尿苷肽类抗生素生物合成研究进展

尿苷肽类抗生素是一类具有相同母核结构的化合物,其化学结构独特、作用机制新颖、抗菌谱窄,是寻找新型低毒、窄谱抗菌药物的先导化合物或候选药物的最佳选择之一。本文介绍了尿苷肽类抗生素的化学结构特征以及构效关系,着重介绍了其生物合成机制的最新研究进展。尿苷肽类抗生素肽链的合成由非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetase,NRPS）以非线性机制催化完成,肽链的组装始于中心模块2,3-二氨基丁酸（2,3-diaminobutyric acid,DABA）,其后的延伸包括N端氨基酸或二肽与DABAβ-氨基间的缩合,以及C端的脲二肽与DABAα-氨基间的缩合。3′-脱氧-4′,5′-烯酰胺尿苷由尿苷经过3步反应转化而来,并在NRPS的催化下与四肽或五肽缩合形成尿苷肽类抗生素。尿苷肽类抗生素生物合成机制的阐明为利用组合生物合成技术获得新结构的尿苷肽类化合物奠定了基础。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与PD98059缀合物对皮肤鳞状细胞癌的疗效研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂与PD98059缀合物的体内、外抗皮肤鳞状细胞癌（SCC）作 用。方法 采用HDAC试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对HDAC活性的抑制作用;采用5-［3-（羧基甲氧基）苯 基］-3-（4,5-二甲基-2-噻唑基）-2-（4-磺基苯基）-2H-四唑内盐（MTS）试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对A431、 HSC-5、Colo16 和 SCC-12 4 种 SCC 细胞增殖的抑制作用。构建 A431 皮下荷瘤鼠模型,并将其随机分为 SAHAPD98059组、SAHA组、PD98059组和空白对照组,连续灌胃给药18 d,每隔2 d记录小鼠体质量,测量肿瘤体积。通过 对小鼠主要器官行HE染色评价缀合物SAHA-PD98059的生物安全性。结果 缀合物SAHA-PD98059抑制HDAC 活性的半抑制浓度（IC50）为（142.9±1.2）nmol/L。缀合物 SAHA-PD98059 在 HDAC 活性口袋中能够与氨基酸残基 H142、G151、T312 形成氢键,而母体化合物 SAHA 可与氨基酸残基 H142、H143、T312 形成氢键。与母体化合物 PD98059及SAHA相比,缀合物SAHA-PD98059对皮肤鳞癌细胞A431、HSC-5、Colo16和SCC-12的抗增殖活性均更 强,其中缀合物SAHA-PD98059对A431细胞增殖的抑制作用最强［IC50=（1.7±0.2）µmol/L］。缀合物SAHA-PD98059 对人正常皮肤细胞TE353.sk基本无毒性。体内研究表明,缀合物SAHA-PD98059的半数致死量（LD50）为647.5 mg/kg, 并可显著抑制 A431 肿瘤的增长。HE 染色发现,缀合物 SAHA-PD98059 对主要器官无明显毒性。结论 缀合物 SAHA-PD98059用于治疗SCC安全有效,其效果强于单一使用SAHA或PD98059。     

抗肿瘤药物2''''-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的合成抗肿瘤药物2'-脱氧-5-氟尿苷.方法以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰澳酰化溴代得2'溴代-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2'-脱氧-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2'-脱氧-5-氟尿苷.结果以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2'-脱氧-5-氟尿苷.结论本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备.     

抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的:合成抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷。方法:以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰溴酰化溴代得2′-溴代-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2′-脱氧-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2′-脱氧-5-氟尿苷。结果:以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2′-脱氧-5-氟尿苷。结论:本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备。     

高效液相色谱法同时测定三七中5种核苷和碱基的含量（英文）

目的测定三七不同部位中5种核苷类成分胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷和尿嘧啶含量。方法采用Zorbax SB-Aq色谱柱;以8mmol·L-1醋酸铵水溶液（A）和甲醇（B）为流动相梯度洗脱,在25℃条件下流速为1mL·min-1;检测波长为260nm。结果胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷和尿嘧啶线性范围分别为1.79-57.40μgm·L^-1（r^2=1.0000）,3.30-105.60μgm·L^-1（r^2=1.0000）,3.09-98.80μgm·L^-1（r^2=0.9999）,2.77-88.60μgm·L^-1（r^2=1.0000）和0.38-12.30μgm·L^-1（r^2=1.0000）;加样回收率分别为93.9%,96.5%,92.7%,93.2%和98.8%。三七不同部位中5种核苷类成分的含量差异显著。结论本文首次报道了三七中核苷类成分的含量,其对完善三七药材的质量控制具有一定的指导意义。     

二种双脱氧脱氢核苷的合成研究

目的:对双脱氧脱氢核苷的合成进行了研究。方法:以2′-脱氧核苷为原料,先用甲磺酰氯(MsCl)将3′5′-位羟基保护,然后在NaOH水溶液中形成3′5′-0-环状物,再与叔丁醇钾(t-BuOK)作用生成2′,3′-二脱氧-2′,3′-二脱氢核苷化合物。结果:合成了2′,3′-二脱氧-2′,3′-二脱氢尿苷(总收率34.4%)及2′,3′-二脱氧2′3′-二脱氢胸苷(总收率52.3%)。结论:产品经紫外可见光谱,质谱及核磁共振谱表征,结构确认,说明用此法合成嘧啶类双脱氧脱氢核苷是可行的。     

甾体-多肽缀合激素的合成及免疫抑制活性

尿毒素三肽UTP-A,UTP-B和UTP-C分别与氢化可的松缀合,得到4种缀合激素。与尿毒素三肽或氢化可的松相比,缀合激素可延长不同种属小鼠异位移植(Heterotopic transplatation)心肌的存活时间;与氢化可的松和尿毒素三肽的机械混合物相比,低浓度下缀合激素可增强对淋巴细胞增殖的抑制作用。表明缀合激素有一定的免疫抑制作用。     

养殖叶片山海绵 Mycale phyllophila高极性次生代谢产物的研究

目的 研究养殖叶片山海绵（Mycale phyllophila）正丁醇萃取组分的化学成分及其抗肿瘤活性，为药源海绵规模化养殖和质量控制提供依据。方法 使用多种色谱分离方法对养殖M. phyllophila正丁醇萃取物进行化合物分离制备，通过一维及二维核磁共振波谱、高分辨质谱等技术对化合物结构进行鉴定。结果 分离鉴定出8个化合物，分别为epi-plancyindole A（1）、脲尿嘧啶（2）、胸苷（3）、2′-甲氧基尿嘧啶核苷（4）、2′-脱氧尿嘧啶核苷（5）、鸟苷（6）、2′-脱氧鸟苷（7）、环（脯氨酸-蛋氨酸）二肽（8）。结论 化合物1为新化合物，化合物2～8首次 从该种海绵中分离得到。化合物1对小鼠单核巨噬细胞白血     

N^4—烷基—5—甲基—2‘—脱氧胞苷的合成

3‘,5‘-O-二苯甲酰胸苷在三氯氧磷存在的条件下与1,2,4-三唑缩合可得到1-（3‘,5‘-O-二苯甲酰-β-D-呋喃核糖）-4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-甲基-嘧啶-2-（1H）-酮,再用不同的胺取代核苷C4上的三唑基团可制备一系列全新的N^4-烷基取代的5-甲基胞苷。方法简便,收率高。     

5＇-脱氧-5-氟胞苷类衍生物的合成及其抗肿瘤活性

目的设计并合成具有抗肿瘤活性的5＇-脱氧-5-氟胞苷类衍生物。方法2＇,3＇-O-二乙酰-5＇-脱氧-5-氟胞苷在三氯氧磷存在下与1,2,4-三唑缩合得到1-（2＇,3＇-O-二乙酰-5＇-脱氧-β-D-呋喃核糖）-4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-氟嘧啶-2-（1H）-酮（3）,后者用不同的亲核基团取代核苷C-4位上的三唑基团,制备一系列含有烷基胺、烷氧基和脒基的5＇-脱氧-5-氟胞苷类衍生物。结果合成了15个未见报道的新化合物,化合物的结构经1H-NMR、FAB-MS及元素分析确证。结论抗肿瘤活性测试表明,其中某些化合物的活性与对照药物卡培他滨相当,对肺癌、结肠癌、乳腺癌和肝癌细胞显示出较好的抑制活性。     

HPLC法测定不同产地地龙中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量

目的:测定不同产地、品种的地龙药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量,建立地龙质量控制的客观指标。方法:用0.9%生理盐水超声提取地龙药材,采用反相高效液相色谱法,Waters Symmetry C₁₈色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）,以0.01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液和50%甲醇为流动相,流速为0.8ml·min^-1,梯度洗脱,检测波长254nm,柱温27℃,同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷等4种成分的含量。结果:尿嘧啶的线性范围为0.75～24.00μg·ml^-1（r=0.9993）,平均回收率99.82%,RSD=2.34%（n=6）;次黄嘌呤的线性范围2.50～80.00μg·ml^-1（r=0.9992）,平均回收率101.93%,RSD=1.45%（n=6）;尿苷的线性范围1.25～40.00μg·ml^-1（r=0.9992）,平均回收率97.53%,RSD=1.73%（n=6）;肌苷的线性范围5.00～160.00μg·ml^-1（r=0.9991）,平均回收率102.06%,RSD=2.44%（n=6）。结论:该方法重复性,回收率好,可用于地龙药材中尿嘧啶等4种成分的含量测定。     

RP-HPLC法测定地黄及其复方制剂中尿苷和腺苷的含量

目的分别建立HPLC外标法测定地黄药材及其制剂中尿苷和腺苷含量的方法。方法采用Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),尿苷以5 mmol·L-1醋酸铵(乙酸调节pH为6.0)为流动相,腺苷以20 mmol·L-1磷酸二氢钾∶甲醇(90∶10)为流动相,流速均为1 mL·min-1,检测波长均为254 nm。结果尿苷浓度在4.17～20.85 mg·L-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好,腺苷浓度在1.01～20.23 mg·L-1(r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=9)分别为100.8%和100.1%。测得6批地黄药材中尿苷的平均含量为(0.027 8±0.003 5)%,腺苷的平均含量为(0.008 4±0.003 1)%。制剂中尿苷含量为0.032 1%,腺苷含量为0.006 9%。结论建立的方法准确可靠,专属性好,可作为地黄及其制剂中核苷含量测定方法。地黄药材中尿苷是主要的核苷成分,其它核苷成分含量甚微。     

高效液相色谱法测定灵芝提取物中尿苷和腺苷含量

目的 建立测定不同产地的灵芝提取物(包括赤芝提取物和紫芝提取物)中尿苷和腺苷含量的反相高效液相色谱法.方法 采用Agilent Zorbax SB-Aq柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动柱(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm.结果 尿苷和腺苷质量浓度分别在2.44 ～ 195.6 μg/mL(r=1.000 0)和2.64 ～ 105.6μg/mL(r=1.000 0)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为102.0％和101.2％,RSD分别为0.2％和1.0％(n=6).不同产地的灵芝提取物中尿苷及腺苷的含量及二者总量差异较大,且同一产地不同批次尿苷及腺苷的含量及二者总量也存在一定差异.结论 该法简便、准确、重复性好,可用于灵芝提取物中尿苷和腺苷的测定,试验结果为灵芝提取物的质量评价提供了参考依据.     

RP-HPLC法测定青海不同产地冬虫夏草中核苷类成分的含量

目的:测定青海不同产地冬虫夏草中主要核苷类成分的含量并比较其差异。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定不同产地的9份样品中尿苷、鸟苷、肌苷、腺苷、虫草素的含量。色谱柱为Symmetry ShieldTMRp18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.2～1.2mL·min-1,检测波长为260nm,柱温为30℃。结果:5种成分的进样量分别在0.331～1.796、0.375～2.046、0.256～1.389、0.338～1.844、0.384～2.110mg范围与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.9999、0.9999、0.9998、0.9997、0.9998);平均回收率分别为98.72%、101.48%、99.74%、98.46%、98.09%,RSD分别为1.96%、1.68%、1.82%、1.57%、2.74%(n均为6)。青海不同产地间冬虫夏草主要核苷类成分含量有差异。结论:本方法能有效鉴别天然冬虫夏草中的核苷类成分,而冬虫夏草化学成分与生态因子的相关性还需要进一步研究。     

一株新种链霉菌菌丝体次生代谢产物的研究

目的 研究一株新种链霉菌（Streptomyces pleomorphus sp. nov.）菌丝体甲醇提取物的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备HPLC方法进行分离,利用理化性质及波谱数据分析结合文献对照确定化合物的结构。结果 从S. pleomorphus sp. nov.菌丝体的甲醇提取物中分离得到12个已知化合物,分别鉴定为teleocidin B2（1）、teleocidin B3（2）、12-齐墩果烯-3,22,24-三醇（3）、胸腺嘧啶脱氧核苷（4）、尿嘧啶脱氧核苷（5）、尿嘧啶（6）、3-甲基哌嗪-2,5-二酮（7）、O-α-D-葡萄吡喃糖乙醇苷（8）、&;#61537;O-α-L-阿拉伯呋喃糖乙醇苷（9）、邻氨基苯甲酸（10）、4-氨基-4-甲基-戊-2-酮（11）、（Z）-13-二十二烯酸（12）。结论 12个化合物均为首次从S. pleomorphus sp. nov.代谢产物中分离得到。     

野独活茎化学成分的分离与鉴定

目的更好地开发利用野独活(Miliusa balansae Fin. et Gag.)药用植物资源。方法用质量分数为80%的乙醇提取,用硅胶柱色谱、羟丙基葡聚糖凝胶LH-20柱色谱分离纯化;通过NMR谱和薄层色谱等鉴定化合物的结构。结果分离鉴定了10个化合物,分别为尿囊素(allantion,1)、(+)-衡州乌药碱(coclaurine,2)、1-N-甲基乌药碱(1-N-methylcoclaurine,3)、鹅掌揪碱(liriodenine,4)、腺嘌呤核苷(adenine riboside,5)、尿嘧啶核苷(uridine,6)、蔗糖(sucrose,7)、葡萄糖(glucose,8)、β-谷甾醇(β-sitosterol,9)、胡萝卜苷(daucosterol,10)。结论除化合物4外,其他化合物均为首次从野独活属植物中分离得到。     

刺山柑果实的化学成分研究

目的研究刺山柑果实的化学成分。方法通过硅胶、sephadex LH-20及反相硅胶(Rp-18)柱层析等色谱方法进行分离,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果从刺山柑果实85%的乙醇提取物中分离鉴定了13个化合物,分别为:二氢-4羟基-5-羟甲基-2(3H)呋喃酮(1)、7-hydroxy-2-oxoindolin-3-ylaceticacid(2)、吲哚-3-甲醛(3)、尿嘧啶(4)、山柰酚芸香苷(5)、芦丁(6)、(6S)-hydroxy-3-oxo-a-ionol(7)、spionosideB(8)、β-谷甾醇(9)、β-胡萝卜苷(10)、β-胡萝卜苷-6′-硬脂酸酯(11)、肌醇(12)和尿苷(13)。结论化合物1～3,12和13为首次从该属植物中分离得到。     

斯里兰卡天料木茎的化学成分研究

对斯里兰卡天料木茎的乙醇提取物进行化学成分研究。应用硅胶柱层析,Sephadex LH-20柱色谱,HPLC和制备薄层等多种色谱方法进行分离和纯化,从中分离得到了13个化学成分,包括5个木脂素类（1–5）,3个异香豆素类（6–8）和7个其他类化合物。经波谱解析并与文献数据相比对,其结构分别鉴定为：（–）-5＇-甲氧基异落叶松脂素3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）,（＋）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷（2）,（＋）-异落叶松脂素3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）,（–）-异落叶松脂素3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）,icariside E5（5）,3-苯基异香豆素（6）,homalicine（7）,（–）-dihydrohomalicine（8）,木栓酮（9）,儿茶酚（10）,对羟基苯甲酸（11）,甲基呋喃阿拉伯糖苷（12）,尿苷（13）。除了化合物6–8外,其他化合物均为首次从该属植物中得到,化合物6为首次从该种植物中分离得到。     

高效液相色谱法定量分析冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤

目的采用高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤2个成分的含量。方法采用Kromasil C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(5:95)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长260nm。结果尿苷和腺嘌呤质量浓度质量浓度均在5～500μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率分别为99.25%和99.43%,RSD分别为1.18%和1.52%(n=6)。结论该方法快速、准确、重现性好,可用于同时测定冬虫夏草中尿苷和腺嘌呤的含量。