肾阳虚大鼠股骨皮质骨差异蛋白质表达分析

目的比较分析肾阳虚证模型大鼠与正常大鼠股骨皮质骨差异表达蛋白质,从骨组织功能蛋白质角度初步探讨肾阳虚证的实质。方法 60只雄性WISTAR大鼠随机分为正常组和肾阳虚组,每组各30只,适应性喂养1周。肾阳虚组:臀部肌肉注射氢化可的松注射液2.5 mg/100 g,每日1次,自由饮水、饮食。正常组:自由饮食、饮水。注射造模干预15 d后继续观察3周。模型鉴定成功后分别获取肾阳虚组和正常组大鼠股骨皮质骨标本,进行总蛋白的提取制备。采用双向凝胶电泳(2-DE)技术展示2组大鼠的皮质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest软件分析2组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点。结果 2组皮质骨2-DE凝胶图谱可辨别蛋白点数目为470个;与正常组比较,肾阳虚组皮质骨中存在12个已知的差异表达蛋白,其中载脂蛋白A-I、α烯醇化酶和热休克蛋白60表达上调,原肌球蛋白异构体2α-3链、I型胶原α-1链、GDP解离抑制因子β、LOC683667蛋白、白细胞酪氨酸激酶受体、线粒体ATP合酶亚基α、膜联蛋白A3、丙酮酸激酶同工酶及蛋白质二硫键异构酶A3表达下调。结论股骨皮质骨12个蛋白表达改变可能与肾阳虚证的发生有关。     

IgA肾病肾阴虚证的血浆蛋白质双向凝胶电泳分析

目的初步观察IgA肾病肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离IgA肾病肾阴虚证患者、肾阳虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mscot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质。结果与正常人和IgA肾病肾阳虚证相比,在IgA肾病肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中绝对高表达的蛋白质斑点14个,绝对低表达的蛋白质斑点17个;定性差异表达分析发现IgA肾病肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中特异出现的蛋白质斑点9个,缺失的蛋白质斑点17个。结论同病异证患者血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对中医证候的发生机制进行阐释。     

金匮肾气丸对肾阳虚证模型大鼠股骨髁松质骨差异蛋白质表达的影响

目的探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证的可能作用机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组20只和造模组40只,将造模成功的38只大鼠再随机分为中药组和模型组各19只,中药组大鼠给予金匮肾气丸8. 44 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水3 ml灌胃,每日1次,连续3周。分别取正常组、模型组和中药组大鼠的股骨髁松质骨,进行总蛋白的提取与制备;采用蛋白质双向凝胶电泳技术展示各组大鼠股骨踝松质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest 8. 0软件分析各组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点。结果各组大鼠股骨髁松质骨双向凝胶电泳图谱的蛋白点数目均为552个;与正常组比较,模型组有23个差异表达的蛋白质;与模型组比较,中药组有16个差异表达的蛋白质。给予金匮肾气丸溶液后,肾阳虚模型大鼠股骨髁松质骨中原来表达上调的磷酸甘油酸激酶1及表达下调的14-3-3ζ蛋白、网钙蛋白3、原肌球蛋白异构体2α-3链、原肌球蛋白α-4链、原肌球蛋白异构体α-1链、40s核糖体蛋白sa、半乳糖凝集素1、线粒体ATP合成酶亚基α、膜联蛋白A1、GDP解离抑制因子1、Ⅰ型胶原α-1链、LOC683667蛋白、膜联蛋白A5、过氧化氧化还原蛋白2和蛋白质二硫键异构酶A3均出现表达趋势的反向调整。结论金匮肾气丸对肾阳虚证的调节可能涉及股骨髁松质骨结构构成、物质转运、能量代谢和细胞增殖与凋亡等方面。     

血府逐瘀汤对气滞血瘀证大鼠血清蛋白质组表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对气滞血瘀证模型大鼠血清蛋白质组表达的影响,初步探讨血府逐瘀汤在分子水平的作用机理.方法复合因素制作大鼠气滞血瘀证模型,采集正常大鼠、气滞血瘀证大鼠及血府逐瘀汤治疗组大鼠的血清,应用一种简单的方法去除血清中的白蛋白,利用双向凝胶电泳分离血清总蛋白,通过Image Master 2D Elite 6.01凝胶图像分析软件分析2-DE图谱,比较各组问蛋白表达谱的改变情况.结果正常组大鼠血清蛋白质点为(354±20),模型组大鼠血清的蛋白质点为(347±37),治疗组大鼠的蛋白质点数为(360±35),软件分析确定的差异蛋白点有7个,其中模型组大鼠血清与正常组相比有1个蛋白质下调,5个蛋白质上调,1个蛋白表达缺失,而给予血府逐瘀汤后可改善这些改变及缺失的蛋白质的表达水平.结论血府逐瘀汤治疗气滞血瘀证的作用机制可能与这些差异表达的蛋白有关,这为血府逐瘀汤作用的分子机理研究提供了新的思路.     

强骨宝1号对去卵巢骨质疏松大鼠皮质骨蛋白质组的影响

目的 从股骨皮质骨差异蛋白质组角度探讨去卵巢大鼠骨质疏松症发病及中药强骨宝1号干预的内在机制. 方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松症模型,设立假手术组、模型组及中药干预组,20周后行双能X线骨密度仪检查,确定造模成功后取股骨的皮质骨进行总蛋白质提取,2-DE电泳技术展示各组股骨皮质骨蛋白质组图谱,图像分析软件寻找各组间差异蛋...     

亚健康肾阴虚证的血浆蛋白质组学初步研究

目的:初步观察亚健康肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨亚健康的发生机制奠定基础.方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离亚健康肾阴虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQuest 软件对凝胶图象进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mseot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质.结果:获得了重复性和分辨性较好的血浆双向凝胶电泳图谱;在亚健康肾阴虚证血浆较正常人血浆表达量升高的蛋白质斑点11个,表达量降低的蛋白质斑点6个;选取其中表达量升高相差10倍以上的3个蛋白质斑点进行PMF鉴定,得到1个匹配精确的蛋白质(热休克蛋白27).结论:亚健康肾阴虚证血浆与正常人血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对亚健康的发生机制进行阐释,并将促进中医证候研究的拓展和深入.     

脾气虚证大鼠回肠组织蛋白质差异性表达的实验研究

目的采用蛋白质组学技术研究脾气虚证大鼠回肠组织蛋白的差异性表达。方法 37只大鼠随机分成3组,即正常对照组、脾气虚证模型组和利血平组。分别采用劳倦过度结合饮食不节和利血平注射液(1mg/mL)腹腔注射的方法建立脾气虚证动物模型,通过模糊数学方法鉴定后分离回肠组织,后采用双向电泳法分离差异表达的蛋白,凝胶银染后经选点、酶切和质谱分析,用MASCOT软件在蛋白质数据库中搜索肽质量指纹谱数据并确定蛋白质。结果脾气虚证模型组回肠组织蛋白质图谱中有3个蛋白点表达异常(P<0.05),利血平组回肠组织蛋白质图谱中有9个蛋白点表达异常(P<0.05)。结论脾气虚证的发生与白蛋白表达下调、胰蛋白酶和葡萄糖调节蛋白78表达上调有密切关系。     

健胃愈疡颗粒对乙酸性胃溃疡复发大鼠作用的蛋白质组学研究

目的分析健胃愈疡颗粒（JWYY）对乙酸性胃溃疡复发大鼠蛋白质表达谱的影响,寻找JWYY抗胃溃疡复发作用的相关蛋白。方法采用二维凝胶电泳（2-DE）分离JWYY处理组和JWYY未处理组大鼠胃组织的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,NCBInr及SWISS-PROT数据库搜索鉴定蛋白质。结果所获2-DE图谱分辨率高、重复性好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,其中JWYY处理组有8个蛋白质点表达上调,4个蛋白质点表达下调,大多数蛋白与溃疡复发的形成、生长、凋亡及免疫等环节相关。结论JWYY抗胃溃疡复发作用可能与多种蛋白直接或间接相关,这些蛋白质的鉴定及进一步研究有助于抗溃疡复发药物新型靶标的发现。     

早期糖尿病肾病不同证候的尿蛋白组学研究

目的:初步探讨尿液中蛋白的差异与早期糖尿病肾病不同中医证型之间的相关性。方法:对符合纳入标准的150例早期糖尿病肾病患者按中医辨证分型分为肝肾阴虚证组、气阴两虚证组和脾肾阳虚证组。用双向凝胶电泳(2-DE)结合质谱分析方法对3组患者尿蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果:在肝肾阴虚证高表达的蛋白质有:Nogo蛋白、单克隆抗体Ig M。在气阴两虚证高表达的有:动力蛋白、转铁蛋白、Ig Kappa链、和两种白蛋白。脾肾阳虚证高表达的蛋白质有:白蛋白(分子量52 047.8)、转甲状腺素蛋白、αl-抗胰蛋白酶。结论:这些差异蛋白与早期糖尿病肾病不同证候的形成有关,也为进一步研究证候实质提供依据。     

甲状腺功能亢进肝阳上亢证大鼠下丘脑组织蛋白质差异表达的观察

目的利用蛋白质组学方法,观察甲状腺功能亢进(简称"甲亢")肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑组织的双向凝胶蛋白图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法左甲状腺素钠(L-T4)和附子汤灌胃造成甲亢肝阳上亢证模型,应用蛋白质组学技术比较模型组与正常组中下丘脑的差异蛋白质,结合生物信息学对其进行分析鉴定。结果两组蛋白斑点总体分布相似,主要分布在等电点pI 3～8,分子量Mr 14.4～75kD;分析发现,模型组与正常组相比有18个蛋白质上调和24个蛋白质下调,进一步质谱鉴定,其中7个蛋白质分别为NSFL1辅助因子、硫氧还蛋白、泛素羧基末端水解酶同工酶L1、血小板活化因子乙酰基水解酶IB—γ亚单位、谷氨酸脱氢酶前体、二氢嘧啶酶相关蛋白2和微管蛋白。结论模型组与正常组相比,有18个蛋白质点上调,有24个蛋白质点下调,经质谱鉴定了其中部分蛋白质.蛋白质的变化可能与甲亢肝阳上亢证的形成密切相关。     

肾阴虚证和肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的比较研究

目的 本研究通过对肾阴虚证和肾阳虚证共同的血浆蛋白差异表达进行研究，挖掘肾虚证的本质。方法 对肾阴虚证、肾阳虚证和健康正常人进行蛋白芯片表达谱的比较研究。结果 选取典型肾阴虚证5例、肾阳虚证5例、正常健康人6例进行蛋白芯片检测，与正常健康人对比，获得2组间共同表达上调的差异蛋白BMP-5。结论 肾阴虚、肾阳虚证之间存在着共同的差异蛋白，这可能是2者均有肾虚的表现有关，这为探讨肾虚证的发生机制，特别是在蛋白水平的改变提供了依据。     

慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜蛋白质组与三仁汤治疗的实验研究

目的研究慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜的蛋白质表达,探讨慢性胃炎脾胃湿热证的相关发病机制,观察三仁汤治疗后慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜蛋白质的表达差异,探讨三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证作用机制。方法将36只SD雄性大鼠适应性喂养3天后,随机分为3组:正常对照组(对照组)、慢性胃炎脾胃湿热证模型组(模型组)、三仁汤治疗组(治疗组),每组12只。采用复合因素复制慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型,运用双向凝胶电泳分离大鼠胃黏膜蛋白,考马斯亮蓝染色,使用PDQuest8.0软件分析差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定仪进行蛋白鉴定。结果在对照组、模型组、治疗组凝胶图谱中检测到蛋白质斑点数分别为(1025±39)、(994±51)、(1087±33)个。经PDquest8.0软件分析,与对照组比较,模型组有差异表达蛋白质点74个,其中上调30个,下调44个;与模型组比较,治疗组有差异表达蛋白质点75个,其中上调49个,下调26个。成功鉴定了5个差异蛋白质点,分别为热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)、热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide-isomerase,PDI)、苹果酸脱氧酶(malate dehydrogenase,MDH)、未命名蛋白(unnamed protein)。结论慢性胃炎脾胃湿热证的发病机制可能与应激反应及能量代谢障碍有关,三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证的作用机制可能是调节胃黏膜蛋白质的差异表达。     

肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达变化

目的 :探讨肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达情况。方法 :将实验动物分为二组 :(1)正常对照组 ;(2 )肾阳虚证大鼠模型组 ,于第 12周留取尿标本。肾组织病理学检查、用Northernblot杂交检测皮质Ⅲ型胶原基因表达。结果 :肾阳虚证大鼠模型组 ,肾病理损伤 ,肾皮质Ⅲ型胶原mRNA表达上调。结论 :肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达明显上调。     

肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达变化

目的：探讨肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达情况。方法：将实验动物分为二组：(1)正常对照组；(2)肾阳虚证大鼠模型组，于第12周留取尿标本。肾组织病理学检查、用Northern blot杂交检测皮质Ⅲ型胶原基因表达。结果：肾阳虚证大鼠模型组，肾病理损伤，肾皮质Ⅲ型胶原mRNA表达上调。结论：肾阳虚证大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因的表达明显上调。     

天麻钩藤饮与高血压病肝阳上亢证方证相关的蛋白质组学初步研究

目的 揭示天麻钩藤饮与高血压病肝阳上亢证“方证相关”的现代生物学基础.方法 制作高血压痛肝阳上亢证细胞模型,用天麻钩藤饮含药血清干预细胞模型,利用双向凝胶电泳(2-DE)技术筛选差异表达的蛋白点.结果 高血压病肝阳上亢证组与健康对照组比较,差异蛋白有25个,其中,有13个蛋白上调,12个蛋白质下调;天麻钩藤饮组与高血压病肝阳上亢证组比较,差异蛋白有12个,其中,有5个蛋白上调,7个蛋白质下调.结论 基于细胞模型的中医“方证相关”蛋白质组学研究是可行的;调节这12个差异蛋白点,可能是天麻钩藤饮治疗高血压病肝阳上亢证疗效的重要分子基础.     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠脑雌激素α受体蛋白水平的表达

目的研究经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠不同脑区雌激素α受体蛋白水平的表达差异,探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法以电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体的蛋白表达量及定位分布模式。结果模型组大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体蛋白表达水平与正常组相比有明显降低(P0.01),经前平颗粒干预后大鼠下丘脑和顶区皮质中该受体表达水平较模型组明显升高(P0.01,P0.05)。结论 PMS肝气逆证模型大鼠会出现下丘脑和顶区皮质雌激素α受体蛋白表达下调,经前平颗粒干预后可改变异常下调状态。     

镇肝熄风汤对脑出血肝阳化风证患者外周血单个核细胞蛋白质组学的影响

目的:观察镇肝熄风汤治疗脑出血肝阳化风证(方证相应)前后外周血单个核细胞蛋白质双向凝胶电泳图谱的动态变化,探讨脑出血肝阳化风证的蛋白质表达规律,寻找镇肝熄风汤所作用的蛋白及疗效机制.方法:利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立脑出血(10例)肝阳化风证镇肝熄风汤治疗10日前后及健康对照组(10例)外周血单个核细胞蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪获得肽质量指纹图谱.用Mascot软件搜索数据库鉴定部分差异蛋白质.结果:筛选出22个差异表达蛋白质点,其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较有20个差异表达蛋白质点,8个表达下调,7个表达上调,5个缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤治疗后与健康对照组比较4个表达下调,5个表达上调,2个缺失,9个表达与健康人无明显差异;在挖取的20个蛋白质点中有8个得到鉴定,其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较6个表达下调,1个表达上调,1个缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤治疗后与健康对照组比较2个表达下调,1个蛋白缺失,5个表达与健康人无明显差异.结论:初步建立了脑出血肝阳化风证外周血单个核细胞蛋白双向凝胶电泳图谱,初步鉴定了部分与脑出血肝阳化风证相关的蛋白及镇肝熄风汤可能的多靶点蛋白调节机制,这些蛋白功能涉及细胞代谢、信号转导、电子传递、细胞骨架等.     

早泄肾阳虚证血清蛋白质组学分析及蛋白质相互作用网络构建

目的鉴定早泄肾阳虚证血清蛋白质组,从蛋白质相互作用角度探索肾阳虚证发病机制。方法分别取4例早泄肾阳虚证患者及4名健康人外周血,提取血清蛋白,获取肾阳虚证相关蛋白质组,采用同位素标记相对和绝对定量技术鉴定肾阳虚证血清蛋白质组,采用STRING数据库构建肾阳虚证蛋白质相互作用网络,对各网络中蛋白质功能进行生物信息学分析。结果共鉴定血清蛋白质总数238个,其中有定量信息的162个。筛选差异表达蛋白质9个,其中1个上调,8个下调。肾阳虚证蛋白质相互作用网络由72个蛋白质节点和283对蛋白质相互作用构成,并可以聚为16个模块,其中蛋白质节点≥3的模块有10个。每个模块都有一个核心蛋白,其中C3、C5、C1S和MASP2为补体系统的组分蛋白,主要参与补体激活生物学过程。结论早泄肾阳虚证差异蛋白质相互作用网络中蛋白模块的功能主要富集于补体激活生物学过程,提示以补体激活途径异常为主导的免疫功能紊乱可能是肾阳虚证的主要病理机制之一。     

慢性乙型病毒性肝炎中医虚证的蛋白质组学规律初探

目的 运用蛋白质组学方法,寻找血浆中差异表达的蛋白质,分析其与慢性乙肝中医虚证(肝肾阴虚证、脾肾阳虚证)证候的对应关系,初步探索出慢性乙肝中医虚证的蛋白质组学规律,为中医临床辨识慢性乙肝虚证提供可供参考的客观化指标.方法 通过双向凝胶电泳,获得血浆蛋白质( Two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱,经质谱分析鉴定出差异表达的蛋白质.结果 ①各组血浆蛋白2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinum V5.0软件分析,各组均可获得重复性稳定的蛋白点450±100个.②归纳总结图谱发现,慢性乙肝中医二虚证与正常人相比存在明显的规律性差异,表现为蛋白点3、8、9(分别为APO -A2、Haptoglobin HP)表达量均明显下降.经质谱分析鉴定得出:蛋白点3为载脂蛋白A2( Apo-A2),蛋白点8、9为结合珠蛋白.结论 ①成功建立起慢性乙肝血浆蛋白质组2-DE图谱.②归纳总结慢性乙肝中医二虚证APO-A2、HP表达量均明显下降,提示慢性乙肝中医二虚证具有相同的蛋白质变化规律,推测这些相同的蛋白质变化可能与慢性乙肝各中医虚型证型的形成机制有关.     

肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的研究

目的观察肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的变化,为肾阳虚证的客观化研究提供依据。方法分别选取典型的肾阳虚证5例、正常健康人6例纳入研究,以抗体芯片分析2组人群血浆蛋白质表达谱的差异。结果肾阳虚证组与正常对照组之间存在差异表达上调的蛋白共14条,其中与生长发育生殖能力相关的为Src蛋白酪氨酸激酶(Csk)、卷曲蛋白1和4(FZD-1,FZD-4)、脑源性神经营养因子(BDNF)、激活素A受体ⅡA型(ActRⅡA)、骨形态发生蛋白-5(BMP-5)、潜在转化生长因子β结合蛋白1(LTBP-1)、成纤维细胞生长因子样受体1(FGFRL1),与免疫系统相关的为CXC趋化因子受体3(CXCR3)、白细胞介素27受体α(IL-27Rα)、脂多糖结合蛋白(LBP)、白细胞介素13受体Ⅱα(IL-13Rα2)、集落刺激因子-1(CSF-1)、血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1)、ActRⅡA。结论肾阳虚证血浆蛋白质表达谱的变化涉及生长发育生殖能力、免疫应答、细胞凋亡等,与中医肾阳虚证所表现的腰膝痠软、耳鸣耳聋、发脱齿松、性欲减退等症状相符。