ATO，ATRA／G-CSF联合使用加速RARα降解诱导NB4细胞末端分化

目的：探讨三氧化二砷（ATO）、全反式维甲酸（ATRA）及粒细胞集落刺激因子（G-CSF）（A／G）联合使用,诱导NB4细胞末端分化的分子机理。方法：台盼蓝染色记录细胞生长,吉姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪分析确定细胞分化分子标志及凋亡,Westernblot观察RAR仪蛋白的表达。结果：NB4细胞经过ATO4-A／G处理,出现形态学末端分化特征和免疫表型的成熟。Westernblot结果显示,RAR仪基因是ATO特定的靶向目标。结论：ATO联合ATRA／G—CSF能够诱导NB4细胞末端分化,其机理与调节RARa的表达有关。     

小剂量硒化壳聚糖与全反式维甲酸协同诱导NB4细胞分化和凋亡

目的 研究小剂量硒化壳聚糖(25 mg/L)与全反式维甲酸(ATRA 0.1 μmol/L)联合应用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化及凋亡的影响.方法 采用DNA片段化凝胶电泳法检测细胞凋亡;NBT还原法检测细胞分化;流式细胞法检测分化抗原CD11b.结果 25 mg/L硒化壳聚糖没有诱导NB4细胞分化和凋亡的能力,但与0.1 μmoL/L ATRA联合使用同单独使用0.1 μmol/L ATRA相比,CD11b表达阳性率进一步增加,NBT还原能力进一步增强,两药合用DNA电泳呈现出典型的梯带.结论 小剂量硒化壳聚糖与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化.     

白血康治疗复发及难治性急性早幼粒细胞白血病20例

全反式维甲酸（ATRA）诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）完全缓解（CR）率虽高达85％以上,但较易复发,且对复发患者再次治疗CR率极低。1996年10月-2001年10月,我们采用白血康治疗复发及难治性APL20例,现报告如下。 临床资料20例均为住院患者,经临床、血象和骨髓象确诊为APL,19例均存在特异染色体易位t（15;17）或PML/RARα融合基因,1例难治患者为非t（15;17）,且PML/RARα融合基因阴性。男9例,女11例;年龄16-63岁,中位年龄30岁;复发14例,均经ATRA诱导至CR,在单用ATRA维持治疗或单用HA（高三尖杉酯碱、阿糖胞苷）、DA（柔红霉素、阿糖胞苷）等方案巩固治疗或ATRA与HA、DA等方案交替治疗过程中复发,平均复发时间为16.4个月,其中1例复发3次,CR1 16     

灵芝多糖对NB4细胞凋亡及Egr-1表达的影响

目的 研究灵芝多糖在体外对人类白血病细胞株NB4细胞的增长抑制及凋亡的影响及抗肿瘤的机制。方法 用MTT比色法检测灵芝多糖对NB4细胞增长的抑制作用,Annexin V-FITC / PI双染色法检测NB4细胞的凋亡情况,荧光定量PCR及蛋白印迹技术检测早期生长反应因子1(Egr-1)基因的表达。结果 灵芝多糖对NB4细胞增殖具有抑制作用并可促其凋亡,最高分别为33.5%及18.77%。这种效应呈时间-剂量依赖性。与对照组比较,差异有统计学意义(P < 0.01)。对Egr-1 mRNA和蛋白表达也具有明显的促进作用,差异有统计学意义(P < 0.01)。结论 灵芝多糖在体外能够明抑制NB4细胞的增长并促其凋亡,其机制可能与上调Egr-1的表达相关。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷体外诱导NB4-R1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨葛根总黄酮联合三氧化二砷(As2O3)对维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖及凋亡的影响。方法:采用葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)联合As2O3(1μmol/L)处理NB4-R1细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果:(1)一定浓度葛根总黄酮对NB4-R1细胞生长有抑制效应,呈剂量和时间依赖性,相同条件下,葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3对NB-R1细胞抗增殖作用强于单用葛根总黄酮,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)及葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3处理NB4-R1细胞48 h后,早期凋亡率呈浓度依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)瑞氏染色,在光镜下观察到葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,且联用组较单药组明显。(4)流式细胞术检测细胞周期变化发现葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用可影响细胞进程,表现为S期细胞增多,葛根总黄酮+As2O3联用组比各单用葛根总黄酮组Sub-G1增加更为明显。(5)Western blottimg结果显示葛根总黄酮可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2表达。结论:低浓度葛根总黄酮体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μmol/L As2O3具有协同作用;其诱导凋亡作用机制可能为阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK通路。     

构建雄黄诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病NB4-R1细胞凋亡的蛋白质双向电泳图谱

目的 构建雄黄（四硫化四砷, tetra-arsenic tetra-sulfide, As4S4）诱导急性早幼粒细胞白?。ˋPL)维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞凋亡前后的差异蛋白质组表达谱。     

miR-223对粒细胞性白血病细胞增殖影响及作用机理

通过在体外将miR-223 duplex转染至粒系白血病细胞株（HL-60、NB4）,观察其对粒系白血病细胞增殖作用的影响,来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理。以白血病HL-60、NB4细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HL-60、NB4细胞增殖的影响;流式细胞术观察粒系细胞分化的表面标志（CD11b＋、CD15＋）表达;RT-PCR检测miR-223对c/EBPα、NFI-A转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况。结果表明：（1）低浓度的miR-223（10nM、20nM）均抑制HL-60、NB4细胞增殖（P〈0.05或P〈0.01）,但在HL-60细胞中随着其浓度的增加（50nM、100nM）,抑制作用与对照组相比无差异;而NB4细胞中随浓度增加抑制作用却没有增强（P〈0.05）。半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致。（2）流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转染粒系细胞中发现,粒系细胞表面标志CD11b＋表达在低浓度（10nM、20nM）下随其浓度升高而增加,但浓度增至50nM、100nM时表达有所下降;而CD15＋在HL-60细胞中表达无显著差异,NB4细胞中表达趋势与CD11b＋一致。（3）两细胞在miR-223作用前后提取总RNA分别进行RT-PCR检测显示,NB4细胞中NFI-A转录因子表达随浓度增加而降低,分别低于未经处理的0.6倍、2.0倍、1.1倍和1.5倍。c/EBPα基因表达随浓度增加而增加,分别是未经处理细胞的1.5倍、2.0倍、1.8倍和2.0倍。而在HL-60细胞中c/EBPα基因表达无明显差异,NFI-A仅在20nM浓度下表达下降差异显著,低于未经处理细胞的3.0倍。对NB4细胞中的NFI-A蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中NFI-A蛋白含量随浓度增加而有所下降。结论：转染一定浓度miR-223至粒系白血病细胞中,能够抑制恶性细胞克隆增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制NFI-A转录因子表达,恢复与分化相关的c/EBPα转录因子的表达,来诱导粒系白血病细胞向成熟方向分化。     

硼替佐米诱导急性髓性白血病细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响

 目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（bortezomib、Bor）诱导急性红白血病细胞株(TF1)和急性早幼粒白血病细胞株(NB4)凋亡及其对 SALL4基因表达的影响。方法 MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测SALL4蛋白表达;实时荧光定量PCR检测SALL4 RNA的表达变化;Western Blotting检测SALL4蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示,硼替佐米能够抑制两种细胞的增殖,呈时间和计量依赖性,TF1细胞和NB4细胞48 h IC₅₀ 分别为(29.15±0.55)和(30.55±0.74) nmol·L^-1;流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着硼替佐米浓度的增加而增加,呈剂量依赖性。免疫细胞化学显示两种细胞均表达SALL4蛋白,定位于细胞核;实时荧光定量PCR结果表明,经不同浓度Bor（10,30,50 nmol·L^-1）处理24 h后,两种细胞的SALL4 RNA均出现了不同程度的下调,50 nmol·L^-1Bor作用后,SALL4基因表达下降为对照组的45.11%(TF1)和69.77%（NB4）,差异均具有统计学意义(P<0.05);Western Blotting结果表明,Bor能够抑制两种细胞中SALL4B蛋白的表达,具有时间剂量依赖性。结论 硼替佐米能够抑制TF1、NB4细胞的增殖并促进细胞凋亡,同时抑制SALL4基因表达。
     

大萼香茶菜甲素对急性早幼粒细胞性白血病细胞体外作用的影响

目的:观察大萼香茶菜甲素(Macrocalyxin A,MA)体外对急性早幼粒细胞性白血病(NB4细胞)增殖抑制、诱导凋亡及诱导分化的作用,并探讨其作用机制。方法:将不同浓度MA在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、MTT细胞活性检测体外观察MA对NB4细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Hoechst33258荧光染色、DNA亚二倍体检测和Annexin V/PI双染色方法研究MA诱导NB4细胞凋亡作用;采用细胞形态学观察、NBT试验、细胞免疫表型CD11b检测等方法研究MA诱导NB4细胞分化作用;采用流式细胞技术分析凋亡调控基因Bcl-2、bax、bad、Fas、p53表达情况和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△ψm)的改变探讨MA体外诱导NB4细胞凋亡和分化机制。实验设置空白对照和全反式维甲酸(ATRA)阳性对照。结果:不同浓度MA在体外对NB4细胞增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间的量效关系;较低浓度MA作用48h后可以诱导NB4细胞分化,较高浓度MA则显著地促进细胞凋亡;在凋亡调控基因中,Bcl-2、Fas表达无明显改变,bax、bad、Bcl-2/bax、p53随着药物作用浓度的增高表达逐渐增高...     

二苯乙烯苷对APP/PS1/Tau三转基因小鼠痴呆模型GSK3β，PKA，PP2A的影响

目的 观察二苯乙烯苷（TSG）对淀粉样前体蛋白/早老蛋白-1/Tau（APP/PS1/Tau）三转基因小鼠阿尔茨海默病（AD）模型脑组织中糖原合成酶激酶3β（GSK3β）,环磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（PKA）,磷酸丝氨酰/磷酸苏氨酰蛋白磷酸酶2A（PP2A）的表达影响。方法 8月龄APP/PS1/Tau三转基因小鼠45只,随机分为模型组、石杉碱甲组（石杉碱甲,0.15 mg·kg^-1）,TSG低、中、高剂量组（TSG,0.033,0.1,0.3 g·kg^-1）,每组9只。另取同龄C5B7L/6J小鼠9只为正常组。各组灌胃60 d相应药物后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠海马神经元的一般结构;免疫组化（IHC）检测各组小鼠脑组织PKA蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测GSK3β,PKA,PP2A mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GSK3β,PP2A蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠神经元细胞的凋亡水平显著升高,GSK3β,PKA蛋白及mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,PP2A蛋白及mRNA表达水平显著下调（P<0.01）;与模型组比较,各给药组小鼠神经元细胞凋亡水平显著下调,GSK3β,PKA蛋白及mRNA表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）,PP2A蛋白及mRNA表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 TSG治疗AD的机制可能与降低GSK3β和PKA mRNA表达水平与蛋白表达水平,提高PP2A的mRNA表达水平与蛋白表达水平等机制有关。     

绿原酸通过影响自噬及耐药蛋白表达逆转5-氟尿嘧啶结肠癌细胞的耐药性

[目的] 观察绿原酸（ChA）对耐5-氟尿嘧啶（5-FU）结肠癌细胞（HCT116-R）中多药耐药及自噬蛋白的影响，探讨绿原酸对HCT116-R细胞系的耐药逆转作用及相关作用机制。[方法] 体外传代培养HCT116、HCT116-R细胞系，采用CCK8法检测了ChA和5-FU对HCT116细胞增殖活力的影响；采用100、400 mg/L ChA干预HCT116-R细胞系48 h后，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western Blot）分析细胞中耐药、自噬相关基因及相关蛋白的表达。[结果] ChA可以诱导5-FU对结肠癌HCT116细胞增殖活力的抑制作用；Western Blot实验结果表明HCT116-R细胞中P-糖蛋白（P-gp）、肺抗药性相关蛋白（LRP）、自噬相关基因Beclin-1及高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达相对于HCT116细胞显著上调（P<0.05）；进一步分析发现ChA呈剂量性的抑制HCT116-R细胞中P-gp、LRP、Beclin-1及HMGB1 mRNA和蛋白表达（P<0.05），并且ChA还降低了p-Akt1、Akt1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR表达（P<0.05）。[结论] ChA通过影响Akt1/mTOR分子通路活化降低耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1、HMGB1表达，进而逆转5-FU结肠癌细胞系的耐药性。     

蓬子菜总黄酮诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡的研究

目的:探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)抗急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的作用,为以后临床治疗早幼粒细胞白血病提供一个新的依据。方法:以急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为研究对象,实验分为3个实验组(FGVL质量浓度依次为50,100,200 mg·L~(-1))和空白组(相同体积的培养液),通过台盼蓝染色观察FGVL对NB4细胞生长的影响;噻唑蓝法(MTT)检测FGVL对细胞增殖的抑制作用;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色观察NB4细胞凋亡的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:与空白组比较,FGVL(50,100,200 mg·L-1)能抑制NB4细胞的增殖(P0.01);24 h细胞形态学可见明显的细胞凋亡特征以及DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA"梯形"凋亡条带;RT-PCR实验表明,与空白组比较,FGVL下调了抑制细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,并上调促凋亡基因Bax mRNA的表达(P0.01),其作用与剂量呈正相关。结论:FGVL抗急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2/Bax表达有关,可为急性早幼粒细胞白血病临床化疗用药提供一个新的可能。     

硒化壳聚糖对NB4细胞的生长抑制作用与Ras信号通路的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。方法 NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot的方法检测两种细胞株相关蛋白含量的变化。结果 Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P<0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞内c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。结论 Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白的含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

威灵仙总皂苷诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化作用的研究

目的研究威灵仙总皂苷对NB4细胞分化的影响。方法取对数生长期的NB4细胞,设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组,观察用药后不同时间点NB4活细胞数,计算生长抑制率;Wright's-Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率,透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术检测CD11b/CD33表达情况。结果与空白对照组比较,威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量-效应依赖关系;但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。结论威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖,但对NB4细胞无明显的诱导分化作用。     

补肺益肾方联合运动改善慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌功能及对PKA-CREB通路的影响

目的观察补肺益肾方联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠骨骼肌结构和功能的影响，并从PKA-CREB通路方面初步探讨其机制。方法将72只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾组、运动组、补肺益肾联合运动组（简称联合组）、氨茶碱组，每组12只。采用香烟暴露联合细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型，空白组、模型组给予生理盐水灌胃，补肺益肾组给予补肺益肾方［11.61 g生药/（kg·d），每天2次］灌胃，运动组置实验跑台跑步（8 m/min，20 min/次，每天1次），联合组给予两者联合，氨茶碱组给予氨茶碱［54 mg/（kg·d），每天2次］灌胃。用BL420生物信号采集系统记录大鼠股四头肌肌肉收缩力；光镜下观察肺组织和股四头肌组织病理变化，电镜下观察股四头肌肌细胞超微结构变化；qPCR方法检测股四头肌PKA、CREB、FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达；Western Blot法检测股四头肌中PKA、CREB、pCREB蛋白表达。结果与空白组比较，模型组大鼠肺组织大量炎症浸润，肺泡断裂融合，肺泡腔增大，股四头肌肌节肌丝排列紊乱，线粒体减少，骨骼肌收缩力降低（P<0.01），股四头肌中PKA、CREB mRNA和蛋白表达降低（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达升高（P<0.01）；与模型组比较，各干预组肺组织和股四头肌病理损伤不同程度减轻，联合组改善显著，各干预组肌肉收缩力升高（P<0.01），PKA mRNA表达升高，CREB mRNA表达除补肺益肾组外均升高（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1、MuRF1 mRNA表达降低（P<0.01），各干预组PKA、CREB和pCREB蛋白表达升高（P<0.01）；与氨茶碱组比较，联合组肌肉收缩力及PKA mRNA表达升高（P<0.01），Atrogin-1 mRNA表达降低（P<0.01），补肺益肾组和运动组CREB mRNA降低、FOXO1 mRNA升高（P<0.01），补肺益肾组PKA、CREB和pCREB蛋白表达降低（P<0.01），运动组PKA蛋白表达降低（P<0.01）；联合组较补肺益肾和运动组PKA和CREB mRNA表达升高（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达降低（P<0.01），PKA蛋白表达升高（P<0.01），较补肺益肾组CREB，pCREB蛋白表达升高（P<0.01）。结论补肺益肾方、运动康复及其联合均可减轻肺组织和股四头肌病理损伤，缓解大鼠骨骼肌功能障碍，以联合尤为显著，其机制可能与调控PKA-CREB通路调节蛋白合成分解平衡有关。     

健脾化瘀解毒方调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡

目的探讨健脾化瘀解毒方（JPHY）调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变（GPL）大鼠胃黏膜上皮细 胞自噬及凋亡的机制。方法采用200 μg·mL-1 N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）自由饮用+隔日禁食法 造模28 周复制GPL 模型。将SD 大鼠随机均分为空白组、模型组、维酶素组（270 mg·kg-1）、JPHY 高剂量 组（9 g·kg-1）和JPHY 低剂量组（4.5 g·kg-1）,每组18 只。第15 周起,各给药组大鼠每天灌胃给药（10 mL·kg-1） 1 次,连续25 周。分别于第18、28 和39 周,每组随机取6 只大鼠,采用HE 染色法观察大鼠胃黏膜组织病 理学形态变化;Western Blot 法测定胃黏膜组织PI3K、Akt、HIF-1α、Beclin1、Bcl-2、BAX 蛋白的表达。 结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织固有腺变薄,非固有腺锯齿样变,弥漫性细胞空泡样变,固有 腺细胞变为体积小、胞质少、核质比例大、深染的异型增生细胞,呈假复层、跨腺腔灶状分布,有炎性细胞浸 润,表现为以肠上皮化生为主;第18 周,大鼠胃黏膜组织的PI3K、Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）;第28 周,PI3K、 Akt、BAX 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上 调（P < 0.01）;第39 周,Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,PI3K、BAX 蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。与模型组比较, JPHY 高剂量组的胃黏膜改善作用最明显,异型增生细胞数量、分布范围和分布密度有明显减少,固有层厚度 明显增加,腺腔结构趋于正常;第18 周的PI3K、Akt 蛋白表达明显上调（P < 0.01）,HIF-1α、Bcl-2 蛋白表达 及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05）;第28 周的PI3K、Akt、BAX 蛋白表达明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值表达明显下调（P < 0.01）;第39 周Akt 蛋白表达明显上 调（P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论JPHY 对 GPL 不同阶段的黏膜损伤均有明显保护作用,可能与其通过PI3K/Akt/HIF-1α 通路调节肿瘤缺氧微环境以及调 控细胞自噬、凋亡作用有关。     

左金丸对DSS 诱导溃疡性结肠炎小鼠滤泡辅助性T 细胞的调控作用

目的探讨左金丸对溃疡性结肠炎（UC）小鼠滤泡辅助性T 细胞（Tfh）的调控作用。方法将BALB/c 小 鼠随机均分为正常组、模型组、左金丸组（3 g·kg-1）及美沙拉嗪组（300 mg·kg-1）,每组10 只。除正常组外其余 各组小鼠采用自由饮水的方式给予3%葡聚糖硫酸钠（DSS） 溶液,连续7 d,构建UC 小鼠模型。7 d 后按照相 应剂量灌胃给药,每日1 次,连续给药7 d。每天称小鼠体质量并观察其一般症状;采用流式细胞术检测Tfh 及滤泡调节性T 细胞（Tfr）数量;测定小鼠结肠质量、结肠长度,计算结肠质量指数;采用HE 染色法进行结肠 组织病理学观察;Western Blot 法检测小鼠结肠组织Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平。结果与模型组比 较,左金丸组小鼠的结肠质量指数明显降低（P < 0.01）,结肠长度明显恢复（P < 0.01）,结肠组织病理评分明显 降低（P < 0.05）;CD4+CD44+ICOS+、CD4+CD44+IL-17+及CD4+CD44+CXCR5+细胞水平明显下降（P < 0.05,P < 0.01）,CD4+CXCR5+Foxp3+及CD4+CXCR5+Blimp-1+细胞水平均明显升高（P < 0.05）;结肠组织中的Caspase-3、 Bax 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,Bcl-2/Bax 蛋白比值明显升高（P < 0.01）。结论左金丸可能通过 调控Tfh/Tfr 细胞平衡,以及结肠组织的Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平,发挥对UC 小鼠的治疗作用。 关键词：左金丸;溃疡性结肠炎;滤泡辅助性T 细胞;滤泡调节性T 细胞;Bax;Bcl-2;Caspase-3;小鼠     

丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

【目的】 探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】 将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸（400 μmol/L）组,丹参酮 ⅡA 20 μmol/L组和棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20 μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、转录激活因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞 GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶 RNA 样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著升高（P <0.01）,H9c2 细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK 和 p-eIF2α/eIF2α 比例也显著增大（P < 0.01）,凋亡相关分子 Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01）。不同浓度丹参酮 ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组细胞存活率显著升高（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.01）,H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）,均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮 ⅡA 10 μmol/L组（P < 0.05）和棕榈酸+丹参酮 ⅡA 20 μmol/L 组（P < 0.05）变化显著。加入 PERK 通路激活剂 CCT020312 作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.05）;再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著回降（P < 0.05）。【结论】 丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关。     

补骨脂素加长波紫外线的光化学疗法诱导NB4细胞凋亡及对Caspase-8、3蛋白表达的影响

目的 研究补骨脂素（psoralen,PSO）加长波紫外线（ultraviolet A,UVA）的光化学疗法（PUVA）对人白血病NB4细胞凋亡和细胞凋亡信号通路的影响。方法 体外培养NB4细胞,利用流式细胞术检测不同浓度的PSO（0、5、10、20、40 μL）、在不同照射时间（0、5 min）、波长为360 nm的UVA干预后的细胞凋亡率;利用透射电镜检测细胞超微结构的改变;采用免疫细胞化学法（ICC）检测凋亡信号通路中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达情况。结果 不同浓度的PSO经0、5 min UVA照射后,NB4细胞的凋亡率呈剂量与时间依赖性的增加,而于40μg/mL浓度的PSO联合5 min UVA照射时达峰值,且二者呈现交互作用（P<0.01）。PUVA处理后的NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学的改变。PSO、UVA及PUVA均上调Caspase-8、Caspase-3蛋白的表达,但PUVA上调Caspase-3的作用于12 h显著强于前两者（P<0.01）,呈时间依赖性,PSO浓度与时间呈现交互作用（P<0.01）。结论 PUVA的最佳方案组合为40μg/mL浓度的PSO联合5 min UVA照射,PUVA可体外激活Caspase-8、Caspase-3基因,具有诱导NB4细胞凋亡作用。     

麻黄细辛附子汤干预Notch通路调控Treg细胞纠正Th2偏移的研究

目的 探究麻黄细辛附子汤对Th2偏移、Treg细胞功能及Notch信号通路的干预作用。方法 体外培养CD4+T细胞,流式细胞仪鉴定纯度,使用白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ抗体（Anti-IFN-γ）诱导建立Th2细胞分化模型,DAPT及麻黄细辛附子汤干预24 h后收集上清及细胞,ELISA检测白细胞介素-5(IL-5)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)含量,RT-PCR检测T细胞特异性转录因子（T-bet）、转录因子结合蛋白-3(GATA-3)、叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)、Notch1 mRNA表达,Western blotting检测T-bet、GATA-3、FOXP3、Notch1蛋白表达。结果 1）较之空白组,模型组IL-5含量升高,IFN-γ、TGF-β1含量降低（P <0.01）;较之模型组,各给药组IL-5含量降低,IFN-γ、TGF-β1含量升高（P <0.01）。2）较之空白组,模型组Tbet、FOXP3 mRNA表达降低,GATA-3、Notch1 m RNA表达升高（P <0.01）;较之模型组,各给药组...