中药复方软坚消肿液抑瘤实验研究

本研究旨在通过移植肿瘤动物模型来现察软坚消肿液的抑瘤作用,并探讨该药的急性毒性反应。采用孙氏综合法测定药物LD_(50),移植S(180)肿瘤细胞及人胃癌细胞(MGC—803)建立小鼠肿瘤模型,测定肿瘤重量了解药物抑瘤情况,透射电镜现察肿瘤细胞变化,并通过Northern杂交观察癌基因Bcl—2、C—myc和P_(53)的改变。该药腹腔注射的LD_(50)为29.34±2.49g/kg;灌胃的LD_(50)为125.34±20.53g/kg。软坚消肿液对S_(180)肿瘤的最大抑瘤率为38.4％,对人胃癌移植肿瘤的最大抑瘤率为56.01％,透射电镜可见复方中药处理的小鼠,瘤细胞呈现典型凋亡细胞特征,Northern杂交显示癌基因Bcl—2表达下调,C—myc和P_(53)表达增强。研究表明软坚消肿液对动物移植肿瘤有明显的抑制作用,可诱导S_(180)肿瘤细胞和人胃癌细胞凋亡。该药的毒副作用极小,有临床开发应用价值。     

前列地尔调节Bc1-2,Bax抑制大鼠糖尿病肾病肾小管细胞凋亡

目的 探讨前列地尔对大鼠糖尿病肾病（DN）肾小管细胞凋亡及蛋白Bc1-2/Bax表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠30只随机抽取10只作为正常对照组,余20只制备成糖尿病大鼠模型,并将成模大鼠随机分为糖尿病组和前列地尔组.16周后取大鼠肾脏皮质,免疫组化法检测肾脏组织Bc1-2/bax蛋白表达,TUNEL检测肾脏细胞的凋亡.结果 与正常对照组相比,前列地尔组和糖尿病组Bc1-2和bax表达水平均升高,Bc1-2/bax比值降低,肾小管细胞凋亡指数增加（P＜0.05）.与糖尿病组比较,前列地尔组Bc1-2表达量及Bc1-2/bax比值升高,bax蛋白含量和肾小管细胞凋亡指数降低（P＜0.05）.结论 前列地尔可通过调节DN肾脏组织中Bc12,bax的表达,发挥对肾脏的保护作用.     

C-myc基因表达及细胞凋亡在脂溢性角化病皮损中的意义

目的  观察脂溢性角化病（SK）中C-myc基因表达及细胞凋亡情况，探讨脂溢性角化病的发病机制。方法  对66例脂溢性角化病皮损及10例正常皮肤组织采用免疫组织化学法检测C-myc基因表达及原位细胞凋亡检测（TUNEL）法检测细胞凋亡情况。结果  两组性别、年龄差异均无统计学意义（P >0.05）；SK组皮损区C-myc基因阳性细胞数百分比（21.94±19.45）%与对照组（0%）相比增加（P <0.05）；66例SK皮损中有52例C-myc基因表达阳性，对照组中均无阳性表达，两组阳性率差异有统计学意义（P <0.05）；TUNEL凋亡检测中SK组的凋亡指数（53.01±31.97）与对照组（33.50±23.86）比较，差异无统计学意义（P >0.05）；Spearman相关性分析显示，C-myc基因在SK皮损中阳性细胞百分比与SK皮损中细胞凋亡指数差异无统计学意义（P >0.05）。结论  C-myc基因参与脂溢性角化病的发生发展，脂溢性角化病皮损中细胞凋亡有所增加。该结果对研究其发病机制有一定的指导意义。

     

胃癌组织P53、PCNA蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的探讨P53、PCNA蛋白表达和胃癌细胞凋亡关系及其它们在胃癌发生发展中的可能作用。方法采用TUNEL及流式细胞术分别检测60份胃癌、癌旁正常黏膜组织细胞凋亡和P53、PCNA蛋白表达。结果胃癌组织细胞凋亡率明显低于癌旁正常组织（〈0.01）;P53、PCNA蛋白在胃癌组织中的表达率明显高于癌旁正常组织（〈0.01）。胃癌P53阳性组细胞凋亡率低于P53阴性组,而PCNA平均荧光强度高于P53阴性组。低分化胃癌病例其P53、PCNA蛋白高于高中分化的病例。有淋巴结转移的胃癌病例其P53、PCNA蛋白高于无淋巴结转移的病例。结论胃癌组织中癌细胞凋亡明显受到抑制,胃癌组织中P53高表达及细胞增殖活跃状态在胃癌的发生发展过程中起重要作用。     

bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制

目的 探讨bcl-2和p53在丹皮酚（paeonol，Pae）诱导入结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法 应用透射电镜技术和原位末端标记（TUNEL）法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用，应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化，并与对照组比较。结果 透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态；Pae在15．63mg／L、62．50mg／L、250．00mg／L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡，TUNEL法显示各组凋亡指数（AI）间差别有显著性意义（P〈0．05）；免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论 Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡，其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。     

术前区域射频热疗同步靶动脉热灌注化疗对胃癌淋巴结转移灶癌细胞凋亡的影响

目的探讨术前区域射频热疗同步靶动脉热灌注化疗对胃癌淋巴结转移灶癌细胞凋亡的影响。方法对40例胃癌伴淋巴结转移患者行胃癌根治性切除术,根据术前是否行区域射频热疗同步靶动脉热灌注化疗分为治疗组和对照组,每组20例,采用免疫组化ABC法检测淋巴转移灶p53、bcl-2及CD95基因的表达,应用原位末端脱氧核苷转移酶标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果治疗组淋巴转移灶p53和CD95表达较对照组明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）,并与细胞凋亡呈正相关;bcl-2表达则减低,差异有统计学意义（P〈0.05）,与细胞凋亡呈负相关。结论胃癌术前行区域射频热疗同步靶动脉热灌注化疗,可能通过p53、bcl-2及CD95介导使转移淋巴结癌细胞凋亡增加,有助于提高根治性手术的疗效。     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗影响的研究

目的人乳头瘤病毒（HPV）是官颈癌最主要的致病因素，E6是主要的致癌基因之一，高危HPV基因型，如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件；放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法；该研究旨在探讨抗HPV16E6核酶（ribozyme）对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，命名为CaSKi—R、CaSKi—P细胞。点杂交交检测核酶在细胞中的表达，Northem杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性，Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率，流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果点杂交证实核酶能在CaSKi—R细胞中稳定表达，Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi—P、CaSKi中明显降低。CaSKi—R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢（P〈0.01）；CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi—P、CaSKi明显增加，克隆形成率明显下降（P〈0．05），CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较x射线照射后CaSKi—P、CaSKi明显增加（P〈0．（31）；CaSKi—R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi—P、CaSKi明显升高山bcl-2明显减少（P〈0．01）。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi—R细胞出现一定程度的生长抑制，且时放射治疗的敏感性增加。     

胃癌组织P53、P63蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的：探讨P53、P63蛋白表达及细胞凋亡在胃癌发生发展中的可能机制。方法：选择57例手术切除的胃癌及胃癌旁组织,用免疫组化方法检测组织中的P53、P63蛋白表达,同时用Tunel方法检测胃癌组织中的凋亡细胞。结果：胃癌组织P53、P63蛋白表达率显著高于胃癌旁组织（P〈0.05）;低、未分化型腺癌表达率显著高于高、中分化型腺癌（P〈0.05）;有淋巴转移显著高于无转移组（P〈0.05）;P53、P63高表达的癌组织,细胞凋亡指数减少,早期胃癌低于晚期胃癌（P〈0.05）。结论：胃癌组织P53、P63蛋白高表达,可能延缓细胞凋亡;细胞凋亡机制障碍可能是胃癌增生失控的基础。     

辅酶 I对缺血再灌注损伤诱导LO2肝细胞凋亡的影响

目的研究辅酶I(NADH)对体外培养正常肝细胞系L02缺血再灌注损伤模型的保护作用.方法实验分组:(1)正常对照组(control组);(2)缺血再灌注损伤组(I/R组),即用模拟缺氧液及复氧液处理;(3)NADH+缺血再灌注损伤组(NADH+I/R组),即先加NADH(终浓度为400μ/ml)后再进行缺血再灌注处理.流式细胞术观察细胞处理后1、6、12、18、24 h凋亡率及12 h时p16、p21、p53和Bc1-2蛋白表达.透射电镜观察细胞超微结构.结果NADH可明显抑制缺血再灌注损伤诱导的肝细胞凋亡,并且能够上调Bc1-2蛋白表达,下调p53、p16、p21蛋白表达,差异显著(P〈0.01);透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征.结论NADH对缺血再灌注损伤的L02肝细胞有明显的保护作用,其作用机制可能与通过调节Bc1-2家族蛋白及p16、p21、p53蛋白有关.     

肺康饮口服液对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的通过观察肺康饮口服液对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的肺康饮口服液作用为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应,透射电镜观察药物对细胞形态学的影响,流式细胞术检测A549细胞中p53和Be1-2蛋白表达情况。结果不同浓度肺康饮口服液作用A549细胞24h增殖抑制明显（P〈0．05）,其抑制效应具有剂量依赖的特点,并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调Bc1-2基因表达（P〈0．05）。结论肺康饮口服液可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

砷剂诱导人胃癌细胞株凋亡及对C-myc基因作用的研究

目的研究砷剂（As2O3）对人胃癌细胞的诱导凋亡作用及对C-myc基因表达的影响。方法选用人胃癌BGC-823细胞株,运用体外细胞培养法、MTT法、流式细胞术检测As2O3对人胃癌的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测C-mycmRNA的表达。结果As2O3对人胃癌BGC-823细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol／L、3．0μmol／L的As2O3可下调C-myc的表达。结论As203具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现。其机制与下调C-myc表达有密切关系。     

阿霉素对MGc-803胃癌细胞凋亡的诱导作用

[目的 ]研究阿霉素对MGc 80 3胃癌细胞凋亡的诱导作用 .[方法 ]通过细胞涂片苏木精与伊红染色法、吖啶橙荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳法 ,观察了阿霉素诱导MGc 80 3胃癌细胞凋亡的形态变化 .[结果 ]阿霉素能使MGc 80 3胃癌细胞出现典型的凋亡 .DNA电泳呈梯形带 ,进一步证实了光学显微镜所见 .[结论 ]阿霉素可诱导MGc 80 3胃癌细胞发生细胞凋亡 .     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol，Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用；DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡；用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比，Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖，诱导其凋亡，光镜下可见明显的凋亡细胞；DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征；RT—PCR和免疫细胞化学检测显示，Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高，Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用，其机制可能是通过抑制P13K通路，增强诱导其凋亡有关。     

茶多酚诱导人胃癌细胞凋亡

为寻找新的肿瘤细胞凋亡诱导剂，选用茶的主要活性成分茶多酚，采用噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法，ＤＮＡ凝胶电流透射电镜技术，观察茶多酚对人胃癌细胞（ＭＧＣ－８０３）凋亡的影响。结果表明，被１２５μｇ．ｍｌ＾－１茶多酚２４ｈ后，ＭＧＣ细胞进行凝胶电泳呈现出典型的ＤＮＡ条带，透射电镜下看到凋亡小体；茶多酚对ＭＧＣ细胞凋亡的诱导活性平行于它的细胞毒作用。     

Anti-tumor effect and mechanism of Paeonol on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404]

OBJECTIVE: To investigate the anti-tumor effect of Paeonol (Pae) on the hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 and its molecular mechanisms. METHODS: Hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404 was treated by Pae in various concentrations and different time points respectively; and then the cell proliferation was assayed by light microscope, MTT method. DNA agarose gel electrophoresis and TUNEL were used to detect the apoptosis. The expression of PTEN and Akt were examined by RT-PCR and immunocytochemical ABC method. RESULTS: Compared with the control groups Pae obviously increased the inhibitory and apoptosis rate of hepatocellular carcinoma cell line Bel-7404. It also showed a typical apoptotic morphology and DNA depicted a ladder pattern characteristic of the apoptosis, indicating the presence of DNA fragmentation. RT-PCR and immunocytochemical ABC assay showed that Pae could increase the expression of PTEN and decrease the expression of Akt. CONCLUSION: Pae can increase the anti-hepatocellular carcinoma effect, and its mechanism may be the increase of apoptosis-inducing effect which is regulated by phosphatidylinositol-3-kinase.     

大鼠脊髓损伤后DNA损伤与P53蛋白的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后神经细胞的ＤＮＡ损伤、凋亡及Ｐ５３蛋白的表达。方法：采用大鼠脊髓急性压迫损伤模型，应用原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳、免疫组化等方法，对大鼠损伤脊髓进行检测。结果：脊髓损伤后４ｈ开始出现凋亡细胞及Ｐ５３蛋白表达，并在２４ｈ达到高峰。两者阳性细胞形态及分布有相似之处。ＤＮＡ电泳可见２４ｈ组出现特征性条带。结论：大鼠脊髓损伤后出现大量的ＤＮＡ损伤和神经细胞凋亡。Ｐ５３蛋白可能参与了诱导神经细胞凋亡的过程     

Apoptosis and P53 protein expression after rat spinal cord injury

AworkshopwasorganizedbytheNationalIn-stituteofNeurologicaDisordersandStrokeinSeptember1995.TheobjectiveofthisworkshopwastopromoteinquiryandtofosterapplicationofresearchinDNAdamageandrepairaftercentralnervoussystem(CNS)injury['].Nowinvestiga-torshavefoundthereareextensiveDNAdamageinmodelsoffocalcerebralischemiaandtraumaticbrain,withneuronsapoptosis.DNAfragmenta-tioncorrelatedgenes(hsp,IEGs,bcl-2,bax.p53)expression["']'Buttherehavebeenonlyfewstud-iesonDNAdamageandcorrelativegenesexpres…     

Ras、C-myc、P53基因联合检测对胃镜下活检粘膜癌及癌前病变的诊断意义

目的探讨癌基因Ras、C-myc和抑癌基因P53在胃粘膜癌变过程中的作用及相互关系,及其联合检测对胃镜下活检粘膜癌及癌前病变的诊断意义.方法应用免疫组化S-P法对Ras、C-myc和P53蛋白在胃粘膜异型增生、胃癌组织中的表达作定位及定性研究.结果 Ras、C-myc和P53蛋白阳性表达率在胃粘膜异型增生组中随异型增生程度加重而增高,至胃癌组达最高,其中轻度组与重度组、胃癌组均有显著差异 (P<0.01).中度组的P53与C-myc蛋白的阳性表达率与胃癌组有显著差异 (P<0.01).胃癌组的Ras、C-myc蛋白的阳性表达有显著协同性(P<0.05).结论癌基因Ras的激活发生在胃粘膜癌前病变的早期,癌基因C-myc的激活和抑癌基因P53的失活发生在胃粘膜癌前病变的晚期,癌基因Ras、C-myc的协同表达在胃粘膜癌变的发生发展中起重要作用.提示中、重度异型增生为重要的癌前病变,对异型增生组织进行多基因联合检测对胃癌的早期诊断有重要意义.