±0.23),(1.39±0.17),(1.22±0.12)mg/g;丙二醛[(36.38±10.42),(22.69±9.56),(19.74±7.26)μmol/g,(P＜0.05～0.01)].山莨菪碱组低于缺血再灌流组(P＜0.01).结论山莨菪碱可通过钙拮抗、抑制脂质过氧化、稳定线粒体膜,减轻线粒体结构损伤,并促进缺血再灌流后线粒体呼吸功能、呼吸链酶活性的恢复,从线粒体水平发挥脑保护作用.     

生脉注射液抗急性百草枯中毒大鼠自由基损伤作用的实验研究

目的 探讨生脉注射液对急性百草枯中毒的治疗作用.方法 将50只SD大鼠随机分为5组(空白组、阴性对照组、阳性对照组、生脉低剂量组和生脉高剂量组),每组各10只.空白组大鼠腹腔注射生理盐水30 ml/kg,其他组复制成百草枯急性中毒模型.观察大体标本、组织病理以及生物学标志(肺湿重/干重比、肺泡灌洗液中性粒细胞比和蛋白含量).同时测定血清和肺泡灌洗液中丙二醛含量以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力.结果 与阴性对照组相比,生脉低剂量组肺组织病理显示肺淤血、肺水肿明显减轻,而且血浆和肺泡灌洗液中丙二醛含量分别由(5.04±0.50)、(1.19±0.18)nmol/ml下降至(4.04±0.21)、(0.79±0.04)nmol/ml,超氧化物歧化酶活力由(123.30±20.39)、(26.43±2.22)U/ml升高至(277.09±11.66)、(37.10±2.49)U/ml,谷胱甘肽过氧化物酶活力由(1796.63±81.12)、(598.24±62.50)U/ml升高至(2151.54±148.32)、(1788.44±175.11)U/ml;2组比较差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 生脉注射液可使急性百草枯中毒引起的脂质过氧化损伤得到改善,低剂量效果更佳.     

维生素E联合左卡尼汀对血液透析患者氧化应激及内皮细胞功能的干预作用

目的 研究维生素E联合左卡尼汀对维持血液透析(MHD)患者氧化应激、内皮细胞功能及营养状态的干预作用.方法 83例MHD患者随机分为对照组(A组),左卡尼汀治疗组(B组),维生素E治疗组(C组),两药联用治疗组(D组).在每次透析结束时B组给予静脉注射左卡尼汀1.0 g,C组每日给予口服维生素E 400 mg,D组联合使用左卡尼汀和维生素E.分别检测各组患者的血生化指标及血浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、一氧化氮(NO).结果 A组3个月末时MDA较透析前增加[(4.81±0.08)nmol/L与(4.62±0.06)nmol/L(P<0.05)],第3个月末时GSHPx降低[(72.02±2.05)μmol/L与(74.62±1.46)μmol/L(P<0.01)],血红蛋白(Hb)、血白蛋白(Alb)降低,但差异均无统计学意义(P均>0.05).B、C组在3个月时MDA明显低于A组[(3.86±0.06)、(3.81±0.19)nmol/L对(4.81±0.08)nmol/L(P均<0.01)],而GSHPx、NO则显著增高[(92.11±1.62)、(92.14±1.37)μmol/L对(72.02±2.05)μmol/L;(64.24±1.72)、(64.35±1.67)μmol/L对(49.91±1.19)μmol/L(P均<0.05)].在第3个月时,患者的Hb、Alb水平较治疗前显著升高(P均<0.05).D组效果优于B、C组(P均相似文献