应用直接和间接SPA菌花环法检测人外周血T细胞亚群

应用OKT抗人T细胞单克隆抗体或兔抗小鼠IgG与含有金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)的金葡菌结合,将其与正常人外周血淋巴细胞反应后,由于抗体的介导,细菌将在T淋巴细胞周围形成光镜下可见的玫瑰花环。用此法检测外周血T细胞,操作简便,需要的条件不高,且标本片可经固定染色后长期保存。     

双花环标记法测定人外周血全T细胞和抑制性T细胞

以AET-SRBC花环为总T细胞的指标,采用Ts单克隆抗体Wu102作为第一抗体同T细胞(AET-SRBC~ )中Ts结合后,与兔抗鼠IgG致敏的SPA菌体形成双花环细胞。24倒正常人外周血淋巴细胞中T细胞(AET-SEBC~ )百分率为74.0％(SD=9.3),Ts(AET-SRBC~ 、SPA-Ig~ )为21.2％(SD=6.6),与国内外文献报道基本一致。     

葡萄球菌A蛋白在血凝抑制试验中检测流行性乙型脑炎IgM抗体中的应用

本文用含A蛋白葡萄球菌CowenⅠ株菌体(SPA)吸收血清IgG,作血凝抑制试验检测乙脑病人血清中IgM抗体,阳性率为83.3％,并以2HE处理法作对照,阳性率为73.3％;两种方法符合率达90％,相差不显著(P>0.05)。而SPA菌体吸收法能直接检测IgM抗体活性和滴度,且SPA菌液,一般实验室均能制备,保存冰箱有效期长,便于推广。以SPA菌体吸     

慢性再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

本文应用美国O(?)tho-mune公司的OKT系列单克隆抗体:T_4(T辅助细胞,T_H)和T_8(T抑制细胞,Ts或Lcu-2a)。采用SPA(金黄色葡萄球菌蛋白A)间接花环法,检测正常人和慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的外周血T淋巴细胞亚群,     

SAT花环形成试验检测人外周血T淋巴细胞的初步探讨

本文报告以猪抗人胚胸腺细胞球蛋白(AHTG)致敏人外周血T细胞后,用含SpA的葡萄球菌体(Cowan Ⅰ株)作用,使菌体结合于致敏T细胞周围,形成花环,即SAT(S:SpA,A:AHTG,T:T细胞)花环试验,是检测T淋巴细胞的一种新的试验方法。探讨了有关试验方法的建立及其影响因素;并用此法对96例健康献血员进行检验,其外周血中T细胞百分率为76.72％,符合正常人外周血T细胞百分率;同时设不合SpA的Z_(12)株、正常猪血清及非特异性IgG(抗AFP血清)3个     

葡萄球菌A蛋白在血凝抑制试验检测流行性乙型脑炎IgM抗体中的应用

本文报道用10%Cowen Ⅰ株葡萄球菌A蛋白(SPA)菌液吸收血清中IgG法和2-巯基乙醇(2ME)处理法,检测疑似乙脑病人血清中IgM 抗体,两种方法符合率达90%,P>0.05,而SPA 菌体法能直接检测IgM 抗体活性,且菌液在一般实验室均可制备,便于推广,SPA 菌体吸收血清作HI 试验检测IgM 抗体,如滴度≥1:20可以诊断为阳性。     

金黄色葡萄球菌蛋白A的原核表达及生物亲和特性研究

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A (SPA)基因片段的表达载体,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,探讨该重组蛋白与不同来源IgG结合的生物学特性。方法利用PCR法扩增SPA基因片段,将该段基因克隆到pET30a(+)表达载体,转化感受态BL21大肠杆菌细胞,IPTG诱导表达,利用SDS PAGE及Westen blot鉴定目的蛋白。His亲和层析纯化后分别与人、小鼠、兔、猪及山羊血清反应,分析其与不同来源IgG的亲和关系。结果构建的pET30a(+) SPA表达载体在大肠杆菌BL21中可表达SPA蛋白,且发现其与人及小鼠源IgG具有较高亲和性,与兔及猪源IgG亲和性较低。结论该重组蛋白SPA与人及小鼠源免疫球蛋白IgG具有较高亲和性,为下一步应用于SPA ELISA打下基础。     

荧光标记A蛋白检测IgG抗体的研究

葡萄球菌A蛋白(SPA)对多种哺乳动物免疫球蛋白G(IgG)有很强的亲和性。SPA可同荧光色素、放射性同位素或酶等结合成各种IgG试剂。在检出IgG抗体中使用标记SPA和标记抗IgG(抗体)这两类IgG指示性试剂,各有优点和缺点。一般认为前者敏感性略差,但是,非特异性反应较轻。     

用SPA协同凝集快速诊断志贺氏菌属的实验研究

金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁上的一个主要成份,能与人和某些哺乳动物血清IgG的Fe段发生非特异性结合。利用这一特点,我们将含有SPA的葡萄球菌制成稳定液,然后将志贺氏菌属抗血清中经DEAE离子交换纯化的IgG,标记在SPA稳定液上,制成SPA痢疾分型试剂用于快速诊断志贺氏菌属。此法简便,节省人力、物力和时间,且具有良好的敏感性和特异性。     

体外循环患者T细胞亚群及E花环形成的动态观察

抗人T细胞单克隆抗体(McAb)可识别人T细胞表面抗原决定簇。其中CD_3 McAb可与外周血全部成熟T细胞反应;CD_4 McAb可与T辅助/T诱导(TH/Ti)亚群反应;CD_8 McAb可与T杀伤/T抑制(Tc/Ts)     

小儿特发性血小板减少性紫癜免疫发病机理的研究

本研究对100例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞及其亚群、B细胞、单核细胞、胸腺细胞及自发性抑制性T细胞(STs)功能,对PHA、ConA刺激的淋巴细胞转化反应、PAIgG等进行了测定。结果:①PAIgG值:患儿组为1669.94±989.31 SPA/BPC(每个血小板表面葡萄球菌蛋白A分子数)。     

应用单克隆抗体鉴定组织培养中的腺病毒型别

<正> 材料和方法一、抗原:为1984年10月～1986年5月从患儿分离到的59株腺病毒(Adv)接种于Hela 细胞,制成细胞涂片,丙酮固定后待检。用标准3、7型 Adv(Ad_3、Ad_7)感染 Hela 细胞涂片为阳性对照,正常 Hela 细胞涂片为阴性对照。二、按已报道过的方法制备分泌腺病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,并制备含McAb 的小鼠腹水:经免疫酶组化法及 IgG亚类测定证实分泌组特异性 McAb 1株,分泌Ad_3、Ad_7型特异性 McAb 各2株。腹水的效价分别为1:2,560～1:51,200,工作浓度为1:20。三、McAb 检测法:按已报道过的方法按顺序滴加 McAb、酶标记葡萄球菌蛋白 A(SPA)、底物溶液,镜检。阳性细胞为核     

冻干葡萄球菌A蛋白菌体试剂和纯品的制备和应用

葡萄球菌A蛋白(SPA)是一种在微生物学、免疫学和细胞学等领域中具有多种用途的试剂。冻干SPA菌体试剂是以自身菌体为载体的固相免疫试剂。在协同凝集试验中,此试剂可用于细菌、病毒等微生物的定群和分型,抗原或抗体测定,T、B淋     

SOKT_1-RTA免疫毒素的制备及其对人T淋巴细胞的特异性细胞毒作用

抗人外周血T淋巴细胞单克隆抗体(McAb)SOKT_1通过SPDP与蓖麻蛋白A链(RTA)交联制成免毒素SOKT_1-RTA,在20mmol/L氯化铵存在条件下,能够杀伤82%人外周血T细胞,并使其~3H-亮氨酸掺入下降为对照的6.2%。SOKT_1-RTA的作用能够被未结合RTA的SOKT_1部分阻滞,而另一无关McAb末显示阻滞作用。表明:SOKT_1-RTA结合物具有SOKT_1的抗原结合特异性和RTA的细胞毒性,有可能成为清除人骨髓中T细胞的有效制剂。     

葡萄球菌蛋白A在病毒学诊断中的应用

<正> 葡萄球菌蛋白A(SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成份,具有与人及多种哺乳动物血清中IgG类抗体Fc段结合的特性。国外自七十年代起对SPA广泛开展了研究;国内自1979年由张颖悟引进标准株以来也进行了大量研究。近年国内外学者应用SPA作为一种新的免疫学试剂,建立了许多敏感、特异、快速而简便的检测方法,本文仅就SPA在病毒学诊断中的应用综述如下。一、SPA主要性质 SPA分子是高度稳定的单一多肽链,分子量为42000。从N端开始有4个高度同源性片段,每个片段都具有与IgG Fc段结合的特性。SPA具有多结合片段的特性使SPA碘化     

介绍一种更为敏感的免疫金银染色方法

免疫金银染色(Immunogold—silver staining,IGSS)法敏感、简便、省时、安全可靠,葡萄球菌A蛋白(SPA)金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性,且它们之间的连接不干扰抗原抗体的结合。简单的SPA金标两步后,第三步     

应用酶联A蛋白测定肝吸虫病抗体

A蛋白(Staphylococcal protein A,简称SPA)是某些金黄色葡萄球菌细胞壁的一种成分,属天然蛋白质,能与人及多种哺乳动物血清中IgG的Fc段结合。1979年国外开始用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase HRP)标记SPA用于酶联免疫吸附试验(E     

协同凝集试验的应用进展

协同凝集试验是目前用于快速诊断,微生物定群或分型的一种新近发展起来的敏感而简便的方法。此种试验是根据金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)表面的A蛋白成分,能结合IgG的Fc段,但不影响IgG的Fab段与相应抗原反应的特性而建立的一种凝集试验。方法是将特异性抗体致敏含A蛋白的金葡菌(SPA),再与相应微生物或抗原接触,相应微生物则与菌体表面吸附的抗体Fab段相结合,从而使含A蛋白金葡菌通过抗体与特异性抗原结合而互相联结,起到扩大的作用,呈现出肉眼可见的凝集颗粒。这一试验的特点是不论是颗粒抗原,还     

A蛋白在免疫细胞化学中的应用——检查病人血清自身抗体IgG(ANA、PCA)的免疫细胞化学方法

A蛋白(Protein A简称SPA)产生于金黄色葡萄球菌细胞壁,它能和数种哺乳类IgG的Fc段高度特异性亲和,是藉助于两个结合点与IgG相结合。由于A蛋白能     

SPA吸附法在测定乙脑患者特异性IgM中的应用

由于葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与人和多种哺乳动物IgG的FC段呈非特异结合的特性,并且许多传染病在急性期产生特异性IgM,,因此应用SPA吸附法测定其特异性IgM,可以判断疾病的活动性或近期感染。本文报告以SPA吸附法测定乙脑患者血清中的特异性IgM的结果。