大脑中动脉栓塞再灌注鼠脑一氧化氮合酶活性变化及地塞米松的治疗效应

一氧化氮 ( NO)广泛参与机体的生理及病理生理过程 ,具有扩张血管、神经毒性和细胞毒性作用。本研究采用一侧大脑中动脉栓塞再灌注 ( MCA OR)大鼠模型 ,观察脑缺血及再灌注条件下鼠脑一氧化氮合酶 ( NOS)活性变化 ,以及地塞米松 ( Dm )对 NOS活性的影响。1　材料与方法1.1　实验动物及分组 :Wistar大鼠由第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供 ,体重 ( 2 5 8.0± 2 6.5 ) g,雌雄不拘。随机分为脑缺血再灌注 ( IR)、地塞米松治疗 ( IR Dm)和正常对照( NORM) 3组 ,每组各 6只。1.2　标本制备 :1.2 .1　四氮唑 ( TTC)染色 :…     

抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后NO、NOS及氧自由基的影响

目的 观察抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及氧自由基的影响.方法 21只国产大耳白兔随机分为实验组(8只)、对照组(8只)和假手术组(5只).实验组缺血60 min,再灌注24 h,并于缺血前10 min静脉注射抑肽酶3×107 IU/kg体重,继而用Graseby3500微量泵持续注入抑肽酶1×107 IU/kg体重/h直至实验结束.对照组缺血及再灌注时间、方法同实验组(用生理盐水代替抑肽酶).假手术组只暴露腹主动脉,不夹闭,不给药.缺血前、缺血再灌注后8 h、24 h处死动物,取腰段脊髓(L2～L4)进行NO及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)测定.处死动物前取动脉血进行丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)检测.结果 再灌注8 h后,实验组的NO、MDA含量和iNOS活力较对照组明显下降,SOD活力增加.结论 抑肽酶预处理可以明显抑制缺血再灌注后脊髓组织中iNOS的产生,降低NO、MDA含量,提高SOD活力,减少再灌注损伤,保护神经组织.     

一氧化氮的研究进展

一氧化氮(NO)是由L-精氨酸通过一氧化氮合成酶(NOS)的催化而合成。在血管系统,内皮细胞上存在的原生NOS所合成的NO对人和动物具有扩张血管的作用;在免疫系统,巨噬细胞和白细胞上存在的诱生NOS受细菌内毒素或某些细胞因子的激活而合成的NO具有细胞毒性。本文述及NO的生物化学、病理生理及其测定方法。     

硝苯地平对自发性高血压大鼠血管内皮细胞的保护作用

背景研究表明,硝苯地平能够改善血管内皮细胞功能,而对于其扩张血管的机制,目前仍在进一步的研究中. 目的观察硝苯地平控释剂对自发性高血压大鼠(SHR)一氧化氮(NO)及诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的影响.设计以实验动物为研究对象的观察对比研究.单位一所医学院的动物实验中心.材料本实验于2002-04/2002-05在山东大学医学院动物实验中心完成.实验动物为近交SHR大鼠21只,体质量(300±20)g,由山东大学医学院实验动物中心提供,清洁级.随机分为3组,即对照组、正常剂量组、低剂量组,每组7只. 方法对照组、正常剂量组和低剂量组分别灌胃生理盐水10 mL/kg、硝苯地平控释剂(拜新同)溶液(0.3 g/L)10 mL/kg和3 mL/kg,1次/d,连续15 d.末次给药后摘眼球取血并取大鼠心、肺分别测定血清NO和iNOS的含量.主要观察指标各组大鼠的NO含量、iNOS活性比较.结果灌胃15 d后,正常剂量组的NO含量与对照组、低剂量组比较,差异均有显著性意义(P<0.01);正常剂量组心、肺组织块中iNOS活性降低,与对照组和低剂量组比较差异均有显著性意义(P<0.01,P<0.05).结论硝苯地平可在降低血压的同时,提高血清NO的含量,并且能对抗血压增高所造成的iNOS的活性增强(或二者互为因果).     

NO在支气管哮喘发病、诊断及治疗中的作用

一氧化氮(NO),为无色,透明,无味的自由基气体分子,具有调节众多生理,病理生理过程的功能,NO所涉及的领域极其广泛,包括血管调节,舒张支气管,神经介质,机体防御,抑制血小板,细胞毒作用等。NO在一氧化氮合酶(NOS)催化下由L-精氨酸产生。NOS有三种形式,INOS和IIINOS主要在神经原和     

一氧化氮在维甲酸诱导分化治疗中的作用

一氧化氮(nitric oxide,NO)作为一种效应分子,参与杀灭病原微生物和攻击肿瘤细胞等细胞毒效应。现在越来越多的证据表明,NO也能影响造血细胞的生长、分化和凋亡,与维甲酸诱导分化治疗作用有关。通过研究NO在维甲酸诱导分化过程中的作用,就可以从另一个角度探讨维甲酸作用的分子机理,为逆转维甲酸耐药和减少维甲酸综合征提供新的思路。     

大黄素甲醚对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

背景白细胞介素1β和细胞黏附分子1可介导中性粒细胞浸润,与脑缺血再灌注损伤密切相关.目的研究大黄素甲醚对缺血再灌注后脑组织炎性反应的影响.设计以实验动物为研究对象,完全随机对照研究.单位一所大学医院的神经内科.材料实验于2003-09/12在河北省职工医学院动物实验室完成.健康雄性SD大鼠91只,由河北医科大学动物中心提供.实验分为假手术组、缺血再灌注组和正常组以及大黄素甲醚20 mg/kg组和大黄素甲醚40 mg/kg组,前二组分为再灌注6,12,24,48 h时间段组,后两组又分为脑缺血再灌注12,24 h两组,每组为7只.干预制备大脑中动脉闭塞模型,用放射免疫的方法检测白细胞介素1β,用免疫组织化学方法检测细胞黏附分子1.主要观察指标各组大鼠脑组织中白细胞介素1β水平及细胞黏附分子1的阳性表达.结果大鼠脑缺血再灌注6 h达高峰,随之开始逐渐下降.大黄素甲醚40 mg/kg组再灌注12 h及再灌注24 h,以及20mg/kg组再灌注12 h病变侧脑组织白细胞介素-1β含量与模型组相应时间段比较明显降低(P＜0.01).正常组及假手术组大鼠大脑皮质可见少量细胞黏附分子1表达,黄褐色反应物出现在血管内皮细胞的胞浆和细胞膜上.缺血再灌注24 h可见大血管的内皮细胞呈阳性表达,并逐渐加深(积分吸光度值31.89±4.38;面密度值0.018 5±0.003 1).大黄素甲醚40 mg/kg组再灌注12 h(积分吸光度值13.33±6.12;面密度值0.007 6±0.002 2)、24 h(积分吸光度值20.04±4.65;面密度值0.012 9±0.003 6)以及20 mg/kg组再灌注24 h(积分吸光度值23.73±4.51;面密度值0.014 1±0.003 8)梗死灶周边的细胞黏附分子1蛋白的表达与相应时间段的模型组比较明显较少(P＜0.01或P＜0.05).结论大黄素甲醚能降低脑缺血再灌注后脑组织白细胞介素1β,细胞黏附分子1的表达,减轻脑缺血再灌注损伤.     

一氧化氮、细胞凋亡与良性前列腺增生症的关系

一氧化氮(NO)是一种结构简单、不稳定的气体分子。大量来自多器官系统的研究表明NO兼有第二信使和神经递质的功能,是一种新发现的细胞间信息传递的载体,广泛参与机体多种生理功能的调节。NO与细胞凋亡的关系是目前生物学研究的前沿领域。NO介导了体内多种细胞凋亡的过程。近     

一氧化氮在肿瘤免疫方面的研究进展

一氧化氮(NO)是L-精氨酸上胍基的氮经氧化而产生的。这个反应由两个主要的NO合成酶催化,即诱生型和原生型,其中诱生型的功能是以细胞毒作用为主。大量研究表明NO可以介导免疫细胞杀伤肿瘤细胞,同时,NO具有双重作用,在生物体内持续超量的NO也可以引起基因突变和癌症。由于生物系中NO的半衰期很短,所以许多试验是用NO_2~-+NO_3~-代替NO或抑制NO合成酶等间接方法检测的。然而,直接检测具有更客观的优势。目前分光镜和电化学方法是最新的NO检测方法。     

Physiologic role for“inducible”nitric oxide synthase:A new form of astrocytic-neuronal interface

长期以来,一氧化氮(NO)都被看作是影响兴奋性突触传递的非典型神经信使分子,其细胞来源尚不清楚.许多脑区中的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)只在少量抑制性神经元中表达.众所周知,胶质细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)不在正常大脑中表达,其在免疫刺激后可经转录介导上调.因此,iNOS调节正常神经功能的作用常被忽视.许多研...     

硝普钠对HL-60细胞诱导分化作用的观察

我们曾报道了有关外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)诱导HL 6 0细胞凋亡及其分子机制的研究。实验中发现低浓度SNP在体外还可诱导HL 6 0细胞分化,并对细胞分化作用的分子机制进行了实验研究。材料和方法1　主要试剂　外源性NO供体SNP为Sigma公司产品,DNA分析制备试剂盒(DNA Prepkit) [内含透膜剂,RNase和碘化丙锭(PI) ]为美国Beckman Coulter公司产品;突变型P5 3单抗(PAB2 4 0 )、Bcl 2单抗(83 8B)、Bax单抗(4F1 1 )及用于Bcl 2、Bax检测的透膜剂、CD1 1b、CD3 3 、CD1 4 、Fas及同型对照均为法国Immunotech公司产品;C…     

抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后NO及NOS的影响

目的 观察抑肽酶预处理对家兔脊髓缺血再灌注损伤后脊髓中一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的影响.方法 45只新西兰大白兔随机分为抑肽酶预处理组、生理盐水组及假手术空白组,每组15只.以体外松解法建立家兔脊髓缺血模型,缺血60 min后恢复血流再灌注24 h.抑肽酶预处理组于缺血前10 min静脉注射抑肽酶3×107 IU/kg,继而用微量泵持续静脉注入抑肽酶1×107 IU/kg/h至实验结束;生理盐水组缺血再灌注时间同实验组,并用等量生理盐水代替抑肽酶;假手术空白组只暴露腹主动脉,不夹闭、不给药.分别于缺血前、缺血再灌注后8 h、24 h处死动物,取腰段脊髓做NO及NOS测定.结果 抑肽酶预处理组与生理盐水组再灌注8 h和24 h的NO、总NOS(TNOS)、诱导型NOS(iNOS)较缺血前升高( P＜0.05);再灌注8 h时,抑肽酶预处理组与生理盐水组之间的TNOS、iNOS有显著性差异( P＜0.05),NO有非常显著性差异( P＜0.01);再灌注24 h时,抑肽酶预处理组与生理盐水组之间的NO、TNOS、iNOS均有非常显著性差异( P＜0.01);抑肽酶预处理组与生理盐水组在再灌注8 h、24 h时,NO、TNOS、iNOS较假手术空白组明显升高( P＜0.01).结论 缺血再灌注时,脊髓中产生过量NO是引起脊髓损伤的重要因素,抑肽酶预处理可以降低脊髓缺血再灌注时脊髓中NO的含量,减轻再灌注损伤,对脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用.     

基于细胞支架大鼠原位移植肝癌模型的制备

背景:超声引导下瘤细胞注射法已应用于制备大鼠原位移植肝癌模型,但成瘤率不高,且易形成腹腔种植.目的:实验拟采用细胞基质胶Matrigel包裹瘤细胞,超声引导下注射到大鼠肘内制各肝癌模型,以提高成瘤率,减少腹腔种植.设计、时间及地点:验证性实验,于2007-12/2008-03在福建医科大学药学院药理系动物实验室完成.材料:取Wistar大鼠20只,按随机数字表法分为瘤细胞悬液注射组和瘤细胞Matrigel注射组,每组10只.方法:取大鼠皮下移植的Walker-256肿瘤组织匀浆制备细胞悬液,在超声引导下注射到10只瘤细胞悬液组大鼠肝实质内,每只2×108个细胞.瘤细胞与Matrigel混合后,超声引导下注射到瘤细胞Matrigel组10只大鼠肝内.主要观察指标:定期超声监测大鼠肝脏移植肿瘤生长情况,移植后第21天麻醉处死动物进行人体解剖,取肿瘤行病理组织学检查.结果:瘤细胞Matrigel组10只大鼠有9只形成了肝脏移植肿瘤灶,仅1只大鼠发生腹腔种植.瘤细胞悬液组10只大鼠仅6只出现肝脏移植肿瘤灶,而发生腹腔种植达6只.大鼠原位移植肝癌病理切片显示典型的肿瘤组织形态学特征.结论:采用Matrigel作为细胞支架制各大鼠肝癌模型可提高成瘤率,明显降低腹腔种植的发生率,是一种较为理想的大鼠原位移植肝癌模型制备方法.     

硝苯地平对自发性高血压大鼠血管内皮细胞的保护作用

背景：研究表明，硝苯地平能够改善血管内皮细胞功能，而对于其扩张血管的机制，目前仍在进一步的研究中。目的：观察硝苯地平控释剂对自发性高血压大鼠(SHR)一氧化氮(NO)及诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的影响。设计：以实验动物为研究对象的观察对比研究。单位：一所医学院的动物实验中心。材料：本实验于2002—04／2002—05在山东大学医学院动物实验中心完成。实验动物为近交SHR大鼠21只，体质量(300&;#177;20)g，由山东大学医学院实验动物中心提供，清洁级。随机分为3组．即对照组．正常剂量组、低剂量组，每组7只。方法：对照组、正常剂量组和低剂量组分别灌胃生理盐水10mL／kg、硝苯地平控释剂(拜新同)溶液(0．3g／L)10mL／kg和3mL／kg，1次／d，连续15d。末次给药后摘眼球取血并取大鼠心、肺分别测定血清NO和iNOS的含量。主要观察指标：各组大鼠的NO含量、iNOS活性比较。结果：灌胃15d后，正常剂量组的NO含量与对照组、低剂量组比较，差异均有显著性意义(P&;lt;0．01)；正常剂量组心、肺组织块中iNOS活性降低，与对照组和低剂量组比较差异均有显著性意义(P&;lt;0．01，P&;lt;0．05)。结论：硝苯地平可在降低血压的同时，提高血清NO的含量，并且能对抗血压增高所造成的iNOS的活性增强(或二者互为因果)。     

iNOS、NO与卵巢癌的关系分析

一氧化氮(nitric oxide,NO)参与血管、神经系统功能等生理和病理生理过程的调节,并在较高浓度时具有细胞毒性作用.在哺乳动物体内,NO由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)催化合成,NOS分为神经型一氧化氮合酶(neuronal nitricoxide synthase,nNOS)、血管型一氧化氮合酶(en-dothelial nitric oxide synthase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)3种亚型,其中nNOS和eNOS合称为结构型一氧化氮合酶,主要在神经和血管内皮细胞中表达,在生理状态下产生低浓度和中等浓度水平的NO.iN-OS主要由巨噬细胞产生并能够产生高浓度的NO[1].iNOS的表达和NO的产生在卵巢癌的发生、发展和转移中发挥着重要的作用,本文就目前的相关研究进展作一综述.     

肾小球系膜细胞一氧化氮合成酶细胞外基质合成影响的研究

目的研究体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)表达水平对细胞外基质成分(IV型胶原、纤维连接蛋白)含量的影响。方法胎肾培养原代系膜细胞，取Ⅲ代细胞进行实验。采用TRLzolRNA一步法提取系膜细胞总RNA。半定量逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)测定iNOSmRNA表达，以β-action为内对照。酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中细胞外基质成分IV型胶原、纤维连接蛋白(FN)的含量。硝酸还原酶法检测培养液中NO的含量。对照组为RPMI1640 10％小牛血清(FGS) 1mM左旋精氮酸(L-arginine)，实验组为1脂多糖(LPS)10ug／ml，观察24h。结果系膜细胞中iNOSmRNA的表达；在未刺激的MC中无iNOSmRNA表达；刺激后4小时可检测到iNOSmRNA表达，6小时明显增加，24小时达到高峰；至48hr，iNOSmRNA表达仍继续增加。上清中的NO：(1)6小时LPS组与对照组无明显差别，24小时后LPS组NO含量增加：(2)LPS诱导的NO含量的增加可被L—NAME抑制。上清IV型胶原，FN含量：(1)4小时、6小时、24小时、48小时LPS组与对照组比较含量降低(P(O，05)(2)I。PS诱导的IV型胶原、FN的降低被L—NAME明显抑制。结论我们的研究发现肾小球MC确含有iNOS，且在生理状态下呈稳定状态，病理状态下iNOS表达上调；MC分泌的ECM与i—NOS表达有关；NO可降低ECM的含量，提示iNOS诱导的NO在肾小球硬化的发生和发展中起到了重要作用；各种因素对iNOS影响的最终结果是NO的变化．能够引起iNOS表达变化的各种因素均可引起NO含量的变化，从分子水平进一步证实肾小球MC-氧化氮合成酶的表达水平与细胞外基质密切相关。     

一氧化氮对骨肉瘤细胞生长能力影响的体外实验研究

目的:研究不同细胞因子作用下体外巨噬细胞中一氧化氮的产生及对人骨肉瘤细胞株(HOS)非特异性免疫功能的影响。方法:实验于1999-06/2002-09在第一军医大学南方医院外科实验室和动物实验室完成。HOS体外与小鼠腹腔巨噬细胞混合培养,实验分为4组,第1组用磷酸盐溶液(PSB)做对照,第2,3,4组分别加入γ-干扰素、脂多糖和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)。分别检测各组一氧化氮的产生情况(Griess比色法)和HOS细胞生长能力(锥虫蓝实验)。结果:在有巨噬细胞和γ-干扰素、脂多糖存在时,一氧化氮浓度为(62.6±0.9)μmol/L,细胞存活率为(6.2±1.7)%,但加入L-NAME后一氧化氮浓度又可降至原有水平,HOS细胞存活数量亦随着增加。结论:体外培养条件下,巨噬细胞在细胞因子的作用下可以产生大量的一氧化氮,并对HOS细胞的生长产生明显抑制作用,为骨肉瘤的治疗及患者保肢希望的功能预后提供了一条新的有效途径。     

抑制枯否细胞对脓毒症大鼠肝脏微循环的影响

目的 探讨抑制枯否细胞(Kupffer cells,KCs)对脓毒症大鼠肝脏微循环的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备大鼠脓毒症急性肝损伤模型.造模前1 d和2 d经尾静脉注射三氯化钆(GdC13)去除KCs.将60只健康SD大鼠随机分为四组,即对照组、假手术组(Sham组)、模型组(CLP组)和GdC13组(CLP+GdC13组).各组动物于术后24 h处死.检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、内毒素(ET)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的水平.提取肝组织RNA,采用RT-PCR方法检测ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA的表达.结果 与对照组比较,脓毒症大鼠血中ALT、AST、ET、ET-1及NO水平显著升高(P<0.05);去除KCs后,脓毒症大鼠血中ALT、AST、ET、ET-1及NO水平显著降低(P<0.05).脓毒症大鼠肝组织ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA 表达水平较对照组显著升高(P<0.05);去除KCs后,肝组织中iNOS及HO-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).结论 KCs在脓毒症时肝脏的微循环障碍中起重要作用.     

游泳对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢的影响

背景运动锻炼能提高正常机体和心血管疾病患者血管一氧化氮的生成能力,但运动锻炼对慢性低氧时一氧化氮代谢有积极的影响.目的探讨游泳锻炼对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢及肺动脉平均压(mean pulmonary artery pressuse,mPAP)的影响.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预实验在温州医学院肺心病研究室完成.实验选用31只SD大鼠随机分成正常对照组(10只)与模型组(21只).模型组低氧4周后,又随机分为模型对照组(8只)与游泳锻炼组(13只).采用比色法测定血浆、肺组织、右心室组织一氧化氮代谢产物(NO2-/NO3-)的含量,液体闪烁仪测定[3H]-瓜氨酸的生成量,计算肺组织、右心室组织组织型NOS(tissue NOS,tNOS)、诱导型NOS(induced NOS,iNOS)和原生型NOS(constitutive NOS,cNOS)的活性.主要观察指标游泳对慢性低氧高二氧化碳在大鼠mPAP、右心室质量,血浆、肺组织、右心室组织NO2-/NO3-含量、NOS活性的影响.结果游泳锻炼组的血浆、肺与右心室组织的NO2-/NO3-的含量和cNOS的活性明显高于模型对照组;同时,游泳锻炼组的mPAP[(19.62±1.32)mm Hg]显著低于模型对照组[(15.19±1.11)mm Hg](q=12.632,P＜0.01).结论游泳锻炼有促使一氧化氮生成增加和降低肺动脉压的作用.     

胸痹通胶囊对高脂血症家兔心肌的保护作用

背景胸痹通胶囊可增加冠心病患者心肌缺血区的血液灌流,减小心肌梗死面积,改善心电图缺血性S-T改变.目的观察胸痹通胶囊对家兔动脉壁一氧化氮代谢的影响,探讨该药改善心肌血液灌流、发挥心肌保护作用.设计随机分组设计,对照实验.单位山东省潍坊市中医院内一科 材料实验于2003-04/2004-02在潍坊医学院生理教研室完成.选用健康成年家兔30只,雌雄各半.随机将动物分为3组正常对照组,模型组,治疗组,每组3只.方法①高脂血症动物模型制备正常对照组喂饲基础颗粒饲料,模型组喂饲造模饲料(基础颗粒饲料+3%猪油+1%胆固醇粉),治疗组除喂造模饲料外,第6周末开始每天用胸痹通胶囊(组方太子参、云苓、瓜蒌、清夏、橘红、石菖蒲、郁金、炙复花、降香、当归、麦冬、五味子)按1粒/kg的剂量加生理盐水10mL灌胃3周.共干预8周.②一氧化氮合酶和一氧化氮代谢产物试剂盒由军事医学科学院放射医学研究所提供,按说明书操作.计算一氧化氮合酶活力,以每分钟每克组织产生的一氧化氮量(nmo1)表示活力;用分光光度计在545 nm处测样品光密度,亚硝酸钠溶液制作标准曲线,以μmol/L表示血清一氧化氮代谢产物NO2-,NO3-的浓度.③计量资料组间差异比较采用t检验.主要观察指标各组家兔血管壁组织一氧化氮合酶活力和血清一氧化氮代谢产物浓度比较.结果家兔30只均进入结果分析.家兔动脉壁组织一氧化氮合酶活力及血清一氧化氮代谢产物浓度模型组和治疗组均明显低于正常对照组(P＜0.05～0.01),治疗组明显高于模型组(P＜0.05).结论①高脂血症家兔动脉壁一氧化氮系统受损害,血清一氧化氮代谢产物水平降低.②胸痹通胶囊治疗可改善上述状况,起到抗心肌缺血、发挥心肌保护的作用.