色素上皮衍生因子在糖尿病大鼠肾脏中表达的改变

目的：探讨糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子（PEDF）的表达。方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）。分别于4周、8周末,检测血糖、糖化血红蛋白、血脂、肾重指数、尿白蛋白排泄率,应用免疫组织化学染色法检测肾脏PEDF的表达。结果：4周、8周末DM组肾重指数、尿白蛋白排泄率均明显高于NC组（P〈0.01）;两组血脂无明显差别（P〉0.05）;DM组大鼠肾脏PEDF的表达较NC组明显减少（P〈0.01）;PEDF的表达与肾重指数、尿白蛋白排泄率均呈明显负相关（r=-0.896,P〈0.01;r=-0.884,P〈0.01）。结论：肾脏PEDF表达不足可能是糖尿病肾病发生发展的主要原因之一。     

白细胞介素-18、-6在糖尿病大鼠肾脏的表达

目的:检测白细胞介素(IL)-18、-6在糖尿病大鼠肾脏的表达,探讨其在糖尿病肾脏病变过程中的作用。方法:40只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照4周(NC1组)及8周(NC2组),糖尿病4周(DM1组)及8周(DM2组),每组10只。DM组按60 mg/kg一次性腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。检测各组大鼠体重(BW)、肾重、尿量(UV)及尿微量白蛋白排泄率(UAER)。用免疫组化方法检测各组肾组织IL-18、IL-6的表达,利用计算机图像分析系统进行定量分析。结果:DM组大鼠的肾重指数(KWI)、UV、UAER较NC组大鼠显著增高(P<0.01),DM2组较DM1组增高明显(P<0.05)。IL-18、IL-6在NC组大鼠肾组织中仅有少量表达,DM1组表达较NC组明显增多(P<0.01),DM2组表达增高更为显著(P<0.01)。肾脏局部IL-18、IL-6与UAER呈显著正相关(r=0.471,P<0.01,r=0.513,P<0.01)。结论:炎性反应在糖尿病肾脏局部损害中发挥重要的作用。     

激活素A及卵泡抑素基因在糖尿病大鼠肾脏表达的实验研究

目的:探讨激活素A(ACT-A)及卵泡抑素(FS)基因在糖尿病大鼠肾脏的表达及可能机制。方法:雄性Wistar大鼠,随机分成对照组(NC)和糖尿病组(DM),腹腔注射STZ诱导糖尿病模型。各组分别在术后4、8、12和16周处死6只大鼠。观察各组肾重/体重(KW/BW)、24h尿白蛋白排泄率(AER)及肌酐清除率(Ccr)的变化。real time-PCR检测各组肾组织ACT-A及FS基因的表达。结果:与NC组相比,DM组大鼠从第8周末开始KW/BW、AER及Ccr均显著上升(P<0.01),16周末时达峰值。DM组大鼠从第4周末开始ACT-A mRNA表达逐渐增加,第12周末时达峰值(P<0.01)。FS mRNA在NC组各时间点大鼠肾组织大量表达,而在DM组其表达量呈逐渐下降趋势,第16周时只能检测到基础量表达。结论:ACT-A及FS表达失衡在DN的进行性发展中发挥了重要作用。     

抑制NF-κB对PDGF-A、PDGF-B在糖尿病大鼠肾组织表达的影响

目的:研究糖尿病大鼠肾组织血小板源性生长因子-A(PDGF-A)、血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、核因子-κB(NF-κB)的表达,以及NF-κB抑制剂PDTC对其表达的影响。方法:将30只健康Wistar雄性大鼠随机分成3组:正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病PDTC干预组(DP组),每组各10只。8周末收集大鼠24h尿测定微量白蛋白,处死大鼠取出肾脏称重,计算尿微量白蛋白排泄率(UAER)、肾重指数(KWI)并用免疫组化方法测定PDGF-A、PDGF-B、NF-κB的含量。结果:8周末,DM组和DP组的UAER、KWI较NC组明显升高;DP组较DM组明显下降。DM组肾组织NF-κB和PDGF-B的表达较NC组显著增高,DP组较DM组明显下降,但显著高于NC组;三组大鼠肾组织PDGF-A的表达均无显著性差异。结论:糖尿病大鼠肾组织局部表达的PDGF-B、NF-κB明显增加,抑制NF-κB能明显降低PDGF-B表达。提示NF-κB和PDGF-B可能在糖尿病肾病发生发展中起重要作用。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法建立单侧肾切除糖尿病模型,大鼠随机分为对照组、糖尿病组与MMF给药组。8周末检测24小时尿白蛋白排泄率(AER)、肾组织与尿丙二醛(MDA)含量;并行肾组织形态学指标观察;应用免疫组化方法检测肾组织CTGF表达。结果MMF 给药组大鼠肾重、肾重/体重、AER与肾小球面积、肾小球容积、系膜区面积明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);MMF 给药组可明显减少糖尿病大鼠肾组织及尿MDA含量(P<0.05);模型组肾小球CTGF表达明显高于对照组(P<0.01), MMF给药组这些改变明显减轻(P<0.01)。结论MMF对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激、下调CTGF表达有关。     

抑制NF-κB对PDGF-A、PDGF-B在糖尿病大鼠肾组织表达的影响

目的：研究糖尿病大鼠肾组织血小板源性生长因子-A（PDGF-A）、血小板源性生长因子-B（PDGF-B）、核因子-κB（NF-κB）的表达,以及NF-κB抑制剂PDTC对其表达的影响。方法：将30只健康Wistar雄性大鼠随机分成3组：正常对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）和糖尿病PDTC干预组（DP组）,每组各10只。8周末收集大鼠24h尿测定微量白蛋白,处死大鼠取出肾脏称重,计算尿微量白蛋白排泄率（UAER）、肾重指数（KWI）并用免疫组化方法测定PDGF-A、PDGF-B、NF-κB的含量。结果：8周末,DM组和DP组的UAER、KWI较NC组明显升高;DP组较DM组明显下降。DM组肾组织NF-κB和PDGF-B的表达较NC组显著增高,DP组较DM组明显下降,但显著高于NC组;三组大鼠肾组织PDGF-A的表达均无显著性差异。结论：糖尿病大鼠肾组织局部表达的PDGF-B、NF-κB明显增加,抑制NF-κB能明显降低PDGF-B表达。提示NF-κB和PDGF-B可能在糖尿病肾病发生发展中起重要作用。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏CD62P、ICAM-1表达的影响

目的观察糖尿病大鼠肾组织P-选择素(CD62P)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达及辛伐他汀的影响。初步探讨辛伐他汀对糖尿病大鼠肾组织的保护作用机制。方法将48只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和辛伐他汀治疗组(D),DM组和D组腹腔注射链尿佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,成模后8周、12周免疫组化法测定CD62P、ICAM-1水平;用放射免疫分析法测大鼠24h尿白蛋白排泄率。结果与NC组相比,DM及D组CD62P、ICAM-1表达增加(P<0.01);D组CD62P、ICAM-1表达低于DM组(P<0.01);并且CD62P、ICAM-1水平与尿白蛋白排泄率呈正相关。结论辛伐他汀通过降低CD62P、ICAM-1的表达,减少血管内皮损伤,减轻肾脏炎症反应及微血栓形成,进而对肾脏起到保护作用。     

杏丁注射液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的:探讨杏丁注射液对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用和机制。方法:腹腔注射链脲菌素60mg/kg制成2型糖尿病大鼠模型,以72小时后空腹血糖>16.7mmol/L为糖尿病模型标志。动物随机分为正常对照组、DM模型组、杏丁组。第12周末分别测定尿白蛋白、血糖、甘油三酯、胆固醇、尿素氮和肌酐,测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)及肾脏肥大指数。结果:(1)DM模型组与正常对照组相比,尿白蛋白、BUN、Scr明显升高,肾脏肥大指数增加;肾组织GSH-Px、SOD和NO、NOS活性降低(P<0.01);光镜和电镜下肾组织可见相应的病理改变。(2)杏丁组与DM模型组相比,大鼠24h尿白蛋白量明显下降(P<0.01),肾组织GSH-Px、SOD、NO、NOS活性增加(P<0.05),肾脏肥大指数降低(P<0.01),同时肾脏病理改变亦减轻。结论:杏丁注射液能改善和调节DM大鼠肾组织过氧化反应指标,对DM肾脏损害有保护作用。     

盐酸贝那普利对早期糖尿病大鼠肾组织足糖萼蛋白表达的影响

目的观察盐酸贝那普利对早期糖尿病大鼠肾组织足糖萼蛋白(PCX)表达的影响,初步探讨其对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其可能的机制。方法将健康雄性SD大鼠随机分为正常对照(NC)组和实验组。实验组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,随机分为糖尿病(DM)组和盐酸贝那普利干预(DT)组,每周检测各组大鼠血糖。4周后,检测大鼠尿白蛋白(UALB)、尿视黄醇结合蛋白(URBP)、尿足细胞特异性标志蛋白PCX(UPCX)、尿肌酐(UCR)、肾脏肥大指数(KI)及糖化血红蛋白(HbA1C)。采用免疫组化及RT-PCR法检测肾脏组织PCX蛋白及mRNA的表达。结果 DM组大鼠血糖、UALB、URBP、UPCX、KI、HbA1C均高于NC组(P<0.01),肾组织病理改变较重,肾组织PCX蛋白及mRNA的表达显著降低(P<0.01);DT组除血糖及HbA1C外,生化指标均明显低于DM组(P<0.01),肾组织病理改变亦减轻,肾组织PCX蛋白及mRNA的表达显著增高(P<0.01)。结论 PCX表达减少可能是糖尿病肾病发病机制之一,盐酸贝那普利可通过减轻尿液PCX排泄,上调肾组织PCX蛋白及mRNA的表达。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制研究

目的:探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法:建立糖尿病大鼠模型,并用姜黄素实施治疗。观察治疗后大鼠的血糖、体重、尿白蛋白排泄量、肌酐清除率及肾脏病理的变化,六周后用免疫组化的方法检测肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平。结果:糖尿病大量组较正常对照组尿白蛋白排泄率、肌酐清除率明显增高(P<0.01),CTGF在肾组织中的表达显著增加(P<0.01),肾脏病理变化显著;而姜黄素治疗组上述指标较糖尿病大鼠组显著减少(P<0.01),CTGF在肾组织中的表达显著减少(P<0.01)。肾脏病交明显改善。结论:早期应用姜黄素对糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,可能与其抑制CTGF在肾组织中的表达有关。     

糖尿病大鼠肾脏MCP-1 mRNA的表达及意义

目的 :研究单核细胞趋化蛋白 1(monocytechemoattractantprotein 1,MCP 1)在糖尿病大鼠肾脏的表达。方法 :Wistar大鼠随机分 3组 :正常对照组 (NC组 ) ,糖尿病未干预组 (DM组 ) ,糖尿病大鼠胰岛素干预组 (DI组 )。以链脲佐菌素 (streptozotocin ,STZ)制备糖尿病大鼠模型 ,大鼠饲养 2 ,4周分别取出肾脏检测MCP 1mRNA的表达。收集2 4h尿测定尿白蛋白排泄率 (urinaryalbuminexcretionrate ,UAER)及肌酐 ,并心脏采血检测血肌酐、尿素氮。mRNA的表达采用RT PCR ,以GAPDH作内对照。结果 :2 ,4周肾组织中MCP 1mRNA的表达DM组高于NC组 (P <0 .0 1) ,DI组低于DM组 (P <0 .0 5 )。 2周时DM组、DI组UAER较NC组有升高趋势 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;4周时DM组、DI组UAER较NC组显著增加 (P <0 .0 1) ,DI组UAER较DM组显著降低 (P <0 .0 1) ,其变化趋势与MCP 1mRNA的表达基本相似。结论 :在糖尿病大鼠肾组织MCP 1mRNA表达明显增加 ;经胰岛素治疗后肾组织MCP 1mRNA的表达降低 ,肾功能改善     

Resveratrol对糖尿病大鼠肾皮质4E-BP1和S6磷酸化表达的影响

目的:探讨Resveratrol对糖尿病(DM)大鼠早期肾脏肥大的影响及其可能的机制?方法:雄性SD大鼠13只,应用链脲佐菌素诱导建立DM大鼠模型,6只正常SD大鼠作为对照(NC)?DM大鼠于第11周随机分为DM组7只和Resveratrol(DR)组6只,DR组给予Resveratrol 10 mg/(kg·d)灌胃,共4周?第14周收集3组大鼠24 h尿测尿微量白蛋白?处死大鼠,心脏取血测血肌酐?取肾组织,制石蜡切片做HE染色,免疫组化观察肾皮质4E-BP1磷酸化蛋白表达量的变化?Western blot检测肾皮质S6磷酸化蛋白表达的改变?结果:与NC组相比,DR和DM组大鼠血糖?24 h尿微量白蛋白和血肌酐明显升高,而体重明显降低(P均 < 0.01),而用Resveratrol干预后DR组大鼠血糖?24 h尿微量白蛋白及血肌酐比DM组明显好转(P < 0.05)?肾脏HE染色结果显示,DM组大鼠肾小球系膜基质中度增生,系膜细胞增生,系膜区明显扩大,肾小球体积增大?DR组肾小球系膜细胞和基质增生及肾小球系膜区扩张较DM组明显减轻?肾皮质免疫组化结果显示,4E-BP1磷酸化蛋白在DM组表达呈强阳性,在DR组表达呈弱阳性?DM和DR组大鼠血管组织中S6磷酸化蛋白的表达明显高于NC组(P < 0.01),而DR组明显低于DM组(P < 0.01)?结论:DM大鼠早期存在肾脏肥大和mTOR信号通路下游的4E-BP1和S6磷酸化蛋白表达增高?Resveratrol可能通过抑制4E-BP1和S6的磷酸化来减轻DM大鼠早期肾脏肥大,延缓糖尿病肾病的发展?     

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-κB的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其核因子-κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦(valsartan)和霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-κB的影响.方法 采用一侧肾切除腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,将80只Wistar大鼠随机分为:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、缬沙坦治疗组(DM+V)、霉酚酸酯治疗组(DM+M)、联合治疗组(DM+V+M).取材,检测各项生化指标,并采用荧光实时定量RQ-PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-κB的mRNA的表达.免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-κB蛋白的表达.结果 ①DM组24 h尿蛋白和肾重/体重比均高于NC组(均P＜0.05),并随糖尿病时程延长逐渐增高,于DM12周时达到最大值;血白蛋白在DM8周组开始下降(P＜0.01),并逐渐降低;血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降(P＜0.01).各治疗组与DM8周组相比较,肾重/体重比变小(P＜0.05),24 h尿蛋白总量降低(均P＜0.05),血白蛋白回升(P＜0.05).以联合组最为明显.②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低(均P＜0.01),16周时其表达量明显升高(P＜0.01).各治疗组与DM8周组比较表达增加(P＜0.05),以霉酚酸酯组和联合组最为明显(P＜0.01).DM组NF-κB的mRNA表达随时间延长逐渐增强(P＜0.01),各治疗组与DM8周组比较表达均降低(均P＜0.05),以联合组最为明显.③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达,肾小球和脉管系统没有表达.DM各组在12周前表达均降低(均P＜0.05),差异有统计学意义;16周后表达明显增强(均P＜0.01).各治疗组阳性细胞数明显增加(均P＜0.05).NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,DM各组NF-κB表达量随时间逐渐增高,各治疗组可显著降低NF-κB表达.结论 TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子,其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展,机制可能由NF-κB调节.早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达,对肾脏产生保护作用.     

Effects of valsartan, mycophenolate mofetil and their combined application on TRAIL and nuclear factor-kappaB expression in the kidneys of diabetic rats

OBJECTIVE: To evaluate the expression of TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) and nuclear factor (NF)-kappaB in the kidney tissues of diabetic rats and the effects of valsartan, mycophenolate mofetil (MMF), and their combined application on the renal TRAIL and NF-kappaB expression. METHODS: Eighty uninephrectomized male Wistar rats were randomly divided into 2 groups: normal control (NC) group (n = 28), undergoing intraperitoneal injection of citric acid buffer, and diabetes mellitus (DM) group, undergoing intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) to establish DM models. The 52 DM rats were randomly divided into 7 equal subgroups: DM without treatment for 4 weeks (DM4), DM without treatment for 8 weeks (DM8) DM without treatment for 12 weeks (DM12) , and DM without treatment for 16 weeks (DM16), valsartan treatment (DM + V), MMF treatment (DM + M), and combined treatment (DM + V + M). The treatment subgroups were treated for 8 weeks immediately after the diabetic models ere established. Twenty-four hour urine was collected to measure the amount of protein 4, 8, 12, and 16 weeks after the induction of DM respectively. The rats were sacrificed. Blood samples were collected from the abdominal aorta to detect the blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (sCr), albumin, and glucose. The kidneys were taken out. Hypertrophy index (left kidney weight/body weight) was determined. Quantitative real time RT-PCR was performed to detect the expression of TRAIL and NF-kappaB mRNA. Immunohistochemistry was used to detect the protein expression of TRAIL and NF-kappaB. RESULTS: 1) The 24 h urine protein levels and hypertrophy indexes of all DM subgroups were significantly higher than those of the NC groups (all P <0.05). 24 h urine protein and hypertrophy index increased gradually and peaked in the l2th week; blood albumin gradually decreased since the 8th week(P <0.01), and BUN and sCr began to decrease only since the 16th week (both P <0.01). Compared with the DM 8 subgroup, the hypertrophy index and 24 h urine protein of the different treatment subgroups, especially the DM + V + M subgroup, were significantly lower (all P <0.05). 2) Quantitative real time RT-PCR showed that compared with the NC group, the TRAIL expression levels of the DM subgroups were significantly lower before the 12th week after induction of DM model (all P < 0.01), and then significantly higher in the 16th week (all P < 0.01). The TRAIL expression of the treatment groups, especially that of the DM + M subgroup, were significantly higher than that of the DM8 group (all P <0.05). Compared with the NC group, the NF-kappaB expression levels of the DM subgroups were significantly higher time-dependently (all P <0.01). Compared with the DM8 group, the NF-kappaB expression levels of the treatment subgroups, especially that of the DM + V + M subgroup were significantly lower (all P <0.05). 3) The expression of TRAIL was mainly located in the convoluted tubule of kidney, and no TRAIL protein expression was detected in the glomeruli or renal vasculature. The levels of NF-kappaB protein expression, shown in glomeruli and convoluted tubules, of all DM subgroups were all higher than that of the NC group. The NF-kappaB protein expression level of the DM + V + M subgroup was significantly lower. The number of NF-kappaB positive cells was significantly related to the mononuclear macrophage infiltration , kidney function, and structural lesion. CONCLUSION: An important monitoring factor in the autoimmune system, TRAIL closely participates in the pathogenesis of diabetic nephropathy, possibly controlled by NF-kappaB. In the early stage combination of valsartan and MMF may upregulate the expression of TRAIL, thus protecting the kidney function.     

安体舒通对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织mcp-1表达的影响

目的:观察安体舒通对糖尿病大鼠肾脏组织的保护作用及其对尿单核细胞趋化蛋白-1(UMCP-1)排泄和肾组织mcp-1表达的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为模型组(20只)和对照组(10只),再将模型组随机分为糖尿病和治疗组,于给药后第8周检测2型糖尿病大鼠及安体舒通治疗大鼠正常对照大鼠的尾外周血糖和糖化血红蛋白(HbA1C),第8周时测12h尿白蛋白排泄率(UAER)、尿视黄醇结合蛋白(URBP)和UMCP-1排泄率,处死大鼠后留取肾脏标本用于逆转录聚合酶链反应半定量测定MCP-lmRNA的含量。结果:1与正常对照组(C组)比较,糖尿病组(D组)、安体舒通治疗组(S组)第8周血糖及HbAlc水平均明显升高,而两组间无显著性差异;2第8周,D、S组UAER及URBP、UMCP-1排泄率和肾脏肥大指数均高于C组,S组4项指标较D组明显降低,且UMCP-1排泄率与UAER、URBP排泄率及肾脏肥大指数呈正相关;3与C组相比,D组大鼠肾脏MCP-1mRNA表达明显上调,S组MCP-1mRNA表达也增加,但明显低于D组。结论:安体舒通对2型糖尿病大鼠肾脏有明显的保护作用,且这种保护作用是独立于降糖作用之外的。其机制可能与抑制肾组织mcp-1表达及其排泄有关。     

糖尿病大鼠早期肾组织钙神经蛋白的表达

目的探讨糖尿病大鼠早期肾组织钙神经蛋白(Cal-cineurin,CaN)的表达及意义。方法大鼠随机分:对照组和糖尿病组。应用链脲佐菌素(65mg/kg)腹腔一次性注射方法建立大鼠糖尿病模型。4周末观察大鼠血糖、肾重/体重与尿白蛋白排泄率(AER)的变化。应用免疫组化与West-ern-blotting印迹检测肾组织CaN蛋白表达。结果糖尿病组大鼠血糖、肾重/体重与AER明显高于对照组。免疫组化显示糖尿病大鼠肾组织CaN蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01),Western-blotting印迹显示糖尿病大鼠肾组织CaN蛋白表达较对照组增加2.4倍。结论糖尿病大鼠CaN过度表达表明糖尿病肾病发病过程可能与激活CaN信号转导途径有关。