荣肝合剂对ConA诱导慢性免疫性肝损伤小鼠的影响

目的观察荣肝合剂对刀豆蛋白（ConA）诱导转基因小鼠慢性免疫性肝损伤的保护作用。方法选用转基因小鼠74只，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯（DDB）组、茵陈组、茵陈蒿汤组、荣肝合剂组。正常组小鼠尾静脉注射PBS溶液0．3mL，其他各组按ConA 12μg／gwt尾静脉注射造模，每周1次，连续6周，制备慢性肝损伤模型。造模成功后，模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃，各治疗组灌胃给药，每日1次，连续4周，末次药后24h，检测血清中ALT、AST活性；测脏器重量指数；肝组织光镜下观察其病理变化。结果①酶学变化：与模型组比较，各用药组均可以降低血清ALT、AST的水平，茵陈蒿汤组、荣肝合剂组的降酶作用和联苯双酯组无统计学差异（P〉0．05）。②病理组织学变化：与模型组比较，荣肝合剂组及茵陈蒿汤组肝组织纤维增生及细胞坏死较轻（P〈0．05）。③脏器重量指数变化：与模型组相比，除茵陈组外，各治疗组胸腺指数均有不同程度下降（P〈0．05～0．01）。结论中药复方荣肝合剂对ConA所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用。     

荣肝合剂对刀豆蛋白A诱导急性免疫性肝损伤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨荣肝合剂对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性免疫性肝损伤小鼠病理组织学及T淋巴细胞亚群的影响。方法:乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠60只,随机分为6组(模型组、正常组、荣肝合剂组、茵陈蒿汤组、茵陈组、联苯双酯组),每组10只,造模前14天,模型组、正常组小鼠给予生理盐水灌胃,其余组分别给予荣肝合剂、茵陈蒿汤、单味茵陈煎液、联苯双酯溶液,每日灌胃给药干预。末次灌胃给药后1h,正常组小鼠给予磷酸盐缓冲液(PBS)尾静脉注射,其余各组按照Con A3μg/g体重尾静脉注射造模。造模给药后8h处死动物取血或组织标本检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、组织病理学(光镜)及T淋巴细胞亚群等指标。结果:模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,荣肝合剂组、联苯双酯组小鼠ALT、AST、TBil水平显著降低(P0.01),荣肝合剂组、茵陈蒿汤小鼠组肝细胞变性、坏死及炎细胞浸润程度较轻;各药物干预组CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例均有升高,以荣肝合剂最显著,有显著性差异(P0.05);荣肝合剂组CD4~+CD8~+T淋巴细胞所占比例下降(P0.05);各中药组均可升高CD4~+/CD8~+T细胞比例(P0.05)。同时,荣肝合剂CD4~+CD8~-T淋巴细胞所占比例于其他药物干预组比较差异有显著性意义(P0.05),荣肝合剂组CD4~+CD8~+T细胞所占比例与联苯双酯组比较有显著性差异(P0.05),荣肝合剂组CD4~+/CD8~+T细胞比值与茵陈蒿汤组比较差异有显著性意义(P0.05)。结论:荣肝合剂对刀豆蛋白A所致转基因小鼠急性免疫性肝损伤具有降酶作用,同时对于肝组织有保护作用,可以减轻肝组织的炎症与坏死,其机理与调节T淋巴细胞亚群功能相关。     

脂联素在小鼠急性肝损伤中的表达及作用

目的: 观察脂联素在小鼠急性肝损伤的表达及作用.方法: 健康♂BALB/c小鼠随机分为3组. 刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)组8只: ConA 30mg/kg 尾静脉注射. 脂联素组5只: 在静脉注射ConA前12 h和2 h, 分别应用脂联素3 mg/kg腹膜内注射. 对照组8只: 尾静脉注射生理盐水10mL/kg. 注射ConA 8 h后处死小鼠, 检测脂联素及ALT血清水平、肝组织病理变化、肝组织脂联素蛋白及mRNA的表达.结果: 脂联素血清水平在脂联素组与对照组无差异, 2组均高于ConA组(15.4±3.0 mg/L,16.5±2.8 mg/L vs 11.8±2.1 mg/L, P <0.05或0.01);肝组织脂联素蛋白表达在脂联素组强于对照组(5.39%±1.72% vs 1.82%±0.36%,P <0.05), 弱于ConA组(10.63±4.35%, P <0.05);肝组织脂联素mRNA表达在脂联素组和ConA组均强于对照组(0.46±0.17, 0.51±0.21 vs0.23±0.05, P <0.05或0.01);血清ALT水平及肝组织炎症程度脂联素组高于对照组(192.50±45.87 U/L vs 44.71±21.29 U/L;21.5±9.2vs 8.4±4.3, 均P <0.05), 低于ConA组(616.00±171.50 U/L, 48.5±8.6, 均P <0.05).结论: 在ConA诱导的急性肝损伤中, 肝组织脂联素蛋白及其mRNA的表达增强, 但血清脂联素水平降低. 脂联素对急性肝损伤小鼠起着抗炎作用.     

小鼠日本血吸虫性肝纤维化组织TGF-β1及Smads的表达

目的:探讨小鼠日本血吸虫病纤维化肝组织中转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4和Smad7的表达和肝纤维化的发病机制.方法:清洁级6-8 wk龄ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分为模型组和正常对照组,用血吸虫尾蚴腹部贴附法制成动物模型,正常组未予处理.感染后wk 4、6、8和12末分批处死2组小鼠且称肝脾质量,取部分肝做病理学观察,HE染色和猩红染色,制作组织芯片,免疫组化检测TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7在各细的表达状况.结果:与正常组相比,模型组小鼠肝脾质量和肝指数均高(肝,12 wk:2.99±0.28 g vs 1.83±0.13 g;脾,12 wk:0.87±0.15 g vs 0.14±0.02g;肝指数,12 wk:0.09±0.01 vs 0.04±0.00;均P＜0.01),TGF-β1和Smad2/3表达也均高于正常对照组(TGF-β1.12 wk:0.105±0.008 vs 0.024±0.002;Smad2/3.12 wk:0.094±0.009 vs 0.003±0.001,均P＜0.01),以上指数分别与肝纤维化程度呈正相关(r=0.635,0.482,0.646,0.347,0.662;均P<0.01);Smad4表达高于对照组且随着纤维化的发展表达量在逐渐下降(4wk:0.075±0.011 vs 0.023±0.006.6 wk:0.043±0.008 vs 0.010±0.002.8 wk:0.038±0.009 vs 0.003±0.002.12 wk:0.028±0.004 vs 0.013±0.006;均P＜0.01).Smad7仅8 wk表达增强.结论:TGF-β1和Smad2/3表达增强在肝纤维化的发生中起重要作用,Smad4可能主要在纤维化的早中期发挥效应.     

CCl4诱导大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性

目的:探讨CCl4大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性.方法:首次CCl4 3 mL/kg sc,以后500 mL/LCCl4橄榄油溶液2 mL/kg sc,2次/wk,共计12wk制备大鼠肝硬化模型.设4 wk、8 wk、12wk 3个时间点,动态观察肝细胞凋亡指数、肝组织Caspase-12免疫组织化学及蛋白表达.结果:模型大鼠4 wk时呈典型的急性肝损伤改变,8 wk时大鼠呈典型的慢性肝损伤肝纤维化的病理改变,12 wk时已形成肝硬化;随着肝损伤加重和肝硬化形成,肝细胞凋亡指数显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8wk比较有显著差异(70.4±11.59 vs 9.6±1.14,95.8±10.94,P＜0.01),模型对照12 wk与模型对照8 wk比较有统计学意义(122.8±17.51 vs 95.8±10.94,P＜0.05).Caspase-12蛋白表达亦显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8 wk比较有显著差异(0.071±0.014 vs 0.014±0.007,1.172±0.028,P＜0.01),模型对照12wk与模型对照8 wk比较亦有显著差异(1.84±0.083 vs 1.172±0.028,P＜0.01);且肝细胞凋亡指数和Caspase-12蛋白表达量之间呈正相关(r=0.89,t=9.125,P＜0.01).结论:内质网凋亡通路参与CCl4大鼠肝硬化形成过程中肝细胞凋亡事件,其关键的凋亡酶Caspase-12蛋白表达量基本能够反映肝细胞的凋亡程度.     

黄芪总苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的影响

目的:研究黄芪总苷(AST)对小鼠日本血吸虫病肝纤维化和虫卵肉芽肿的影响.方法:以日本血吸虫尾蚴感染ICR小鼠制作肝纤维化动物模型,5 wk末随机分为:AST高剂量组20 mg/(kg·d)、AST低剂量组10 mg/(kg·d)、阳性药护肝片组540 mg/(kg·d)和模型对照组,各组均于感染40 d后,吡喹酮杀虫2 d 500mg/(kg·d).同时设置正常对照组30只.感染后6、10和14 wk每组随机处死10只,观察肝脏指数,应用HE和天狼猩红染色观察小鼠虫卵结节大小及纤维化程度;构建组织芯片,应用免疫组织化学方法检测虫卵结节中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:感染后10、14 wk, AST高、低剂量组与模型组相比较,肝组织中血吸虫虫卵结节显著缩小,纤维化程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量(MOD)明显减低(10 wk: 0.093±0.002、0.084±0.003 vs 0.134±0.004,P＜0.01;0.074±0.002、0.104±0.005 vs 0.146±0.008,P＜0.05;14 wk: 0.099±0.004、0.095±0.004 vs 0.141±0.007,P＜0.01;0.070±0.003、0.077±0.003 vs 0.101±0.004,P＜0.05).感染10 wk,AST高、低剂量组Ⅲ型胶原蛋白含量有统计学差异(P＜0.01).结论:AST通过抑制虫卵结节、减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成发挥抗小鼠日本血吸虫病肝纤维化的作用.     

清肝活血方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡基因表达的影响

目的:探讨清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡GRP78/Bip、GRP94、caspase-12基因和蛋白表达的影响.方法:建立大鼠慢性酒精性肝损伤复合模型, 第11周将造模大鼠按体质量和状态均衡分为模型组、清肝活血方组9.5 g/(kg·d)、清肝方组3 g/(kg·d)、活血方组6.5 g/(kg·d)和空白对照组, 每组10只. 各组每日上午仍灌胃给予乙醇混合液, 下午给予药液或生理盐水,连续给药2 wk, 末次给药1 h后称质量, 腹主动脉采血, 处死, 分离肝脏. DNA ladder法和流式细胞术对肝细胞凋亡进行定性和定量检测, RT-PCR和Western blot法检测大鼠肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达.结果:与正常组比较, 造模12 wk大鼠血清ALT和AST水平明显升高(138.3±43.3 U/Lvs 33.9±9.8 U/L, 257.4±162.3 U/L vs 119.6±28.6 U/L, P<0.01); 肝细胞发生早期凋亡改变, 总凋亡率和早期凋亡率分别达到29%和26%( P<0.01); 肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达明显增强( P<0.05或0.01). 经2 wk治疗后, 清肝活血方及拆方均能明显降低酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST水平; 抑制肝细胞凋亡, 总凋亡率和早期凋亡率分别降至8%和6%; 清肝活血方及清肝方显著降低肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达, 与模型组比较有统计学差异( P<0.05或0.01), 而活血方组与模型组则无明显差异.结论:清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠肝细胞凋亡均表现出较强的抑制作用, 其机制可能与下调内质网应激反应性凋亡相关基因caspase-12、GRP78/Bip和GRP94表达有关.     

基于MAVS介导信号通路的补肾方抗炎抗HBV作用及机制研究

目的:观察补肾方对刀豆蛋白A(ConA)诱导HBV转基因小鼠肝损伤的抗炎及抗HBV作用机制。方法:24只HBV转基因小鼠随机分为3组,模型组及补肾方组小鼠按照体重予以3μg/g ConA尾静脉注射,正常组予以相应量生理盐水,每周1次,连续4周。造模后,补肾方组小鼠予以补肾方汤剂2.25g/kg体重灌胃,正常组及模型组小鼠予以等量生理盐水,每天1次,连续4周。观察各组小鼠处理前后血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)水平及肝组织病理变化,观察各组小鼠处理前后肝组织HBcAg表达及肝组织线粒体抗病毒蛋白(MAVS)介导信号通路关键蛋白表达。结果:补肾方可显著降低ConA诱导HBV转基因小鼠血清ALT、AST水平(P0.01),减轻肝组织内炎性细胞的浸润及肝细胞的变性坏死;可显著降低小鼠血清HBsAg水平(P0.05),降低肝组织内HBcAg的表达(P0.001);可显著提高小鼠血清IFN-β水平(P0.01),上调TBK-1、STING、pTAK-1(t183)的表达,下调TRADD的表达(P0.05)。结论:补肾方具有减轻肝组织炎症、抗HBV作用,其作用机制与MAVS介导的信号通路有关。     

氢盐水对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的:研究肝脏病理形态学、肝功能、氧化应激因子的变化,探讨氢盐水(hydrogen-rich saline,HS)对大鼠酒精性肝损伤的保护作用.方法:将40只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量HS治疗组、高剂量HS治疗组;采用梯度酒精灌胃方法建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,模型组及治疗组给予酒精灌胃12wk,低剂量HS治疗组和高剂量HS治疗组同时分别给予HS5g/kg、10g/kg体质量,腹腔注射;空白对照组给予等热量、等体积的糖水灌胃.12wk后检测大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、肝组织匀浆丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(reduced glulathione hormone,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量,肝组织HE染色观察肝组织形态学变化.结果:灌酒12wk后模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TBIL水平均明显上升(65.82±16.14vs36.43±4.92,180.45±35.51vs110.53±18.43,0.92±0.13vs0.35±0.07,1.92±0.34vs0.74±0.12,P<0.01);肝脏GSH含量、SOD活性下降(78.56±16.45vs135.43±19.81,93.14±21.05vs181.53±30.13,P<0.01),而MDA含量增加显著(8.04±1.12vs3.25±0.83,P<0.01);HS低剂量组和高剂量组大鼠血清ALT、AST、TG、TBIL下降显著(43.26±8.81,41.15±8.89vs65.82±16.14;130.42±11.64,125.81±10.84vs180.45±35.51;0.44±0.09,0.38±0.08vs0.92±0.13;1.03±0.21,0.89±0.15vs1.92±0.34;P<0.01);SOD、GSH活性明显增加(162.51±28.56,164.24±30.07vs93.14±21.05;105.42±17.32,110.67±20.51vs78.56±16.45;P<0.01),MDA含量明显上升(4.56±0.98,4.21±1.05vs8.04±1.12;P<0.01).HE染色结果显示,模型组大鼠肝组织可见中重度肝细胞变性,胞质内见大小不一的脂滴空泡,窦内皮细胞肿胀,汇管区炎细胞浸润;HS低、高剂量组肝组织脂肪变性、炎细胞浸润程度减轻.结论:HS可有效地抗氧化应激和脂质过氧化,改善肝功能,减轻酒精诱导的大鼠慢性肝损伤.     

胶原纤维在小鼠酒精性肝损伤过程中的表达变化

目的:探究胶原纤维在酒精性肝损伤发展过程中各个阶段的变化规律及其与酒精性肝损伤的关系.方法:饲养清洁健康BALB/c♂小鼠40只,随机分为对照组(n=3)与模型组(n=37).将对照组3只小鼠处死,取肝;模型组小鼠每日给予0.15 m L/10 kg 56°红星二锅头白酒灌胃,持续4 wk,于开始灌胃后1、2、3、4 w k各取3只小鼠进行肝脏取材.天狼星红染色法观察小鼠肝组织胶原纤维病理变化情况,蛋白印迹法检测小鼠肝脏增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,P C N A)蛋白表达及变化趋势.运用ImageProPlus6.0对病理切片样本进行积分光密度(IOD)定量分析,Gel Pro4.0软件对目标蛋白条带灰度值进行测定.运用SPSS16.0对数据进行处理,用ANOVE法和非参数秩和检验法进行显著性分析.结果:第1、2周组小鼠肝组织胶原纤维含量持续显著增高(852.21±10.65 vs 345.24±65.94,1054.15±10.80 vs 852.21±10.65,P0.01),第2周达到最高,随后第3、4周小鼠肝组织胶原纤维含量依次降低(588.75±17.18 vs 1054.15±10.80,559.40±14.17,P0.01);小鼠肝组织中PCNA蛋白含量前2 wk明显下降,第2周时达到最小值,第3周较第2周增加显著,差异有统计学意义(P0.05).第4周与第3周变化无明显差异.结论:在酒精诱导小鼠肝脏损伤的过程中,肝脏胶原纤维的变化规律是先增加后减少,变化明显;PCNA的表达出现显著动态变化,二者均可能与肝脏的损伤修复机制密切相关.     

受体相互作用蛋白3介导自身免疫性肝炎肝脏单核细胞来源巨噬细胞募集

目的探索受体相互作用蛋白3(RIP3)对自身免疫性肝炎(AIH)肝脏单核细胞来源巨噬细胞浸润的调控作用。方法纳入2018年1至6月于天津医科大学总医院消化科行肝穿刺活组织病理学检查的AIH患者10例,同期选择年龄和性别均匹配且无肝功能异常的5例肝囊肿患者作为对照,应用免疫荧光染色观察AIH患者和对照者肝组织单核细胞来源巨噬细胞浸润情况。将Raw264.7巨噬细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+RIP3抑制剂GSK872(GSK872)组,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测巨噬细胞RIP3、混合谱系蛋白激酶样结构域(MLKL)、TNF-α、IL-6、IL-1β、细胞炎性小体Nod样蛋白3(NLRP3)、CC趋化因子配体(CCL)2和CCL5的mRNA水平;将Raw264.7巨噬细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+地塞米松组,采用qPCR检测巨噬细胞TNF-α、NLRP3、RIP3和MLKL的mRNA水平。选择24只6周龄雌性C57BL/6小鼠建立急性AIH小鼠模型,并将其分为对照组、刀豆蛋白A(ConA)组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(每组6只),处死小鼠后收集外周血和肝组织,观察小鼠肝脏病理学表现,测定血清ALT和AST水平,采用qPCR检测CCL2和CC趋化因子受体2(CCR2)的mRNA水平,采用流式细胞术分析小鼠肝脏巨噬细胞比例。统计学方法采用独立样本t检验和单因素方差分析。结果AIH患者肝脏CD68阳性组织驻留巨噬细胞(库普弗细胞)和MAC387阳性单核细胞来源巨噬细胞比例均高于对照者[(0.84±0.21)%比(0.09±0.03)%、(0.79±0.13)%比(0.03±0.01)%],差异均有统计学意义(t=3.00、4.84,P均<0.05)。脂多糖组巨噬细胞内RIP3、MLKL、TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3、CCL2、CCL5的mRNA水平均高于对照组和脂多糖+GSK872组(1.64±0.16比1.07±0.07和0.63±0.11,10.45±1.37比1.10±0.33和1.51±0.63,5.43±0.59比0.94±0.06和2.59±0.45,204.20±30.73比1.26±0.19和111.40±11.62,20848.00±362.00比1.09±0.26和10940.00±566.60,7.47±1.17比1.09±0.09和3.79±0.89,68.03±5.15比1.14±0.19和14.09±2.62,5935.12±96.20比1.43±0.46和673.50±49.10),差异均有统计学意义(t=3.11、5.21,6.65、6.55,7.57、3.96,6.60、3.06,8.83、4.08,5.46、2.56,12.97、10.16,25.34、14.99;P均<0.05)。脂多糖组巨噬细胞TNF-α、NLRP3、RIP3和MLKL的mRNA水平均高于对照组和脂多糖+地塞米松组(8.85±1.43比1.44±0.43和3.63±0.63,6.42±0.86比0.99±0.12和2.07±0.17,1.72±0.21比0.93±0.09和0.43±0.07,6.87±0.85比1.62±0.31和1.41±0.29),差异均有统计学意义(t=4.95、3.33,6.24、4.95,3.04、5.11,5.77、6.07;P均<0.05)。ConA组小鼠肝脏表现出明显的炎症细胞浸润和点状坏死。ConA组小鼠的血清ALT和AST水平均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组[(2569.00±45.44)U/L比(49.38±9.07)、(103.00±14.07)和(759.30±34.99)U/L,(3335.00±88.79)U/L比(108.50±18.10)、(460.00±97.40)和(1573.85±36.06)U/L],且ConA+地塞米松组小鼠的血清ALT和AST水平均低于ConA+GSK872组,差异均有统计学意义(t=5.54、5.42、3.90、4.63、4.16、3.79、6.70、2.71,P均<0.05)。ConA组小鼠肝脏CCL2和CCR2的mRNA水平均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(92.64±10.57比0.78±0.15、5.64±1.00和9.47±2.06,5.73±0.39比0.98±0.22、2.18±0.22和2.98±0.33),差异均有统计学意义(t=7.66、7.24、5.87、8.71、8.58、5.45,P均<0.01)。ConA组小鼠肝脏CD45⁺CD11b⁺F4/80⁺总巨噬细胞比例和CD45⁺CD11b^hiF4/80^lo浸润的单核巨噬细胞比例均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(0.86±0.02比0.73±0.03、0.68±0.02和0.72±0.03,0.56±0.02比0.08±0.02、0.11±0.01和0.08±0.01),CD45⁺CD11b^loF4/80^hi肝脏驻留巨噬细胞(库普弗细胞)比例低于对照组、ConA+地塞米松组和GSK872组(0.24±0.03比0.58±0.04、0.52±0.07和0.56±0.07),差异均有统计学意义(t=4.27、5.90、3.89,18.70、19.87、20.52,7.35、3.82、3.87,P均<0.05)。结论AIH患者肝脏巨噬细胞数量增加。RIP3信号介导免疫性肝炎肝脏单核细胞来源巨噬细胞浸润并可能成为AIH的潜在治疗靶点。     

丹参川芎嗪治疗慢性肺源性心脏病急性发作的疗效

目的：观察丹参川芎嗪注射液对慢性肺源性心脏病急性发作患者肺动脉压（PAP）、动脉氧分压（PaO。）、C反应蛋白（CRP）和内皮素-1（ET-1）的影响。方法：40例慢性肺源性心脏病肺动脉高压患者被随机分为两组,常规治疗组：20例,接受常规治疗;观察组：20例,在常规治疗基础上加用丹参川芎嗪。另选20例健康查体者作为健康对照组。观察治疗后各组PAP、PaO：、CRP、ET-1水平和左室射血分数（LVEF）变化,并进行分析。结果：治疗后与常规治疗组比较,观察组总有效率明显提高（75％比90％）,PaOz[（83．87±14．53）mmHg比（92．95±13．54）mmHg]显著升高,平均肺动脉压（mPAP）[（55．43±9．65）mmHg比（45．52±8．89）mm-Hg]显著下降,CRP[（6．37±2．12）mg／L比（3．29±0．84）mg／L]和ET-1[（52．37±20．79）ng／L比（40．29±16．04）ng／L]水平明显下降（P〈0．05～〈0．01）。两组治疗后LVEF升高幅度无显著差异（P〉0．05）。结论：对于慢性肺心病急性发作患者丹参JIJ芎嗪注射液能显著提高临床疗效,改善右心功能,降低平均肺动脉压,改善内皮功能,抑制炎症反应。     

水通道蛋白2在胆总管结扎大鼠肝硬化肾组织中的表达及丹参注射液对其表达的影响

目的:探讨胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)大鼠肝硬化不同阶段肾组织中水通道蛋白2(aquaporins-2,AQP2)表达的变化;用丹参注射液干预肝硬化腹水大鼠,观察丹参注射液对其表达的影响.方法:将70只♂SD大鼠随机分成假手术组、模型组.模型组分别于结扎后1、2、3、4wk麻醉10只动物.假手术组与4wk模型组同批麻醉.4wk末时,再从剩余存活造模大鼠中,随机选取16只腹腔穿刺证实有腹水的大鼠,随机分为治疗组和对照组.从造模第5周开始进行治疗观察.治疗组给予丹参注射液2mL腹腔注射,1次/d,连用2wk.对照组给予蒸馏水2mL腹腔注射,1次/d,连用2wk,6wk末2组同批麻醉.采用HE染色、Masson三色染色确定模型建立情况;肾脏组织标本采用HE染色,光镜下观察组织学变化,应用免疫组织化学方法测定AQP2的表达及分布.结果:造模1-4wk大鼠肾组织AQP2的阳性染色平均吸光度A值(皮质:0.4703±0.0313,0.4832±0.0212,0.5081±0.0417,0.6802±0.0531;髓质:0.4320±0.0237,0.4724±0.0284,0.4796±0.0451,0.5187±0.0612)均高于假手术组(皮质:0.4197±0.0295;髓质:0.4139±0.0152,P<0.05),提示肝硬化进程中,AQP2在肾皮质和肾髓质的表达均逐渐增强.治疗组(皮质:0.4233±0.0521,髓质:0.4158±0.0413)大鼠肾组织AQP2的阳性染色平均A值显著低于对照组(皮质:0.5536±0.0476,髓质:0.4764±0.0536,P<0.05).结论:以BDL法制备的大鼠肝硬化模型中存在着肾脏AQP2表达的上调,提示在肝硬化进程中,肾脏集合管可能参与了水重吸收的增加;而丹参注射液可以下调肝硬化腹水大鼠肾脏AQP2的高表达.     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察

目的 动态观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化.方法 将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105 CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔黏膜接种免疫Balb/c小鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)、刀豆蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激培养,同时设有双歧杆菌液体培养基(MRS)对照.收集脾细胞培养上清液,ELISA法检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10水平.结果 口服灌胃组的IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8、2～8、4、6～10周升高,分别在免疫后4、2、4、6周达最高水平,其EgAg刺激组IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别为(700.0±115.5)、(45.0±5.8)、(350.0±57.7)、(112.5±14.4)ng/L,与0周[(35.0±5.8)、(12.5±2.9)、(190.0±11.6)、(25.0±5.8)ng/L]及MRS对照组[(37.5±5.0)、(13.8±2.5)、(195.0±5.8)、(27.5±2.9)ng/L]比较,差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);鼻腔接种组的IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8、2～8、2～6、6～16周升高,分别在免疫后2、2、4、8周达最高水平,其EgAg刺激组IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别为(700.0±115.5)、(55.0±5.8)、(275.0±28.9)、(140.0±11.6)ng/L,与0周[(35.0±5.8)、(12.5±2.9)、(190.0±11.6)、(25.0±5.8)ng/L]及MRS对照组[(37.5±5.0)、(13.8±2.5)、(195.0±5.8)、(27.5±2.9)ng/L]比较,差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01).EgAg、ConA、LPS刺激组的细胞因子水平高于相应的脾细胞悬液组(P＜0.05或＜0.01),ConA或LPS刺激组的细胞因子水平高于相应的EgAg刺激组(P＜0.05或＜0.01).结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗在免疫早期(2～6周)可诱导小鼠脾细胞产生Th1和Th2混合型免疫应答.     

原儿茶酸对刀豆蛋白A所致的免疫性肝损伤小鼠肝组织MDA、NO、SOD和GSH-PX表达的影响

目的 研究原儿茶酸对豆蛋白A(ConA)所致的免疫性肝损伤小鼠肝组织丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平的影响。方法 随机将60只小鼠分为对照组、模型组、小、中、大剂量(2.5 mg.kg^-1.d^-1、5 mg.kg^-1.d^-1、10 mg.kg^-1.d^-1)原儿茶酸和(0.2 g.kg^-1.d^-1)联苯双酯处理组。在对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,在药物处理组分别给予不同剂量的药物灌胃,连续10 d。在末次给药1 h,一次性经尾静脉注射ConA,诱导免疫性肝损伤模型。分别检测血清白介素-4(IL-4)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肝组织匀浆MDA、NO、SOD和GSH-PX活性。结果 不同剂量原儿茶酸和联苯双酯处理组动物肝、脾指数显著降低,血清ALT和AST水平显著降低,血清IL-4、IL-6和TNF-α水平显著降低(P<0.05);模型组肝匀浆MDA和NO水平分别为(5.2±0.5)nmol/mg和(8.0±0.9)μmol/L,经小、中、大剂量原儿茶酸处理后,分别降至【(4.7±0.4)nmol/mg、(4.3±0.3)nmol/mg和(3.9±0.3)nmol/mg及(6.8±0.8)μmol/L、(6.2±0.7)μmol/L和(5.8±0.7)μmol/L,P<0.05】;模型组肝匀浆SOD和GSH-PX水平分别为(59.4±3.6)U/mg和(85.2±9.6)U/mg,经小、中、大剂量原儿茶酸处理后,分别升高至【(74.2±4.4)U/mg、(85.2±5.3)U/mg和(99.2±5.9)U/mg及(107.3±13.4)U/mg、(115.2±12.8)U/mg和(139.3±12.9)U/mg,P<0.05】。结论 原儿茶酸可以减轻ConA引起的小鼠免疫性肝损伤,可能是通过提高了肝组织内源性抗氧化酶活力,增强了对氧自由基的清除能力有关。     

复方丹参注射液对变应性哮喘小鼠脾巨噬细胞TLR2和TLR4 mRNA表达的研究

目的通过观察卵清蛋白（OVA）诱导的变应性哮喘小鼠脾脏巨噬细胞中TLR2和TLR4 mRNA的表达变化,探讨复方丹参注射液（Complex Salvia Mihiorrhiza Injection,SA）对其作用的机制。方法将30只雄性BALB／c小鼠随机分为对照组、模型组和SA组,每组各10只。各组按要求处理于20天后取脾脏,贴壁法分离脾巨噬细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）,检测TLR2和TLR4 mRNA以及GAPDH cDNA的荧光域值循环数,观察SA对TLR2和TLR4 mRNA水平表达的影响。结果与对照组相比,模型组TLR2 mRNA表达明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）,而TLR4 mRNA表达无变化（P〉0．05）;模型组与SA组比较,SA组TLR2和TLR4 mRNA表达均上调,且有统计学差异（P〈0．05）。结论SA能使变应性哮喘模型小鼠脾巨噬细胞中TLR2和TLR4 mRNA水平表达上调,为中药在哮喘治疗中的应用提供了科学依据。     

川芎嗪,丹参治疗大鼠肺纤维化对Ⅰ,Ⅲ型前胶原基因表达的影响

目的观察川芎嗪、丹参治疗大鼠肺纤维化对胶原基因表达的影响。方法大鼠随机分为正常对照、３个模型、川芎嗪、丹参和氢化可的松琥珀酸钠（氢可）组７个组。博莱霉素复制模型后１５～２８天给药,２９天取肺作ＨＥ染色及检测α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ的原位杂交,进行组织病理学检查及图像分析定量。结果模型组两种前胶原ｍＲＮＡ在第７天表达至高峰,２９天Ⅰ型仍保持高水平,Ⅲ型已恢复正常。经治疗川芎嗪组的α１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ降至正常（Ｐ＞０．０５）,丹参、氢可组仍较高（Ｐ＜０．０１）。各组的α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ均达正常（Ｐ＞０．０５）。结论川芎嗪通过抑制α１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ而起到抗肺纤维化作用,丹参和氢可的作用次之。     

谷氨酰胺对NAFLD大鼠肠道紧密连接蛋白表达与定位的影响

目的：探讨谷氨酰胺对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的调控,及其对大鼠肠黏膜屏障的保护作用。方法建立NAFLD大鼠模型。实验分为正常组、模型组和谷氨酰胺组各12只,以第8周和第12周为时间点,观察肝脏病理学改变、记录肝指数,鲎试剂终点比色法检测内毒素水平,ELISA法测定TNF-α,westernblot法检测肠道occludin蛋白量,免疫组化染色明确蛋白定位及分布。结果病理证实高脂饮食诱导NAFLD鼠模成功。在第8周模型组和谷氨酰胺组肝指数、内毒素及TNF-α含量均高于正常组（3．14±0．76,3．07±0．65比2．84±0．55;0．213±0．019,0．194±0．010比0．120±0．014;25．76±3．54,23．65±2．78比7．84±1．55）;模型组和谷氨酰胺组差异无统计学意义（P＞0．05）。第12周时,与正常组比较,模型组和谷氨酰胺组上述指标升高明显（3．75±0．56,3．47±0．73比2．75±0．91;0．279±0．033,0．203±0．012比0．114±0．021;29．73±5．34,28．77±3．61比6．84±1．87,均P＜0．05）;谷氨酰胺治疗后血清内毒素水平的下降与模型组相比,差异有统计学意义（P＜0．05）。NAFLD大鼠存在肠道occludin蛋白量减少,谷氨酰胺具有上调其表达的作用。3组中occludin蛋白定位无明显区别,但其棕褐色染色强度及范围在正常组及谷氨酰胺组更强。结论谷氨酰胺能修复NAFLD大鼠肠黏膜屏障,其机制与降低TNF-α含量、上调肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达,进而改善内毒素血症等有关。     

A rabbit model of pediatric nonalcoholic steatohepatitis： The role of adiponectin

AIM： To create a rabbit model of pediatric nonalcoholic steatohepatitis （NASH） and to evaluate the role of adiponectin in the process. METHODS： Thirty-two specific pathogen-free male New Zealand rabbits were divided randomly into three groups： （1） the normal control group （n = 10） was fed with standard diet for 12 wk; （2） the model group A （n = 11）; and （3） model group B （n = 11） were fed with a highfat diet （standard diet ＋ 10% lard ＋ 2% cholesterol） for 8 and 12 wk, respectively. Hepatic histological changes were observed and biochemical parameters as well as serum levels of adiponectin, interleukin （IL）-6, IL-10 and tumor necrosis factor （TNF）-α were measured. RESULTS： Typical histological hepatic lesions of NASH were observed in both model groups described as liver steatosis, liver inflammatory infiltration, cytologic ballooning, perisinusoidal fibrosis and overall fibrosis. Compared with the normal control group, there were significant increases in model groups A and B in weight gain （1097.2 ± 72.3, 1360.5± 107.6 vs 928.0 ±58.1, P 〈 0.05, P 〈 0.01）, liver weight （93.81±6.64, 104.6±4.42 vs 54.4±1.71, P 〈 0.01）, Lg （ALT） （1.9±0.29, 1.84± 0.28 vs 1.60±0.17, P 〈 0.01）, and Lg （TG） （1.03 ±0.24, 1.16 ±0.33 vs 0.00 ±0.16, P 〈 0.01）. Weight gain was much more in model group B than in model group A （1360.5± 107.6 vs 1097.2 ±72.3, P 〈 0.05）. But, there was no significant difference between the two groups concerning the other indexes. Pro-inflammatory cytokines （IL-6 and TNF-α） increased in model group B compared with that of control and model group A （IL-6：1.86±0.21 vs 1.41 ±0.33, 1.38± 0.42, P 〈 0.01; TNF-α： 1.18±0.07 vs 0.66 ±0.08, 0.86 ±0.43, P 〈 0.01, P 〈 0.05）, whereas serum adiponectin and IL-10 decreased in model groups compared with that in the control （adiponectin： A： 21.87±4.84 and B： 21.48 ±4.60 vs 27.36 ±7.29, P 〈 0.05. IL-10： A： 1.72± 0.38 and B： 1.83 ±0.39 vs 2.26±0.24, P 〈 0.01）. Lg （TC） and the degree of liver fatty infiltration was an independent determinant of serum adiponectin level analyzed by stepwise multiple regressions, resulting in 29.4% of variances. CONCLUSION： This rabbit model produces the key features of pediatric NASH and may provide a realistic model for future studies. Adiponectin level partially reflects the severity of liver steatosis, but not the degree of liver inflammation.