金雀异黄酮对体外培养缺氧大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

 目的 观察金雀异黄酮对缺氧体外培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法 采用贴壁筛选法体外培养BMSCs并用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组细分为1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol·L-1组金雀异黄酮组,缺氧处理36 h后分析各组的细胞增殖和成骨性指标包括碱性磷酸酶（ALP）活性、Ⅰ型胶原表达、钙盐沉积量和钙化结节面积等,并用Real Time RT-PCR法检测Runx2和骨形成蛋白（BMP）-2的基因表达情况。结果 与缺氧对照组比较,金雀异黄酮抑制BMSCs增殖,显著提高ALP活性、Ⅰ型胶原表达量、钙盐沉积量和钙化结节面积,并提高基因Runx2和BMP-2的表达水平,且呈现出剂量依赖性特点。结论 金雀异黄酮具有抑制缺氧BMSCs增殖并促进其成骨分化的作用。     

基于BMP-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠BMSCs增殖和成骨分化的影响＊

目的 基于BMPs-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用机制。方法 制备固本增骨方含药血清；台盼蓝染色观察细胞生长情况；取P3代大鼠BMSCs分为空白血清组、5%、10%、20%、30%浓度含药血清组及传统诱导组，分别对各组大鼠BMSCs进行培养及成骨诱导，向6组加入相应培养液24 h后幵始测量细胞计数，连续测量4天；成骨诱导2周后，进行碱性磷酸酶染色试剂盒说明书进行染色，光镜下观察各组细胞蓝紫色区域的密集程度；ELISA法检测COL-I、ALP、BGP、OPN蛋白的含量；Real-time PCR检测BMPs信号通路相关基因BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2表达。结果 各组固本增骨方含药血清组在培养24h后比空白组及传统成骨诱导组OD值比较差异均具有统计学意义（P < 0.05），并且20%含药血清组较5%、10%及30%含药血清组OD值比较差异具有统计学意义（P < 0.05）；碱性磷酸酶染色后镜下观察在浓度为20%时染色区域最密集；5%、10%、20%含药血清组与其他各组BGP、OPN、ALP、COL-I含量比较差异具有统计学意义（P < 0.05），且20%含药血清组与5%、10%含药血清组比较差异具有统计学意义（P < 0.05）；20%含药血清组与其他各组BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2 mRNA表达比较差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 固本增骨方能促进BMSCs的增殖，并且能促进成骨标志蛋白BGP、OPN、ALP、COL-I蛋白含量的增加，且在20%浓度为最佳，这个机制可能是激活了BMP-Smad/RUNX2信号通路实现的。     

辛伐他汀对大鼠BMSCs成骨分化及其基因表达谱的影响

 目的 探讨辛伐他汀对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells, BMSCs）成骨分化的作用,以及在此过程中大鼠BMSCs基因表达谱的变化。方法 取6周龄雄性SD大鼠股骨、胫骨骨髓,进行细胞培养,并于第3天实验组（SIM）加入辛伐他汀（1×10-7 mol·L-1）,对照组（V）加入等量溶剂。细胞培养的第14天提取、纯化mRNA,逆转录合成cDNA,荧光标记后与大鼠全基因组寡核苷酸芯片（G4130A）杂交、扫描后筛选出差异表达的基因,并于同一时间点进行碱性磷酸酶（ALP）染色;第21天行Von Kossa染色观察细胞外基质矿化情况。 结果 ①ALP染色：SIM组ALP阳性细胞比例显著高于V组;②Von Kossa染色：SIM组细胞外基质矿化能力明显强于V组;③在22 575个基因中,共检测出318个差异表达基因,其中包括ALPl、TGFβ1、IBSP、MMP13、VEGF、IL1α、CXCL10、Zfp36、MEPE等与成骨分化相关的基因。结论 辛伐他汀能够促进体外诱导培养的BMSCs向成骨细胞分化,同时伴有多个成骨相关基因表达水平的改变。     

健骨益痹方含药血清对骨髓间充质干细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的观察健骨益痹含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响。方法分离BMSCs分为空白对照组(A组)、低浓度组(B组)、中浓度组(C组)、高浓度组(D组)、阳性对照组(E组),通过MTT法检测健骨益痹含药血清对BMSCs活性的影响,于干预后的第3、6、9、12天分别测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法染色并观察钙结节密度;RT-PCR法检测ColⅠ、BGP、RUNX2mRNA转录表达。结果与对照组比较,实验组经定向成骨诱导后BMSCs增殖增强,ALP水平升高,钙结节密度显著增大,成骨相关转录因子ColⅠ、BGP、RUNX2的表达量亦增加(P0.05)。结论健骨益痹复方含药血清能促进BMSCs体外增殖并诱导其成骨分化。     

活血接骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响作者

目的 探究活血接骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响。方法 使用“续骨活血汤”含药血清和（或）BMP-4干预BMSCs并分为4组：对照组、中药组、BMP-4组和中药+BMP-4组。通过检测线粒体脱氢酶活性（CCK-8）及细胞DNA含量反应BMSCs细胞活性。采用ALP染色和茜素红染色检测成骨诱导28天后各组细胞ALP活性和矿化情况；采用荧光定量PCR和Western Blot法检测各组细胞中成骨相关基因（Col1A2、OC、OPN）和Sclerostin基因表达情况。使用（低浓度、中浓度、高浓度）活血接骨方含药血清体外干预BMSCs 7天后检测Sclerostin基因及Wnt信号通路相关分子（Wnt5a、GSK-3β）的表达情况。结果 与对照组相比，其他3组BMSCs出现明显矿化，且BMP-4组矿化程度高于中药组，而中药+BMP-4组矿化程度最高（P < 0.05）；成骨相关因子Col1A2、OC、OPN也呈现相同趋势的表达上调（P < 0.05），但Sclerostin基因呈现明显表达下调（P < 0.05）。与空白对照组相比，各浓度含药血清组BMSCs中Wnt5a的表达呈现浓度依赖性上调（P < 0.05），而Sclerostin、GSK-3β和P-GSK-3β的表达则呈现浓度依赖性下调（P < 0.05）。结论 活血接骨方具有促进BMSCs体外成骨分化作用，其机制可能与抑制Sclerostin基因表达，激活Wnt信号通路相关。     

上皮钠离子通道参与雌激素影响成骨细胞成骨的作用

 目的 探讨雌激素（17β-estradiol对大鼠骨髓基质干细胞分化的成骨细胞上皮钠离子通道（ENaC表达和功能的影响。方法 采用大鼠骨髓基质干细胞来源的成骨细胞,通过CCK-8试剂盒和AKP试剂盒分别测定雌激素对细胞增殖和分化的影响,通过半定量PCR方法测定雌激素对成骨细胞ENaC和成骨相关基因表达的影响。结果 雌激素能促进初级成骨细胞增殖,且较高浓度时（1×10-7,1×10-5 mol·L-1促增殖作用显著（与对照组相比,P<0.05;联用阿米洛利处理后各组细胞增殖速度均有所降低,其中高浓度E2组显著降低（与E2单独处理组相比,P<0.05;雌激素能提高成骨细胞上α-ENaC、γ-ENaC基因的表达水平,且增加趋势与成骨相关基因（Coll-Ia、OC、ALP、ONmRNA表达的增加趋势一致。结论 雌激素促进骨形成的同时也增加ENaC mRNA表达,而阿米洛利（ENaC抑制剂能阻断雌激素的促成骨作用,说明ENaC可能参与成骨细胞成骨,提示成骨细胞可能存在一个与ENaC相关的调节新途径,为骨代谢的研究提供了一个新思路。     

低氧条件下 BMSCs 来源外泌体激活 HIF–1α/VEGF/JNK 通路促进血管再生的机制研究

〔摘 要〕 目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体在低氧条件下增强血管生成的机制。方法：超速离 心法提取常氧和低氧条件 BMSCs 外泌体;分别处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,CCK–8 法检测细胞活性,Traswell 检测细胞迁移情况,成管试验检测 HUVECs 成血管情况,同时利用 Westernblot 检测血管生成关键蛋白低氧诱导因子 –1a （HIF–1a）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：低氧条件下 BMSCs 释放的外泌体能促进 HUVECs 的增殖、 迁移和血管生成,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;血管相关蛋白 HIF–1a、VEGF 显著上调,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）,同时磷酸化 c–Jun 氨基末端激酶（p–JNK）的表达显著增强,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：低 氧条件下 BMSCs 来源外泌体通过激活 HIF–1α/VEGF/JNK 通路促进血管生成,为血管生成相关疾病提供新的治疗方案。     

复叶耳蕨总黄酮通过BMP信号通路促进MSC成骨分化

目的:研究复叶耳蕨总黄酮(total flavonoids from Arachniodes exilis,TFA)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法:通过茜素红染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性考查BMSCs成骨情况;RT-PCR检测Ⅰ型胶原酶α1(collagen typeⅠα1,COL1A1)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopotin,OPN)、BMP2、BMP4、Runx2、Osterix转录水平;ELISA检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路相关蛋白BMP2、BMP4、Runx2表达情况。结果:TFA能显著增加BMSCs碱钙结节的形成、ALP活性,上调COL1A1、OCN、OPN的表达,促进BMSCs成骨分化,而Noggin能抑制该作用;TFA能显著上调BMP2、BMP4、Runx2、Osterix的表达。结论:TFA可能通过BMP信号通路促进大鼠BMSCs成骨分化。     

淫羊藿水提取物对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的影响及其机制

目的 观察淫羊藿水提取物对SD大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）骨向分化能力及转化生长因子β₁（TGF-β₁）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的影响,阐释其防治骨质疏松症的作用机制。方法 全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;以碱性磷酸酶（ALP）活性及ALP染色阳性率确定淫羊藿水提取物促MSCs骨向分化的最佳质量浓度,并以该质量浓度进行MSCs骨向分化实验。按是否添加经典成骨诱导液将大鼠分为对照组、成骨诱导剂组、淫羊藿水提取物（500 μg/mL）组、淫羊藿水提取物（500 μg/mL）＋成骨诱导剂组,每3～4 d各组更换含相应物质培养液1次,连续干预14 d。通过检测各组ALP、I型胶原（Col I）、骨钙素（BGP）和钙化结节等骨向分化指标的变化,以评价淫羊藿水提取物对MSCs骨向分化能力的影响;通过检测TGF-β₁、BMP-2的表达,研究淫羊藿水提取物促MSCs骨向分化的作用机制。结果 淫羊藿水提取物最佳促MSCs骨向分化的质量浓度为500 μg/mL;成骨诱导剂组、淫羊藿水提取物组及淫羊藿水提取物＋成骨诱导剂组均能促进MSCs骨向分化及上调TGF-β₁和BMP-2的表达。结论 淫羊藿促进MSCs骨向分化,上调TGF-β₁、BMP-2的表达可能是其作用机制之一。     

中药调控骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化相关信号通路的研究进展

骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源于从骨髓中分离出的干细胞，具有多向分化和自我更新的潜能，在一定的条件干预下，可将其诱导分化为成骨细胞（OB）、软骨细胞、脂肪细胞和成纤维细胞等。BMSCs对维护骨结构稳定和平衡骨代谢过程具有十分重要的作用，促进BMSCs增殖，诱导其向OB分化对临床防治骨质疏松症、骨缺损、骨折愈合等疾病具有重要的意义。由于BMSCs的增殖及成骨分化过程是一个受多基因控制和多条信号传导通路调控的复杂过程，而中药恰好具有多生物活性成分、多靶点和多通路协同的作用优势，能够通过多渠道影响BMSCs的增殖及分化过程，诱导BMSCs增殖，增强与成骨相关基因的转录与表达，从而促进BMSCs向OB分化，达到防治骨质疏松症、骨缺损等多种骨病的目的。文章通过对中药单体及复方干预BMSCs增殖及成骨分化相关文献进行查阅，重点整理中药单体及复方调控分泌型糖蛋白（Wnt）、神经源性位点缺口同源蛋白（Notch）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)、骨形态发生蛋白（BMP）/Smad、Janus激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）、骨...     

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定脉络宁注射液中25种矿物质元素

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)直接稀释测定脉络宁注射液中25种矿物质元素(Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V、As、Cd和Hg)的方法。方法分别对微波消解条件和测试条件进行考察;样品经微波消解后,采用电感耦合质谱仪测定25种矿物质元素,并对测定方法学进行考察。结果确定最佳消解条件为3步缓慢升温:400 W 80℃升温10 min,保留5 min;600 W 120℃升温10 min,保留5 min;900 W 200℃升温20 min,保留20 min;25种矿物质元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.999 6,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均符合定量分析要求;加标回收率为94.7%~106.1%,RSD在0.34%~2.79%。脉络宁注射液中检测出Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V,未检出As、Cd和Hg。结论该方法简便、迅速、准确,适用于脉络宁注射液中25种矿物质元素的同时测定。     

基于ICP-MS法的麝香保心丸中26种无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立麝香保心丸中26种无机元素(Li、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法麝香保心丸样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中26种无机元素的量。结果待检测的26种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 4,各元素的检出限在0.010~2.987μg/L,定量限在0.035~10.000μg/L,回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Mg、Na、Fe量较高,均超过1.000 mg/g;Mn、Cu、Zn、Al、Ga量也相对较高,而Sb、Hg、Tl、Bi量相对较低,均在0.050μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于麝香保心丸中无机元素的测定。     

基于ICP-MS法分析九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素(Li、Mg、Cd、Sn、Al、Mn、Fe、Ti、V、Co、Zn、Ga、Cr、Ni、Tl、Pb、Cu、As、Be、B、Sb、Ba、Sr、Hg、Bi)的测定方法。方法九味熄风颗粒样品经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法进行测定。结果检测的25种元素线性关系良好,相关系数R2≥0.999 2,各元素的检出限在0.009~16.051μg/L,回收率在70.75%~107.66%,RSD≤6.44%。测定的6批样品中Cr、Sn、Hg、Pb均未检出,Tl、Cd、As、Cu的量均较低或未检出,Cd≤0.011μg/g,Cu≤0.373μg/g,Tl≤0.021μg/g,As≤0.571μg/g。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于九味熄风颗粒中重金属及微量元素的测定。     

蜂蜜炼制前后黄酮类成分种类和含量变化分析

目的研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化。方法参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制。供试品经固相萃取法富集黄酮类成分。采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温30℃。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析。结果蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元。黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素。不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异。6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加。结论炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变。     

Die Lateralität und Lateralitätsinstabilität in der Diagnostik und Therapie

The disturbance and instability of laterality are obstacles to diagnostics and therapy. Correction prior to starting therapy is required. They also predispose toward defined health problems and unspecific diseases. Numerous research activities provide evidence of the relevance of undisturbed laterality in diagnostics and therapy. Techniques of testing and therapeutic corrections will allow for optimized therapy success.     

基于ICP-MS法分析银杏叶系列品种中25种无机元素

目的建立银杏叶制剂中25种无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同剂型银杏叶制剂中无机元素量进行比较分析。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定25种无机元素量,绘制无机元素指纹谱图,并进行方法学考察。结果 25种无机元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.950 0,精密度、稳定性和重复性试验的RSD值均符合定量分析要求;加样回收率为91.35%～108.86%,RSD在0.05%～4.45%。银杏叶制剂中检测了25种无机元素量,并绘制无机元素指纹图谱,发现其谱图具有一定的特征性;银杏叶片中元素Hg、Al、Cr的量较高,有害无机元素的量超标应引起关注。结论通过无机元素在银杏叶制剂中的组成分布及其量的变化规律研究,为银杏叶制剂的质量控制及安全性评价提供依据,同时为临床使用提供一定参考。     

Journal of Acupuncture and Tuina Science Instructions for Authors

The Journal of Acupuncture and Tuina Science, a journal with an international scope （IS SN 1672-3597, CN 31-1908/R, Bimonthly）, is embodied by ＇Springer Verlag＇ Database, Index Copernicus （IC） and Chinese Scientific and Technical Paper and Citations Data （CSTPCD）. You can search full text on http：//www, springerlink, com/content/1672 -3597.     

Yerba Mate or Paraguay Tea

正Beverages based on Ilex paraguariensis A.St.-Hil.are used in the south Brazil and other Latin American countries located at the so-called southern cone.It is known as chimarro or mate in south and southeast Brazil,tererêin     

Gibt es eine Beziehung zwischen Qigong und Moderner Physik?

Based on the principle of completeness, Qigong is described as a method uniting external and internal paths to insight, and this can be perceived while practicing it. The common principle which we approach in every Qigong exercise is named the Dao. In quantum physics, there are also phenomena showing an underlying unity: entanglement of atomic systems.