RP-HPLC法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的含量

目的:建立测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的高效液相色谱分析方法。方法:采用Vydac 208TP54-C8(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相A为0.1%三氟乙酸,B为乙腈-水(90∶10,含0.1%三氟乙酸),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温45℃,检测波长为280 nm。结果:尖吻蝮蛇血凝酶浓度在2.5～30μg·mL-1(r=0.9991)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)为99.5%。结论:该方法可以为注射用尖吻蝮蛇血凝酶的质量控制提供依据。     

反相高效液相色谱法鉴别不同来源降纤酶

目的：建立鉴别白眉蝮蛇降纤酶和尖吻蝮蛇降纤酶的反相高效液相色谱方法。方法：采用汉邦Lichrospher C_4（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以A：0.1%三氟乙酸、B：含0.1%三氟乙酸乙腈-水（90：10）为流动相,梯度洗脱,检测波长280 nm,流速1.0 ml·min~（-1）,柱温：40℃,进样量：100μl。结果：白眉蝮蛇降纤酶与尖吻蝮蛇降纤酶在色谱图上存在明显差异。结论：该方法简便准确,专属性强,可用于白眉蝮蛇与尖吻蝮蛇两种不同来源降纤酶的鉴别。     

注射用糜蛋白酶溶解后稳定性及雾化粒径考察

目的 建立测定注射用糜蛋白酶溶解后含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并考察注射用糜蛋白酶雾化吸入溶液(简称雾化溶液)的稳定性和雾化粒径分布.方法 色谱柱为Grace 214TP C4柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1％三氟乙酸水溶液-0.09％三氟乙酸乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL...     

降纤酶肽图分析

目的采用反相高效液相色谱法测定尖吻蝮蛇降纤酶和白眉蝮蛇降纤酶肽图。方法将降纤酶样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C18色谱柱,以0.1%三氟乙酸为A相,乙腈-水-三氟乙酸(90∶10∶0.1)为B相进行梯度洗脱得到降纤酶肽图。结果降纤酶各个肽段都能得到很好的分离,白眉蝮蛇降纤酶和尖吻蝮蛇降纤酶肽图存在显著差异。结论本法简便、快速,可应用于不同蛇种来源降纤酶的鉴别,以减少临床不良反应的发生。     

反相高效液相色谱法测定注射用盐酸米诺环素含量

目的:探讨用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)测定注射用盐酸米诺环素中盐酸米诺环素含量.方法:采用Waters 2690-996高效液相色谱仪,以Nucleodur C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水-三氟乙酸(15:85:0.1,V/V),流速为1.4 mL/min,检测波长为350 nm.结果:盐酸米诺环素的浓度在(12.5～800)μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为103.24%,RSD=0.52%.结论:该方法操作简便、灵敏、快速,适用于盐酸米诺环素的含量测定.     

RP-HPLC法测定注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白的含量

目的:建立测定注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(简称TACI-Fc)含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为VydacC18,流动相A液为含0.1%三氟乙酸的水溶液,流动相B液为含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液,梯度洗脱,流速为1.3mL·min-1,检测波长为280nm。结果:TACI-Fc进样量在5.0～20.0μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9997);方法平均回收率为99.71%,RSD=1.14%(n=9)。结论:本方法操作简便、重复性好、结果准确,适用于测定注射用TA-CI-Fc的含量。     

多肽卵泡刺激素-4的高效液相色谱法检测及其方法学考察

目的:建立多肽卵泡刺激素-4(FSH-4)的高效液相色谱(HPLC)法的检测方法,并考察了其方法学。方法:采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.60 mm,5μm);流动相为纯水(0.1%三氟乙酸)(A)-乙腈(0.1%三氟乙酸)(B),按梯度洗脱;柱温为25℃;检测波长为218 nm。结果:该法的线性范围介于10~400μg/mL;回归方程为A=7937.2ρ+132.08,r~2=0.999 6,血浆中含卵泡刺激素2.8μg/mL;日间和日内相对标准偏差(RSD)<5.0%;血浆样品检测提取回收率为85.0%~90.0%。结论:本法简便、准确、重现性好,适用于测定FSH-4的含量。     

高效液相色谱法测定香菊片中迷迭香酸的含量

目的 采用HPLC法测定香菊片中迷迭香酸的含量.方法 色谱柱为C18柱(Agilent 4.6mm×250mm,5μm),流动相为:甲醇:0.1%三氟乙酸(40:60),流速1.0mL·min-1,检测波长330nm,柱温35℃,进样量:10μL.结果 迷迭香酸在25~250μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,回归方程A=29847.3721C+15259.2736,r=0.9998,平均回收率为99.3%,RSD为1.33%(n=9).结论 本法简便、易操作、准确度高,可用于香菊片中迷迭香酸的含量测定.     

HPLC测定注射用多西他赛的含量并检查有关物质

目的 建立测定注射用多西他赛含量及有关物质的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Luna C18(200 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(50:50),流速为1.0 ml·min-1,检测波长233 nm.结果 多西他赛浓度1～200μg·ml-1与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),重复性试验的RSD=0.1%(n=6),高、中、低浓度的平均回收率为101.8%,有关物质检查的限量为2.0%,单个杂质限量为1.0%.结论 所建方法准确、简便、快速,适用于注射用多西他赛的质量控制.     

高效液相色谱法快速测定丹参中5种活性成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱法快速测定丹参中丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量。方法:采用Kinetex核-壳技术色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.6μm),以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长为280 nm(丹酚酸B)和254 nm(丹参酮类)。结果:丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA5个成分浓度分别在3.40～850μg.mL-1(r=0.9998),0.96～240μg.mL-1(r=0.9999),2.04～255μg.mL-1(r=0.9995),0.27～68μg.mL-1(r=0.9998),1.12～210μg.mL-1(r=0.9997)范围内与峰面积呈现良好的线性;平均回收率(n=3)在97.32%～104.9%之间,RSD≤4.7%。结论:该方法快速、简便、灵敏,可用于丹参药材的质量控制。     

巴曲抗栓酶研究新进展

巴曲抗栓酶能降低血中纤维蛋白原的含量，临床上可用于预防和治疗血栓形成及相关疾病。通过对近年的有关文献进行分析总结，对巴曲抗栓酶的临床应用和动物实验研究的新进展进行了综述。     

离子导入对降纤酶经皮渗透的影响

目的研究离子导入对降纤酶经皮渗透的影响。方法利用水平式扩散池，对降纤酶进行离子导入透过大鼠皮肤和人尸表皮的渗透性试验，对电极极性、渗透介质的pH以及离子强度等影响进行考察。结果离子导入阳极转运时，在pH 6.4的磷酸盐缓冲介质中，降纤酶的表观经皮渗透系数为（1.2±0.4）×10^-4 cm·h^-1，明显高于阴极转运［（4.3±1.4）×10^-5 cm·h^-1］；在pH 7.4磷酸盐缓冲介质中，降纤酶阳极离子导入经皮渗透量为（25±5）×10^-14 mol·cm^-2高于pH 6.4介质经皮渗透量［(15±4)×10^-14 mol·cm^-2］。结论离子导入阳极转运能够促进降纤酶的经皮渗透，电渗作用有重要影响。     

降纤酶治疗急性期脑梗死临床疗效观察

目的研究降纤酶治疗急性期脑梗死的临床疗效。方法我校老年病研究中心住院患者60例,随机分为治疗组(30例)、对照组(30例)。对照组患者静脉滴注低分子右旋糖苷,治疗组患者按疗程应用降纤酶治疗。比较治疗前后的神经功能缺损程度及血液流变学变化。结果治疗组的有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论降纤酶可降低血中纤维蛋白原含量,降低气血粘度,改善微循环,早期治疗脑梗死疗效满意。     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的 :观察降纤酶 (defibrase)对大鼠局灶性脑缺血性损伤的治疗作用。方法 :雄性Wistar大鼠 ,采用大脑中动脉内线栓法诱导局灶性脑缺血 ,60只局灶性脑缺血大鼠 ,随机分成 1 0组 ,每组 6只 ,其中 5组大鼠分别在缺血后 0 .5 ,3 ,6,9,1 2h静脉注射降纤酶 ,8U·kg-1,另 5组大鼠分别在相同时间点静脉注射等量生理盐水对照 ,另设 1 0鼠作假手术组。各组大鼠均在手术后 2 4h进行神经功能评分 ,然后处死大鼠 ,标本用苏木精曙红染色 (HE)及氯化三苯基四氮唑(TTC)染色 ,观察梗死灶大小、病理改变。结果 :缺血后 0 .5 ,3h静脉给药治疗组神经功能评分比对照组明显改善 ,分别为 (0 .8±s 0 .5 )分 ,(1 .3± 0 .5 )分和 (3 .0± 0 .9)分 ,(3 .2± 1 .0 )分 ,脑梗死灶体积比对照组明显减小 ,分别为 (1 1 9±3 9)mm3 ,(1 41± 62 )mm3 和 (2 91± 5 6)mm3 ,(2 97± 3 9)mm3 ,差别有非常显著意义 (P <0 .0 1 ) ;缺血区病理改变也轻于对照组。缺血后 6,9,1 2h给药组神经功能评分、脑梗死灶体积与对照组比较均无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗组与对照组镜下均见点状出血 ,但未发现治疗组增加脑梗死后出血率。结论 :早期静脉应用降纤酶有效缩小脑梗死灶体积 ,且不增加出血率。     

发色底物法测定注射用降纤酶中类凝血酶的含量

目的 建立发色底物法测定注射用降纤酶类凝血酶的方法。方法 以Be—Phe—Val-Arg—PNA为发色底物，检测波长405nm。结果 降纤酶在2～10单位／mL范围内呈良好的线性关系，r=0．9993（n=5）。结论 本法简便，准确，专属性强，适用于产品的质量控制。     

巴曲酶与蚓激酶序贯疗法治疗急性脑梗死

目的通过对三种不同降纤方案的比较，探索经济有效的降纤治疗方案。方法连续累积该院2004年10月至2005年8月急性脑梗死住院患者，随机分为蚓激酶组（A组）35例、巴曲酶组（B组）40例和两药序贯疗法组（C组）50例，均于发病后6～72h内给药。治疗方法：A组入院当天起日服蚓激酶胶囊60万U，每天3次，共14d；B组自入院当天起隔日给予巴曲酶治疗；C组入院时给予巴曲酶10U治疗1次，同时口服蚓激酶胶囊60万U，每天3次，共14d。评价治疗前后各组神经功能缺损程度及变化时间，比较三组治疗后实验室指标、医疗费用。结果（1）治疗半个月时显效率与痊愈率，C组显著高于A组，B组与C组差异无统计学意义。（2）神经功能缺损评分，A组在（2．8±0．9）d开始降低，B组与C组则在1d内开始降低。（3）治疗后血液流变学各项指标的变化，A组不如B、C组明显，而B组和C组间则无明显差异。（4）A组与C组均出现轻度的胃肠道不适，B组中有2例75岁以上患者在症状改善后再次加重，其中1例CT检查证实为出血性脑梗死。（5）费用上，三组从低到高依次为A组、C组、B组。结论蚓激酶与巴曲酶序贯疗法治疗急性脑梗死是一种经济安全的降纤方法。     

聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性评价

目的检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。方法应用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。结果 Ames试验结果显示每平皿100、20、4、0.8、0.16 U各个剂量组,在加或不加S9代谢活化系统时对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均与溶剂对照的突变菌落数相近。体外培养CHO细胞染色体畸变试验结果显示2.5、5.0和10.0 U.mL-1各个剂量组在加S9代谢活化系统于24 h和不加S9代谢活化系统于24 h、48 h培养的CHO细胞染色体畸变率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。小鼠骨髓微核试验显示425、850、1700 U.kg-1各个剂量组对ICR小鼠的微核诱发率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。结论聚乙二醇修饰降纤酶对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应。表明聚乙二醇修饰降纤酶在本实验条件下无遗传毒性。     

聚乙二醇化降纤酶对血小板聚集和凝血功能的影响

目的研究聚乙二醇化降纤酶对血小板聚集和凝血功能的影响。方法以二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集,用Labor aggregometer-153型双道血小板聚集仪测定血小板最大聚集率,观察聚乙二醇化降纤酶对大鼠体内血小板聚集的影响;同时通过对Beagle犬各个时间点凝血指标:凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)含量的观察,研究聚乙二醇化降纤酶对beagle犬凝血功能的影响。结果聚乙二醇化降纤酶低、中、高剂量组均能明显抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集作用;降低纤维蛋白原(FIB)含量,延长beagle犬TT、PT、APTT时间,等剂量的聚乙二醇化降纤酶药效达峰和维持时间均较阳性药降纤酶的长。结论聚乙二醇化降纤酶具有较强的对抗血小板聚集和凝血作用。     

蕲蛇酶与降纤酶的生物活性比较

目的比较蕲蛇酶和降纤酶在试管内的酶活力及在兔体血液凝固系统的生物活性。方法分别体外测定蕲蛇酶和降纤酶的相对分子质量(Mr)、蛋白质含量、精氨酸酯酶活力和凝血酶活力等。分别给家兔静脉注射蕲蛇酶0.75U/kg和降纤酶5U/kg,连续3d,比较给药前后纤维蛋白原含量、凝血酶时间、凝血酶原时间、部分凝血酶活酶时间、血小板数目、血小板聚集率、血栓长度及血栓重量的变化。结果蕲蛇酶Mr比较小(27000),且由2个Mr为15500的亚基构成,降纤酶Mr较大(40900),为单链蛋白质。0.75U蕲蛇酶和0.21U凝血酶相当;5U降纤酶约相当于1.4U凝血酶.蕲蛇酶的精氨酸酯酶活力为(973±14)μmolTAME/(mg.min),降纤酶的精氨酸酯酶活力为(1140±18)μmolTAME/(mg.min)。家兔实验,两者均能减少血栓形成及降低纤维蛋白原含量,但蕲蛇酶的药效比降纤酶强,其余指标无明显差异。结论蕲蛇酶与降纤酶不同,蕲蛇酶在生物体内(家兔)表现的药效比降纤酶强。