海洋甾体YC—1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

目的：观察海洋甾体ＹＣ－１对低钾（５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｌｏｗ Ｋ＾＋）诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法：小脑颗粒神经元原代培养;采用二乙酸荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ,ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法观察神经元存活率及形态学特征;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。结果：低钾引起小脑颗粒神经元凋亡,Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ＤＮＡ染色     

围术期不同钾浓度溶液对血钾影响的临床实验研究

３０例非体外循环手术患者ＡＳＡ１～２级,随机分成３组（ｎ＝１０）,以静脉普鲁卡因平衡麻醉．每组输入不同含钾浓度的乳酸林格氏液．Ｃ组含钾浓度为４ｍｍｏｌ／Ｌ,Ａ１组为２０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ａ２组为２５ｍｍｏｌ／Ｌ．所有溶液均含１％葡萄糖．每例患者入室后至麻醉前输给１０ｍＬ／ｋｇ,以后按１２ｍＬ·ｋｇ－１·ｈ－１输入并维持至切皮后６ｈ．分别在麻醉前切皮后２,４,６ｈ４个时相测定血钾、红细胞钾、尿量、尿钾、血气、血Ｈｃｔ、血糖等指标．结果麻醉前３组血钾均轻度下降（Ｐ＜００５）,以后Ｃ组显著下降（Ｐ＜００５）,Ａ１组保持原来水平,Ａ２组则上升至理想水平（Ｐ＜００５）．３组红细胞钾于麻醉前均明显高于正常,在切皮后６ｈ中,逐渐下降．与此同时,尿排钾显著增多,血ｐＨ和Ｈｃｔ在所有病人中都有不同程度降低（Ｐ＜００５）．本研究认为,以含钾浓度为２０～２５ｍｍｏｌ／Ｌ,速度为１２ｍＬ·ｋｇ－１·ｈ－１进行围术期补钾效果较好,可为临床实践提供具体而有用的参考     

小檗碱诱导大鼠神经元毒性死亡的研究

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元的直接作用及Ｂｅｒ与间接胆红素的相互作用。方法：采用二乙酸荧光素（ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法，观察神经元的存活率及形态学特征；用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析Ｂｅｒ诱导神经元死亡的生化学特征。结果：Ｂｅｒ呈剂量（０～２０μｍｏｌ／Ｌ）依赖性地诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元死亡。其死亡的机制呈现坏死的特征：包括神经元胞体肿大、无明显核染色质浓缩、ＤＮＡ随机断裂而在凝胶电泳图上呈弥散样改变、流式细胞仪分析未见凋亡峰。用蛋白质合成抑制剂预处理神经元，不能阻断Ｂｅｒ的神经毒性作用。无毒性剂量下的Ｂｅｒ（１μｍｏｌ／Ｌ）与无毒性剂量下的胆红素相加，可产生神经元的毒性。结论：Ｂｅｒ诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元坏死，并增强胆红素的神经毒性作用。     

蟾蜍背根神经节胞体动作电位离子成份的分析

在蟾蜍离体背根神经节标本上，用标准微电极方法，通过改变胞外离子成份及浓度，结合应用离子通道阻滞剂，分析胞体动作电位各离子成份。结果表明：５μｍｏｌ／Ｌ河豚毒灌流６ｍｉｎ后，动作电位幅值及去极相斜率均明显减小；无Ｃａ（２＋）（０ｍｍｏｌ／Ｌ）和高Ｃａ（２＋）（１０、２０ｍｍｏｌ／Ｌ）液灌流１５ｍｉｎ后，动作电位时程（ＡＰＤ）分别较对照值减小和增大；无Ｋ＋（Ｏｍｍｏｌ／Ｌ）和高Ｋ＋（６ｍｍｏｌ／Ｌ）液灌流１５ｍｉｎ后，ＡＰＤ的改变与上述相同；２ｍｍｏｌ／ＬＭｎ（２＋）和１０ｍｍｏｌ／Ｌ四乙胺亦可分别使ＡＰＤ较对照值减小和增大。实验表明胞外Ｃａ（２＋）的改变与ＡＰＤ值的大小呈线性关系。     

嘌呤能P2z受体介导白血病细胞凋亡的研究

目的探讨嘌呤能Ｐ２ｚ受体在介导慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）细胞凋亡中的作用。方法将表达Ｐ２ｚ受体［Ｐ２ｚ（＋）］与不含Ｐ２ｚ受体［Ｐ２ｚ（－）］两组ＣＬＬ细胞分别同１．０ｍｍｏｌ／Ｌ三磷酸腺苷（ＡＴＰ）体外培养８小时,以电镜、ＤＮＡ凝胶电泳和定量ＤＮＡ３′－末端的ＴｄＴ法检测细胞凋亡;并对ＡＴＰ、ＢｚＡＴＰ、２ＭｅＳＡＴＰ、ＡＴＰ－γＳ与其他核苷的诱导及ＯｘＡＴＰ、ＫＮ－６２的抑制效应做定量研究。结果（１）Ｐ２ｚ（＋）细胞能在ＡＴＰ诱导下呈现典型的细胞凋亡形态和ＤＮＡ梯状条带;（２）不同的Ｐ２ｚ受体激活剂可通过Ｐ２ｚ受体诱导细胞凋亡并产生不同量的ＤＮＡ降解片段,诱导能力的强弱顺序是ＢｚＡＴＰ＞ＡＴＰ＞２ＭｅＳＡＴＰ,而ＡＴＰ－γＳ或其他核苷几乎无诱导能力;（３）Ｐ２ｚ受体的抑制剂Ｏｘ－ＡＴＰ和钙调节蛋白激酶抑制剂ＫＮ－６２可完全阻止诱导剂诱导的细胞凋亡的诱导。结论Ｐ２ｚ受体在介导由ＡＴＰ诱导ＣＬＬ细胞凋亡的过程中起着十分重要的作用。     

胆碱能受体不同亚型在介导孤束核及疑核神经元兴奋中的作用

向含有孤束核中央亚核（ＮＴＳｃ）、疑核（ＡＭＢｃ）及网状小细胞核（ＺＩＲＰ）的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠脑薄片的ＮＴＳｃ表面压力注射毒蕈碱（ｍｕｓｅａｒｉｎｅ）１～２ｐｍｏｌ可引起ＡＭＢｃ神经元产生节律性兴奋性突触后电位（ＥＰＳＰ），注入６－氰基－７－硝喹啉－２，３－双酮（６－ｃｙａｎｏ－７－ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２，３－ｄｉｏｎｅＣＮＱＸ）２μｍｏｌ／Ｌ及犬尿酸（ｋｙｎｕｒｅｎａｔｅ）１ｍｍｏｌ／Ｌ可阻断该ＥＰＳＰ；由疑核引导的神经元自发性电活动及刺激ＺＩＲＰ在ＡＭＢｃ引起的ＥＰＳＰ可被二氢－β－刺桐若定（ｄｉｈｙｄｒｏ－β－ｅｒｙｔｈ－ｒｏｉｄｉｎｅ）１～５ｐｍｏｌ抑制而被毒扁豆碱（ｐｈｙｓｏｓｔｉｇｍｉｎｅ）１０μｍｏｌ／Ｌ加强。结果表明，在孤束核－疑核传导通路中，疑核神经元的节律性活动来自孤束核中央亚核胆碱能Ｍ受体介导的兴奋，而网状小细胞核神经元向疑核的投射则通过胆碱能Ｎ受体而发挥作用。     

小檗碱诱导大鼠神经元毒性死亡的研究

目的：研究小檗碱对原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元的直接作用及Ｂｅｒ与间接胆红素的相互作用。方法；采用二乙酸荧光素（ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ＤＮＡ染色法，观察神经元的存活率及形态学特征；用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析Ｂｅｒ诱导神经元死亡的生化学特征。结果：Ｂｅｒ呈剂量（０￣２０μｍｏｌ／Ｌ）依赖性诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元死亡。其死亡的机制呈现坏死的特征：包括神     

谷氨酸的神经毒性作用及其作用机制

目的研究谷氨酸对神经细胞的毒性作用及其作用机制。方法取体外培养的胎鼠大脑皮层神经，分组加入不同浓度的谷氨酸、Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）或海藻酸（ＫＡ），ＤＬ－２－ａｍｉｎｏ－５－ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄ（ＡＰＶ）、４－Ｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－２－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄｈｙｄｒａｔｅ（ＨＱＣＡ），作用３０ｍｉｎ，２４ｈ后测定培养液内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量，并用苔盼蓝鉴定神经细胞活性。结果与空白对照组比较，加入谷氨酸组细胞培养内ＬＨＤ以及神经细胞蓝染率均显著增加（Ｐ＜０．０１），且其程度与加入的药物剂量成正相关。谷氨酸ＬＤ５０为５１．１０±４．２９μｍｏｌ／Ｌ，与ＮＭＤＡ（６６．１７±６．２０μｍｏｌ／Ｌ）相似，但显著低于ＫＡ（１７２．８０±１６．４０μｍｏｌ／Ｌ）。ＡＰＶ或ＨＱＣＡ能显著抑制谷氨酸所致的ＬＤＨ增加。结论谷氨酸的确具有神经毒性作用，这种作用可能主要是通过ＮＭＤＡ受体介导的     

牛磺酸对大鼠培养心肌细胞感染病毒后钙离子内流的影响

观察牛磺酸对心肌细胞感染 ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３）后 Ｃａ２＋内流的影响。取新生 ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞， １８ ｈ后接种 １００ ＴＣＩＤ５０的 ＣＶＢ３作为实验性病毒性心肌炎模型，并采用放射性同位素４５Ｃａ２＋示踪技术，观察了 １～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸对正常及感染 ＣＶＢ３后心肌细胞 Ｃａ２＋内流的影响。结果：（ｌ）１０～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸对正常心肌细胞不同胞外 Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］０， ０．５、 １．５和 ４．０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）下的 Ｃａ２＋内流均有抑制作用，而 １ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸只抑制高［Ｃａ２＋］０（４．０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）时 Ｃａ２＋内流，对低［Ｃａ２＋］０（０．５ ｍｍｏｌ／ Ｌ）和正常［Ｃａ２＋］０（１．５ ｍｍｏｌ／ Ｌ）时 Ｃａ２＋内流无明显作用；（２） ｌ～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌβ－丙氨酸对 Ｃａ２＋内流无明显影响；（３）感染ＣＶＢ３后Ｃａ２＋内流增加，加用１ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸后能减少感染ＣＶＢ３后的Ｃａ２＋内流。结论：牛磺酸具有抑制培养心肌细胞感染ＣＶＢ３后Ｃａ２＋内流的作用，这可能是牛磺酸能减轻ＣＶＢ３所致细胞损伤的机理之一。     

尾加压素在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用及其机制

目的 观察近年新发现的活性肽尾加压素（Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ Ⅱ,ＵⅡ）在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用及其机制。方法 （１）采用＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定ＵⅡ对原代培养的大鼠气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的影响,应用不同阻断剂观察ＵⅡ诱导细胞ＤＮＡ合成的信号转导通路。（２）采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光探针,测定ＵⅡ对胞浆游离钙浓度的影响。结果 （１）ＵⅡ呈浓度（１０＾－１０～１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）依赖性刺激ＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入,１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时,为对照组的７倍（Ｐ〈０．０１）;（２）蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）阻断剂Ｈ７、丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）阻断剂ＰＤ９８０５９及钙通道阻断剂尼卡的平均能抑制ＵⅡ刺激的ＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入,其抑制率分别为２９％（Ｐ〈０．０５）,４５％（Ｐ〈     

海洋甾体YC-1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

【目的】观察海洋甾体YC 1对低钾 (5mmol/L ,lowK )诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响 ,并对其机制进行初步探讨。【方法】小脑颗粒神经元原代培养 ;采用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)和Hoechst 332 5 8DNA染色法观察神经元存活率及形态学特征 ;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。【结果】低钾引起小脑颗粒神经元凋亡。Hoechst332 5 8DNA染色表现出染色体固缩 ,DNA凝胶电泳表现出由大小不一的断裂DNA片段形成的“梯形”条带。YC 1(1 2 5～ 2 0 μmol/L)呈时间和剂量依赖性地抑制上述现象的出现。蛋白质合成抑制剂放线菌酮 (cycloheximide)不能改变由不同孵育时间造成的YC 1对神经元不同保护效果的差异。【结论】YC 1抑制低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,YC 1的这一作用可能属于一非基因效应。     

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子（KCl25mmol*L-1）的培养基中转移至低钾培养基（KCl5mmol*L-1）中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段,SAPK/JNK分析盒测定c-JunN-末端蛋白激酶(JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB203580通过抑制细胞凋亡,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元,c-Jun表达和磷酸化水平升高了,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB20358025μmol*L-1的低钾培养基中,c-Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB203580抑制JNK活性,降低c-Jun的磷酸化而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

酒精对原代培养大鼠小脑细胞的损害

原代培养的新生大鼠小脑颗粒神经元及小脑细胞经不同浓度的酒精进行处理 ,用倒置显微镜及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。结果酒精浓度在 5～ 40mmol/L时 ,细胞存活率呈剂量依赖性降低。酒精浓度增至 16 0mmol/L时 ,颗粒神经元的存活率回升。提示酒精对原代培养大鼠小脑细胞有细胞毒性作用。在高浓度 ( 16 0mmol/L)时 ,其对颗粒神经元毒性减小     

高K~+阻止神经元凋亡与cAMP关系的研究

原代培养的新生大鼠小脑颗粒神经元经 5mmol/LKCl或 2 5mmol/LKCl或 5mmol/LKCl+ 10 μmol/LFK处理 ,用二乙酸荧光素 (FDA)染色法测定存活细胞数及用碘标放射免疫法测定神经细胞内cAMP浓度 ([cAMP]i)。结果表明 :①幸存神经元数 :高钾组 199.11± 2 4.0 0 ,低钾组 47.5 6± 11.0 9,FK组 2 0 1.11± 2 7.43;② [cAMP]i(pmol/孔 ) :高钾组 0 .5 8±0 .2 2 0 ,低钾组 0 .32± 0 .10 6 ,FK组 2 .2 0± 0 .46 9。认为高K+ 阻止原代培养新生大鼠小脑颗粒神经元凋亡的效应与cAMP无关。     

氯化锂对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 :研究氯化锂 (LiCl)在体外对K5 6 2白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法 :采用液体培养试验 ,四唑盐 (MTT)比色试验 ,集落培养试验为指标观察LiCl对K5 6 2细胞增殖的影响 ,采用DNA片段凝胶电泳及细胞形态学改变为指标检测细胞凋亡。结果 :①不同浓度的LiCl(10～ 5 0mmol/L)对K5 6 2细胞具有抑制增殖的作用 ,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②在LiCl(30mmol/L)作用下 ,K5 6 2细胞形态学上可见凋亡细胞 ,且DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见“梯形带”(DNAladder)。结论 :LiCl能抑制K5 6 2白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

不同浓度乙醇灌流液对蟾蜍离体心脏活动影响的比较分析

用不同浓度乙醇灌流液灌流蟾蜍离体心脏,观察其对离体心脏心率、心肌收缩力和心输出量的变化。结果显示：心率减慢,但在１０ ｍ ｍｏｌ／Ｌ 稍有加快（ Ｐ ＞ ０ ．０５） ,浓度在２０ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ 以上时减慢才明显（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ;心肌收缩幅度下降,其表现浓度越大下降越明显（ Ｐ ＜ ０ ．０５ ～０ ．０１） ;心输出量在１０ ｍ ｍｏｌ／Ｌ、１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ 时略有增加,超过３０ ｍ ｍｏｌ／Ｌ 以后心输出量下降,但不明显（ Ｐ ＞ ０ ．０５） 。表明乙醇过量有减慢心率和抑制心肌收缩力的作用,而对输出量影响不大。     

氯化锂对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究氯化锂(LiCl)在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养试验，四唑盐(MTT)比色试验，集落培养试验为指标观察LiCl对：K562细胞增殖的影响，采用DNA片段凝胶电泳及细胞形态学改变为指标检测细胞凋亡。结果：①不同浓度的LiCl(10～50mmoL／L)对K562细胞具有抑制增殖的作用，这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②在LiCl(30mmol／L)作用下，K562细胞形态学上可见凋亡细胞，且DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见“梯形带”(DNA ladder)。结论：LiCl能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

渥曼青霉素对化疗药物诱导BGC823细胞凋亡的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对足叶乙甙和阿霉素诱导的人胃癌细胞BGC823凋亡的影响。方法:常规培养人胃癌细胞BGC823,将细胞分为6组:①空白对照组(不加任何药物);②渥曼青霉素组(终浓度为40 nmol/L);③足叶乙甙组(终浓度为20μmol/L);④渥曼青霉素(终浓度为40nmol/L)+足叶乙甙组(终浓度为20μmol/L);⑤阿霉素组(终浓度为0.3μmol/L);⑥渥曼青霉素(终浓度为40nmol/L)+阿霉素组(终浓度为0.3μmol/L)。分别以上述药物干预24 h后,提取各组细胞的蛋白,以NaI法提取各组细胞的DNA。采用DNA琼脂糖凝胶电泳分析各组的细胞凋亡现象,用Western blot检测各组细胞中Caspase-3蛋白的活化表达。结果:DNA琼脂糖凝胶电泳示空白对照组细胞见较弱的DNA梯状谱(DNA Ladder),其他5组细胞均出现明显的DNA梯状谱;阿霉素与足叶乙甙干预后,胃癌细胞BGC823的Caspase-3活性较空白对照组增强,加用渥曼青霉素处理后,Caspase-3活性进一步增强。结论:PI3K抑制剂渥曼青霉素可增强化学治疗药物足叶乙甙和阿霉素对胃癌细胞的凋亡诱导作用,提高其化疗疗效。为寻求新的高效胃癌化疗方案提供理论依据。     

胆红素诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的研究

目的从细胞与分子水平探讨胆红素神经毒性的机制。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒和大脑皮质神经元,观察胆红素对其毒性的影响。并用ＤＮＡ染色及琼脂糖凝胶电泳法确定胆红素诱导神经元死亡时的形态学及生物化学改变的特征。结果胆红素在０～１７μｍｏｌ／Ｌ的浓度下,选择性地、剂量与时间依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡,呈现凋亡的特征为：核染色质浓缩与ＤＮＡ双链断裂成小片段;在凝胶电泳图上呈“梯形”样改变;用ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂预处理神经元,可阻断其死亡。说明胆红素诱导小脑神经元死亡的过程需要蛋白质的合成。而此浓度的胆红素对大脑皮质神经元的毒性明显低于小脑神经元。结论胆红素可以选择性地诱导小脑颗粒神经元凋亡。     

氨甲酰胆碱对多巴胺诱导的小脑颗粒细胞凋亡的保护机制

【目的】研究多巴胺诱导小脑颗粒神经元凋亡的分子机制,以及胆碱受体激动剂氨甲酰胆碱对多巴胺诱导凋亡的作用。【方法】在培养的小脑颗粒神经元建立多巴胺凋亡模型。用相差显微镜观察形态学,DNA凝胶电泳和Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,细胞的存活率用二乙酸荧光素（FDA）染色法检测。采用Westernblot分析细胞外信号调控的蛋白激酶（ERK）激活情况。【结果】多巴胺可诱导小脑颗粒神经元凋亡,并可持续激活ERK,二者均可被氨甲酰胆碱和PD98059抑制。氨甲酰胆碱对神经元的保护作用及对ERK激活的抑制作用可被阿托品阻断。【结论】多巴胺在小脑颗粒神经元诱导凋亡可能是通过持续激活ERK介导的。氨甲酰胆碱通过激活M胆碱受体,继而抑制了ERK的激活,从而起到对神经元的保护作用。