Notch信号通路参与肝癌细胞侵袭迁移的机制分析

目的:探讨Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中的相关机制。方法:体外培养肝癌细胞系Hep G2、Huh-7和正常非肿瘤肝细胞系HL-7702,利用Transwell小室检测细胞的侵袭迁移能力,Western blot方法检测Notch1、Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达。采用1μmol/L和5μmol/L的DAPT(γ-分泌酶抑制剂)阻断Notch信号通路,与对照组(空培养基)比较对细胞的侵袭迁移能力以及Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达量的影响。结果:Notch1、Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9参与了肝癌细胞侵袭迁移过程,DAPT能显著上调E-cadherin和下调Snail、MMP2、MMP-9的表达(P0.05)。结论:Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中起着非常重要的作用,其机制初步认为与Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9的表达有关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白通过活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白（HCVc）对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3（stat3）通路及上皮间质转化（EMT）的影响。 方法将含HCVc基因序列的重组质粒pEGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞HepG2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat3、磷酸化stat3（p-stat3）及EMT指标蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的表达,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。 结果划痕实验及Transwell实验结果显示,过表达HCVc可增强HepG2细胞的迁移和侵袭能力;stat3通路抑制剂AG490处理可抑制HepG2细胞的侵袭能力。RT-PCR和Western blotting结果显示,过表达HCVc后,HepG2细胞中p-stat3、Vimentin及Snail在表达升高,E-cadherin表达下降;AG490处理可下调p-stat3、Vimentin及Snail表达,增强E-cadherin表达。 结论HCVc可活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化,增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

萝卜硫素对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响

目的研究萝卜硫素（SFN）对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。 方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、E-cadherin蛋白表达水平。 结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖（P<0.05）。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为（26.38±3.24）%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。     

白细胞介素6对人胰腺癌细胞上皮间质转换的影响及机制探讨

目的 应用白细胞介素6(IL-6)作用于人胰腺癌细胞株SW1990、Capan-2和沉默STAT3基因的SW1990细胞,观察细胞上皮间质转换相关基因的变化并探讨其机制.方法 使用IL-6作用人胰腺癌细胞株SW1990、Capan-2和沉默STAT3基因的SW1990细胞.MTT法检测细胞增殖.荧光定量PCR、Real-time PCR、Western blot检测STAT3、p-STAT3、Snail、Twist和E-cadherin基因mRNA和蛋白表达.体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 100μg/L IL-6作用人胰腺癌细胞株后,细胞增殖能力增强(P＜0.05).Western blot显示P-STAT3的表达增加;荧光定量PCR、Real-time PCR、Western blot显示Snail mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05);E-cadherinmRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05);细胞侵袭能力增强.而IL-6作用沉默STAT3基因的SW1990细胞,Snail和E-cadherin mRNA和蛋白表达均无明显改变.结论 IL-6可能通过激活STAT3信号转导通路,上调Snail和下调E-cadherin基因表达,促进胰腺癌细胞上皮间质转换,进而增强侵袭能力.     

抑制PI_3 K/Akt信号通路对Ephrin-A1介导的肝癌细胞运动和侵袭能力的影响

目的 探讨PI_3K/Akt信号传导通路在Ephrin-A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中的作用.方法 Western blot法检测Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用人肝癌细胞系Huh-7细胞前后丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI_3K)信号分子的表达,利用LY294002特异性的阻断PI_3K/Akt信号通路后,检测细胞运动能力、细胞侵袭能力的变化.结果 Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用后p-Akt磷酸化蛋白的表达与对照组比较明显上升(t=4.564,P＜0.05),PI_3K/Akt信号通路可能为Ephrin-A1/EphA1作用的下游信号传导通路;LY294002明显抑制Ephrin-A1/Fc融合蛋白对Huh7细胞中PI_3K/Akt信号通路的激活,p-Akt磷酸化蛋白的含量与对照组比较明显减少(P＜0.05);Ephrin-A1介导肝癌细胞的运动能力及侵袭能力明显受到抑制(P＜0.05). 结论 PI_3K/Akt信号通路在Ephrin-A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中起重要的作用.     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

Notch1调控PI3K/AKT信号通路促进黑素瘤细胞发展的研究

目的:分析Notch1在黑素瘤发展过程中的作用和机制。方法:采用RT-PCR检测Notch1 mRNA在黑素瘤和正常黑素细胞中的表达,采用慢病毒转染技术构建Notch1过表达的黑色素瘤细胞系,CCK法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,划线法检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,Westernblot检测细胞Notch1过表达对PI3K/AKT信号通路中AKT磷酸化水平的影响。结果:黑素瘤细胞系MM200、Mel-CV、A2058和A375细胞中Notch1mRNA水平明显高于正常黑素细胞系HemN-MP(P0.05)。黑素瘤细胞A2058细胞中Notch1水平升高后,细胞的增殖速率显著提高,在48h、72h和96h转染组细胞增殖能力明显高于对照组(P0.05);Transwell结果显示Notch1水平升高可以显著增加穿过小室膜A2058细胞数量(P0.05);划线法结果显示24h转染组细胞迁移率明显高于对照组(P0.05);流式细胞检测结果显示转染组细胞早期凋亡率明显低于对照组(P0.05)。Notch1水平增加后,AKT蛋白磷酸化水平明显提高,说明Notch1能够促进PI3K/AKT信号通路的激活。加入了Notch信号通路特异性阻断剂DAPT后,能够有效抑制Notch1过表达引起的AKT蛋白磷酸化的升高。结论:Notch1能够调节PI3K/AKT信号通路通过促进黑素瘤的发展,本研究为临床治疗黑素瘤提供了新的思路。     

水通道蛋白9 对肝癌细胞迁移能力的影响

目的：通过油酸诱导肝癌HepG2细胞水通道蛋白9（AQP9）的表达观察后者对HepG2细胞株迁移能力的影响。 方法：HepG2细胞经不同处理后（0、250、500 μmol/L油酸处理或AgNO3+500 μmol/L油酸处理）,用Western blot法检测AQP9蛋白的表达,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。 结果：经油酸处理后,HepG2细胞AQP9蛋白表达增加,细胞迁移能力增强,且呈浓度依赖性（均P<0.05）,油酸的上述作用被预先给予水通道蛋白抑制剂AgNO3所取消。 结论：肝癌HepG2细胞的迁移能力与其AQP9表达有关,AQP9表达越高细胞的侵袭力越强。     

锶可通过激活Notch信号通路促进脂肪来源干细胞成骨分化

目的探讨锶(strontium,Sr)促进脂肪来源干细胞成骨分化过程与Notch信号通路的关系。方法于2017年1~4月,对脂肪来源干细胞进行分离、提取、鉴定,行成骨诱导,按实验目的分组处理后,以酶标法检测成骨标记物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测各组Notch信号通路相关蛋白Notch胞内结构域(notch intracellular domain,NICD)表达情况。结果 100μmol/L SrCL_2可增加ALP活性,上调NICD蛋白表达,当加入Notch通路抑制剂γ分泌酶抑制剂(DAPT)后,可抑制锶对NICD蛋白上调作用,拮抗锶对ALP活性的促进作用,削弱脂肪来源干细胞成骨分化能力。结论锶可通过激活Notch信号通路促进脂肪来源干细胞成骨分化。     

SOCS1调控JAK/STAT通路传导抑制肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的探讨SOCS1在肝癌进展过程中的功能及其分子机制。方法采用q RT-PCR和Western bolt检测人正常肝细胞和肝癌细胞系中SOCS1的表达。构建SOCS1过表达及干扰表达载体,转染肝癌细胞,MTT检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,transwell实验检测细胞侵袭性变化。q RT-PCR检测JAK2、STAT3 m RNA水平;Western bolt检测JAK2、STAT3蛋白和磷酸化水平。通过SOCS1 si RNA和JAK/STAT通路抑制剂氯硝柳胺共处理肝癌细胞,观察肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的变化。结果 SOCS1在肝癌细胞系中显著低表达,SOCS1过表达后肝癌细胞增殖活性显著下调,细胞迁移能力显著下降,1/2划痕愈合时间增长,细胞侵袭能力显著下降,而SOCS1干扰表达则促进细胞增殖、迁移和侵袭。SOCS1表达变化不影响JAK2、STAT3 m RNA和蛋白表达水平,但SOCS1过表达抑制JAK2、STAT3磷酸化,SOCS1干扰表达则增强JAK2、STAT3磷酸化水平。JAK/STAT通路抑制剂氯硝柳胺能够明显恢复SOCS1干扰表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭性的影响。结论 SOCS1通过调控JAK/STAT信号通路活性,进而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

FOXP3基因下调EMT抑制肝细胞癌细胞迁移

目的 探讨FOXP3基因对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及机制研究。方法 利用慢病毒感染的方式构建FOXP3稳定敲低的细胞模型。采用qRT-PCR和Western blot实验验证病毒感染效率。利用划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力,并采用Western blot的方法检测下调FOXP3基因后上皮细胞-间充质转化（EMT）通路相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Slug的表达变化。结果 感染FOXP3-shRNA后,肝癌细胞HepG2和MHCC97H中FOXP3的表达水平显著降低。体外试验证明敲低FOXP3可显著抑制肝癌细胞的迁移能力。Western blot实验表明下调FOXP3可抑制EMT通路,上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin及Slug的表达。结论 下调FOXP3通过介导EMT抑制肝癌细胞的迁移能力;FOXP3可能作为肝癌复发转移的潜在治疗靶点。     

低氧对肝癌细胞上皮间质转化及侵袭转移能力的影响

目的:观察低氧环境下肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)情况和侵袭转移能力的改变。方法:选取2种具有不同侵袭转移能力的人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,通过1%O2低氧培养建立人肝癌细胞物理缺氧模型。动态观察2种细胞在低氧环境中的形态学改变;应用Westernblot方法检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin和间质细胞标志蛋白vimentin表达的变化;应用Transwell小室检测肝癌细胞迁移、侵袭能力。结果:低氧环境中,该2种肝癌细胞均由原来的紧密排列上午上皮样状态转为较松散的纺锤体样改变;Western blot检测显示,2种肝癌细胞株的E-cadherin表达量明显下降(均P<0.01),而vimentin表达量明显升高(均P<0.01);Transwell迁移及侵袭实验显示,2种肝癌细胞的迁移及侵袭能力明显增强(均P<0.01);SMMC-7721细胞的上述变化均较HepG2细胞明显(均P<0.01)。结论:低氧环境可诱导肝癌细胞发生EMT,并增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰基-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯与氯喹的交叉对话作用对胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡的影响

目的观察胃癌MKN-45细胞中Notch信号通路抑制剂3,5-二氟苯乙酰基-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对自噬的影响及自噬抑制剂氯喹(CQ)对Notch信号通道的影响,探讨DAPT联合CQ对MKN-45细胞增殖、凋亡的影响。方法将MKN-45细胞分成4个组,对照组(Control组,RPMI 1640完全培养基培养);氯喹组(CQ组,含40μmol/L氯喹的RPMI 1640完全培养基培养);γ-分泌酶抑制剂组(DAPT组,含80μmol/L DAPT的RPMI 1640完全培养基培养);联合用药组(Comb组,含40μmol/L CQ和80μmol/L DAPT的RPMI 1640完全培养基培养)。应用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡;应用透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞自噬水平;应用Western blot检测Notch信号通路表达。两组间比较采用独立样本t检验。结果MTT结果显示,Comb组[(55.09±1.38)%]细胞增殖能力明显低于DAPT组[(78.83±1.74)%]和CQ组[(64.82±1.89)%],差异均有统计学意义(t=18.514、7.185,P<0.01)。流式细胞结果显示,Comb组[(43.43±2.30)%]凋亡率明显高于DAPT组[(27.26±3.02)%]和CQ组[(22.16±2.24)%],差异均有统计学意义(t=7.339、11.415,P<0.01)。Western blot、RT-PCR结果显示,DAPT组自噬相关的微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、苄氯素1(Beclin1)、自噬相关基因7(ATG7)信使核糖核酸(mRNA)、自噬相关基因12(ATG12)mRNA的相对表达量(0.587±0.030、1.503±0.066、1.797±0.110、2.433±0.111)明显高于Control组(0.333±0.002、1.137±0.068、1.000±0.000、1.000±0.000),差异均有统计学意义(t=14.893、6.695、12.527、22.446,P<0.01)。CQ组Notch1蛋白的相对表达量(0.932±0.061)明显高于Control组(0.477±0.031),差异有统计学意义(t=11.590,P<0.01)。结论胃癌MKN-45细胞中自噬与Notch信号通路存在交叉对话,两者相互调节,DAPT联合CQ可以使胃癌MKN-45细胞增殖能力下降、凋亡率提高。     

姜黄素调控TLR4/mTOR信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用

目的：分析姜黄素影响肝癌（LC）细胞系BEL-7402体外侵袭、转移与增殖及其潜在分子机制。方法：对BEL-7402细胞实施浓度不等的姜黄素（0、30、60μmol/L）干预,经由四甲基偶氮唑蓝（MTT）技术对细胞的增殖情况展开测定,Transwell法对细胞侵袭与迁移活性展开测定;用姜黄素（60μmol/L）处理BEL-7402细胞,Western blot法检测细胞内Toll样受体4(TLR4)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达情况。结果：MTT实验显示,在BEL-7402细胞增殖能力上,相较空白对照组,姜黄素1组、2组皆显著偏低（P<0.05）。Transwell侵袭和迁移实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素1组和姜黄素2组BEL-7402细胞侵袭能力和迁移能力均显著降低（P<0.05）。Western blot结果表明,姜黄素2组BEL-7402内mTOR、TLR4蛋白表达量显著下调（P<0.05）。结论：对于LC细胞BEL-7402的增殖、转移与侵袭,姜黄素具抑制功能,其机制和下调信号途径TLR4/mTOR可能相关。     

转录因子Snail介导E-cadherin表达在食管鳞癌迁移和侵袭中的作用

目的探索转录因子Snail、E-cadherin基因在食管鳞癌中的表达及临床病理意义,明确其对食管鳞癌迁移和侵袭的影响。方法食管鳞癌组织及对应癌旁组织标本30例,PCR检测Snail、E-cadherin表达;以癌/癌旁组织相对表达量表示Snail及E-cadherin在mRNA水平表达的差异,分析其与临床病理特征间关系;随机抽取其中4例,Western blot检测Snail、E-cadherin表达。筛选三株食管鳞癌细胞株中的一株进行转染,利用Snail小干扰RNA作为实验组,以双链无义RNA转染作为对照组,检测Snail和E-cadherin表达水平变化,行细胞划痕、侵袭实验。结果 30例食管鳞癌组织较癌旁组织中Snail相对表达量高(1.96±0.75/0.52±0.43,P=0.04),E-cadherin相对表达量低(0.66±0.31/2.19±0.62,P=0.02);食管鳞癌中Snail相对高表达、E-cadherin相对低表达程度均与癌组织浸润深度(P=0.009)、淋巴结转移与否(P=0.047)相关。其中4例病人,癌组织相比对应癌旁组织中Snail蛋白表达高(0.73±0.13/0.23±0.08,P=0.00),而E-cadherin蛋白表达低(0.10±0.06/0.60±0.14,P=0.00)。选取EC109为实验细胞株,PCR结果显示,Snail小干扰RNA转染组较对照组中Snail表达减少(0.53±0.05/1.00±0.15,P=0.00),同时,E-cadherin表达上调(3.28±0.26/1.00±0.18,P=0.00);Western blot检测显示,抑制Snail蛋白表达后(0.25±0.05/0.41±0.10,P=0.03)EC109中E-cadherin蛋白表达上调(0.83±0.11/0.29±0.05,P=0.02)。划痕实验及Transwell细胞侵袭实验示,下调Snail表达后EC109迁移、侵袭能力均减弱(P0.05)。结论转录因子Snail在食管鳞癌中相对高表达,并可能通过介导E-cadherin表达影响肿瘤迁移与侵袭。     

FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路对乳腺癌侵袭及迁移的影响

目的探讨FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路通过调控上皮间质转化（EMT）途径参与乳腺癌侵袭及迁移的机制。 方法应用不同浓度环靶明（Cyclopamine）处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率及计算药物半数抑制浓度（IC₅₀）;采用Cyclopamine或沉默FOXC2基因表达以阻断Hedgehog/Gli信号通路活化;通过Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验分别检测阻断Hedgehog/Gli信号通路对MDA-MB-231细胞侵袭及迁移影响;Western blotting检测阻断前后Hedgehog/Gli信号通路分子Smoothened（Smo）、Gli1和EMT相关标志物FOXC2,E-cadherin及Vimentin蛋白表达变化。 结果与空白对照组比较,Cyclopamine可显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖并呈现时效-量效关系,48 h的IC₅₀为25 μmol/L。Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验均显示,与未转染组及Control-siRNA组相比,FOXC2-siRNA组和Cyclopamine组细胞穿膜数及迁移率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting显示,与未转染组及Control-siRNA组相比较,FOXC2-siRNA组及Cyclopamine组Smo、Gli1及FOXC2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。而沉默FOXC2表达可显著降低Vimentin蛋白表达及增加E-cadherin蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论FOXC2通过介导Hedgehog/Gli信号通路从而调控EMT促进乳腺癌侵袭及迁移,提示阻断该信号通路有望成为乳腺癌靶向治疗新线索。     

Tim-3在肝癌细胞上皮间质转化及转移中的作用机制

目的:探讨Tim-3与肝癌细胞发生上皮间质转化(EMT)的关系及对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞SMMC-7721,RT-PCR检测Tim-3表达差异,将SMMC-7721分为3组,对照组:未接受转染的SMMC-7721;实验组转染Tim-3 siRNA细胞低表达Tim-3;阳性对照组转染PEX-3-hTim-3过表达质粒细胞高表达Tim-3。应用RT-PCR、Western blot检测3组肝癌细胞Tim-3及EMT相关基因:E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、Twistl、Slug、Snail、Smad mRNA和蛋白的表达。通过Transwell小室侵袭实验检测3组肝癌细胞迁移和侵袭能力改变;分析Tim-3表达与EMT相关基因表达的相关性。结果:(1)与正常肝细胞L02比较;Tim-3在肝癌细胞中高表达(P<0.05);(2)RTPCR和Western bolt结果提示,实验组上皮标志物E-cadherin表达较对照组明显上升(P<0.05),而间质标志物N-cadherin、MMP-9、Twistl、Snail、Slug、Smad表达较对照组下降(P<0.05),提示EMT受到抑制;阳性对照组中E-cadherin表达较对照组下降(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、Twist1、Snai1、Slug、Smad表达较对照组上升(P<0.05),促进了肝癌EMT;(3)Transwell迁移实验中,实验组与对照组和阳性对照组相比较,肝癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少,3组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05),实验说明Tim-3表达水平的改变,影响肝癌的迁移和侵袭性;(4)Tim-3的表达与EMT标志物的表达做相关性分析显示,Tim-3的表达与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05),与N-cadherin、MMP-9、Twist1、Snai1、Slug、Smad的表达呈正相关(P<0.05)。结论:Tim-3是肝癌细胞EMT的潜在诱导者,抑制Tim-3的表达,同时抑制肝癌细胞EMT的发生,肝癌细胞迁移和侵袭能力下降。因此,Tim-3有望成为今后的临床抗肿瘤药物新的治疗靶点用于改善和评估患者预后。     

长链非编码RNA FER1L4在肝细胞癌中调节miR-106a-5p发挥抑癌因子作用的研究

目的 ：探讨长链非编码RNA FER1L4(lncRNA FER1L4)调节miR-106a-5p的表达影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的可能机制及其临床意义。方法：收集2017～2019年阜阳市第五人民医院及大连大学附属中山医院36例肝细胞癌患者手术标本，采用荧光定量PCR技术(RT-qPCR)分析肝癌细胞和癌旁正常肝细胞中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。同时采用RT-qPCR分析肝癌细胞系Huh-7、HepG2和正常肝细胞系L-02中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。采用CCK-8法、细胞划痕及集落形成实验等方法测定细胞的增殖、转移和成瘤能力。结果：与正常组织相比，lncRNA FER1L4在肝癌组织中表达较低(P<0.05)，而miR-106a-5p表达较高(P<0.05)，且两者呈负相关(P<0.0001,R²=0.376)；与对照组相比，下调FER1L4肝癌细胞的增殖能力增加(P<0.05)，敲除FER1L4肝癌细胞的迁移和侵袭能力增加(P<0.05)；与对照组相比，...     

P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肝细胞缺氧再灌注影响的实验研究

目的 观察P38MAPK抑制剂SB203580在人肝癌细胞系HepG2细胞和人正常细胞系L02细胞缺氧再灌注过程中的作用.方法 实验分为正常对照组、缺氧对照组、SB203580＋正常培养组、SB203580＋缺氧培养组,缺氧培养24h、复氧1h后,分别应用Western Blot、MTT、划痕实验、Transwell实验、AnnexinV-FITC/PI双染实验检测细胞中P38蛋白表达情况和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的变化.结果 与正常对照组相比,缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率、P38MAPK磷酸化水平增加;SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率相对于缺氧培养组增加,P38MAPK磷酸化水平降低;划痕实验48 h后,缺氧对照组HepG2细胞明显向划痕的中央迁移,而SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞的侵袭能力较缺氧对照组降低（P＜0.05）;AnnexinV-FITC/PI双染实验显示与缺氧对照组相比,L02细胞SB203580＋缺氧培养组凋亡率降低,而HepG2细胞SB203580＋缺氧培养组凋亡率则增加（P ＜0.01）;MTT结果显示实验组HepG2细胞和LO2细胞增殖抑制率受到影响,并出现时间浓度依赖关系.结论 SB203580通过特异性阻断P38MAPK信号转导通路,对缺氧培养的正常肝细胞LO2细胞产生保护作用,同时对缺氧培养的肝癌细胞HepG2具有促进凋亡、抑制增殖以及抑制细胞迁移和降低侵袭能力的作用.     

miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-96在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR测定miR-96在不同HCC细胞系(HepG2、7721、huh7)及正常肝细胞系L02中的表达;将HepG2细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-96模拟物(miR-96模拟物组)和miR-96抑制物(miR-96抑制物组)后,用细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot分别测定PTPN9 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-96在各肝癌细胞系中的相对表达量均明显高于其在正常肝细胞系L02的相对表达量(均P0.01)。与阴性对照组比较,细胞划痕愈合率在miR-96模拟物组明显升高,而在miR-96抑制物组明显降低(均P0.05);侵袭细胞数在miR-96模拟物组明显增多,而在miR-96抑制物组明显减少(均P0.05);PTPN9 mRNA与蛋白相对表达量在miR-96模拟物组均明显下调,而在miR-96抑制物组均明显上调(均P0.05)。结论:miR-96在HCC细胞中表达升高,并可能通过下调PTPN9表达促进HCC细胞的迁移与侵袭。