黑灵芝多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究黑灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法用不同浓度的黑灵芝多糖作用于正常的和LPS活化的腹腔巨噬细胞;测定巨噬细胞代谢MTT活力;Griess法测定NO的产生;ELISA法检测巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的分泌水平。结果黑灵芝多糖对细胞代谢MTT活力有增强作用;在20～160mg·L-1范围内,多糖呈剂量依赖性地促进正常的巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β,增强免疫;而巨噬细胞经LPS激活后,与LPS组比较,多糖不同程度地抑制NO、TNF-α、IL-1β的过量分泌。结论黑灵芝多糖能有效地增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫,可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的诱导作用。     

氯沙坦通过降低ADMA水平诱导血管内皮保护作用

目的本实验拟观察在培养的人脐静脉内皮细胞,氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管内皮活化的保护作用是否与降低非对称二甲基精氨酸(ADMA)水平有关。方法用不同浓度的AngⅡ(10-9~10-6mol.L-1)孵育不同时间(6~48 h),并加入不同浓度的氯沙坦(1、3、10μmol.L-1)预处理1 h,检测细胞培养上清液中的ADMA、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,细胞中蛋白甲基转移酶(PRMT)蛋白表达、二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)和活化蛋白(AP-1)活性。结果AngⅡ呈浓度和时间依赖性增加PRMT的表达,AngⅡ(10-6mol.L-1,24 h)显著增加培养液中ADMA、TNF-α水平,减少NO的生成,降低细胞DDAH活性,增加细胞AP-1活性。氯沙坦可拮抗AngⅡ所致的上述效应。结论这些结果提示氯沙坦诱导的血管内皮细胞保护作用可能与降低ADMA水平有关。     

吲哚硒对免疫性肝损伤小鼠一氧化氮和炎性细胞因子的影响

目的　研究吲哚硒(IND -Se)对免疫性肝损伤小鼠的影响。方法　建立BCG+LPS诱导免疫性肝损伤小鼠模型,分光光度法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotrans ferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotrans ferase,AST)活性,Griess法检测血清中NO水平,放免法检测TNF α含量, MTT法检测腹腔巨噬细胞培养上清液中IL 1水平。结果　IND Se(5、10、20mg·kg-1 )灌胃给药可明显降低血清中ALT、AST活性,减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润;进一步研究发现IND Se可降低血清中升高的NO和TNF -α水平,抑制免疫性肝损伤小鼠腹腔巨噬细胞TNF -α和IL-1的产生。结论　IND Se可减轻免疫性肝损伤小鼠的病理改变,其机制与降低血清NO和TNF- α水和抑制腹腔巨噬细胞炎性细胞因子的产生有关。     

三甲氧基二苯乙烯对小鼠巨噬细胞产肿瘤坏死因子-α及细胞核因子-κB活性的作用研究

目的研究三甲氧基二苯乙烯（BTM）对小鼠巨噬细胞经脂多糖（LPS）诱导后产生肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及细胞核因子-κB（NF-κB）活化的调控作用。方法培养RAW246．7小鼠巨噬细胞,加入不同浓度的BTM或白藜芦醇,再加入LPS活化细胞,收集细胞上清液用L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性,制作细胞爬片用免疫细胞化学法检测巨噬细胞中NF-κB的表达。结果BTM和白藜芦醇本身对L929细胞无细胞毒性;经不同浓度BTM和白藜芦醇处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平及表达NF-κB的阳性率呈剂量依赖性减少,BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α及表达NF-κB的能力大于白藜芦醇,巨噬细胞产生TNF-α的活性及NF-κB的阳性细胞率均与药物浓度呈负相关,TNF-α的活性和NF-κB的阳性细胞率呈正相关。结论BTM和白藜芦醇在浓度为5～80μmol／L范围内,呈浓度依赖性地通过抑制NF-κB的活化来抑制TNF-α的产生,且BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α和NF-κB活化的能力犬于白藜芦醇。     

广西山银花绿原酸体外抗炎作用及分子机制研究

目的研究广西山银花绿原酸体外抗炎效应并探讨其分子机制。方法分离大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macro-phages,PMΦ),MTT比色法分析绿原酸对PMΦ生长活性的影响,LPS长时间刺激PMΦ,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)含量,用PGE2的含量表示COX-2的活性;A23187短时间刺激PMΦ,放射免疫分析法测定培养上清液6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量,以此表示COX-1的活性。结果绿原酸在31.25～1 000 mg.L-1范围内对细胞无抑制作用;除绿原酸50 mg.L-1组TNF-α含量与LPS刺激组无统计学意义外,其余各浓度组TNF-α、IL-6及PGE2含量与LPS刺激组比较差异有显著性,呈剂量依赖性;绿原酸体外低浓度抑制6-keto-PGF1α生成,高浓度则诱导6-keto-PGF1α生成。结论绿原酸具有体外抗炎作用。其作用机制可能与抑制TNF-α、IL-6等炎症因子的活化以及影响花生四烯酸(AA)代谢有关。     

来氟米特对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL—1，IL—6和TNF—α产生的动态影响

目的:探讨来氟米特(leflunomide,LEF)对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL-1,IL-6和 TNF-α分泌的影响及其抗炎、抗类风湿的可能作用机制.方法:大鼠足跖皮下注射Freund完全佐剂诱导关节炎模型;LEF灌胃后分次获取腹腔巨噬细胞,其培养上清液中IL-1,IL-6和TNF-α活性采用ELISA法或生物法测定.结果:佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL-1,IL-6和TNF-α分泌较正常对照组明显升高;LEF对由 LPS诱导产生的 IL-1和 TNF-α有明显的抑制作用,作用产生快;LEF(10,25 mg/kg)在应用21天后对IL-6的分泌也有明显抑制作用.结论:来氟米特具有抑制佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞 IL-1,IL-6和 TNF-α分泌水平的作用.     

吡拉米司特在大鼠急性肺损伤模型中降低PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡有关

目的观察PDE4活性与TNF-α/IL-10平衡在脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤模型(ALI)中相互关系,探讨选择性磷酸二酯酶4抑制剂吡拉米司特(piclamilast)对ALI的作用及机制。方法脂多糖(LPS)诱导大鼠ALI模型,设对照组、模型组、吡拉米司特组(1、3、10mg.kg-1)和地塞米松组(1mg.kg-1),常规细胞形态学检测肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中中性粒细胞的浸润情况,比色法测定BALF中超氧阴离子自由基(O2.)和中性粒细胞髓过氧化酶(MPO),ELISA法检测肺组织中TNF-α和IL-10含量,高效液相(HPLC)法测定肺组织中PDE4活性。结果①吡拉米司特(1、3、10mg.kg-1)灌胃给予能够抑制BAL中MPO、O2.的增加,改善LPS诱导的大鼠ALI模型BALF中的炎症细胞聚集和肺水肿程度,②吡拉米司特可抑制LPS诱导的大鼠ALI肺组织TNF-α上升(P<0.05～0.01),并能明显提高LPS引起的大鼠ALI肺组织IL-10分泌下降,③大鼠ALI模型肺组织中PDE4活性明显上升(P<0.01),吡拉米司特预处理可抑制PDE4活性的上升,而且其对PDE4活性抑制性变化与TNF-α/IL-10比值的变化基本一致。地塞米松1mg.kg-1也能降低TNF-α和升高IL-10水平,调节TNF-α/IL-10平衡关系,但DXM不能抑制PDE4活性的升高。结论TNF-α/IL-10可能是ALI病理生理学的一对重要的平衡性细胞因子。吡拉米司特可能通过抑制PDE4活性,调节TNF-α/IL-10平衡改善LPS诱导的大鼠ALI。     

脂多糖对肺泡巨噬细胞自噬水平的影响

目的观察脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞(NR8383)后,对细胞自噬水平的影响。方法 将体外培养的NR8383细胞分成LPS处理组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,培养8h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平,自噬体检测:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞LC3 mRNA的转录水平、采用Western blot检测细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平。结果 LPS处理组细胞培养上清液中TNF-α含量(pg/ml)较PBS对照组明显升高(639.20±43.49 vs 6.47±1.23,P<0.01),细胞LC3 mRNA转录水平较PBS对照组上调(3.4±0.36倍,P<0.01),细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PBS对照组升高(1.03±0.15 vs 0.53±0.12,P<0.01)。结论 LPS刺激NR8383细胞后,细胞自噬体形成增多,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。     

紫草素通过TLR4/NF-κB信号通路抑制由脂多糖诱导的巨噬细胞炎症研究

目的 研究紫草素抑制由脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症的机制.方法 以淀粉培养基注射BALB/c小鼠腹腔,诱导并分离巨噬细胞,以APC标记F4/80染色,并用流式细胞仪检测分离巨噬细胞情况;用1 mg·L-1的LPS刺激上述分离的巨噬细胞,分组如下:DMSO溶剂对照组,LPS对照组,LPS+低剂量紫草素组(0.1 μmol·L-1);LPS+中剂量紫草素组(1 μmol·L-1);LPS+高剂量紫草素组(10 μmol·L-1);通过ELISA和实时定量PCR(qRT-PCR)方法分别测定各处理组培养上清液以及细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的表达情况;Western blot分别测定Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)的p65亚基磷酸化表达情况.结果 流式细胞检测可知,APC标记的F4/80染色巨噬细胞的纯度可达97.8%;ELISA和实时定量PCR结果显示,紫草素处理后可以抑制由LPS刺激细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达(P<0.05),并增加IL-10的表达(P<0.05),且呈现出一定的浓度依赖性;Western blot结果显示,紫草素能下调由LPS刺激的TLR4的表达水平和NF-κB的p65亚基磷酸化表达.结论 紫草素的抗炎机制可能是通过TLR4介导的信号通路活化NF-κB,抑制IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,并促进IL-10的分泌.     

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

五味子丙素抑制脂多糖诱导心肌细胞的炎症反应与 细胞焦亡的作用及机制研究

目的:探究五味子丙素(SchC)对脂多糖(LPS)诱导心肌细胞HL-1炎症反应与细胞焦亡的影响。方法:培养小鼠心肌细胞HL-1,将其分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+SchC组。SchC预处理1 h后,分别以LPS刺激24 h或48 h,ELISA法提取细胞培养液上清液,检测细胞因子IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌,MTT法收集细胞检测细胞活力,Western Blot检测cleaved-Caspase1、GSDMD-N和NLRP3的表达;将HL-1细胞分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+siGSDMD(GSDMD siRNA)组、LPS+siGSDMD+SchC组,给药预处理1 h后,LPS刺激24 h,收集细胞培养液上清液,ELISA法检测IL-1β的分泌,MTT法检测细胞活力。结果:与LPS组比较,LPS+SchC组细胞活力得到改善(P<0.05),IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌均显著降低(P<0.05);Western Blot结果表明,与LPS组比较,LPS+SchC组的cleaved-Caspase1、GSDMD-N段和NLRP3蛋白水平显著降低(P<0.05);ELISA和MTT结果表明,与LPS组比较,LPS+siGSDMD组IL-1β的分泌显著降低(P<0.05)且细胞活力显著得到改善(P<0.01),然而LPS+siGSDMD组与LPS+siGSDMD+SchC组的IL-1β分泌水平和细胞活力并无显著性差异。结论:五味子丙素能有效缓解LPS诱导HL-1的炎症反应和细胞焦亡。     

复方银黄微型灌肠剂调节细胞因子表达及核因子-κB信号通路的实验研究

目的研究复方银黄微型灌肠剂(Yinhuangmicroenemacompound,YHMEC)的体外抗炎效应并探讨其部分分子作用机制。方法大鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)刺激组、YHMEC和地塞米松干预组,观察各组细胞形态学的改变,MTT比色法分析PMФ的生长活性,ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素6(IL6)的蛋白表达,细胞免疫化学法分析核因子κB(nuclearfactorkappaB,NFκB)p65的表达及分布变化。结果LPS刺激组TNFα和IL6含量增加,NFκB表达增强且多分布在细胞核;YHMEC干预组TNFα和IL6含量增加被明显抑制,细胞核p65表达减少。结论复方银黄微型灌肠剂通过抑制NFκB核转位,使PMФ分泌TNFα和IL6减少,可能是其发挥抗炎作用的分子作用机制之一。     

褪黑素对内毒素血症大鼠血清炎性因子的影响

目的探讨褪黑素(MT)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症大鼠炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和抗炎因子IL-10表达的影响。方法雄性SD大鼠48只,分为溶剂对照组、LPS组、LPS+MT组、MT组,每组12只。检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α、IL-6和IL-10含量。结果 LPS+MT组的血清SOD活性较LPS组明显增高(P<0.01),MDA含量较LPS组明显降低(P<0.01);LPS组大鼠血清TNF-α,IL-6含量明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而给予LPS前后应用MT干预治疗,可显著降低血清TNF-α、IL-6含量,与同时间点LPS组比较均差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MT可以降低内毒素血症大鼠血清炎性因子水平。     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的:研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法:ELISA方法检测0.2、2、20μmol/L不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E2(PGE2)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2酶蛋白表达的影响。结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE2可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论:蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE2的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

Effect of itraconazoles on the production of pro-inflammatory substances in mouse macrophage-like cells

BACKGROUND, MATERIALS AND METHODS: Synthetic triazoles are widely used for the treatment of fungal infection. In order to understand their possible anti-inflammatory action, we investigated the effect of itraconazole and its hydroxylated derivative (hydroxyitraconazole) on the production of various pro-inflammatory substances by mouse macrophage-like RAW264.7 cells. RESULTS: These compounds did not apparently show any growth inhibitory or stimulatory effects over a wide range of concentrations (0.2-50 μg/ml). Itraconazoles dose-dependently increased the production of prostaglandin E? (PGE?) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) without affecting the production of interleukin-1β (IL-1β) and nitric oxide (NO). LPS treatment significantly enhanced the production of NO, PGE?, TNF-α and IL-1β. The addition of itraconazoles to LPS-stimulated RAW264.7 cells significantly reduced the production of NO, but rather enhanced the production of PGE?, TNF-α and IL-1β. ESR spectroscopy demonstrated that itraconazoles did not significantly scavenge NO and superoxide anion radicals, indicating that the inhibition of NO production by itraconazoles is not due to their radical-scavenging activity. Hydroxyitraconazole was slightly more cytostatic, and more efficiently inhibited NO production, but enhanced the production of other pro-inflammatory substances. CONCLUSION: These data suggest that itraconazoles regulate NO and other pro-inflammatory substances differently in activated macrophages.     

地昔帕明对小鼠内毒素急性肺损伤的影响

目的探讨地昔帕明(DP)对脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤的作用并初步探讨其作用机制。方法昆明种小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、地昔帕明对照组(DP组)、模型组(LPS组)及地昔帕明处理组(DP+LPS组)。腹腔注射LPS建立小鼠急性肺损伤模型。造模6h后测定肺湿/干重比值(W/D)、肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数和蛋白含量、肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)水平,同时用ELISA法检测肺匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果LPS可提高小鼠肺W/D、BALF中白细胞数和蛋白含量、肺匀浆MPO活性、MDA和TNF-α含量(P<0.01),DP处理组可有效减轻LPS所引起的上述变化(P<0.05)。结论DP对LPS导致的小鼠急性肺损伤有保护作用,其保护机制可能与抑制肺TNF-α的产生,进而减轻中性粒细胞的肺部扣押和肺组织脂质过氧化损伤的程度有关。     

益母草碱抑制NLRP3炎症小体过度激活调控巨噬细胞M1/M2表型分化

目的研究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答影响及相关机制。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖和益母草碱预处理24 h,MMT法检测巨噬细胞活性;Griess法检测NO释放量;ELISA法检测IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的释放量;RT-PCR法检测NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、iNOS、Arg-1和CD206的mRNA表达量;Western blot检测NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达量。结果益母草碱能显著抑制脂多糖引起的巨噬细胞上清液中NO、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的释放。RT-PCR及Western blot实验结果显示,益母草碱可以抑制脂多糖引起的巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA及蛋白表达;益母草碱还能明显抑制脂多糖所诱导的巨噬细胞向M1型分化,并促进巨噬细胞向M2型分化。结论益母草碱能通过抑制NLRP3炎症小体,促进脂多糖诱导的巨噬细胞由M1表型向M2表型分化。     

2,3-吲哚醌对二甲基苯蒽诱导的大鼠乳腺癌的预防作用

目的探讨2,3-吲哚醌(ISA)对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的大鼠乳腺癌的化学预防作用。方法♀SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、ISA低、中、高剂量给药组,一次性皮下给予DMBA诱导大鼠乳腺癌模型发生,观察ISA对DMBA诱导的乳腺癌模型大鼠肿瘤抑制率,脏器指标,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)活性,肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,肿瘤组织病理学检查结果。结果 ISA能推迟大鼠乳腺癌的发生时间,降低肿瘤发生率;与模型组相比,低、中、高剂量组大鼠的脾指数及胸腺指数升高;低剂量组GSH-Px及SOD均明显升高,而MDA活性降低(P<0.05);ISA低、高剂量组TNF-α浓度较模型组有明显降低。结论 ISA对DMBA诱发的大鼠乳腺癌有预防作用,其机制可能为:增强荷瘤大鼠免疫系统的抵抗力,清除血中氧化应激产生的氧自由基,抑制肿瘤细胞的增殖。     

Different effects of bacterial lipopolysaccharide on superoxide anion production by macrophages from normal and tumor-bearing rats

Bacterial endotoxins or lipopolysaccharides (LPS) exhibit a wide range of modulatory activities on immunocompetent cells. Among the numerous effects of LPS on macrophages, an enhancement of superoxide anion (O2-) release has been reported. In previous studies carried out on tumor-bearing rats, it was found that several functions of peritoneal macrophages such as phagocytic, microbicidal and antiviral activities were depressed. In this paper we evaluated the spontaneous or phorbol myristate acetate (PMA)-induced production of superoxide anion by macrophages from tumor-bearing rats with respect to controls. Moreover, the effect of in vitro priming with LPS on O2- production by the same cells was studied. It was found that the pattern of superoxide release by macrophages from tumor-bearing rats is significantly different from controls. Preincubation of macrophages from normal rats with LPS enhanced the spontaneous and PMA-induced production of O2-. In contrast, the same concentrations of LPS did not prime macrophages from tumor-bearing rats.