丹葛解酲汤对酒精性肝损害大鼠肝细胞中Bcl-2和NF-kB表达的影响

目的 通过观察肝组织病理形态学改变,来探讨丹葛解酲汤对酒精性肝损害大鼠肝细胞中Bcl-2和NF-κB表达的影响.方法 将90只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、丹葛解酲汤组,采用白酒灌胃的方法建立大鼠酒精性肝损伤模型,12周后,采用TUNEL法检测肝细胞凋亡指数并观察肝脏的病理学形态;用免疫组化法测定Bcl-2和NF-κB在肝细胞中的表达.结果 丹葛解酲汤组就细胞凋亡指数低于模型组,差别有统计学意义(P＜0.01);肝组织病理结果提示丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠具有保护作用.模型组Bcl-2和NF-kB表达强度均明显高于正常对照组(P＜0.01),丹葛解酲汤组Bcl-2表达强度高于模型组(P＜0.05),丹葛解酲汤组NF-κB表达强度低于模型组(P＜0.01).结论 丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠肝细胞具有保护作用;通过影响大鼠肝组织中Bcl-2和NF-κB表达,推测丹葛解酲汤有减少肝细胞凋亡而起到保护肝细胞作用的可能机制.     

维药黑种草子对急性乙醇性肝损伤小鼠保护作用及抑制NF-κB炎性反应信号通路的研究

目的:观察维药黑种草子对急性乙醇性肝损伤小鼠保护作用及对NF-κB炎性反应信号通路的抑制作用。方法:50只昆明小鼠随机分为模型组、空白组、阳性对照组、黑种草子水提液高剂量组(6 g/kg)、黑种草子水提液低剂量组(2 g/kg)。除空白组外,其余各组每日均灌胃给予56度白酒10 m L/kg,连续灌胃15 d。禁食不禁水10 h后,观察小鼠一般状态,检测体质量,肝重,肝指数,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),肝组织核因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,并进行肝组织病理学检查。结果:与空白组相比,模型组小鼠体质量和肝指数均降低,血清ALT及AST活性升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,黑种草子水提液各组小鼠肝体质量和肝指数有所升高,血清ALT及AST活性降低,差异有统计学意义(P0.05)。模型组小鼠肝细胞明显气球样变性、坏死和并伴有少量炎细胞浸润,黑种草子水提液组较肝损伤模型组病变情况显著减轻。模型组NF-κB及TNF-α表达强度均高于空白组,黑种草子各给药组较模型组NF-κB及TNF-α表达强度均下降。结论:黑种草子水提液对急性乙醇性肝损伤小鼠具有一定保护作用,并且能明显抑制小鼠肝细胞NF-κB及TNF-α的表达。     

三叶木通总黄酮对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的:研究三叶木通总黄酮对四氯化碳(CCl_4)诱发的急性肝损伤小鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:各组小鼠灌胃给予药物或溶剂干预10 d后,腹腔注射0.1%CCl_4花生油溶液建立急性肝损伤模型。生化法检测小鼠血清中门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量,蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达,HE染色观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,三叶木通总黄酮能显著降低小鼠血清AST、ALT活性,提高血清SOD、GSH-Px活性,降低血清MDA及肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,下调肝组织NF-κB蛋白表达,并改善肝组织病变。结论:三叶木通总黄酮对CCl_4诱导的急性肝损伤小鼠具有保护作用,其保肝作用机制可能与抗氧化和抑制炎症反应有关。     

兖州卷柏水提物对急性酒精性肝损伤小鼠保肝及肠道菌群的影响

目的 研究兖州卷柏水提物对急性酒精性肝损伤小鼠保肝及肠道菌群的影响。方法 将60只小鼠随机分成6组,每组10只。正常组和模型组每天灌胃生理盐水,阳性组每天灌胃100 mg/kg葵花护肝片,兖州卷柏低、中、高剂量组每天分别灌胃100、150、200 mg/kg兖州卷柏水提物,连续15 d。末次给药3 h后,模型组、阳性组和兖州卷柏各剂量组小鼠灌胃10 mL/kg无水乙醇,正常组小鼠灌胃等体积生理盐水。造模24 h后,检测血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶活性(ALP)活性,以及肝组织核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达,HE染色观察肝组织病理性改变,采用高通量测序技术对小鼠粪便细菌进行分析。结果 与模型组比较,兖州卷柏各剂量组小鼠血清GOT、GPT和ALP活性降低(P<0.05),肝组织TNF-α和NF-κB表达降低(P<0.05),肝组织病理性损伤得到改善,酒精引起的肠道菌群紊乱得到一定恢复。结论 兖州卷柏对酒精引起小鼠肝损伤具有一定保护作用,其机制可能与阻断NF-κB通路的活化进而抑制炎症反应,以及改善肠道菌群紊乱有关。     

樟芝多糖通过下调TLR4-MyD88-NF-κB信号的表达改善LPS/D-GalN诱导的肝细胞凋亡及小鼠肝损伤

目的:研究樟芝多糖对LPS/D-GalN诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:建立LPS/D-GalN诱导的NCTC1469细胞凋亡模型,采用CCΚ-8法检测细胞存活率,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平,化学比色法检测LDH、ALT、AST水平,二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH水平,Western blot检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。建立LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤模型,HE染色检测小鼠肝脏病理,化学比色法检测血清LDH、ALT、AST水平,免疫组织化学检测NF-κB表达,Wstern blot检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB表达。结果:细胞实验中,LPS/D-GalN可诱导NCTC1469细胞的凋亡,上调细胞中TLR4、MyD88、NF-κB表达和培养基中LDH、ALT、AST、MDA水平,下调细胞中SOD、GSH水平,樟芝多糖能提高细胞存活率,下调细胞中TLR4、MyD88、NF-κB表达和LDH、ALT、AST、MDA水平,上调SOD、GSH水平。动物实验中LPS/D-GalN可诱导小鼠肝损伤,上调外血清LDH、ALT、AST水平和肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达,樟芝多糖能下调小鼠血清LDH、ALT、AST水平和肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达。结论:樟芝多糖可通过下调TLR4-MyD88-NF-κB信号表达保护LPS/D-GalN诱导的肝细胞凋亡及急性肝损伤。     

白首乌C-21甾体总苷对肝损伤小鼠氧化应激通路的影响

通过观察白首乌C-21甾体总苷对肝损伤小鼠氧化应激的影响来探讨白首乌的保肝作用机制。雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药组及白首乌总苷高剂量(8 g·kg~(-1))和低剂量(4 g·kg~(-1))组,用四氯化碳(CCl4)复制小鼠急性肝损伤模型,采集各组动物血液和肝组织标本,测定血清中ALT和AST水平,HE染色观察肝脏病理学改变,比色法检测肝组织SOD活性和MDA含量,Western blot法检测肝脏NF-κB p65,p-IκBα,i NOS和COX-2的表达,RT-PCR法测定肝组织中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。与模型组比较,白首乌C-21甾体总苷可明显降低模型动物血清中ALT,AST水平(P0. 01),同时显著升高肝匀浆中SOD活性(P0. 01),并降低MDA含量(P0. 01); HE染色结果显示白首乌2个剂量组均不同程度地减轻肝细胞水肿、变性; Western blot和RT-PCR法结果显示,白首乌总苷组p-IκBα,i NOS,NF-κB p65和COX-2蛋白表达显著下降(P0. 01),TNF-α和IL-6 mRNA表达明显下调(P0. 05)。白首乌C-21甾体总苷对CCl4诱导的小鼠肝损伤有较好的预防作用,通过减轻氧化应激,从而发挥保肝作用,其机制与提高细胞SOD活性、降低MDA水平,抑制NF-κB通路激活,下调i NOS和COX-2蛋白表达有关。     

青蒿琥酯对Con A诱导小鼠自身免疫性肝损伤的保护作用研究

免疫性肝病是临床上难治性疾病,目前没有特效性药物,因此,研发新的有效干预药物,对防治免疫性肝病有重要的临床价值。为探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对免疫性肝损伤的保护作用,该研究采用不同质量浓度(27,54,108 mg·kg~(-1))Art灌胃小鼠连续7 d,然后尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导小鼠肝损伤模型。于造模后8 h采血液和肝组织进行血清转氨酶(ALT,AST)、组织病变、炎性细胞因子以及NF-κB关键蛋白表达水平的检测。结果表明,与模型组相比,Art高浓度组显著降低了模型小鼠的肝指数、ALT和AST水平(P0.01),组织病变也明显减轻,同时降低了促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-17的水平而增加了炎性抑制因子IL-10的表达(P0.05),并呈现明显的剂量-效应关系。Western blot法检测结果显示108 mg·kg~(-1)Art可显著抑制NF-κB关键蛋白p-p65和p-IκBα的表达(P0.01)。NF-κB特异阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)也可显著抑制p-p65和p-IκBα表达并减轻肝损伤。以上结果说明Art主要通过抑制NF-κB信号通路而对Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤发挥保护作用。该研究为青蒿琥酯用于自身免疫性肝损伤的防治提供了参考。     

石榴多酚对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的：观察石榴多酚（punicosides,Puns）对乙醇所致的急性小鼠肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法：将60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、Puns低、中、高3个剂量组和水飞蓟宾组。预先给予Puns组和水飞蓟宾组灌胃给药4周后建立乙醇所致的急性肝损伤动物模型,观察Puns对肝、胸腺和脾脏指数的影响,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶 （AST） 和甘油三酯（TG）的含量,及肝匀浆中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽S转移酶（GSH-ST）的含量变化。HE染色观察肝脏组织学改变,免疫组化法检测肝组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和核转录因子-κB（NF-κB）的表达情况。结果：Puns中剂量和高剂量组能显著降低小鼠肝指数,改善肝脏脂肪变性情况,降低小鼠血清中的ALT,AST,TG水平,降低肝匀浆中的MDA含量,增加SOD,GSH-Px和GSH-ST 3种酶的活性,改善肝组织学变化,抑制肝组织中MCP-1和NF-κB的表达。结论：Puns对小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用。     

诸葛菜种子水提物对硫代乙酰胺诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究

该实验研究了诸葛菜种子水提物对硫代乙酰胺(TAA)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。将雄性ICR小鼠随机分为7组:正常组,模型组,双环醇阳性对照组(200 mg·kg-1)及葵花护肝片阳性对照组(350 mg·kg-1),诸葛菜种子水提物低(125 mg·kg-1)、中(250 mg·kg-1)、高(500 mg·kg-1)剂量组。各组按照0.02 mL·g-1灌胃给药,每日1次,连续给药4 d,第4天给药后1 h,除正常组外均腹腔注射硫代乙酰胺溶液100 mg·kg-1建立急性肝损伤模型,24 h后脱臼处死取血、取材。计算肝脏指数;检测血清中ALT,AST,TBiL活性及肝组织中SOD,GSH-Px的活性,MDA,GSH的含量;HE染色法观察肝组织病理变化;Western blot法检测NF-κB p65,Keap-1,Nrf2,p-p38,p-ERK,p-JNK,Bax,Bcl-2,caspase-3,cleaved caspase-3,caspase-8蛋白的表达。结果表明,与模型组相比,诸葛菜各给药组均能明显改善肝脏病理变化,降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,TBiL活性,其高剂量组肝脏组织匀浆上清中SOD与GSH-Px活性升高,GSH含量升高,MDA含量降低,同时可致肝组织中Bax,Keap-1,p-p38,p-JNK,p-ERK,NF-κB p65,cleaved caspase-3蛋白表达水平减少和Nrf2,Bcl-2,caspase-3,caspase-8蛋白表达水平增加。因此,诸葛菜种子水提物对硫代乙酰胺溶液所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,其机制可能与下调Keap-1,上调Nrf2蛋白表达减轻氧化应激,抑制p38,ERK的磷酸化水平,进而抑制NF-κB信号通路的激活,抑制JNK蛋白的磷酸化,下调Bax,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制肝细胞凋亡有关。     

复方叶下珠汤对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用及机制研究

目的:研究复方叶下珠汤对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤大鼠的保护作用,并从Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)炎症信号通路探讨其作用机制。方法:将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟素0. 12 g/kg组和复方叶下珠汤12、6、3 g/kg组,每组10只。灌胃等体积相应药物或生理盐水,每天1次,连续给药10 d。末次给药2 h后,正常对照组腹腔注射橄榄油5 m L/kg,其余各组均腹腔注射12%CCl4橄榄油溶液5 m L/kg建立急性肝损伤大鼠模型。禁食不禁水16 h后,摘除眼球取血,采集肝脏。生化法检测血清中ALT、γ-GT和AST活性,肝组织中SOD、GSH-Px及NO和MDA含量;酶联免疫吸附法检测肝组织中TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ含量。苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝组织病理变化。蛋白质印迹法(Western blot)检测肝组织中TLR-4和NF-κB蛋白的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组ALT、AST、γ-GT活力显著升高,SOD、GSH-Px活力、IFN含量明显降低,MDA、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6显著增加,TLR-4、NF-κB蛋白表达显著上调(P <0. 05或P <0. 01)。肝组织小叶结构紊乱、肝索排列失序、肝组织水肿。与模型对照组比较,复方叶下珠汤能剂量依赖地降低ALT、AST、γ-GT活性及MDA、NO含量;增强SOD、GSH-Px活性,降低肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,升高IFN-γ含量,抑制TLR-4及NF-κB蛋白表达;病理切片显示复方叶下珠汤对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织的病理变化有改善作用,以6、12 g/kg最为显著(P <0. 05或P <0. 01)。结论:复方叶下珠汤对CCl4致急性肝损伤大鼠有显著的保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激和调控TLR-4/NF-κB信号通路抑制炎症反应有关。     

理气化痰祛瘀中药复方对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织NF-κB、IκBα表达的影响

目的:观察理气化痰祛瘀中药复方对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠肝组织NF-κB、IκB表达的影响。方法:以高脂饲料喂养大鼠造模。造模结束后,分别以不同剂量的理气化痰祛瘀中药和易善复灌胃治疗,模型组和正常组予等容量的蒸馏水灌胃,均连续8周。取肝组织HE染色观察大鼠肝脏脂肪变程度,免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65、IκBα的表达。结果:模型组大鼠肝组织脂肪变程度较正常组明显升高(P<0.01);应用大、中、小剂量中药治疗后肝组织脂肪变程度较模型组明显下降(P<0.01)。模型组大鼠肝组织中NF-κBp65、IκBα的阳性表达明显高于正常组(P<0.01);应用大、中、小剂量中药治疗后大鼠肝组织中NF-κBp65表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论:理气化痰祛瘀中药能明显改善高脂饮食诱导的大鼠肝组织脂肪变性,抑制大鼠肝组织NF-κBp65表达可能是其作用机制之一。     

银杏叶提取物对大鼠纤维化肝脏NF-κB活性的抑制作用

目的探讨银杏叶提取物对大鼠纤维化肝脏核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法采用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型。设立银杏叶提取物治疗组,秋水仙碱治疗对照组,模型组及空白组,分别灌胃给药。实验末期采用自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST),放射同位素检测血清透明质酸酶(HA)。免疫组化SP法检测NF-κBp65蛋白表达的改变,光镜下观察肝组织病理学变化。结果银杏叶提取物可以显著降低CCl4诱导的肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平;银杏叶提取物组HA含量大幅度下降;模型组的肝脏损伤及其纤维化分级均明显高于正常组,银杏叶提取物的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组;银杏叶提取物显著抑制纤维化肝脏组织NF-κBp65蛋白的活性。结论银杏叶提取物可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,抑制NF-κB的表达可能是其抗肝纤维化作用的靶点之一。     

蒿芩清胆汤对流感病毒性湿热证NF-кB表达的影响

目的:应用蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症模型进行治疗,并探索其中可能存在信号通路,为评价其作用打下实验基础。方法:将小鼠随机分为正常组、病毒组(单纯病毒感染)、模型组(高脂饮食+湿热环境+病毒感染)、阳性药物组(模型组+病毒唑)、蒿芩清胆汤组(模型组+蒿芩清胆汤)。造模成功后取小鼠肺组织,用免疫组织化学法检测肺组织切片NF-κB阳性光密度值;提取小鼠腹腔巨噬细胞用RT-PCR的方法检测其NF-κBmRNA的表达,测定各组小鼠肺指数并计算肺指数抑制率,再进行比较。结果与模型组相比,蒿芩清胆汤组的小鼠肺病变程度明显好转,肺组织NF-κB的阳性表达及腹腔巨噬细胞NF-κBmRNA的表达均明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症疗效显著,而它是通过下调NF-κB的表达来干预肺泡内炎症反应,减少肺组织损伤从而达到治疗的目的。     

白马骨水提物对急性肝损伤小鼠氧化应激及炎症反应的影响

目的:基于氧化应激及炎症反应,研究白马骨水提物对急性肝损伤小鼠的保护作用机制。方法:将60只小鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(水飞蓟素0.2 g·kg-1)和白马骨高、中、低剂量(4,2,1 g·kg-1·d-1)组,每组10只。连续灌胃给药7 d,末次给药2 h后,除正常组外,其余各组小鼠均腹腔注射0.12%四氯化碳(CCl4)花生油溶液(10 m L·kg-1),建立小鼠急性肝损伤模型。16 h后,眼球取血,并收取肝脏。生化法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),直接胆红素(DBIL),总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及一氧化氮(NO)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平;蛋白质印迹法(Western blot)分析肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达情况;显微观察肝组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组血清中ALT,AST,TBIL,DBIL,MDA及NO的水平显著升高,T-SOD和GSH-Px的活性降低(P0.01);肝组织中IL-1β,TNF-α,IL-6含量升高和NF-κB蛋白表达增强(P0.01)。与模型组比较,白马骨水提物各剂量组不同程度降低化学性肝损伤小鼠血清中ALT,AST,TBIL,DBIL,MDA及NO的水平(P0.05,P0.01),并抑制T-SOD和GSH-Px活性的降低;白马骨水提物可抑制肝组织IL-1β,TNF-α,IL-6含量的升高和NF-κB蛋白的表达(P0.01,P0.05);病理切片观察也表明白马骨水提物能明显改善受损的肝损伤病理特征。结论:白马骨水提物对CCl4致急性肝损伤小鼠具有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激,抑制肝脏炎症反应相关。     

绿茶提取物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨绿茶提取物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的抗氧化保护作用。方法:60只小鼠随机分成正常对照组、CCl4模型组、绿茶提取物200、400、800mg/kg组及维生素E 250mg/kg组,连续给药7d,采用0.12%CCl4制备小鼠急性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)的水平;检测肝组织匀浆液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,病理观察肝脏的损伤程度,酶联免疫法(Elisa)检测血清中核转录因子(NF-κB)、肿瘤坏死表达水平。结果:与模型组比较,绿茶提取物200、400、800mg/kg剂量组均能明显降低血清ALT、AST的水平,提高肝脏组织匀浆液SOD、CAT、GSH-Px活性;改善肝脏组织病理损伤;减低NF-κB,TNF-α的表达水平。结论:绿茶提取物具有保护急性肝损伤作用,可能是减低NF-κB、TNF-α的表达,减少氧化应激损伤,从而达到保护急性肝损伤的作用。     

柴胡皂苷b_2对LPS/GalN诱导的小鼠急性肝损伤炎症和能量代谢的影响

该研究旨在探讨柴胡皂苷b2(SS-b2)对注射脂多糖/氨基半乳糖(LPS/Gal N)诱导的小鼠急性肝损伤炎症因子的调控和对能量代谢的影响。将小鼠随机分为空白对照组(等量生理盐水),模型组(100μg·kg~(-1)LPS+400 mg·kg~(-1)Gal N),SS-b2低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg~(-1)·d-1)和阳性对照组(地塞米松,10 mg·kg~(-1))。除空白对照组外,其余各组每天腹腔注射LPS/Gal N建立急性肝损伤小鼠模型。计算脏器指数;血清生化指标检测ALT和AST的含量和肝脏ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量;微量酶标法测定肝脏LDH的含量; HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法测定LDH-A的蛋白表达; Western blot法检测肝脏Sirt-6和NF-κB蛋白表达情况。结果显示,与模型组相比,SS-b2高剂量组小鼠脏器指数均有明显变化(P0. 05); SS-b2中、高剂量组能明显降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,TNF-α,IL-1β,IL-6的水平及LDH活性(P0. 01),随着SS-b2剂量的增加,小鼠肝脏病变范围减少,损伤程度减轻,各剂量组能够显著增强小鼠肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性(P0. 01); SS-b2中、高剂量组能够显著下调肝组织NF-κB的蛋白表达(P0. 01),同时,各剂量组能够显著提高急性肝损伤小鼠肝脏中Sirt-6蛋白表达量(P0. 01)。综上,SS-b2对LPS/Gal N诱导的小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用,该作用可能与其下调NF-κB蛋白表达以及上调Sirt-6蛋白表达改善炎症损伤以及能量代谢有关。     

糖肾清2号方对糖尿病肾病小鼠AMP激活蛋白激酶信号通路的影响

目的观察糖肾清2号方对糖尿病肾病模型小鼠AMP激活蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法采用自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周诱导糖尿病肾病模型。造模成功的小鼠随机分为模型组,阳性药组,中药大、中、小剂量组,以C57BL/6J小鼠设为正常组,每组各6只。正常组及模型组予去离子水0.1 mL/(10 g·d),阳性药组予缬沙坦13.33 mg/(kg·d),中药大、中、小剂量组分别按照糖肾清2号方生药量40.66、20.33、10.17 g/(kg·d)剂量灌胃。各组小鼠每日灌胃1次,连续干预治疗12周后取血清及肾脏。采用RT-PCR技术检测肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65、TNF-α、IL-6 mRNA转录水平。Western blot技术、免疫组化法测定肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65蛋白表达水平。ELISA法检测血清TNF-α、IL-6蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组AMPK-α1 mRNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P0.01),NF-κB P65、IL-6、TNF-αmRNA转录水平及蛋白表达水平明显上调(P0.01)。与模型组比较,中药大、中、小剂量组AMPK-α1 mRNA及蛋白表达均有上调(P0.05,P0.01),NF-κB P65、IL-6、TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显下调(P0.05,P0.01)。与阳性药组比较,中药各组AMPK-α1 mRNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P0.01),NF-κB P65、TNF-α、IL-6 mRNA水平均明显上调(P0.01),NF-κB P65、IL-6蛋白表达水平均明显上调(P0.05,P0.01);中药大、中剂量组TNF-α蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论糖肾清2号方对肾脏的保护作用可能与激活AMPK-α1活性,间接抑制NF-κB活性从而抑制炎症反应有关。     

基于Klotho研究三七总皂苷对大鼠肾缺血-再灌注损伤的保护机制

目的观察三七总皂苷对肾缺血-再灌注损伤大鼠Klotho蛋白表达的影响,探讨其对模型大鼠的保护机制。方法实验大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组和三七总皂苷高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物,每日1次。建立大鼠肾缺血-再灌注损伤模型,造模4 h后腹主动脉取血处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平及肾组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,HE染色观察肾组织形态变化,免疫组化检测Klotho、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清BUN、SCr水平明显升高(P0.05),肾组织Klotho蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,各给药组Klotho蛋白表达升高,NF-κB p65蛋白表达降低(P0.05);与阳性药组比较,三七总皂苷高剂量组Klotho蛋白表达升高,NF-κB p65蛋白表达降低(P0.05)。NF-κB p65蛋白表达与Klotho呈负相关(r=-0.895,P0.05)。结论三七总皂苷可能通过上调Klotho蛋白表达,减少NF-κB p65蛋白表达,抑制氧化应激和对抗炎症,从而发挥保护肾脏作用。     

基于氧化应激和TLR-4/NF-κB通路研究算盘子根总黄酮保肝作用及其机制

目的:研究算盘子根总黄酮对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠的保护作用及其作用机制。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组(150 mg/kg)、算盘子根总黄酮(300 mg/kg、150 mg/kg、75mg/kg)剂量组,每日以10 ml/kg灌胃给药1次,连续给药10d。末次给药2 h后,除正常组外,其余各组小鼠均腹腔注射0. 12%CCl4花生油溶液(10 ml/kg)建立急性肝损伤模型,16h后,眼球取血,收集肝组织。生化法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及一氧化氮(NO)活性或含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平; HE染色肝切片,观察肝组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况。结果:算盘子根总黄酮各剂量均可显著降低肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、一氧化氮(NO)及丙二醛(MDA)活性或含量,增强T-SOD和GSH-Px活性;下调肝组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平并抑制肝组织TLR-4及NF-κB蛋白表达;同时病理切片显示算盘子根总黄酮各剂量均对小鼠肝损伤有改善作用。结论:算盘子根总黄酮对CCl4致急性肝损伤小鼠有良好保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激、抑制炎症反应以及调控TLR-4/NF-κB通路有关。     

葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3/8活性的影响

目的探索葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3和Caspase8活性的影响。方法以小鼠活动状态和血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平为参考指标,制备急性酒精中毒小鼠模型,分别给予葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂灌胃干预,检测小鼠肝组织Caspase3/8活性。结果 (1)所有造模小鼠出现嗜睡、步态蹒跚、活性减少、身子发抖等状态,模型对照组小鼠血清ALT、AST水平较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组实验小鼠血清ALT、AST水平明显降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(2)急性酒精性肝损伤小鼠肝组织Caspase3/8活性较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组小鼠肝组织Caspase3或/和Caspase8活性较模型对照组显著降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(3)Caspase3活性以葛根散大剂量组降低幅度最大,而Caspase8活性则以葛花解酲汤大剂量组降低幅度最大。结论急性酒精中毒小鼠肝组织Caspase3/8活性显著升高,葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂分别对其具有明显抑制作用,这可能是各方抑制肝细胞凋亡、防治酒精性肝损伤的部分机制。