提高陈旧性石蜡标本抗原检出率的抗原修复方法

目的:提高陈旧性石蜡标本抗原的检出效果.方法:取时间>5年的肺癌石蜡包埋组织,对同一蜡块连续切片,使用4种不同的缓冲液进行高压修复,分别为:构橼酸缓冲液(CA,pH 6.0)、PBS(pH 7.0)、EIYFA( pH 8.0)和EDTA(pH 9.0),每一种抗原修复液又分别采用2、5、10、15、20、25、30 min 7个不同的时间修复,比较不同条件下陈旧性肺癌石蜡组织中Ki-67的表达结果.结果:采用EDTA(pH 9.0)、高压修复维持喷气时间15 min时,Ki-67阳性检出效果明显提高,阳性率可达75%以上;维持喷气时间分别为20、25、30min时,阳性检出效果更好,阳性率达到90%以上.结论:用EDTA(pH 9.0)高压修复肺癌石蜡切片20 min或20min以上可显著提高存放时间>5年的陈旧性肺癌石蜡切片Ki-67抗原的检出率.     

浅谈石蜡组织切片的标准化操作规程

石蜡组织切片的质量直接影响染色的效果,而制定和实施石蜡组织切片的标准化操作规程(SOP)可确保切片操作过程准确无误,使切片质量提高[1]。我科结合工作实际并参照相关标准制定了石蜡组织切片的SOP,并应用于实际工     

几种抗原修复方法研究

由于常规福尔马林固定和石蜡包理过程造成的抗原封闭与结构改变，限制了一些抗体在免疫组织化学中的应用。为了恢复组织的抗原性，提高免疫组织化学的检测阳性率，我们应用高压锅，微波炉和胰蛋白酶分别对石蜡切片进行处理。结果显示，一些抗体过去只能用于冰冻切片，经前处理后可用于石蜡切片，一些抗体的敏感性增强，经高压锅处理的免疫染色重复性较微波炉处理得好，个别抗体适用于酶消化。总之，在免疫组织化学染色过程中应根据抗原抗体的特性选用适当的前处理方法。     

肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色方法的探讨

目的探讨不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。方法将20例肾活检标本分别制成石蜡切片（实验组）及冰冻切片（对照组）,其中实验组石蜡切片分成应用胰酶抗原修复组;高压加热抗原修复组及无抗原修复组,后行免疫荧光染色,并与冰冻切片免疫荧光染色相比较。结果石蜡切片胰酶抗原修复组免疫荧光染色结果与冰冻切片免疫荧光染色结果基本符合;高压加热抗原修复组出现较多的假阴性结果;无抗原修复组染色效果较差;以上三组间存在统计学差异。结论石蜡切片胰酶抗原修复免疫荧光染色可以作为冰冻切片免疫荧光染色标本无肾小球时较好的补救措施。     

改良硬脂酸石蜡切片的免疫组化染色效果观察

在常规石蜡切片的制作过程中 ,通常在组织脱水完成以后 ,需经过二甲苯使组织透明再浸入石蜡中或以硬脂酸石蜡(2∶3)直接浸蜡 ,这两种方法在常规制片中都能取得良好效果 ,但迄今为止未见有关这两种石蜡切片的免疫组化染色效果的报道 ,笔者进行了实验观察 ,并统计了 80例乳腺癌硬脂酸石蜡切片中抗原阳性的表达率 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　材料　所选组织均为我科 1997— 2 0 0 3年间手术和活检标本 ,包括上皮源性肿瘤、软组织肿瘤、神经源性肿瘤、淋巴瘤及内分泌肿瘤。所有试剂均购于福州迈新生物技术开发公司。微波炉为浙江临安电子器…     

丙酮在腔镜活检小组织快速诊断中的应用

目的建立简便快捷的腔镜小组织活检流程,缩短腔镜小组织病理诊断时间。方法利用丙酮能与水、乙醇、石蜡相溶的物理特点,建立简便快捷的应用丙酮对腔镜活检小组织标本256例进行快速石蜡切片制作并进行病理诊断。结果应用该法进行组织标本处理及石蜡制片,缩短了病检时间,具有适用范围广、制片质量好、诊断快速等优点。单片出片所需的时间为3~4h(常规需48~72h),制成的蜡块可切出3~5μm的薄片,切片染色后组织结构和细胞形态清晰,切片优良率达到95%,切片合格率达到100%,与常规切片病理诊断符合率达到100%。结论利用丙酮进行快速石蜡切片制作,取得了很好的效果,值得推广应用。     

应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的研究

目的探讨微波在肾穿刺冰余组织重制石蜡切片染色中的作用。方法应用微波技术对58例临床上怀疑急进性肾炎的肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的标本进行染色,并与常规切片染色结果比较。结果应用微波技术的58例怀疑急进性肾炎肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的染色结果与常规切片染色结果基本无差异。结论应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片可弥补穿出的肾组织肾小球过少或缺失;制片染色省时且质量好。对临床快速准确做出病理诊断、指导治疗及判断预后有重要意义。     

原位荧光杂交检测在骨髓活检切片中的方法建立及优化

目的建立及优化骨髓活检石蜡切片原位荧光杂交(FISH)检测流程。方法建立和优化骨髓活检石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在20例骨髓活检组织,其中5例诊断为套细胞淋巴瘤(MCL),应用FISH检测IGH/CCND1探针。结果建立骨髓活检石蜡切片的FISH检测步骤和实验条件,5例确诊MCL骨髓活检石蜡切片可检测到IGH/CCND1融合信号。证明本方法的可行性。结论骨髓活检石蜡切片FISH检测可以获得信号清晰、核形态较好、背景清晰的FISH染色结果,可以满足临床应用要求。     

免疫组化技术(四)

3 免疫组化方法 这里有大量用于定位和验证组织抗原的免疫组化染色技术.选择合适的技术应基于各种研究标本的类型、研究的预处理的类型等参数,例如:冷冻切片、石蜡切片、树脂切片或细胞学制品以及所需敏感性的程度.     

中间丝蛋白免疫细胞化学显示内源性过氧化物酶的抑制

在敏感抗原如淋巴细胞膜标记物的免疫细胞化学研究中,固定、处理组织细胞标本以保证其抗原性(尤其是弱抗原)不被破坏是很有必要的。常用以封闭标本中的内源性过氧化物酶活性(EPA)的甲醇/H_2O_2对一些抗原有破坏作用。本文作者在冰冻及石蜡包埋切片上比较了甲醇/H_2O 以及其取代物环丙烷、水化物、叠氮钠和丙基硫脲嘧啶对EPA的封闭作用和对IFP 的毒性作用。标本取自尸解及手术,包括正常大脑皮质、小脑、甲状腺及子宫组织,均作冰冻及石蜡包埋切片;再用以下四种方法封闭     

用于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法

背景：甲醛固定石蜡包埋的标本易于保存,免疫荧光法定位定量能精确支持多种标记物。目的：建立适合于甲醛固定石蜡包埋组织的改良免疫荧光法。方法：将取自类风湿性关节炎和无骨性关节炎患者的滑膜血管翕和髋臼增生组织的石蜡切片进行常规脱蜡复水,观察不同的柠檬酸缓冲液热修复时间、血清封闭时间、一抗浓度和荧光标记物在免疫荧光法中显色的差异。结果与结论：柠檬酸高温修复15min后滴加抗原修复液比单纯高温修复10～20min,组织结构保存更为完整,且背景染色无显著区别;选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40min作为最佳的抗原封闭条件,既可以保证良好的封闭效果,同时又不影响一抗和抗原位点结合;较高一抗浓度（10mg/L）能保证明显的荧光信号、低背景和可接受的成本。进行石蜡切片免疫荧光实验,并用普通荧光显微镜观察,应避免采用FITC等蓝色激发光、呈现绿色荧光信号的标记染料基团。提示柠檬酸高温修复15min后滴加抗原修复液,选择体积分数10%二抗来源正常血清室温封闭40min,较高一抗浓度,普通荧光显微镜观察可提高免疫荧光法的检测质量。     

比较GS环保试剂与常规试剂制备的组织样本在荧光定量PCR中的效果

应用GS生物组织标本制备液(GS液)制作的石蜡切片提取DNA,进行实时荧光定量PCR技术扩增,并与常规方法制作的石蜡切片进行比较,结果没有大的差别。证实GS液能较好地保存组织中的DNA。1材料与方法1.1材料取乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和淋巴瘤组织     

多聚甲醛在免疫组织化学染色防止脱片中的应用

多聚甲醛在免疫组织化学染色防止脱片中的应用贺占国，胡雄，邓平非（白求恩国际和平医院病理科石家庄０５００８２）回顾性研究中，免疫组化染色多用石蜡切片。有些组织中的抗原经甲醛固定，有机溶剂处理后，抗原决定簇被遮盖，需用蛋白酶消化，但许多组织经消化易脱落，...     

背景染色改良法在免疫组化技术中的应用

在免疫组化染色的显色阶段,为使操作者在光镜下观察到组织、细胞的基本结构,便于及时找准病变部位和自身对照区域,更好地控制呈色反应结果,作者对切片背景染色方法进行了改良。经过反复实践,取得了良好的效果。现将方法简介如下。1 方法石蜡切片常规脱蜡入水至蒸馏水,经高压(微波或水浴高温)修复抗原、3% H_2O_2 阻断内源性过     

微波加热抗原修复应用中应注意的几个问题

长期以来，在常规福尔马林固定、石蜡包埋的组织中抗原显示存在一定的问题，使免疫组化的应用特别是在一些回顾性研究中受到一定的限制。这主要是二方面的因素造成，一是抗原显露不好，或抗原物质受到破坏；二是有些抗体的使用仅限于冰冻切片或某些特殊固定液处理的组织。...     

肾活检免疫组织化学法与免疫荧光直接法染色结果比较

目的 :探讨石蜡切片免疫组织化学(免疫组化)检测肾穿刺异常免疫复合物的可行性。方法 :收集36例肾小球肾炎的穿刺活检标本,分别行冷冻切片免疫荧光、石蜡切片免疫组化检查,并以荧光免疫检测结果作为对照,观察免疫组化染色结果。结果:7例狼疮性肾炎、16例IgA肾病、13例膜性肾小球肾炎的免疫组化IgA、IgG、IgM、C1q、C3c、C4c结果与免疫荧光冷冻切片组染色结果相同,表达强度相同,表达部位一致(P0.05)。结论 :经适当抗原修复,石蜡切片免疫组化检查可以作为免疫荧光冷冻切片结果不理想的补救方法。     

介绍一种自动调节恒温水盆的装置

病理石蜡切片附贴一般采用酒精灯加热法或用电灯法,这些方法都有一定的缺点和不便。我们设计使用自动调节恒温水盆装置(见图1),不仅适用于切片附贴,而且还可用于组织石蜡包埋和活体组织常规快速固定,经过数月的实践证明,既提高了制片质量,又给工作带来了方便。     

脑病变组织快速石蜡切片和冷冻切片的比较

快速病理切片分为冷冻切片和快速石蜡切片两种。脑组织快速送检标本由于组织较小且质地疏松 ,难以制成优质的快速病理切片。本文就使用超声波处理仪对脑组织进行快速石蜡切片并和冷冻切片进行比较。1　材料与方法1 1　材料　选取我科 2 0 0 0 1— 2 0 0 0 12脑组织病理标本 2 4 7例均做快速石蜡切片 ,其中 183例同时做冷冻切片。1 2　方法1 2 1　冷冻切片　使用日本樱花牌ＣＭ 4 1型恒冷式冷冻切片机 ,组织经ＯＣＴ组织包埋剂包埋 ,- 12～ - 16℃冷冻2～ 4ｍｉｎ ,切片 4～ 6 μｍ ,丙酮固定后ＨＥ染色。1 2 2　快速石蜡切片　使用ＰＨ…     

bFGF与ki-67双重免疫组化染色法

双重免疫组化染色是同在一张切片上显示两种不同抗原的免疫组化法 ,能同时观察细胞及组织中两种不同抗原的分布情况 ,对于研究它们之间的关系具有重要意义。本实验成功地在一张切片上显示卵巢肿瘤组织中碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)与增殖细胞核抗原 (Ｋｉ 6 7) ,用以观察ｂＦＧＦ表达的细胞是否为增殖细胞 ,介绍如下。1　材料与方法1 1　标本　 45例卵巢肿瘤组织 ,常规 10 %福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,5ｍｍ厚切片。1 2　试剂　ｂＦＧＦ多克隆抗体 (ＳａｎｔａＣｒｕｓ公司产品 ) ,Ｋｉ 6 7单克隆抗体 (ＭａｘｉｎＢｉｏ公司产品 ) ,双…     

肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达:检测的可靠性

背景:组织芯片技术可高通量检测组织中的生物分子.但是组织芯片所用的组织很小,直径仅0.6 mm,且肿瘤细胞具有异质性,所以组织芯片检测结果是否可靠尚不清楚.目的:比较石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶和相应的淋巴结转移灶的表达差异,探讨组织芯片检测PBK/TOPK蛋白表达的可靠性.方法:采用组织微阵列技术按照正常成人肺组织,胚胎肺组织,肺鳞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺腺癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺小细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺大细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌的顺序依次构建包含760点阵的石蜡组织芯片.应用免疫组化SP法,检测石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白的表达.应用Leica Q500MC图像分析系统分别对石蜡组织芯片和常规石蜡切片上PBK/TOPK蛋白表达的阳性单位和阳性表达率进行定量测试.结果与结论:组织芯片和对应常规切片相应细胞中PBK/TOPK的阳性强度及阳性表达率基本相同,相对偏差不足0.6%,两者比较差异无显著性意义.结果说明石蜡组织芯片和常规组织切片检测PBK/TOPK蛋白表达结果高度一致;应用组织芯片检测肺癌、胚胎肺及正常肺组织中PBK/TOPK蛋白的表达结果可靠.