微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞凋亡及对Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响

目的：研究微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞活力及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响,为探讨其诱导凋亡的途径提供依据。方法：分别用不同浓度（1、3.75、7.5、15、30、50 μg/mL）微囊藻毒素-LR处理人正常食管上皮HEEC细胞24 h,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,计算半数抑制浓度（IC₅₀）以确定后续实验的MC-LR浓度。进一步用0、6、12、24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞,采用PI-Annexin V双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,3.75~50 μg/mL的微囊藻毒素-LR均可使人正常食管上皮细胞活力降低（P均 < 0.01）,测定得出IC₅₀为24 μg/mL。因此,选择6、12和24 μg/mL的MC-LR用于后续实验。用6~24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞24 h后,细胞凋亡率升高（P < 0.05或P < 0.01）,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加（P均 < 0.01）。结论：微囊藻毒素-LR可以诱导人正常食管上皮细胞凋亡,且可能与细胞凋亡相关的信号分子Caspase-3和Caspase-9的激活有关。     

亚硒酸钠与白藜芦醇联用对肺癌细胞抗氧化和细胞周期蛋白的影响

目的：研究亚硒酸钠与白藜芦醇联用对肺癌细胞抗氧化和细胞周期蛋白的影响,从而探讨其对肺癌细胞存活和凋亡的作用。方法：采用细胞培养技术培养肺癌A549细胞,分别将细胞分为对照组、亚硒酸钠组、白藜芦醇组、亚硒酸钠和白藜芦醇联用组,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率和ROS水平,用酶标仪检测谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）表达水平,Western blot法检测细胞周期蛋白（P-Rb）表达水平。结果：与单独处理组相比,亚硒酸钠与白藜芦醇联用可降低肺癌A549细胞的存活率,促进其凋亡,且与对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）;同时,与单独处理组相比,联用组能显著降低GSH表达水平（P < 0.05）和显著增加MDA （P < 0.05）和ROS表达水平（P < 0.05）,联用组可以显著降低周期蛋白（P-Rb蛋白）的表达水平（P < 0.05）。结论：亚硒酸钠和白藜芦醇的联用对肺癌细胞有抑制增殖、促进凋亡的作用,其机制可能与增加氧化损伤及降低P-Rb蛋白表达有关。     

PM2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因表达的影响

目的： 探讨PM_2.5对人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡基因表达的影响。方法： 利用CCK-8试剂盒测定PM_2.5混悬液对HK-2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;实验设阴性对照组、PM_2.5混悬液低剂量（10 μg/mL）、高剂量（50 μg/mL）染毒组和阳性对照组（Cr⁶⁺ 10 μmol/L）,分别对HK-2细胞处理24 h后利用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot检测癌基因（c-myc、c-fos、p53）和凋亡基因（Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2） mRNA和蛋白的表达水平。结果： PM_2.5混悬液对HK-2细胞的IC₅₀为95.98 μg/mL;经PM_2.5混悬液染毒24 h,qPCR结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义（P < 0.01）。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论： PM_2.5可引起HK-2细胞中部分癌基因表达上升、抑癌基因表达下降、促凋亡基因表达上升和抑凋亡基因表达下降,提示PM_2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因具有一定的促进与激活作用。     

氟达拉滨与TRAIL联用诱导肺癌细胞凋亡及 其作用机制

目的：研究氟达拉滨（Fludarabine）在低浓度下与TRAIL联合处理是否能够诱导人肺癌A549细胞发生凋亡,并探讨其作用机制。方法：实验设对照组、Fludarabine组、TRAIL组、Fludarabine和TRAIL联合组,CCK-8法检测Fludarabine与TRAIL联合处理时对A549细胞及人脐静脉内皮细胞（HUVEC,人正常细胞作为对照）增殖活力的影响,流式细胞术检测A549细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bcl-xl、caspase-8、caspase-3、JNK和p38的表达情况。结果：25、50 μmol/LFludarabine或50 ng/mL TRAIL单独处理时对A549及HUVEC细胞增殖活力均无明显影响（P均>0.05）,两者联合处理后对A549细胞增殖活力抑制率分别为30.9%和44.9%。Fludarabine或TRAIL单独使用时对A549细胞凋亡无明显影响,联合处理时可使A549细胞凋亡率达到89.3%。与对照组、Fludarabine组和TRAIL组相比,Fludarabine与TRAIL联合处理可使A549细胞中Survivin、Bcl-2、Bcl-xl表达降低（P均<0.05）,促进caspase-8及caspase-3的激活,并能促进JNK和p38的磷酸化（P均>0.05）。结论：Fludarabine与TRAIL联合处理可促进A549细胞凋亡。     

氯喹通过激活P38MAPK通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的：研究氯喹对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并初步研究其可能的机制。方法：体外培养HepG2细胞,采用MTT法检测不同浓度（0、10、20和40 μmol/L）氯喹作用不同时间（24、48和72 h）后对细胞增殖的影响;用DAPI染色观察氯喹处理细胞24 h后细胞核的变化;流式细胞术检测氯喹对HepG2细胞凋亡的影响;Western blot技术检测氯喹对HepG2细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、P-P53、P38MAPK和P-P38MAPK蛋白表达的影响。结果：与对照组比较,在上述3个时间点10、20、40 μmol/L氯喹（10 μmol/L氯喹作用24 h组除外）对人肝癌HepG2细胞的增殖均有明显抑制作用（P均 < 0.05）;荧光显微镜下发现,10、20、40 μmol/L氯喹处理24 h后均可引起HepG2细胞不同程度的核浓集、固缩等典型凋亡形态变化;流式细胞术结果提示10、20、40 μmol/L氯喹能诱导HepG2细胞凋亡（P均 < 0.05）;Western blot结果显示20和40 μmol/L氯喹作用HepG2细胞后,P-P53、P-P38MAPK、剪切后活化型Caspase-3和Bax蛋白表达量增加（P均 < 0.05）,Bcl-2表达下降,Caspase-3和P38MAPK表达无明显变化（P > 0.05）。结论：氯喹能够抑制人肝癌HepG2细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与P38MAPK通路有关。     

沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的： 探讨沉默c-fos基因对PM_2.5染毒人支气管上皮细胞（HBE细胞）癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法： 采用RNA干扰技术，根据GenBank提供的c-fos mRNA序列，设计合成shRNA干扰序列，将重组慢病毒载体转染HBE细胞，构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象，用浓度为50 μg/mL的PM_2.5混悬液染毒24 h，同时设立阴性对照组，qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果： 转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中，经qPCR和Western blot检测发现，与对照组HBE细胞相比，c-fos mRNA表达水平下降70.1%，c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM_2.5染毒HBE细胞后，与未染毒的对照组比较，c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%，差异均有统计学意义（P < 0.05），c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%，p53 mRNA表达水平下降12.27%，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PM_2.5染毒c-fos基因沉默细胞后，与未染毒组比较，c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%，Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%（P < 0.05），p53 mRNA下降53.39%（P < 0.01）。此外，c-fos基因沉默细胞染毒后，与HBE正常细胞染毒后比较，c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降（P < 0.05）；仅c-myc蛋白表达下降（P < 0.01）。结论： 成功构建c-fos基因沉默细胞株；PM_2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高，c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM_2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。     

StAR基因高表达对DEHP致MCF-7细胞凋亡作用的影响

目的：构建类固醇合成急性调节蛋白（StAR）基因高表达载体,建立StAR基因高表达细胞,研究StAR基因高表达对邻苯二甲酸二-（2-乙基己）酯（DEHP）毒性作用的影响。方法：根据GenBank提供的StAR基因cDNA序列设计引物,PCR扩增StAR基因并将其克隆到慢病毒载体中,构建StAR基因高表达MCF-7细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞。用不同剂量DEHP染毒MCF-7细胞和StAR基因高表达MCF-7细胞24 h,检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：基因测序证明构建的StAR基因高表达载体序列正确,荧光定量PCR检测StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StAR mRNA表达水平升高591.9倍（P < 0.01）,Western blot实验结果显示,StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StAR蛋白表达水平升高190%（P < 0.01）。不同剂量DEHP染毒StAR基因高表达细胞后,荧光定量PCR结果显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平较对照组（0 mmol/L DEHP）显著升高,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。Western blot实验显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平比对照组显著升高,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：本实验成功构建了StAR基因高表达细胞,DEHP处理后StAR基因高表达细胞的凋亡相关基因表达水平较MCF-7细胞升高,提示StAR基因具有促进DEHP致细胞凋亡作用。     

沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的： 探讨沉默c-fos基因对PM_2.5染毒人支气管上皮细胞（HBE细胞）癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法： 采用RNA干扰技术，根据GenBank提供的c-fos mRNA序列，设计合成shRNA干扰序列，将重组慢病毒载体转染HBE细胞，构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象，用浓度为50 μg/mL的PM_2.5混悬液染毒24 h，同时设立阴性对照组，qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果： 转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中，经qPCR和Western blot检测发现，与对照组HBE细胞相比，c-fos mRNA表达水平下降70.1%，c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM_2.5染毒HBE细胞后，与未染毒的对照组比较，c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%，差异均有统计学意义（P < 0.05），c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%，p53 mRNA表达水平下降12.27%，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PM_2.5染毒c-fos基因沉默细胞后，与未染毒组比较，c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%，Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%（P < 0.05），p53 mRNA下降53.39%（P < 0.01）。此外，c-fos基因沉默细胞染毒后，与HBE正常细胞染毒后比较，c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降（P < 0.05）；仅c-myc蛋白表达下降（P < 0.01）。结论： 成功构建c-fos基因沉默细胞株；PM_2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高，c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM_2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合紫杉醇抑制宫颈癌细胞增殖的体外实验

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效果及其机制。方法：设置空白对照组、紫杉醇（10 nmol/L）、SAHA（10 μmol/L）、紫杉醇（10 nmol/L）+SAHA（10 μmol/L）联合组，采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测各组HeLa细胞的生长抑制率，计算紫杉醇对HeLa细胞的IC₅₀。RT-PCR法检测各组HeLa细胞中抑癌基因p27 mRNA的相对表达，Western blot检测HeLa细胞乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达。结果：紫杉醇、SAHA、紫杉醇+SAHA联合组处理HeLa细胞24 h的相对抑制率分别为25.93%±5.32%、46.38%±3.66%、54.27%±4.02%，联合组抑制率与紫杉醇组相比明显升高，差异具有统计学意义（P < 0.01）；48 h的抑制率分别为29.12%±3.09%、65.26%±3.03%、77.02%±3.86%，联合组抑制率最强，显著高于SAHA组和紫杉醇组（P < 0.01）。经SAHA预处理后紫杉醇对HeLa细胞的IC₅₀较单独紫杉醇组均显著下降（P < 0.05或P < 0.01）。紫杉醇组、SAHA组、紫杉醇+SAHA联合组细胞中p27 mRNA的相对表达量分别为5.845±0.548、0.978±0.117和10.601±0.673，乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的相对表达分别为0.878±0.068、1.148±0.018、1.282±0.033，联合组中表达量均显著高于SAHA组和紫杉醇组（P均 < 0.01）。结论：SAHA联合紫杉醇在体外能显著抑制宫颈癌细胞HeLa的增殖，增强组蛋白乙酰化水平，诱导抑癌基因的表达。     

纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞辐射敏感性的影响

目的：研究纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞（A549/DDP）辐射敏感性的影响。方法：采用细胞增殖抑制实验确定γ射线半数抑制剂量和纳米氧化铈的使用浓度,细胞集落形成实验检测γ射线和纳米氧化铈处理后的细胞存活情况。将细胞分为阴性对照,γ射线照射组,纳米氧化铈低、中、高浓度组（分别加入0.000 5、0.05和5 μmol/L的纳米氧化铈处理后,再进行照射）,采用流式细胞术进行细胞凋亡率、细胞周期和胞内pH值检测。结果：通过细胞增殖抑制实验,确定γ射线诱导A549/DDP细胞半数抑制剂量为25 Gy。细胞集落形成实验观察发现,与照射组相比,纳米氧化铈低浓度组细胞的SF₂降低、a/b比值和增敏比升高。流式细胞术检测发现,纳米氧化铈低浓度组细胞凋亡率增加（t=5.42,P < 0.05）;纳米氧化铈低、中、高浓度组的S期阻滞明显（t=3.14、4.08、6.81,P < 0.05）;纳米氧化铈低、高浓度组的胞内pH值升高（t=2.86、4.93,P < 0.05）。结论：低浓度纳米氧化铈对于体外培养的A549/DDP细胞具有一定的辐射增敏作用。     

基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响

目的 基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。方法 建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol，将细胞分为pcDNANC组（转染pcDNA-NC空白载体）、pc DNA-SMAC组（转染pc DNA-SMAC载体）、siRNA-NC组（转染siRNANC空病毒载体）和siRNA-SMAC组（转染siRNA-SMAC慢病毒载体）。qRT-PCR法检测细胞中SMACmRNA表达；MTT法检测细胞敏感度；克隆实验法检测细胞增殖能力；Transwell法检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡能力；Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低（P<0.05）。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高（P<0.05）。和siRNA-NC组相比，siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低（P<0.05）。和pcDNA-NC组相比，pcDNA...     

白花檵木对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的 探讨白花檵木粗提物对肺腺癌A549细胞体外增殖的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度白花檵木粗提物对A549细胞增殖的影响;集落形成实验检测白花檵木粗提物对A549细胞克隆生长能力的影响;流式细胞Annexin V-APC/PI双染法检测白花檵木粗提物诱导A549细胞凋亡的情况;免疫印迹法检测白花檵木粗提物处理后...     

榄香烯乳对人肺腺癌 A549 细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用.IC软件计算10％的细胞抑制浓度(IC10).免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化.结果:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性.榄香烯乳作用24h后IC10为43.49μg/ml,Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有药物浓度相关性.结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,榄香烯乳可上调凋亡相关蛋白表达、诱导凋亡.     

紫杉醇和顺铂对EGFR野生型与突变型肺腺癌细胞的杀伤作用比较及其分子机制

目的 探讨化疗相关基因表达水平与EGFR突变状态的关系及其对化疗疗效的影响。方法 采用MTT法分别检测紫杉醇、顺铂对A549与HCC827细胞的24 h半数抑制浓度（IC50）;比较紫杉醇、顺铂单独及联合作用于A549与HCC827细胞杀伤作用的差异;荧光定量PCR法检测紫杉醇、顺铂作用前后A549与HCC827细胞化疗相关基因（BRCA1、ERCC1、TUBB3）的表达水平。结果 紫杉醇对A549与HCC827细胞24 h的IC50分别为100和70 μg/ml,顺铂对两种细胞的IC50分别为40和50 μg/ml。单独作用时,紫杉醇对HCC827细胞的杀伤作用明显高于A549细胞（P<0.05）;顺铂对A549细胞的杀伤作用明显高于HCC827细胞（P<0.05）;紫杉醇和顺铂联合作用对A549和HCC827细胞的杀伤作用差异无统计学意义（P>0.05）,且均表现为单纯相加作用（Q=1.03, 1.06）。HCC827细胞中BRCA1基因表达明显高于A549细胞（P<0.05）;顺铂作用于A549细胞后,其ERCC1基因表达明显升高（P<0.05）。结论 紫杉醇、顺铂单独作用对EGFR野生型与突变型肺腺癌细胞杀伤作用有明显差异,而两者联合无明显差异,可能与BRCA1基因的表达有关;EGFR野生型比突变型肺腺癌细胞更容易对顺铂出现耐药。     

白藜芦醇对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对人非小细胞肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响。方法 采用50 μmol/L白藜芦醇作用于非小细胞肺癌A549细胞（Res组）,对照组细胞用2% FBS的DMEM培养,培养24 h后采用倒置显微镜观察两组A549细胞形态的变化,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞自噬小体的形成,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、活化caspase-3的表达。结果 A549细胞培养24 h后, 倒置显微镜下可见Res组细胞形状较对照组变圆,细胞排列稀疏;激光扫描共聚焦显微镜下可观察到Res组A549细胞胞浆内大量自噬体形成。Western blot检测结果显示,与对照组比较,Res组A549细胞自噬相关蛋白Beclin 1、LC3 Ⅱ/Ⅰ表达升高（0.151±0.032 vs 0.093±0.013,P=0.011;3.644±0.122 vs 1.903±0.054,P＜0.001）,p62蛋白表达下降（0.032±0.002 vs 0.061±0.005,P=0.021）;促凋亡相关蛋白Bax、活化caspase-3表达升高（0.633±0.061 vs 0.423±0.053,P=0.011;0.154±0.004 vs 0.111±0.011,P=0.002）,而抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下降（2.437±0.055 vs 3.503±0.138,P＜0.001）。结论 白藜芦醇可通过促进非小细胞肺癌A549细胞过度自噬而诱导细胞凋亡。     

防己诺林碱对肺癌H1299和A549细胞的作用及其分子机制研究

目的 探究防己诺林碱在肺癌中的作用及其分子机制。方法 MTS法检测经10、15、20、30、40和60 μM/L防己诺林碱处理的肺癌H1299和A549细胞的增殖情况,通过Caspase3、Caspase8和Caspase9活性检测试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。Western blot检测MAPK信号通路(p-Akt、PI3K、mTOR和Akt蛋白)、增殖和转移(MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1和P21蛋白)、周期和凋亡(Cyclin D2、Bcl2、MCL-1、Bax和p53蛋白)相关蛋白的表达情况,通过Real-time PCR检测PI3k、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2、MCL-1、Bax、Bcl2和TP53基因表达情况。结果 防己诺林碱会抑制肺癌H1299和A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase3、Caspase8和Caspase9酶活性。经防己诺林碱处理后,PI3K、p-Akt、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2蛋白表达降低,P21、MCL-1、Bax和p53蛋白表达升高,并且表现为剂量依赖性,但对Akt蛋白表达无影响;PI3K、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2基因表达降低,TP53、MCL-1和Bax基因表达增加。结论 防己诺林碱通过调控MAPK信号通路、增殖和转移、周期和凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Sevoflurane inhibits proliferation, induces apoptosis, and blocks cell cycle progression of lung carcinoma cells

Purpose: Sevoflurane, an inhalational anesthetic, is used extensively during lung cancer surgery. However, the effect of sevoflurane on growth of lung carcinoma cells remains unclear. The purpose of this study is to investigate effects on proliferation, apoptosis, and cell cycling in the A549 human lung adenocarcinoma cell line. Methods: A549 cells were treated with 1.7%, 3.4%, and 5.1 % sevoflurane for 2, 4, and 6 hours. Cell proliferation was evaluated by the MTT assay and colony formation assay. Apoptosis and cell cycle was analyzed by flow cytometry. Expression of X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP), survivin, Bcl-2, Bax, caspase-3, cyclin A, cyclin B1, and cdc2 was measured by Western blotting. Results: Sgnificant inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis were found in A549 cells after sevoflurane treatment. Simultaneously, expression of XIAP and survivin was surpressed, while that of caspase-3 increased significantly, but Bcl-2 and Bax were not altered. Sevoflurane caused cell cycle arrest at the G2/M phase. At the same time, data revealed that cyclin A, cyclin B1, and cdc2 expression was down-regulated after sevoflurane treatment. Conclusion: This study demonstrated that sevoflurane inhibited proliferation, and induced apoptosis in human lung adenocarcinoma A549 cells, associated with down-regulated expression of XIAP and suvivin, and activating caspase-3.     

多西他赛诱导肺腺癌A549/DTX细胞株的建立及耐药机制分析

目的 建立人肺腺癌细胞A549多西他赛（DTX）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法 采用逐步增加多西他赛浓度、间歇诱导的方法,建立人肺癌A549/DTX体外耐药细胞模型;MTT法检测A549/DTX的耐药特性;流式细胞仪比较多西他赛对耐药细胞株A549/DTX及亲本细胞株A549凋亡的影响;Western blot分析多西他赛作用后两种细胞凋亡调节因子Bc1-2、Bax表达差异。结果 MTT显示A549/DTX的多西他赛耐药指数为18.5;流式细胞分析显示经12.5、25、50 μg/L多西他赛作用24 h后,A549/DTX的细胞凋亡率为(6.2±4.1)％、(13.6±2.7)％、(20.5±5.1)％,A549细胞凋亡率为(15.7±3.5)％、(28.5±2.9)％和(33.1±4.8)％,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）;Western blot显示,与A549相比,A549/DTX细胞Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白明显降低(P＜0.01)。结论 逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的A549/DTX细胞株,并认为凋亡受抑是A549/DTX的耐药机制之一,与Bcl-2表达上调、Bax表达下调相关。     

Testin在非小细胞肺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Testin基因(TES)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞株中的表达及其对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法:收集2015年1月至2015年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院手术切除的27例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,用Western blotting法检测癌组织和癌旁组织,以及正常人胚肺成纤维细胞株MRC5和肺癌细胞株A427、A549、H1299、LK2、PC9和SW900中TES蛋白的表达水平.应用短发卡RNA(shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰TES基因的表达,并进一步检测TES低表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cas-pase-3的表达.结果:在NSCLC组织和细胞株中TES蛋白的表达明显下降(均P＜0.05).shTES干扰A549细胞后,TES mRNA和蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.05).抑制TES表达显著增强A549细胞的增殖[(2.75±0.04) vs (1.79±0.06),P＜0.05]、迁移[(52.3±2.6)％s(19.7±1.4)%,P＜0.05]和侵袭能力[(31.2±3.9)％vs(14.5±4.1)％,P＜0.05],同时降低了细胞凋亡率[(8.2±1.1)％s(23.1±1.7)％,P＜0.05].TES低表达使A549细胞Bax和Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:TES在NSCLC组织中呈低表达,TES表达下调具有促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡等生物学效应,其有可能成为肺癌治疗一个新靶点.