厦门市乙型肝炎病毒亚基因型分布的初步研究

目的探讨厦门地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布情况。方法应用混合性型特异性引物聚合酶链反应法结合琼脂糖电泳，根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型；应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样本的亚基因型，并探讨前前S区编码的流行情况。结果在217例可以通过混合性型特异性引物聚合酶链反应法确定基因型的感染者中，B型83例（38．2％）、C型71例（32．7％），B／C混合型63例（29．0％）。HBeAg阳性患者中感染B基因型占50％，B／C型混合感染占22％；抗-HBe阳性患者中B／C型混合感染36％，B型38％；在慢性乙型肝炎患者中，以B基因型多见（46％），在肝硬化和肝癌患者中，以C（41％和42％）或B／C混合基因型（38％和33％）感染为主；20例患者血清经过DNA测序-生物信息学分析方法确定了亚基因型，其中B2亚型2例，C2亚型18例，其中混合性型特异性引物聚合酶链反应判断为B型的4例经过测序分析为C2亚型。B2亚型不编码前前S区，18例C2亚型均编码前前S区。结论本研究提示厦门地区乙型肝炎患者群的HBV基因型B、C型的感染率大致相同，亚基因型分析提示C2亚基因型占90％，可能是B／C基因型重组的结果。C2亚基因型病毒株均编码前前S区，提示前前S区的编码可能具有亚基因型特异性。     

慢性乙型肝炎患者HBV基因型和亚型分布调查

目的研究慢性乙型肝炎患者HBV基因型和亚型流行情况。方法应用HBV基因型和亚型特异性引物PCR法对北京、长春、大连、西安、石家庄、郑州和合肥7个城市660份HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者血清进行基因型和亚型分析。结果在660份HBVDNA阳性血清中,B基因型、C基因型和B/C混合感染分别为16.67%(110/660)、74.54%(492/660)和8.79%(58/660);在C基因型中,C1亚型6例(1.22%)、C2亚型473例(96.14%)、C1/C2混合基因亚型13例(2.64%);B基因型均为Ba亚型,B基因型和C基因型混合感染者均为Ba与C2亚型混合感染,未发现其他基因型和基因亚型;不同基因型感染患者HBeAg阳性率差异无统计学意义(P=0.153);B基因型和C基因型患者之间血清HBVDNA水平差异无统计学意义(6.37±1.62lgcopies/ml对6.29±1.76lgcopies/ml),但均高于B和C基因型混合感染患者(5.25±1.65lgcopies/ml)。结论这7个城市慢性乙型肝炎患者以B基因型和C基因型感染为主,有部分B/C基因型混合感染。HBV亚型以Ba和C2亚型占优势。     

浙南地区HBV基因型分布特征及其与慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平和HBeAg表达的关系

目的分析浙南地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特征,探讨不同基因型与患者血清中HBV DNA水平及HBeAg表达的关系。方法收集2011年6月-2012年3月161例就诊的HBV DNA阳性患者血清标本,采用型特异性引物PCR方法对HBV进行基因分型并用实时荧光定量PCR方法测量HBV DNA含量(拷贝/ml)和ELISA方法检测HBeAg;对HBV DNA含量进行对数转换使其符合正态分布后,运用χ2检验分析基因型与HBeAg阳性率的关系,t检验分析B、C基因型患者HBV DNA水平的差异。结果 161例患者中,B型41例,占25.5%;C型118例,占73.3%;BC混合型2例,占1.2%。C型患者HBV DNA水平和HBeAg阳性率分别为(5.84±1.40)log10拷贝/ml和64.4%,高于B型的(5.49±1.33)log10拷贝/ml和53.7%,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论浙南地区HBV基因型以C型为主,B型次之。C基因型HBV DNA水平与HBeAg阳性率均高于B基因型,肝硬化的发生与C基因型HBV密切相关。     

延边地区朝鲜族乙型肝炎病毒感染者病毒基因型的检测与分析

目的:分析延边地区朝鲜族HBV感染者HBV基因类型分布及其临床意义.方法:延边地区朝鲜族HBV感染者215例分为无症状携带者36例,急性乙型肝炎5例,慢性乙型肝炎106例,肝炎肝硬化50例,原发性肝癌18例.利用特异性引物聚合酶链反应法(PCR),对患者血清标本进行基因型检测.结果:215例HBV感染者中检出B基因型61例(28.0%),C基因型154例(72.0%),未检出其他基因型.在慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝细胞癌患者中,C基因型比例(79.0%、84.0%、89.0%)明显高于无症状携带者及急性乙型肝炎(25.0%、60.0%,P<0.01),在无症状携带者中,B基因型比例高于C基因型(75.0%vs 25.0%,P<0.01).HbeAg阳性组C基因型比例高于HBeAg阴性感染组(73.0% vs 54.0%,P<0.05),HbeAg阴性组的B基因型比例高于HBeAg阳性组(46.0% vs 27.0%,P<0.01).结论:延边地区朝鲜族HBV感染主要为C基因型,其次为B基因型.C基因型在临床上以慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝细胞癌多见.其发生率显著高于B基因型.     

135例慢性HBV感染者阿德福韦酯抗病毒疗效与基因型的关系

目的探讨秦皇岛地区慢性乙型肝炎患者阿德福韦酯抗病毒疗效与基因型的关系。方法慢性HBV感染者135例予以阿德福韦酯10 mg/d口服,疗程48周,用药前采用A-D基因型乙型肝炎病毒（HBV）全长逆转录酶区（PCR）方法测定基因型,用药中检测HBV DNA阴转率、HBeAg血清转换率、ALT复常率、治疗有效率。结果秦皇岛地区慢性乙型肝炎患者基因型以C型为主占75.56%,其次为B型占17.78%,B/C混合型占6.67%。在阿德福韦酯治疗中,B、C、B/C混合型在HBV DNA阴转率、HBeAg血清转换率、ALT复常率、治疗有效率方面均无统计学差异（P〉0.05）。结论慢性HBV感染者阿德福韦酯抗病毒疗效与基因型无关。     

乙型肝炎病毒基因的型特异引物结合型特异核苷酸分析

目的 研究HBV感染者HBV基因型分布状况,并建立一套适合HBV病毒株分型的简便可靠的分析方法.方法 通过对GenBank中全部S区基因序列(1000余条)进行比对,筛选A～H 8个基因型的型特异核苷酸.采用型特异引物PCR法分型,对238例慢性乙型肝炎患者所感染病毒中未能分型的病毒株再进行S区基因巢式PCR扩增、测序筛选出其特异性核苷酸从而判定其基因型.结果 238株HBV均得到分型.其中B型HBV感染者159例(男120例、女39例);C型69例(男52例、女17例);B+C混合型6例(男4例、女2例),B+D混合型4例(男3例、女1例).B型、C型、B+C和B+D昆合型检出率分别为66.8%、28.9%、2.5%和1.6%.未检出A、E、F、G、H基因型.结论 HBV感染以B、C基因型为主,B基因型高于C基因型.少数患者为B+C或B+D混合型感染.B、C基因型分布与性别无关(χ2=0.794,P＞0.05).     

基因芯片技术检测西藏拉萨地区的乙型肝炎病毒基因型

目的:研究西藏拉萨地区乙型肝炎病毒基因型的分布与特点.方法:采集92份西藏拉萨地区乙型肝炎患者的血清,参照GenBank中HBV DNA序列设计寡核苷酸探针并制备HBV基因分型芯片,利用套式PCR扩增HBV S基因部分片段,结合基因芯片、DNA测序和BioEdit软件进行基因分型检测,并对其与乙肝标志物、DNA含量、性别和民族之间的关系进行分析.结果:在92例血清标本中,套式PCR检测73例HBV DNA阳性可进行基因分型检测.其中B型13例(17.8%),C型18例(24.7%),D型39例(53.4%)和B/D混合基因型3例(4.1%).统计学分析3种基因型分布在不同乙肝标志物阳性、不同DNA含量和不同性别之间无差异,但与民族存在统计学差异(x~2=7.179,P<0.05).B型以汉族为主(9/13),而C、D型以藏族为主(12/18、28/39).将基因芯片分型的B、C、D型和B/D混合型进行DNA序列分析,表明两种分型方法的结果完全一致.结论:PCR结合基因芯片技术可用于HBV基因分型.西藏拉萨地区HBV基因型包括B、C、D和B/D混合型,其中以D型为主.     

乙型肝炎病毒基因分型与拉米夫定临床应用反应

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特征,探讨基因型与肝功能损害、病毒复制水平及其与拉米夫定疗效关系.方法 76例慢性乙型病毒性肝炎患者每天口服拉米夫定100mg治疗,并于治疗4～6周时测定不同基因型患者的丙氨酸转氨酶(ALT)和HBV DNA,治疗48周后测定HBV DNA反跳和YMDD变异.采用巢式聚合酶链反应(nest PCR)法扩增HBV S基因区,以4色荧光标记PCR产物末端,在以毛细管高压电泳为核心技术的核酸序列分析仪上自动测序,将测序结果与基因库中登录的标准基因型序列相比较.结果 76例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA基因分型示B型株感染26例(34.2%),C型株感染50例(65.8%).B和C基因型患者ALT值分别为(246.3±138.8)U和(283.7±125.6)U,(t=0.335,P>0.05),HBV DNA含量分别为107.124±101.49和107.189±101.56拷贝/ml(t=0.138, P>0.05),HBeAg阳性数分别为20例和41例(χ2=0.159,P>0.05).拉米夫定治疗4～6周后,B基因型和C基因型患者ALT、HBV-DNA(阴转)、HBV DNA(拷贝/ml)均呈良好恢复状态,两组间差异无显著性.治疗48周后,HBV DNA反跳者B基因型20例,C基因型16例(χ2=13.49,P<0.001).结论常州地区HBV DNA基因型以单一B或C型为主;不同基因型患者ALT水平、病毒复制水平以及HBeAg表达水平差异均无显著性,拉米夫定对C基因型患者的疗效优于B基因型.     

散发性成人急性乙型肝炎病原学随访研究

目的 观察分析成人急性乙型肝炎(AHB)病原学特点,探讨急性HBV感染肝损伤及病毒清除的机制.方法 以120例成人AHB患者为研究对象.采取病区及门诊随访方法,收集患者流行病学资料和住院期间及出院后历次复诊时的系列血清标本,ELISA法检测血清HBV标志物,实时荧光定量PCR法检测HBV DNA和HBV基因型,动态观察AHB病原学变化规律.计数资料采用非参数秩和检验,组间均数比较采用t检验,两个样本率的比较采用Pearsonχ2检验.结果 就诊时48.33%的患者HBV DNA阳性,平均为9.84×104拷贝/mL,平均12.5 d降到检测限以下.HBVDNA阳性组血ALT中位数为1600 U/L,阴性组为1490 U/L(z=0.678,P=0.498);HBV DNA≤1×104拷贝/mL组血ALT为(2058±123)U/L,>1×104拷贝/mL组为(1393±139)U/L,差异有统计学意义(t=2.17,P-0.049).40份HBV DNA阳性标本中,HBV B基因型占52.5%,C基因型占42.5%,B、C混合型占5.0%.初诊时血清HBV标志物呈现8种模式,以HBsAg、HBeAg、抗-HBc、抗-HBc IgM阳性和HBsAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HBe IgM阳性2种模式最多见,分别占38.3%和30.0%.前瞻性动态监测28例AHB患者HBV标志物,HBsAg阴转率为100.0%,平均阴转时间中位数为3周;观察52周抗-HBs累计阳转率为85.7%;HBeAg阴转率为100.0%,其中53.6%的患者就诊时血清HBeAg已转阴,其余患者于发病4周内阴转,在52周的观察期内抗-HBe阳转率为82.1%;血清抗-HBc(总抗体)始终为阳性,39.3%患者抗-HBc IgM在观测期阴转.结论 快速HBV的清除和病毒标志物的血清转换,构成了AHB与慢性乙型肝炎的显著差异.     

新疆维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布及其特点

目的探讨新疆维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布及其特点。方法采用型特异性引物巢式PCR法对127例维吾尔族慢性乙型肝炎患者进行基因分型,并测序验证。结果基因D型占39．4%（50/127）,基因B型占22．0%（28/127）,基因C型占16．5%（21/127）,基因BD混合型占9．4%（12/127）,基因CD混合型占8．7%（11/127）,基因BCD混合型占3．9%（5/127）; HBeAg阳性与HBeAg阴性的维吾尔族慢性乙型肝炎患者基因型分布,差异无统计学意义（x^2= 6．033,P＞0．05）;不同年龄维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布差异无统计学意义（x^2= 3．137,P＞0．05）;不同性别维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布差异亦无统计学意义（x^2= 8．058,P＞0．05）。结论新疆维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型以D型占优势,其次可见B、C型及BD、CD、BCD混合型。同一疾病谱的慢性HBV感染者基因型分布可能与宿主HBeAg状态、年龄、性别无明显关系。     

135例乙型肝炎病毒感染者基因分型及其临床分布

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者中HBV基因分型及其临床分布情况。方法应用基因型和亚型特异性引物聚合酶链反应（PCR）法，对鲁西地区135例HBV感染者血清进行HBV基因型及亚型分型。结果未分型11例，已分型124例。其中C型111例（C2基因亚型87例、非C1／C2亚型24例）；B型11例，其中Ba型8例、Bj型3例；B／C混合型2例均为BaC2亚型混和感染。在肝硬化和重度慢性乙型肝炎中C型所占比例较高，分别为100％、88％；无症状携带者中B型所占比例较高为8．51％；HBV基因型分型与性别无关。结论鲁西地区HBV感染者以C基因型为主，其中C2亚型占优势。     

江西乙型肝炎病毒基因型分布及其与临床的相关性

目的了解江西慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布情况及HBV基因型与临床的关系。方法选择HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者血清150份,患者分别诊断为慢性HBV携带者、慢性肝炎轻度、中度、重度和慢性重型肝炎,每组30例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型。结果本组慢性乙型肝炎患者HBV基因分型结果为B型118例（78．7％）,C型31例（20．7％）,D型1例（0．6％）;在上述5组患者中C型比例分别为0％,16．7％,26．7％,30．0％和30．0％,其中慢性HBV携带者与其他组比,差异有统计学意义（P〈0．05）;B、C两基因型患者HBeAg阳性率分别为83．9％（99／118）和90．3％（28／31）,HBeAb阳性率分别为16．1％（19／118）和9．7％（3／31）,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论江西地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,有少量的D型感染者。     

山西省HBV基因型及亚型分布调查

目的了解山西省乙型肝炎病毒(HBV)的基因型及亚型分布情况。方法对136例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者血清采用PCR-PFLP结合基因型特异性引物-PCR法进行HBV基因型及亚型检测。结果 136例HBV感染者的血清标本经PCR-PFLP分析,B基因型18例,均为Ba亚型,占13.2%;C基因型113例,占83.1%,除4例未分型外均为Ce亚型;D基因型5例,占3.7%。经型特异性引物-PCR分析,18例HBV B基因型中有4例为B/C基因型混合感染;5例经PCR-PFLP确定的D基因型病毒经型特异性引物法分析有2例扩增出E基因型条带。C、B基因型病毒感染者的平均年龄分别为(39.5±13.1)岁和(30.5±14.1)岁,差异有统计学意义(P<0.05);与B基因型相比,C基因型病毒感染者的HBeAg阴转率减慢。结论山西省HBV基因型主要为C(Ce),有少量的B(Ba)和D基因型,且存在B/C混合基因型,且可能存在D和E基因型病毒的重组体;与B基因型比较,感染C基因型病毒更难被机体清除,疾病更易慢性化。     

YMDD mutations and genotypes of hepatitis B virus in northern China

The objective of this research was to determine the relationship between YMDD mutations and the genotypes of hepatitis B virus (HBV) during lamivudine treatment. HBV genotypes were determined by nested PCR with 6 pairs of HBV genotype-specific primers (A to F) in serum specimens from 142 hepatitis B patients receiving lamivudine antiviral therapy. YMDD mutations were detected by fluorescent hybridization bioprobe PCR and melting curve assay (FH-PCR-MC). Among 142 serum specimens, 13 samples were genotype B (9.2%), 125 samples were genotype C (88%), 4 samples were genotype D (2.8%), and 80 YMDD mutations were found. The YMDD mutation rates were 69.2 and 54.4% in genotype B and genotype C, respectively. There was no significant difference in the YMDD mutation rate between genotypes B and C. Nine genotype B sera with YMDD mutations were found, including 2 YIDD mutations and 7 YVDD (M + V) mutations. Sixty-eight genotype C sera with YMDD mutations were found, including 34 mutations I (M + I) and 17 mutations V (M + V). There was a significant difference in the YMDD mutation types between genotypes B and C. Our results suggested that the YMDD mutation rate was 56.3% in patients treated with lamivudine for 2-4 years. YIDD was the main mutation type. The YMDD mutation rate showed no significant difference between HBV types B and C (P > 0.05), while the YMDD mutation types showed a significant difference between HBV types B and C in Northern China (chi2 test = 4.6, P < 0.05).     

乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亚型分布及其临床意义

目的研究不同类型乙型肝炎病毒（HBV）感染者中HBV基因型和亚型分布情况及其临床意义。方法应用基因型和亚型特异性引物聚合酶链反应法（PCR），对北京、长春、汉川，深圳，清远和南京等6个城市445份HBV感染者血清进行基因型及亚型分型，其中急性肝炎7例，无症状携带者36例，慢性乙型肝炎352例，肝硬化28例，肝细胞癌22例。通过对PCR产物测序确定其基因型，以验证该法的准确性。结果445份血清中，239例（53．7％）为C型，其中13例（5．4％）为C1亚型，135例（56．5％）为C2亚型，91例（38．1％）为非C1／C2亚型；145例（32．6％）B型，其中100例（69．0％）为Ba亚型，25例（17．2％）为Bj亚型，20例（13．8％）为非Ba／Bj亚型；61例（13．7％）为B型与C型混合感染，其中6例（9．8％）为Ba与C1亚型混合感染，3例（4．9％）为Bj与C1亚型混合感染，15例（24．6％）为Ba与C2亚型混合感染，8例（13．1％）为Bj与C2型混合感染，11例（18．0％）为Ba与非C1／C2亚型混合感染，7例（11．5％）为Bj与非C1／C2亚型混合感染，2例（3．3％）为非Ba／Bj亚型与C1亚型混合感染，3例（4．9％）为非Ba／Bj亚型与C2亚型混合感染，6例（9．8％）为非Ba／BJ亚型与非C1／C2亚型混合感染。未检测到其他基因型及亚型。在不同类型乙型肝炎病毒感染者中，B型，C型、B与C型混合感染及亚型分布差异有统计学意义，在肝硬化和肝细胞癌患者中C型所占比例较高（分别为78．6％和86．4％），无症状携带者中B型所占比例较高（72．2％）。但不同性别患者中，HBV基因型和亚型分布无差异。在HBeAg阳性和阴性感染者中，HBV基因型和亚型分布差异也有统计学意义。结论该6个城市HBV感染者中，以B2和C2亚型占优势，C基因型可能与肝硬化和肝细胞癌的发生有关。     

Genotypes of hepatitis B virus among voluntary blood donors in northern Thailand.

There are distinct ethnogeographic variations for the distribution of various hepatitis B virus (HBV) genotypes, and pathogenic and therapeutic differences are also observed. In general, genotype B infection has a relatively better prognosis than genotype C. In Thailand, genotypes C and B were reported as the major genotypes; however, there were no previous reports of HBV genotyping in the north of the country. From 1998 to 2000, 216 HBsAg-positive serum samples (164 males and 52 females, aged 16-52 years), were screened and collected from voluntary blood donors in four provinces of northern Thailand. The method of Naito et al. was employed in this study, with the multiplex-PCR approach and genotype-specific primers to identify genotypes A-F. We found that the HBV genotype C was highly predominant in northern Thailand (89.3%), when compared with the previous reports of genotype C distribution among voluntary blood donors from other areas in the country (50-65%), followed by genotype B (7.4%), mixed infection of genotype B and C (1.9%) and genotype A (0.5%). Four samples (1.9%) were unclassifiable. There was no significant difference of genotype distribution among four northern Thai provinces or each age group.     

Hepatitis B Virus Genotypes: Clinical Relevance and Therapeutic Implications

At least ten hepatitis B virus (HBV) genotypes (A to J) with distinct geographic distributions have been recognized. HBV genotype is not only predictive of clinical outcome but also implicated in responsiveness to antiviral therapy, especially interferon-based regimens. HBV genotype-specific immunologic and virological pathogenesis may contribute to heterogeneous clinical outcomes in chronic hepatitis B patients. For example, patients with genotypes C and D infection have a lower rate of spontaneous HBeAg seroconversion. In addition, genotype C and D have a higher frequency of basal core promoter A1762T/G1764A mutation than genotype A and B. Genotypes C and D also carry a higher risk of cirrhosis and HCC development than genotype A and B. Therapeutically, genotype A and B patients have a better response to interferon-based therapy than genotypes C and D patients, but the response to nucleos(t)ide analogues is comparable across all HBV genotypes. In conclusion, genotyping of HBV can help practicing physicians identify chronic hepatitis B patients who are at risk of disease progression and optimize anti-viral therapy in clinical practice.     

lnfluence of HLA-DRB1 alleles and HBV genotypes on interferon-α therapy for chronic hepatitis B

AIM: To investigate the influence of HLA-DRB(1) alleles and HBV genotypes on interferon-alpha therapy for chronic hepatitis B. METHODS: HLA-DRB1*03, *07, *09, *12, *15 alleles were determined using polymerase chain reaction/sequence specific primer (PCR/SSP) technique in 126 patients with chronic hepatitis B and 76 normal control subjects in Shandong Province, and HBV genotypes were determined by nested-PCR analysis using type-specific primers in 126 patients. RESULTS: The positivity of HLA-DRB1*07 allele in chronic hepatitis B group was significantly higher than that in normal control group (chi(2) = 6.33, P<0.025, RR = 2.37). Among the 126 patients, genotype B was found in 38 (30.2%), genotype C in 69 (54.8%), and mixed genotype (B+C) in 19 (15.0%), genotypes D-F were not found. Among the 46 DRB1*07(+) patients, 7 were responders and 39 were non-responders among them (chi(2) = 6.71, P<0.05). The positivity of HLA-DRB1*07 and prevalence of HBV genotype C were significantly higher in non-responders than in responders. CONCLUSION: High positivities of HLA-DRB1 *07 allele and HBV genotype C are closely associated with the lower response to interferon-alpha therapy for chronic hepatitis B.