WIN 55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的检测WIN55，212—2对培养的大鼠三叉神经节神经元细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响并探讨其机制。方法以Fura一2／AM为钙探针，用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca^2＋]i的变化。结果WIN55，2122（0．01～10μmol／L）可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，EC50为0．47μmol／L；用大麻素Ⅰ型受体（CBI受体）阻断剂AM251孵育后，发现10μmol／L的AM251可明显抑制10μmol／L WIN55。212—2对三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i的作用（P〈0．01）。结论WIN55，212—2可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，该作用可能是由CBI受体所介导。     

吗啡长时程作用对新生鼠TM神经细胞cAMP和cGMP的影响以及青藤碱的干预作用

目的观察体外原代培养的新生鼠下丘脑结节乳头核（TM）神经细胞在吗啡长时程作用下胞内cAMP及cGMP水平的变化以及青藤碱对它的影响。方法采用原代培养7d的TM神经细胞，加入含100μmol／L吗啡的培养液培养48h，形成类吗啡依赖神经细胞，经100μmol／L纳洛酮戒断后，用EIA法测定细胞内cAMP和cGMP含量。不同剂量的组胺或青藤碱存纳洛戒成断前30min作用于细胞，同时测定药物对正常TM细胞内cAMP和cGMP水平的影响。结果以100μmol／L吗啡作用于新生鼠TM细胞48h后，胞内cAMP及cGMP含量明显升高，经100μmol／L纳洛酮戒断后．胞内cAMP含量出现反弹性超高现象，而cGMP含量则明显下降，cAMP与cGMP比值明显增大。30、100μmol／L青藤碱及40μmol／L组胺对正常TM神经细胞的cAMP及cGMP含量无明显影响，300μmol／L青藤碱及80μmol/L组胺可使正常细胞内cAMP含量明显升高。三个剂量的青藤碱及40μmol／L组胺预先作用可明显降低吗啡依赖的TM细胞经纳洛酮戒断时的cAMP超高水平，同时明显升高cGMP水平，使细胞内增大的cAMP与cGMP比值减小。结论在吗啡（100μmol／L）长时程（48h）作用下，TM神经细胞内cAMP及cGMP水平发生了明显的变化，中枢组胺能神经系统可能参与了吗啡依赖的形成与戒断过程，青藤碱可显著降低吗啡依赖细胞戒断时的cAMP超高水平，同时升高cGMP水平，使两者比值趋于正常。     

大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响,从而探讨其降眼压机制。方法采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法（NSE,Ⅷ因子相关抗原染色）鉴定细胞,应用透射电镜对细胞进行形态学及生长特性观察;对传3代的小梁细胞分别施加含大麻素WIN55,212-2终浓度为0（对照组）、1、10、20、40μmol/L的培养液,48h后行MMP-3和MMP-9免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。提取上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化。结果体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9,大麻素WIN55,212-2可促进MMP-3及MMP-9的表达,并抑制TIMP-1的表达。结论一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达（P〈0.05）,并抑制TIMP-1的表达（P〈0.01）,从而达到降低眼压的目的。     

肾上腺素对视网膜色素上皮细胞ATP酶活性及细胞内cAMP和钙离子浓度的影响

目的 研究。肾上腺素对培养的成人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）钠-钾三磷酸腺苷酶（Na^＋-K^＋ATP酶）、钙离子三磷酸腺苷酶（Ca^2＋-ATP酶）和细胞内环腺嘌呤核苷酸（CAMP）、[Ca^2＋]i的影响与超微结构的变化，以探讨视网膜下液转运和吸收的机制。方法 采用不同浓度。肾上腺素诱导RPE细胞24h后，采用ATP酶试剂盒检测细胞Na^＋-K^＋ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力，^125I-cAMP放免试剂盒检测胞内cAMP浓度，Fura-2／AM荧光探针检测细胞内[Ca^2＋]i，并采用透射电镜技术观察细胞超微结构的改变。结果 0．1～100nmol／L。肾上腺素能显著降低RPE细胞Na^＋-K^＋ATP酶活性，并提升Ca^2＋-ATP酶活性（均P〈0．01）。10nmol／L。肾上腺素可明显升高REP细胞内cAMP水平，加入10nmol／L。肾上腺素30min可明显引起RPE细胞内[Ca^2＋]i降低，透射电镜观察发现。肾上腺素诱导后的RPE细胞内水肿样改变。结论 肾上腺素可能通过β-肾上腺素能受体-cAMP途径影响RPE细胞离子与液体转运。     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡、抑制增殖与bcl-2、PCNA表达变化的关系

目的探讨柔红霉素（DNR）在体外诱导Jurkat细胞凋亡的情况并探讨其与细胞表达凋亡相关蛋白改变的关系。方法Annexin V／PI双标流式细胞仪（FCM）检测DNR诱导Jurkat细胞的凋亡作用,用免疫细胞化学观察相关蛋白表达水平的变化。结果当DNR为0．1～2．0μmol／L浓度范围时,作用一定时间后Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高。但药物浓度超过2．0μmol／L,或2．0μmol／L作用48h后Jurkat细胞出现凋亡率下降,细胞大部分死亡。0．5μmol／L DNR作用于Jurkat细胞24h后,细胞中bcl-2、PCNA蛋白表达水平降低。结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,药物浓度达5．0μmol／L时细胞大部分死亡。本实验条件下DNR体外诱导Jurkat发生凋亡的机制可能是通过抑制bcl-2、PCNA蛋白的表达实现。     

嘌呤受体P2X7激活介导大鼠视网膜神经节细胞死亡的实验研究

 【目的】研究嘌呤受体P2X7激动剂、拮抗剂对大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的影响。【方法】（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine以标记RGCs。检测P2b激动剂BzATP（0、50、100、500μmol／L）和特异性拮抗剂OxATP（100μmol／L）对体外培养RGCs存活率的影响；（2）体外培养未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGCs，以10μmol／L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后。利用Ca^2＋影像测定仪分别测定P2X7激动剂BzATP（50μmol／L）和拮抗剂OxATP（100μmol／L）对RGCs胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】P2X7受体激动剂BzATP可引起体外培养的RGCs死亡，反应呈剂量依赖性，EC50=35μmol／L。在50μmol／L浓度下，BzATP约杀死30％的RGCs；而100μmol／L OxATP则可明显减轻BzATP对RGCs的毒性作用，使RGCs存活率从77％±4％提高至96％±3％（P〈0．001）。BzATP可引起RGCs胞内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使胞内Ca^2＋升高（1022±113）nmol／L。在OxATP作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高（63±13）nmol／L（P〈0．001）。【结论】嘌呤能P2X7受体激活可导致大鼠视网膜神经节细胞死亡和胞内钙离子浓度升高。     

吡咯二硫代氨基甲酸乙酯干预人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的 研究PDTC对体外培养的人视网膜色素上皮（hRPE）细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞（hRPE），采用MTT法和免疫组化图像分析系统研究不同浓度PDTC对hRPE细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。结果 作用24h组．浓度0．062g／L以上PDTC可有效抑制RPE细胞增殖，并呈浓度依赖性。作用48h组，浓度0．031g／L以上PDTC即可有效抑制RPE细胞增殖，亦呈浓度依赖性。浓度0．062g／L以上PDTC作用24h组PCNA表达水平较阴性对照组明显下降，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论 PDTC可以抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞的增殖，抑制效应与药物浓度和作用时间正相关，其作用机制可能与降低细胞内PCNA表达有关。PDTC可望成为治疗增殖性玻璃体视网膜病变新的药物。     

过氧化氢对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白表达的影响

目的采用体外研究方法探讨过氧化氢（H2O2）对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白（Grx）表达的影响。方法体外分离培养原代人结肠上皮细胞;通过相同浓度H2O2或不同浓度H2O2刺激原代人结肠上皮细胞,使细胞处于氧化应激状态,应用MTT比色法检测不同浓度的H2O2对细胞活力的影响,半定量RT—PCR检测H2O2对细胞Grx基因表达的影响。结果400μmol／L以上的H2O2降低细胞活力,300μmol／L浓度的H2O2在一定时间内随刺激时间的延长Grx基因表达相应增加（P〈0．05）,且在各时间点与对照组相比,H2O2组Grx基因表达均显著增加,在30min时表达量最多;在300μmol／L以下,随着H2O2浓度的增加,Grx基因表达水平亦相应增加（P〈0．05）,而500μmol／L浓度的H2O2组Grx基因表达与400μmol／L组相比有所下降（P〈0．05）。结论H2O2引起的氧化应激可明显上调原代人结肠上皮细胞Grx基因的表达,可能在基因水平上参与了对抗H2O2的的作用,但另一方面也赋予了细胞良好的抗凋亡能力,值得深入探讨。     

致敏血清诱导大鼠气道平滑肌细胞嗜酸粒细胞趋化因子的表达及机制探讨

目的观察气道平滑肌细胞经哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达变化,并探讨其可能的机制。方法贴壁法体外培养大鼠气道平滑肌细胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激体外培养的气道平滑肌细胞,或同时予以致敏血清和地塞米松干预。采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中Eotaxin水平,放射免疫法测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）表达,逆转录聚合酶链反应半定量检测细胞中Eotaxin mRNA表达。结果致敏血清干预后,细胞培养上清Eotaxin水平和细胞内Eotaxin mRNA表达均较正常对照组显著升高[（107.09±7.12）ng/L比（0.63±0.56）ng/L,P〈0.05;1.39±0.04比0.05±0.01,P〈0.05],细胞内cAMP表达显著降低[（17.58±3.62）ng/L比（32.39±3.36）ng/L,P〈0.05]。地塞米松与致敏血清同时干预后,上清中Eotaxin水平[（64.18±4.04）ng/L]和胞内Eotaxin mRNA（0.77±0.19）表达较哮喘组显著降低,细胞内cAMP表达显著升高[（58.99±5.94）ng/L]（P〈0.05）。上清Eotaxin水平与胞内cAMP水平呈负相关（r=-0.788,P〈0.01）。结论气道平滑肌细胞在致敏状态下Eotaxin基因和蛋白表达均显著增强,可能作为炎性自分泌细胞分泌炎症因子,通过cAMP信号途径参与哮喘的发生。     

双丁酰环腺苷酸对高转移性肺巨细胞癌

目的：为研究双丁酰环腺苷酸（DBcAMP）对高转移人肺癌细胞系PGCC细胞生长及分化的调控作用及其作用机制。方法：用MTT法、Boydern小室法和软琼脂集落形成实验测PGCC细胞体外生长、浸润及集落形成能力，放射免疫测定细胞内cAMP水平，HE染色，免疫细胞化学观察用药后PGCC细胞形态、神经特异性烯醇化酶（NSE）和嗜铬素表达。结果：DB AMP1mmol/L处理第8天，对PGCC细胞的生长抑制率近40％，磷酸二酯酶抑制剂IBMX与DBcAMP合用明显增加其抑制作用，且DBcAMP处理后，PGCC细胞内cAMP水平升高，体外浸润及集落形成能力均降低，光镜见处理细胞胸突伸长或增长，细胞内出现嗜铬素颗粒及NSE表达增强。结论；DBcAMP通过增加细胞内cAMP水平抑制PGCC细胞的生长、浸润并诱导其分化。     

Effects of WIN 55,212-2 on I_K Current in Cultured Trigeminal Ganglion Neurons of Rat

The trigeminal ganglion (TG) neurons are oneof the primary sensory neurons. It contains severaltypes of voltage gated potassium channels, whichinclude those that activate rapidly and inactivateslowly (IK) and those that activate and inactivaterapidly (IA) [1]. Primary afferents are a functional ly diverse population of neurons that transduce andencode a variety of stimuli. Some of this diversitymay reflect a different distribution of voltage gatedK+ currents, a class of currents…     

Inhibition of 5-HT3 receptors-activated currents by cannabinoids in rat trigeminal ganglion neurons

This study investigated the modulatory effect of synthetic cannabinoids WIN55,212-2 on 5-HT3 receptor-activated currents (I5-HT3) in cultured rat trigeminal ganglion (TG) neurons using whole-cell patch clamp technique. The results showed that: (1) The majority of examined neurons (78.70%) were sensitive to 5-HT (3-300 μmol/L). 5-HT induced inward currents in a concentration-dependent manner and the currents were blocked by ICS 205-930 (1 μmol/L), a selective antagonist of the 5-HT3 receptor; (2) Pre-application of WIN55,212-2 (0.01-1 μmol/L) significantly inhibited I5-HT3 reversibly in concentration-dependent and voltage-independent manners. The concentra-tion-response curve of 5-HT3 receptor was shifted downward by WIN55,212-2 without any change of the threshold value. The EC50 values of two curves were very close (17.5±4.5) mmol/L vs. (15.2±4.5) mmol/L and WIN55,212-2 decreased the maximal amplitude of I5-HT3 by (48.65±4.15)%; (3) Neither AM281, a selective CB1 receptor antagonist, nor AM630, a selective CB2 receptor antagonist re-versed the inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2; (4) When WIN55,212-2 was given from 15 to 120 s before 5-HT application, inhibitory effect was gradually increased and the maximal inhibition took place at 90 s, and the inhibition remained at the same level after 90 s. We are led to concluded that-WIN55,212-2 inhibited I5-HT3 significantly and neither CB1 receptor antagonist nor CB2 receptor an-tagonist could reverse the inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2. Moreover, WIN55,212-2 is not an open channel blocker (OCB) of 5-HT3 receptor. WIN55,212-2 significantly inhibited 5-HT-activated currents in a non-competitive manner. The inhibition of I5-HT3 by WIN55,212-2 is probably new one of peripheral analgesic mechanisms of WIN55,212-2, but the mechanism by which WIN55,212-2 in-hibits I5-HT3 warrants further investigation.     

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂W／N-55,212-2（WIN）对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂wIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol／L的WIN处理K562细胞24、48h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加（P〈0．05）。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降。激活Caspase．3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。     

Effects of WIN 55,212-2 on IK Current in Cultured Trigeminal Ganglion Neurons of Rat

Summary To investigate the effects of WIN 55, 212-2 onI _K in cultured rat trigeminal ganglion (TG) neurons, whole-cell patch clamp techniques were used to record theI _K before and after WIN 55,212-2 perfusion at different concentrations. 30 μmol/L WIN 55,212-2 markedly (35.7%±7.3%P<0.01,n=8) inhibitedI _K currents, and the currents were partially recovered after washing. 30 μmol/L WIN 55, 212-2 also induced a significant depolarizing shift in conductance-voltage parameters (control: V_0.5=10.43±4.25 mV, k=16.27±3.86; WIN 55,212-2: V_0.5=24.71±3.91 mV, k=16.69±2.75;n=8,P<0.01 for V_0.5). 0.01 μmol/L WIN 55,212-2 slightly (27.0%±7.9%,P<0.05,n=7) increasedI _K currents, but had no significant change in conductance-voltage parameters (control: V_0.5=10.74±5.27 mV, k=17. 33±2.96; WIN 55, 212-2: V_0.5=11.06±2.05 mV, k=19.69±6.60;n=7,P>0.05 for V_0.5 and k). These results suggested that WIN 55, 212-2 has dual action, which might be through different receptors. MING Zhangyin, male, born in 1968, Doctorial Candidate This project was supported by a grant from National Natural Sciences Foundation of China (No. 30271500).     

心肌M2胆碱受体抗体对大鼠心房及心室肌cAMP含量的影响

目的 :了解心肌M2 胆碱受体抗体 (M2 Ab)对大鼠心房和心室肌cAMP含量的影响 ,并与M2 胆碱受体激动剂卡巴可 (Carb)的作用进行了对比观察。方法 :采用离体生化放射免疫分析法测定M2 Ab及M2 胆碱受体激动剂Carb对心肌cAMP含量的影响。结果 :①M2 Ab及Carb两者均可剂量依赖性抑制异丙肾上腺素 (Isoproterenol,Iso)所刺激的大鼠心房及心室肌cAMP的增加。卡巴可浓度为 2 μmol/L ,10 μmol/L ,5 0 μmol/L时可分别抑制Iso所刺激的cAMP含量 (8.5± 1.2 ) % ,(16 .2± 1.4) % ,(2 9.5± 2 .1) % ,而M2 Ab浓度为 5 0nmol/L ,10 0nmol/L ,40 0nmol/L时 ,可分别抑制 (6 .1± 0 .6 ) % ,(17.3± 1.8) % ,(31.7± 3.1) % (P <0 .0 1)。②Carb(10 μmol/L)及M2 Ab(10 0nmol/L)两者可分别抑制基础cAMP(49.2± 4.3) %和 (6 4.3± 5 .1) %。③M受体阻断剂阿托品 (Atr) (1.5 μmol/L)不但可阻断Carb对Iso的抑制反应 ,亦能阻断M2 Ab的这种反应。而相应的抗原性肽段也能阻断M2 Ab的这种反应。结论 :M2 Ab抑制Iso引起的心室肌细胞cAMP生成量的增加反应 ,类似于M受体激动剂Carb ,两者效应均通过作用于M2 受体途径实现。     

大麻素受体激动剂预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨大麻素(CB)受体激动剂WIN 55,212-2预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用.方法采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型,将50只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(Con组),行线栓法敛大脑中动脉栓塞(MCAO)前24 h腹腔注射生理盐水(NS)0.3ml;WIN 55,212-2预处理组(WIN1～3),分别于MCAO前24 h腹腔注射WIN 55,212-2 0.3,1和3rag/kg;DMSO组,于MCAO前24 h腹腔注射二甲基亚砜(DMSO,WIN 55,212-2的溶剂)0.3 ml.观察MCAO120 min再灌注24,48和72 h后神经功能评分(NFS)和再灌注72 h脑梗死容积百分比.结果 WIN 55,212-2预处理组大鼠NFS明显高于DMSO组和Con组(P<0.05),脑梗死容积百分比明显小于DMSO组和Con组(P<0.05).WIN2组和WIN3组的脑梗死容积百分比明显小于WIN1组,NFS明显高于WIN1组(P<0.05),WIN2组和WIN3组的NFS和脑梗死容积百分比差异无统计学意义(P=0.928),但3 mg/kg WIN 55,212-2可引起大鼠明显嗜睡和倦怠.结论 CB受体激动剂WIN 55,212-2预处理能诱导脑缺血耐受,对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,并具有一定的剂量相火性.     

Characterization of a small molecule inhibitor of tumor necrosis factor-alpha production

Background Numerous studies have shown that reducing the level of tumor necrosis factor-alpha （TNFα） through the use of anti-TNF antibodies or soluble TNF receptor is a safe and efficacious treatment to inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Therefore, novel approaches to achieve this outcome are desired. The aim of this study was to investigate the characterization of a small molecule inhibitor, Y316, which blocks TNF mRNA upregulation and TNF production by lipopolysaccharides （LPS） stimulated monocytes. Methods Peripheral blood mononuclear cells （PBMC） from healthy volunteers were plated in 24-well plates and stimulated with LPS （1 pg/ml）, phorbol-12-myristate-13-acetate （PMA） （100 ng/ml）, zymosan （10 IJg/ml） and Tsst （100 ng/ml）. Supernatants were collected after 4-hour culture at 37℃, and quantitative determination of TNFα, interleukin-113 （IL-1β）, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-2 production in the supernatants was performed by colorimetric enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Total RNA of PBMC was isolated and cytokine mRNA quantitation was performed by using a RNA level measuring kit （R ＆ D Systems）. PBMC were pretreated with Y316 （10 μmol/L, 1 μmol/L, 0.1 μmol/L, 0.01 μmol/L and 0.001 μmOl/L） or dimethyl sulfoxide at 37℃ for 10 minutes, and then stimulated with LPS or PMA, protein concentrations of p44.42, IKBa, P38 and Jun NH2-terminat kinase were determined by Western blotting. Cyclic adenosine-3＇,5＇-monophosphate （cAMP） of PBMC was measured by enzyme immunoassay kit （Amersham Pharmacia Biotech）. Results Y316 blocked TNF production and inhibited the upregulation of TNF mRNA levels in response to LPS, and also prevented the production of IL-1 and IL-6. In contrast, Y316 augmented the production of IL-10 in LPS-stimulated monocytes. Y316 failed to prevent the production of IL-2 and TNF in antigen-stimulated T cells, suggesting that its effects may be cell-type specific. Y316 prevented the phosphorylation and activation of the MAPK, ERK, and therefore appeared to mediate its effects on TNF by acting at an early point in the signaling cascade induced in response to LPS. There was no effect of Y316 on cAMP levels either alone or in the presence of LPS. Conclusions Y316 appears to be a small molecule inhibiting TNF production, which may act via a novel mechanism. Identification of the target of Y316 may lead to the development of alternative strategies for achieving selective cytokine inhibition.     

2型糖尿病患者血尿酸水平与下肢血管病变的相关性

目的 分析2型糖尿病患者血尿酸(UA)水平与下肢血管病变的关系.方法 对2174例2型糖尿病患者(男1228例,女946例)进行体脂参数、血压、血糖、血脂、血UA、C反应蛋白(CRP)等测定,同时用高频超声检查下肢动脉,分析血UA水平与下肢血管病变发生率的相关性.结果 (1)将男女患者分别根据有无下肢血管病变分组,女性患者有下肢血管病变组的UA水平显著高于无下肢血管病变组[(304±76)μmol/L比(287±71)μmol/L,P<0.01],男性患者2组间差异无统计学意义[(332±76)μmol/L比(328±77)μmol/L,P=0.45].(2)将男女患者分别按血UA水平四分位间距分为4组,女性为UA<240 μmol/L组(A组),240 μmol/L≤UA<285μmol/L组(B组),285μmol/L≤UA<341 μmol/L组(C组),UA≥341 μmol/L组(D组).4组女性患者下肢血管病变发生率分别为38.56%,44.02%,47.54%和50.00%(趋势P<0.01).其中C组和D组的发生率均显著高于A组(P<0.05).(3)Logistic回归分析显示,在校正年龄、糖尿病病程、吸烟、收缩压、体质指数、总胆固醇、甘油三酯、CRP等因素后,以A组作为对照,女性2型糖尿病患者发生下肢血管病变的OR值B组为1.25(95%CI0.87～1.81;P=0.23),C组为1.44(95%CI1.01～2.08;P<0.05)和D组为1.59(95%CI 1.10～2.30;P=0.01),而男性差异无统计学意义.结论 血UA水平升高是女性2型糖尿病患者下肢血管病变的危险因素.     

H2O2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响

目的通过体外实验，研究H2O2对人脐静脉内皮细胞（ECV304）谷氧还蛋白（Grx）mRNA表达水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）；MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响；在时间相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min；在剂量相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L、500μmol／L H2O2作用30min，采用Trizol一步法提取细胞总RNA，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异。结景MTT结果表明，100μmol／L H2O2对细胞增殖无影响，200—500μmol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在时间相关性研究中，终浓度100μmol／L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高，30min达到最大值，差异显著（P〈0．05）；剂量相关性研究表明，终浓度100μmol／L H2O2．400μmol／L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高，差异显著（P〈0．05），其中终浓度300μmol／L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平。