过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE、IL-4的表达及其法医学意义

【目的】寻找法医学鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。【方法】利用组织芯片技术采用免疫组化方法（SP法）检测35只过敏性休克豚鼠（实验组28只，对照组7只）死后0、6、12、24h4个时间点的心、肝、肺、肾、脾、胃、肠、气管及扁桃体组织中的ISE及IL-4的表达情况。【结果】ISE的表达：实验组肺及气管组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；脾组织呈弱阳性表达。各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。IL-4的表达：实验组肺、气管及胃组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；肠组织呈弱阳性表达，各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。【结论】免疫组化方法检测ISE、IL-4的表达，可望作为鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。     

过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE蛋白表达

目的:检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE的蛋白表达情况,探讨法医学鉴定过敏性休克的病理形态学诊断标准. 方法:建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,利用组织芯片技术、采用免疫组化方法SP法检测25例过敏性休克死亡鼠脏器中IgE蛋白的表达情况,并与常规切片比较. 结果:过敏性休克死亡豚鼠在肺小血管壁及其血管周围 ,气管黏膜上皮内、小血管壁及结缔组织和脾髓质中IgE蛋白呈阳性表达,而肝、肾、心等脏器中IgE蛋白表达呈阴性. 结论:过敏性休克时,肺、气管和脾组织中可检见IgE.     

地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺水通道蛋白1的影响

 【目的】观察水通道蛋白1（AQP1）在急性过敏性哮喘小鼠肺组织的改变，以及地塞米松对其的影响。【方法】建立小鼠哮喘模型，并随机分为3组，哮喘模型组、生理盐水对照组和治疗组，治疗组在激发阶段给予地塞米松治疗。检测各组中支气管肺泡灌洗液（BALF）的白细胞总数、分类计数以及IL-5和IFN-γ水平，用RT-PCR、Westem blot和免疫组化法检测AQP1mRNA、蛋白质水平和在肺组织的分布．观察肺组织形态学改变。【结果】（1）哮喘组BALF中自细胞总数[（52±8）×106／mL]、嗜酸性粒细胞数[（9．8±1．7）×10^6mL]和IL-5水平[（71±27）pg／mL]均高于对照组（P均〈0．01），IFN-γ水平[（294±26）pg／mL]低于对照组（P〈0．05），治疗后白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均明显下降（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01），IFN-γ水平明显上升（P〈0．05）；（2）哮喘组AQP1mRNA（1．90±0．29）和蛋白质（1．31±0．10）明显高于对照组（P均〈0．01），治疗后表达明显下降（P〈0．01，P〈0．05）；（3）哮喘组肺组织可见较弥漫的炎性改变，黏液分泌增多，血管壁水肿明显，血管周围有大量的炎症细胞渗出物，治疗组形态学改变明显减轻；AQP1在气管黏膜上皮、微血管内皮上皮、支气管周围血管床、炎症细胞呈阳性表达，哮喘组表达呈强阳性，治疗后表达明显减弱。【结论】AQP1在急性哮喘小鼠肺组织内过度表达，地塞米松对其有显著的抑制作用，可明显改善小鼠肺部的炎性浸润和肺水渗出的病理生理过程。     

地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺水通道蛋白1的影响

【目的】观察水通道蛋白1（AQP1）在急性过敏性哮喘小鼠肺组织的改变，以及地塞米松对其的影响。【方法】建立小鼠哮喘模型，并随机分为3组，哮喘模型组、生理盐水对照组和治疗组，治疗组在激发阶段给予地塞米松治疗。检测各组中支气管肺泡灌洗液（BALF）的白细胞总数、分类计数以及IL-5和IFN-γ水平，用RT-PCR、Westem blot和免疫组化法检测AQP1mRNA、蛋白质水平和在肺组织的分布．观察肺组织形态学改变。【结果】（1）哮喘组BALF中自细胞总数[（52±8）×106／mL]、嗜酸性粒细胞数[（9．8±1．7）×10^6mL]和IL-5水平[（71±27）pg／mL]均高于对照组（P均〈0．01），IFN-γ水平[（294±26）pg／mL]低于对照组（P〈0．05），治疗后白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均明显下降（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01），IFN-γ水平明显上升（P〈0．05）；（2）哮喘组AQP1mRNA（1．90±0．29）和蛋白质（1．31±0．10）明显高于对照组（P均〈0．01），治疗后表达明显下降（P〈0．01，P〈0．05）；（3）哮喘组肺组织可见较弥漫的炎性改变，黏液分泌增多，血管壁水肿明显，血管周围有大量的炎症细胞渗出物，治疗组形态学改变明显减轻；AQP1在气管黏膜上皮、微血管内皮上皮、支气管周围血管床、炎症细胞呈阳性表达，哮喘组表达呈强阳性，治疗后表达明显减弱。【结论】AQP1在急性哮喘小鼠肺组织内过度表达，地塞米松对其有显著的抑制作用，可明显改善小鼠肺部的炎性浸润和肺水渗出的病理生理过程。     

白三烯受体拮抗剂孟鲁斯特对小鼠气道炎症的抑制作用

【目的】探讨白三烯受体1拮抗剂盂鲁斯特（montelukast，MK）抑制小鼠气道炎症的作用及可能的机制。【方法】致敏的BALB／c小鼠持续吸入10g／L雾化卵白蛋白（OVA）30min，OVA吸人前2d开始连续3d或5d尾静脉给予MK或生理盐水（saline），OVA吸入后24h及72h取材，瑞氏染色观察支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid．BALF）中炎症细胞的渗出情况；ELISA方法检测血清、BALF和肺组织中有关细胞因子水平；HE、刚果红染色观察肺组织炎症细胞的渗出；免疫组化染色观察血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）和嗜酸性粒细胞趋化因子（eotaxin）的表达；原位杂交研究IL-5 mRNA的变化。【结果】给予MK5d减少BALF嗜酸性粒细胞渗出达90％以上，嗜酸性粒细胞减少随MK剂量（10、25、62．5mg／kg）的增加呈量效关系。ELISA结果表明给予3dMK使肺、血清和BALF中IL-5、IL-4水平显著降低，肺IL-13含量也明显减少（P〈0．05），但MK组肺组织eotaxin下降与saline组比较无明显差异（P〉0．05）。免疫组化显示MK组肺组织VCAM-1和eotaxin表达比saline组明显减弱；原位杂交可见MK组肺组织IL-5 mRNA的表达比saline组减弱。【结论】MK减轻气道炎症．可能通过抑制VCAM-1表达和IL-5、IL-4、IL-13等细胞因子分泌起作用。急性哮喘中应用大剂量MK抗炎治疗值得进一步探讨。     

TLR4在过敏性休克死亡豚鼠中的表达及法医学意义

目的探讨过敏性休克豚鼠多种器官TLR4的表达,为过敏性休克死亡的法医学鉴定寻找新指标。方法将35只豚鼠随机分为实验组(26只)和对照组(9只),实验组豚鼠注射人血清致敏原建立过敏性休克豚鼠模型,对照组注射生理盐水。采用RT-PCR及免疫组织化学分别检测2组豚鼠死后即时、冷藏48h、冰冻7d气管、肺、胃和脾等组织TLR4的表达水平。结果实验组豚鼠死后即时、冷藏48h、冰冻7d气管、肺、胃和脾TLR4mRNA及蛋白表达水平均较对照组显著升高(P<0.05);实验组豚鼠死后各时段气管、肺、胃和脾TLR4mRNA及蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RT-PCR、免疫组织化学检测气管、肺、胃及脾TLR4表达可能为法医学鉴定过敏性休克猝死提供参考;过敏性休克死亡在尸体保存条件良好情况下,TLR4在7d内降解不明显。     

癃闭康对实验性大鼠前列腺增生组织bax／bcl-表达的影响

【目的】观察实验性大鼠前列腺组织bax／bcl-2的表达及癃闭康对其的影响。【方法】雄性sD大鼠,随机分为对照组、模型组、前列康组、癃闭康低、中、高不同剂量组。去势加丙酸睾丸酮注射法复制前列腺增生模型,干预后观察前列腺湿重、前列腺指数、bax／bel-2的表达及病理变化。【结果】bax在对照组大鼠前列腺组织中表达呈强阳性,在模型组表达呈弱阳性;各治疗组bax表达均强于模型组;bcl-2蛋白在对照组大鼠前列腺组织中表达呈弱阳性,在模型组表达呈阳性,各治疗组bd-2蛋白均为弱阳性表达;光镜下组织结构接近对照组。【结论】癃闭康可能通过调节bax／bd-2的表达促进前列腺增生的上皮细胞凋亡而抑制前列腺组织增生。     

豚鼠过敏性休克IgE和C5复合物分布及c-kit蛋白表达

【目的】探索过敏性休克法医学客观诊断标准。【方法】建立豚鼠异种血清过敏性休克模型 ,采用LSAB免疫组化方法检测模型鼠脏器IgE ,c kit蛋白以及C5复合体的分布。【结果】过敏性休克豚鼠肝 ,脾未检出IgE ,肺、肾检见大量IgE ,胃黏膜层c kit蛋白阳性细胞明显增多 ,各脏器均未检测出C5复合物。【结论】过敏性休克时 ,肺小血管壁及管周 ,肾小管内检见大量IgE ,可作为法医检案客观诊断标准。同时提示 ,肺和肾是病变最严重的脏器 ,补体C5未参与异种血清造成的过敏性休克过程。胃黏膜层c kit蛋白阳性细胞增多可作为辅助诊断指标。     

呼吸训练对留置气管套管患者拔管时间的影响

目的：确定呼吸训练手法对气管切开后留置气管套管患者的拔管时间的影响。方法：患者随机分为实验组和对照组各45例。对照组接受常规康复治疗及内科对症治疗；实验组在对照组的治疗手段基础上增加呼吸训练治疗。3-8周后分别通过肺感染好转治愈率、ADL量表、拔管时间等方面比较2组患者治疗前、后功能改善程度，确定呼吸训练对重症留置气管套管患者肺功能、日常生活状态及拔管时间的影响。结果：经过2个月呼吸训练后，实验组患者肺感染治疗有效率较对照组提高11．11％，肺感染治疗显效明显（P〈0．001）；实验组Barthel指数显著高于对照组（P=0．00013）；实验组拔管时间显著少于对照组（P=0．00703）。3项指标差异均有统计学意义。结论：呼吸训练可提高留置气管套管患者的肺感染治愈率，提高其生活自理能力，更重要的是能够缩短留置气管套管的时间，促进患者尽早拔除气管套管，缩短住院时间。     

非小细胞肺癌血管内皮生长因子-C和Survivin蛋白的表达及其对患者预后的影响

【目的】研究血管内皮生长因子-C（VEGF-C）和survivin蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与肺癌生物学行为的关系。【方法】应用免疫组化方法检测77例NSCLC组织中VEGF—C和survivin蛋白的表达，分析其与肿瘤大小、肿瘤淋巴管密度（LVD）、组织类型、分化程度、淋巴结转移、临床复发情况和患者术后生存时间的关系。【结果】77例NSCLC组织中，有45例VEGF-C蛋白表达呈阳性（58．4％1；有41例survivin蛋白表达呈阳性（53．2％）。VEGF-C蛋白的阳性表达组肿瘤大小和LVD均高于阴性组（P〈0．05），VEGF-C蛋白的表达与患者术后生存时间呈负相关（P〈0．05）。Survivin蛋白的阳性表达组的LVD高于阴性组（P〈0．05）．survivin蛋白的表达与NSCLC淋巴结转移（r=0．324，P〈0．05）和临床复发呈正相关（r=0．233，P〈0．05），与患者术后生存时间呈负相关（P〈0．05）。VEGF-C和survivin蛋白在NSCLC组织中的表达之间呈正相关性f，=0．266．P〈0．05）。【结论】VEGF—C和survivin蛋白的表达与非小细胞肺癌的生物学行为具有相关性．它们的高表达提示非小细胞肺癌患者预后不良。     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克小鼠肺组织中的表达

探讨过敏性休克小鼠肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达。方法：取健康昆明种小鼠36只,随机分为过敏性休克模型组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,每组再分为死亡即时组、冷冻48 h组和冷冻7 d组,每组6只,模型组通过注射卵蛋白（OVA）制作过敏性休克模型,致敏第3周诱发过敏性休克致死或颈椎脱臼处死动物。对照组采用PBS代替OVA,第3周与模型组小鼠一并处死。各组小鼠分别在3个时间点取肺组织,福尔马林固定,制作石蜡切片,并行免疫组织化学染色检查观察CSE在肺组织中的表达情况。结果：模型组各时间点肺组织中见胱硫醚-γ-裂解酶主要表达在肺泡上皮细胞胞浆,对照组肺泡上皮细胞呈弱阳性。结论：过敏性休克小鼠肺组织中有胱硫醚-γ-裂解酶表达,死后冷冻7 d之内,肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶表达随着时间的延长呈下降趋势,应用免疫组化染色检查肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶的表达可为过敏性休克死亡提供一定的法医病理学诊断依据。     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克死亡小鼠心肌组织中的死后变化

目的：探讨胱硫醚-γ-裂解酶（ cystathionine-γ-lyase,CSE）在过敏性休克小鼠心肌组织中的表达和意义。方法：通过注射卵蛋白（ OVA）制作小鼠过敏性休克模型。将昆明种小鼠60只随机分为4组,即：PBS对照组、OVA模型组、OVA模型﹢炔丙基甘氨酸（ PPG）组、OVA模型﹢硫氢化钠（ NahS）组。各组小鼠致敏第3周诱发过敏性休克致死,未死亡小鼠1 h后颈椎脱臼处死动物。分别于死亡后即时（T1）、死亡后冷冻2 d（T2）和冷冻7 d（T3）三个时间点取心肌组织行免疫组织化学染色检测心肌组织CSE蛋白的表达。结果：对照组小鼠心肌组织中CSE呈弱阳性表达,OVA诱导的过敏性休克模型心肌组织中CSE呈阳性表达。给予外源性NahS后CSE在心肌组织中表达增强,而给予h2 S抑制剂PPG后,CSE在心肌组织中表达减弱较为明显。各组小鼠心肌组织在T1、T2、T3三个时间点CSE的表达变化不明显。结论：过敏性休克小鼠心肌细胞中CSE的表达增强,应用免疫组化染色检查心肌组织中CSE的表达可为过敏性休克死亡的法医学鉴定提供形态学参考指标。     

系统性红斑狼疮患者白细胞介素-6和-18水平的变化及意义

目的探讨IL-6和IL-18水平变化在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别测定39例SLE患者血浆的IL-6和IL-18水平。结果血浆IL-6的水平在SLE患者活动期组和非活动期组均明显高于正常对照组,差异有显著性(P<0.01);SLE患者的IL-6水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)之间呈正相关(r=0.74,P<0.01);SLE患者血浆的IL-18水平增高,且活动期组较非活动期组增高更明显(P<0.01),与正常对照组比较差异均有显著性(分别P<0.05,P<0.01);SLE患者的IL-18水平与SLEDAI呈正相关(r=0.49,P<0.01)。结论SLE患者血浆IL-6、IL-18水平均显著增高,并且与SLE的病情活动密切相关,可能在SLE的发病机制中发挥重要作用。     

中性粒细胞弹性蛋白酶在重症急性胰腺炎并急性肺损伤发病中的表达和意义

目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）在重症急性胰腺炎并急性肺损伤（SAP-ALI）发病过程中的作用和意义。方法健康SD大鼠60只,随机分成3组：假手术组（n=18）、SAP-ALI组（n=22）、NE处理组（n=20）。ELISA法测定血清NE、TNF-α、IL-1β含量,RT-PCR法检测肺组织中NE的变化,Western blot检测肺组织中NE的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）和血清中的NE的含量变化,同时观察肺和胰腺组织湿/干质量比和病理形态学变化。结果 NE处理组肺组织、BALF和血清NE含量均较假手术组和SAP-ALI组大鼠明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,血清TNF-α、IL-1β含量也明显增加（P〈0.05）。结论中性粒细胞的大量激活及其NE、TNF-α、IL-1β的过度释放参与了SAP-ALI的发病过程。     

创伤性休克兔复苏后肾功能的变化及亚甲蓝的影响

目的研究亚甲蓝（methylene blue,MB）对创伤性休克兔肾脏的保护作用及其可能机制。方法选用健康日本长耳大白兔18只,随机分为对照组（CON组）、生理盐水复苏组（NS组）、MB处理组（MB组）,每组6只。NS组及MB组观察休克前（T1）、休克末（T2）、复苏末（T3）及复苏后2 h（T4）、4 h（T5）、6 h（T6）、8 h（T7）时间点平均动脉压（MAP）的动态变化,测定各时间点血浆尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）水平。观察各组兔肾组织光镜下病理形态学变化。结果 NS组复苏末及复苏后各时间点MAP均未达到基础值水平（P〈0.05）;复苏末及复苏后各时间点MAP与CON组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;复苏后2 h、6 h、8 h的MAP与MB组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。MB组休克末及复苏后2 h MAP与基础值比较差异有统计学意义（P〈0.05）,与CON组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。兔创伤性休克复苏后各时间点NS组、MB组BUN、Cr水平较CON组升高（P〈0.05）,但MB组BUN、Cr水平较NS组明显降低（P〈0.05）。光镜下NS组和MB组肾脏可见轻微的病理改变,但两组之间无明显差异,较对照组亦无明显改变。结论创伤性休克可致兔肾功能损害,MB能显著改善休克后兔血流动力学、肾功能,保护肾脏组织。     

参麦注射液救治过敏性休克的临床研究

目的　观察参麦注射液救治过敏性休克患者微循环、血压、尿量的影响。方法　在现代医学常规治疗过敏性休克的基础上辅以静推参麦注射液治疗过敏性休克患者 60例 (治疗组 ) ,观察治疗前后血液流变学变化、意识状态、生命体征、血压、尿量及无创血氧饱和度 ,并与常规治疗过敏性休克患者 3 6例 (对照组 )进行比较。结果　治疗后 4h血压回升率治疗组 68.3 %,对照组 2 2 .2 %;治疗后 6h血压回升率治疗组 93 .3 %,对照组 44 .4%(P <0 .0 1) ;治疗组治疗后 2、3、4、5、6h尿量平均值明显高于对照组 (P值除治疗后 5h <0 .0 5外 ,其余均 <0 .0 1) ;治疗组治疗后血液流变学指标较对照组明显改善 (P <0 .0 1)。结论　在现代医学常规治疗过敏性休克的基础上辅以静推参麦注射液 ,治疗效果优于单纯现代医学常规治疗     

EXPRESSION OF TNFα, IL-lβ, IL-6 mRNA, RELEASE OF TNFα IN VITAL ORGANS AND THEIR RELATIONSHIP WITH ENDOTOXIN TRANSLOCATION FOLLOWING HEMORRHAGIC SHOCK

This study was designed to systematically investigate expression of TNF α,IL-1β,II-6 mRNA in the liver,lungs and kidneys,release of TNF α in the above tissues,their relationship with hepatic,pulmonary and renal dysfunction,and distribution of endogenous endotoxin in tissues after hemorrhagic shock in mice and rats,with reverse-transeription-polymerase chain reaction,ELISA, eta,to elucidate the kinetics of expression and release of major cytokines in vital organs,their role and mechanism of production in shock. The resulis were :①expression of TNF α,IL-1β,IL-6 nIRNA in vital organs successively increased after hemorrhagic shock and resuscitation,and TNF α expression was the first to appear followed by IL-1βThough expression of IL-6 mRNA appeared late,it persisted longer ;②TNF a levels in the liver,lungs and kidneys were all elevated but to different degrees after shock and resuscitation. At 3 hours after resuscitation,TNF α levels in the three above tissues were still significantly high,while plasma TNF α levels were already decreased to control levels；③hepatic,pulmonary and renal functions were damaged to different degrees after hemorrhagic shock,with hepatic dysfunction being the most severe;④endotoxin levels in the liver,lungs and kidneys were markedly increased after shock and resuscitation ,and paralleled the expression of cytokine genes. In additlon, there was significant correlation between changes in endotoxin level in tissues and TNF α release in tissues during early shock. It is suggested that expression and release of eytokines in vital organs might play an important role in local organ damage after hemorrhagic shock,and production of cytokines is related to endotoxin translocation.     

重症急性胰腺炎小鼠IL-37的动态变化及其意义研究

[目的]探讨IL-37在重症急性胰腺炎小鼠模型中的动态变化及意义。[方法]采用牛磺胆酸钠注射诱导小鼠重症急性胰腺炎,再用乌司他丁（UTI）给予治疗,分别于6h、12h、24h时处死小鼠,留取血清和胰腺组织。ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-37表达水平,利用Western blot和Real-Time PCR方法检测小鼠胰腺组织IL-37蛋白及IL-37 mRNA表达水平。[结果]重症急性胰腺炎组（SAP组）小鼠血清细胞因子TNF-α和IL-6水平均随着时间延长而显著增加（P〈0.01）;TGF-β1和IL-37的表达水平在12h后明显降低（P〈0.01）。胰腺组织中IL-37蛋白及IL-37 mRNA表达也在12h后显著降低（P〈0.01）。而经UTI治疗后,小鼠血清TNF-α和IL-6水平均随时间延长而降低,而TGF-β1和IL-37的表达水平则随时间延长而增高,并且胰腺组织中IL-37蛋白和IL-37 mRNA的表达水平也相应增高（P〈0.01）。[结论]SAP小鼠中IL-37可能作为抑炎性细胞因子参与机体的病理变化。     

失血性休克后小鼠肺组织TLR4受体表达及其意义

目的探讨单纯性失血性休克(无复苏)后肺组织TLR4表达变化及意义。方法C57BL/6小鼠随机分为失血性休克组、脂多糖(LPS)刺激组、假手术组。复制各组动物模型,在不同时间点取出肺组织,通过免疫组化方法,观察TLR4在肺组织的表达变化。结果在失血性休克和LPS刺激后肺部出现明显的中性粒细胞浸润、红细胞渗出。在失血性休克1、2及4 h后,肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺间质TLR4表达逐渐增加,6 h开始下降;而LPS刺激后1、2、4及6 h肺TLR4表达逐渐增加。假手术组未见TLR4表达。结论失血性休克后肺TLR4变化可能与急性肺损伤(ALI)的发生有关。失血性休克及LPS刺激后肺组织TLR4变化增强了机体的非特异性免疫能力,同时增加了宿主对随后各种刺激的易感性,过度表达的TLR4可能造成组织、器官结构和功能的损害。