CCL_4诱导大鼠肝损伤模型的代谢组学及茵陈蒿汤的干预作用研究

基于代谢组学的系统化理论,以UPLC/QTOF分析系统为核心手段,结合生物样品分析制备方法,研究CCL_4诱导肝损伤大鼠的代谢组变化,以及茵陈蒿汤干预后的肝损伤大鼠代谢组的回调趋势。同时,借助MS解析理论和主成分分析软件,明晰表征大鼠肝损伤的5个内源性特征生物标记物,并结合系统生物学的理论还原肝损伤的机理与实质,以及茵陈蒿汤的肝损伤防治机理,从药物代谢组学角度对经典方剂防治肝损伤给出全新解释。     

基于代谢组学的茵陈蒿汤及组分配伍对大鼠酒精性肝损伤的保护作用研究

目的：利用代谢组学技术,结合临床生化检测和组织病理学,评价茵陈蒿汤及其组分配伍对长期过量摄入酒精诱导肝损伤的保护作用。方法：对Wistar大鼠进行“白酒—玉米油—吡唑”混合溶液灌胃和饲喂高脂饲料12周制备酒精性肝损伤大鼠模型,茵陈蒿汤及其组分配伍组分别于造模开始每日灌胃给予茵陈蒿汤和6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黄酸配伍组合,12周末测定血清ALT、AST、ALP、TG、T-BIL、TP、ALB、CHOL、HA、LN、PCIIINP、CIV浓度和肝脏组织HYP、γ-GT、MDA、TBA、SOD和GSHPX含量,观察肝左叶HE和Masson染色病理组织切片,并利用UPLC-Q/TOF-MS技术采集尿液代谢轮廓数据,提取各组样品中酒精性肝损伤生物标记物信息,分析空白对照组、模型对照组、茵陈蒿汤组及茵陈蒿汤组分配伍组之间大鼠代谢轮廓及生物标记物的变化。结果：茵陈蒿汤及其组分配伍均能显著抑制酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALP、TG、T-BIL、TP、ALB、CHOL、HA、LN、PCIIINP、CIV浓度和肝脏组织HYP、γ-GT、MDA、TBA、SOD和GSH-PX含量的变化,减少肝脏细胞炎性浸润和肝纤维化,并使肝损伤大鼠整体代谢轮廓远离模型对照组而靠近正常对照组,使10个生物标记物趋于正常水平。结论 茵陈蒿汤对大鼠酒精性肝损伤具有显著的保护作用,其3个组分6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷和大黄酸的配伍组合能够有效表达茵陈蒿汤的生物效应,是其主要有效组分,为茵陈蒿汤防治酒精性肝损伤疾病的创新药物开发奠定了基础。     

茵陈蒿汤对ANIT诱导的急性肝损伤的保护作用

目的:探讨茵陈蒿汤对ANIT急性肝损伤模型的保护作用,并初步探讨其对肝细胞摄取、转化、排泄胆红素的影响,揭示利胆退黄的作用机理,为后续实验建立中医阳黄证黄疸动物模型奠定基础。方法:采用α-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃诱导大鼠急性肝损伤,观察大鼠ALP,ALT,AST,γ-GT活性及T-BIL,D-BIL,β-G和MDA含量,评价茵陈蒿汤保肝作用。结果:茵陈蒿汤低剂量组能使肝损伤生化指标明显改善,具有显著的保肝作用,而高、中剂量组保肝作用不明显。结论:茵陈蒿汤具有保肝利胆退黄的作用,其机理可能与降低肝细胞β-G、MDA含量,促进胆红素代谢,降低脂质过氧化物含量有关。     

茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的:探索茵陈蒿汤对模型大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组和茵陈蒿汤防治组,模型组和中药防治组给予高胆固醇高脂肪饮食喂养共12周以复制非酒精性脂肪性肝炎模型,中药防治组同时给予茵陈蒿汤灌胃12周。12周后处死大鼠收集标本,检测血清ALT、AST活性、TC含量,肝组织TG含量,对肝脏组织进行HE染色。结果:茵陈蒿汤能有效地减轻大鼠体重和肝重,明显减轻模型大鼠血清炎症损伤的病理状态,改善肝组织脂肪变性的病理状态。结论:茵陈蒿汤能够有效防治非酒精性脂肪性肝炎的病理损伤。     

黄芪汤和茵陈蒿汤改善大鼠肝纤维化的效果及分子机制——差异基因表达谱的比较分析

目的:探讨黄芪汤和茵陈蒿汤抑制二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化中对信号传导通路调节的差异。方法:大鼠被随机分为正常组、黄芪汤组、茵陈蒿汤组和模型组,并予以DMN造模及相应药物治疗。观察各组肝组织病理学变化和羟脯氨酸含量;采用全基因组芯片检测,进行差异基因,富集功能GOs及信号通路分析。结果:与正常组相比,模型组出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,黄芪汤和茵陈蒿汤均显著改善肝组织病理,降低Hyp含量(P0.01)。黄芪汤、茵陈蒿汤与模型组比较的差异基因分别为373个和432个,共有基因189个。各用药组都作用于Notch介导的上皮间质转化(EMT)通路、Notch和细胞粘附细胞基质糖复合物通路。黄芪汤还作用于血管内皮生长因子与促血管生成素通路、血小板反应素通路等;茵陈蒿汤还作用于细胞黏附-细胞外基质重塑通路、EMT通路等。结论:黄芪汤和茵陈蒿汤都能显著抑制DMN诱导的大鼠肝纤维化。黄芪汤益气扶正的功效主要与调节Notch诱导的EMT信号通路相关,茵陈蒿汤清热利湿的祛邪作用侧重于调节细胞黏附-细胞外基质(ECM)信号通路。     

基于超高效液相色谱-飞行时间质谱的CCl_4诱导肝损伤小鼠血浆代谢组学研究

目的:利用代谢组学的方法研究不同剂量CCl4诱导的小鼠肝损伤模型,确定能够表征CCl4肝损伤模型的血浆代谢物中的生物标记物。方法:采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)的代谢组学技术,并结合主成分分析的方法,研究正常小鼠和不同剂量CCl4诱导的肝损伤小鼠血浆代谢物组的变化。结果:初步确定建立小鼠肝损伤血浆代谢物研究模型的CCl4用量,并寻找到10个具有特征性的内源性生物标记物。结论:代谢组学方法成功用于CCl4诱导的小鼠血浆肝损伤模型研究,并为进一步研究中药的保护肝脏作用奠定了基础。     

茵陈蒿汤的发展及现代研究

综述了茵陈蒿汤的发展及研究现状，自仲景以来，历代将茵陈蒿汤化载用于治疗各类黄疸性疾病，现代研究表明，茵陈蒿汤不仅具有促进胆红素代谢的作用，还具有抗肝损伤，抑制肝细胞凋亡、抑制星状细胞活化及胶原合成等作用，其作用的物质基础主要为6，7-二甲基香豆素、都桷子素及大黄素等，并进一步明确了一些有效组分的作用靶点。     

清肺排毒汤对大鼠整体代谢及肠道菌群的调节作用研究

通过代谢组学和肠道微生物组学探讨清肺排毒汤(Qingfei Paidu Decoction,QPD)对大鼠整体代谢及肠道菌群的影响,为揭示清肺排毒汤的临床药效机制提供实验依据。采用GC-MS结合LC-MS/MS的非靶向代谢组学以及肠道微生物组学方法,对清肺排毒汤干预大鼠5 d后的血清内源性代谢物谱与肠道菌群组成开展了系统的研究。基于GC-MS和LC-MS/MS代谢组学方法分别获得清肺排毒汤调控的23种和43种差异代谢物,涉及的代谢通路主要包括甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、TCA循环和丙酮酸代谢。利用基于16S rDNA测序分析发现清肺排毒汤显著调节了大鼠肠道菌群的组成,明显上调Romboutsia,Turicibacter,Clostridium_sensu_stricto_1的相对丰度,下调norank_f_Lachnospiraceae的相对丰度。该研究证明清肺排毒汤短期干预能够显著调节大鼠整体代谢,并调节动物的肠道菌群组成,提示清肺排毒汤的临床疗效可能与其对机体的内源性代谢调控及肠道菌群组成的调节有关。     

茵陈蒿汤治疗脓毒症相关肝损伤的研究

目的观察茵陈蒿汤治疗脓毒症相关肝损伤的临床疗效。方法将入住ICU诊断为脓毒症相关肝损伤的40例患者随机分为2组,对照组20例给予标准治疗,研究组20例在对照组治疗基础上给予茵陈蒿汤鼻饲,观察2组治疗前和治疗后3,7 d肝功能指标、腹内压、肠内营养热量/体质量变化情况,并统计2组实际病死率/预期病死率均值、ICU住院时间及痰培养、尿培养情况和肠道菌群移位率,分析年龄、性别、茵陈蒿汤治疗、APACHEⅡ评分与患者病死率、ICU住院时间的关系。结果 2组治疗后3,7 d肝功能指标、腹内压、肠内营养热量/体质量水平均明显改善(P均0.05),且研究组各指标改善情况均明显优于对照组(P均0.05)。研究组的实际病死率/预期病死率均值、ICU住院时间及肠道菌群移位率均明显低于对照组(P均0.05)。Pearson线性相关分析示茵陈蒿汤治疗与脓毒症相关肝损伤患者病死率和ICU住院时间呈负相关(r=-0.465,P=0.03;r=-0.412,P=0.034);多变量Logistic回归分析显示脓毒症相关肝损伤患者使用茵陈蒿汤治疗后可以使死亡风险降低25%(P=0.012)。结论茵陈蒿汤能够显著改善脓毒症相关肝损伤患者肝功能,提高肠内营养耐受性,降低腹内压,防止肠道菌群移位,且能降低患者的病死率,缩短ICU住院时间。     

何首乌致肝损伤大鼠的动态血清代谢组学研究

该文采用液相色谱-质谱方法测定服用何首乌大鼠的血清代谢指纹谱,同时利用多元统计分析方法比较代谢谱差异并筛查显著相关的生物标志物,考察其动态变化趋势。探讨何首乌致大鼠肝脏损伤的代谢组学动态变化,寻找其显著相关的生物标志物,并考察标志物的动态变化趋势,以期为何首乌致肝损伤的内在机制与临床早期诊断提供依据。结果显示给药后不同时间点大鼠的血清代谢轮廓存在一定的差异,经比较分析,共筛选得到6个潜在生物标志物:oleamide,lyso PC(16∶0),leukotriene A4,trans-tetra-dec-2-enoic acid,dihydrocortisol和7a-hydroxydehydroepiandrosterone,这些标志物在何首乌致肝损伤动态过程中呈现一定的变化趋势。所筛选到的生物标志物在给药1周后含量即出现明显变化,相比于ALT,AST来说更加敏感。一定程度上可揭示出何首乌造成肝损伤的动态机制以及肝脏自我修复表现,对于监测服用何首乌患者肝功能、早期发现何首乌肝损伤具有潜在的应用价值和意义。     

芪柴复肝汤对CCl4所致大鼠慢性肝损伤的影响

芪柴复肝汤能明显降低CCl4所致肝损伤大鼠血清ALT、AST，提高A／O比值，降低肝组织中HPA含量，减轻肝细胞的变性坏死，抑制肝纤维化，表明本方对慢性肝损伤有很好的治疗作用。     

益气活血、化痰通络治脑萎缩——国医大师张学文治疗脑病经验之八

张学文教授认为脑萎缩的中医病机主要是阴血耗伤,肝肾不足,阴虚肝热,脑脉不利,脑失所养。治疗以滋阴清肝、化痰通络为主。     

四君子汤和右归饮对衰老大鼠学习记忆能力及自由基水平的影响

目的观察比较四君子汤、右归饮对衰老模型大鼠学习记忆能力和脑组织中自由基的影响。方法以D-半乳糖腹腔注射致亚急性衰老动物模型,观察大鼠水迷宫游泳到达出口的时间及错误次数及脑组织中SOD、MDA、NO、NOS等有关自由基指标。结果四君子汤可缩短衰老模型大鼠水迷宫游泳到达出口的时间;右归饮可升高衰老模型大鼠脑组织SOD水平,降低MDA水平,四君子汤可降低衰老模型大鼠脑组织中NO、NOS水平。结论四君子汤可改善D-半乳糖致衰老模型大鼠空间学习记忆能力,具有增强记忆的功能;右归饮能减轻模型大鼠脑组织自由基对机体的损伤,具有良好的抗自由基作用。     

从黄连及其复方古今临床应用,发掘现代临床新应用

黄连是古今常用中药,有两千年的临床用药史,功能清热燥湿,泻火解毒,用于湿热,热毒诸证,内服外用均可,以黄连为主或配用黄连的复方,如普济消毒饮、黄连解毒汤、朱砂安神丸、清营汤、安宫牛黄丸、牛黄清心丸、交泰丸、黄连阿胶汤,左金丸、当归龙荟丸、黄连羊肝丸,五泻心汤,连朴饮、葛根黄芩黄连汤、白头翁汤、香连丸等名方均以清心肝火热之毒,胃肠湿热之邪为要。现代多认为黄连是抗菌、抗病毒中药,广泛应用于各种感染性疾病,其实在药理研究的基础之上,还应用于心脑血管疾病,糖尿病和恶性肿瘤。笔者也在临床上用黄连为主或配伍治疗上述各种疾病,近年更把重点放在抗恶性肿瘤和肝胆疾病的临床和实验研究上,特别是肝脏疾病方面,观察到黄连及其复方在各种肝脏疾病上,如急慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等属于湿热、热毒证者,辨病与辨证相结合,效果明显,部分结果已经得到实验研究的证实,值得进一步研究开发与应用。     

对原发性高血压中医病机及治疗的再认识

认为原发性高血压中医病机以肝肾阴虚为本,并与肝失疏泄密切相关。同时指出中医治疗应从滋补肝肾、控制危险因素、减轻西药毒副作用等入手。     

橄榄解酒饮对急性酒精性肝损伤大鼠、小鼠丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的影响

目的:观察橄榄解酒饮对大鼠、小鼠急性酒精性肝损伤的防治效果,初步探讨其对血清及肝匀浆丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的影响.方法:采用白酒灌胃法造模,每天记录醉酒、醒酒时间,第3天检测血清ALT,第5天检测血清及肝匀浆ALT、AST,并与护肝胶囊对照.结果:橄榄解酒饮可显著降低大鼠、小鼠急性酒精性肝损伤模型醉酒率,提高醒/醉比;显著降低血清ALT、AST及肝匀浆ALT水平,与对照组比较差异有显著(P《0.05或P《0.01).结论:橄榄解酒饮具有良好的防醉解酒护肝作用.     

肝病择时用药体会——读《素问·脏气法时论》

日朝(寅卯)为春配属肝,日中(巳午)为夏配属心,日晡(申酉)为秋配属肺,夜半(亥子)为冬配属肾,再以辰戊丑未为土气配属脾。根据这一理论,当病邪侵犯某脏,其证候表现必在相应的某脏腑值时的时间内尤为明显;反之,正是某一病证表现最强烈的时辰,可判定病在某脏某腑,以确定治疗方法。研究发现,肝病患者病情有寒热虚实不同,而不同性质的不同阶段在不同季节和昼夜不同,人体阴阳气血节律的变化是不同的,择时施治,就是乘人体生理变化之势发挥作用,达到事半功倍之目的。     

茵陈、大黄联合用药对四氯化碳肝损伤小鼠的保护作用

目的:比较不同配比茵陈、大黄(茵黄)联合用药对四氯化碳急性肝损伤小鼠的保护作用,探究茵黄联合用药治疗小鼠四氯化碳急性肝损伤的最佳比例。方法:将80只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、茵黄10∶0组、茵黄9∶1组、茵黄3∶1组、茵黄3∶2组、茵黄1∶1组、茵黄1∶9组、茵黄0∶10组,每组各8只。阳性对照组以联苯双酯(0.2 g·kg~(-1))进行灌胃,治疗组按上述比例灌胃给药;空白组、模型组分别以等量蒸馏水进行灌胃。各给药组连续灌胃给药7 d,末次给药1 h后,给药组与模型组均腹腔单次注射质量分数0.1%四氯化碳花生油溶液0.01 mL·g~(-1)。16 h后摘眼球取血,检测血清中谷丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)水平。解剖取肝脏称重,计算肝体指数;制成肝组织匀浆,测定三酰甘油(three acyl glycerin,TG)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)浓度。取相同部位肝组织制片,HE染色后观察其病理学形态。结果:与模型组比较,茵黄不同比例治疗组均能降低肝损伤小鼠的肝体指数,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组ALT、AST水平显著上升;与模型组比较,茵黄10∶0组、茵黄9∶1组、茵黄1∶9组ALT水平降低;茵黄3∶1组AST、茵黄10∶0组,茵黄3∶2组、茵黄1∶1组、茵黄1∶9组、茵黄0∶10组AST水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,茵黄3∶2组、茵黄1∶1组、茵黄1∶9组、茵黄0∶10组TC水平下降,茵黄1∶9组、茵黄0∶10组TG水平下降,差异均有统计学意义(P0.05)。病理学形态分析结果显示,各治疗组均能明显改善肝组织损伤的程度。结论:茵黄不同比例治疗组可抑制肝损伤小鼠血清中ALT、AST升高的趋势,对四氯化碳急性肝损小鼠伤均有保护作用,以茵黄配比1∶9组效果最佳。     

蒙药八味沉香胶囊对大鼠心肌缺血的保护作用

目的观察八味沉香胶囊对大鼠心肌缺血的保护作用。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型。将健康成年大鼠随机分为6组:假手术组,缺血模型组,普罗帕酮组,八味沉香胶囊大、中、小剂量组。观察大鼠心律失常发生情况,检测心肌梗死范围,测定丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性。结果八味沉香胶囊能减轻心肌缺血大鼠的心律失常程度,缩小心肌梗死范围,降低心肌缺血后血清中MDA含量和CK活性,提高SOD活性和NO含量。结论八味沉香胶囊对大鼠心肌缺血有明显的保护作用,其机制可能是通过有效的拮抗自由基损伤,提高心肌组织抗氧化能力来实现的。     

女性抗精神病药物源性内分泌紊乱的中药治疗

目的:观察中药二陈汤加减对女性患者抗精神病药物(AP)源性脂质代谢及内分泌紊乱的疗效及安全性,并探讨女性抗精神病药物源性内分泌紊乱的机制。方法:对44例符合入组标准的女性精神分裂症患者进行治疗,总疗程30天。所有患者在服用中药治疗前后检测血清催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、睾酮(T)。并于治疗前后分别做心电图、血常规及尿常规检查。结果:治疗后患者血清催乳素、睾酮水平均下降,且与治疗前有显著性差异(P<0.01);雌二醇水平较治疗前显著上升(P<0.01)。治疗前后的心电图及血、尿常规检查亦未发现明显改变。结论:中药二陈汤加减有显著降低血清催乳素及睾酮水平以及提高血清雌二醇水平的作用,改善AP源性内分泌紊乱;且安全性较好,是一种治疗抗精神病药物源性内分泌紊乱的较为理想的方药。