基因芯片技术检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因

目的检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs和AmpC酶的基因。方法在对ESBLs和AmpC酶表型检测的基础上,利用基因芯片和PCR技术研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生ESBLs和AmpC酶的基因,并对部分ESBLs和AmpC酶的基因扩增产物进行序列分析。结果大肠埃希菌和产酸克雷伯菌以单产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌则以同时产生ESBLs和AmpC酶为主。大肠埃希菌产生的ESBLs(除TEM型外)主要是CTX-M-9组型,占63.5%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs分别以SHV型和CTX-M-3组型为主,分别占70.4%和89.8%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌的AmpC酶均为DHA-1型酶的基因,大肠埃希菌的AmpC酶主要编码CMY-2型AmpC酶。结论基因芯片技术可同时检测多种耐药基因,是ESBLs和AmpC酶基因检测的新途径。     

临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株及其耐药基因型研究

目的 研究分离的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的产ESBLs菌株的耐药情况及耐药基因的表达.方法 选取2014年1月至2015年12月我院的514例感染患者的样本作为研究对象,分离大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌,PCR检测产ESBLs菌株的TEM、SHV、CTX-M-Ga、CTX-M-Gb及CTX-M-Gc的表达情况.结果 所有样本分离出大肠埃希菌198株,其中产ESBLs菌株101株(51.01%):TEM阳性27株(26.73%),SHV阳性32株(31.68%),CTX-M-Ga阳性17株(16.83%),CTX-M-Gb阳性13株(12.87%)及CTX-M-Gc阳性7株(6.93%).肺炎克雷伯菌114株,其中产ESBLs菌株61株(53.51%):TEM阳性11株(18.03%),SHV阳性14株(22.95%),CTX-M-Ga阳性11株(18.03%),CTX-M-Gb阳性13株(21.31%)及CTX-M-Gc阳性7株(11.48%).结论 对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs菌株筛选及耐药基因检测,对指导临床抗菌药物的合理应用具有重要意义.     

临床产ESBLs细菌耐药特性及其基因分型的研究

目的了解并研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌流行及耐药特点,应用聚合酶链反应(PCR)对产ESBLs细菌进行初步分型.方法先后用头孢硝噻吩及纸片扩散初筛法、纸片扩散确认法从临床分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希氏菌中检测产ESBLs菌株,用微量稀释法测定不同类抗生素对产ESBLs菌株的MIC值,并用聚合酶链反应对ESBLs基因进行初步分型.结果我院临床分离肺炎克雷伯菌产ESBLs率为16.7%、大肠埃希氏菌产ESBLs率为12.4%.产ESBLs细菌对青霉素类及三代头孢菌素类耐药率约为70%-100%.加用酶抑制剂后它们的耐药率降为2%-60%左右.它们对复方磺胺、环丙沙星及头孢吡肟的耐药率分别为69.23%,56.41%和20.51%.但它们对阿米卡星的耐药率为12.82%.而非典型β-内酰胺类抗生素头孢西丁、头孢美唑及拉氧头孢对产ESBLs菌株的敏感率分别为94.88%,92.32%,和97.44%.碳青霉烯类的亚胺培南和美罗培南表现了最高的敏感率末发现耐药菌株.ESBLs对单独头孢哌酮的水解率为43.93%,而当结合了舒巴坦、克拉维酸及三唑巴坦时对头孢哌酮的水解率分别下降为20.91%,18.13%及15.27%.产ESBLs肺炎克雷伯菌中产SHV型,TEM型,及SHV和TEM型β-内酰胺酶基因的百分率依次为41.66%,8.33%和50%,而在大肠埃希氏菌中百分率依次为96.3%,0%和3.7%.结论产ESBLs细菌对青霉素、头孢菌素类耐药率较高,并对不同类抗生素有多重耐药的特点.它们对头孢霉素类及氧头孢烯类表现出相当高的敏感率;碳青霉烯类是对产ESBLs细菌最有效的药物.酶抑制剂对产ESBLs细菌的体外效果以头孢哌酮共同底物的情况下为三唑巴坦略优于克拉维酸,但二药都强于舒巴坦.产ESBLs细菌均携带SHV或TEM型β-内酰胺酶基因,其中大肠埃希氏菌绝大部分产TEM型β-内酰胺酶,而对于产ESBLs肺炎克雷伯菌则主要以产SHV型β-内酰胺酶为主.     

山西省阳泉地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因分布与耐药性的研究

目的了解山西省阳泉地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性及基因型分布特点。方法采用BD Phoenix 100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,聚合酶链反应检测β-内酰胺类耐药相关基因,包括TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1和MOXF-Amp C酶。结果 54株产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药,在23种抗生素中,对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为3.7%、3.7%、9.26%、12.96%和14.81%,其余18种抗生素的耐药率为22.2%~100.0%。54株产ESBLs大肠埃希菌携带的β-内酰胺酶基因TEM、CTX-M-1群、CTX-M-9群和OXA-1的检出率分别为100.0%、37.0%、98.1%和14.9%,仅有1株检出产SHV型ESBLs;检出MOXF-Amp C酶基因15株,阳性率为27.8%。菌株同时产2种以上基因达98.1%。结论阳泉地区产ESBLs大肠埃希菌多重耐药严重,携带的β-内酰胺酶基因以TEM+CTX-M-9为主,且大多菌株同时产两种以上基因。     

惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶临床研究

目的探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌中TEM型β-内酰胺酶分型、耐药性及基因突变类型。方法收集86例产ESBLs大肠埃希菌菌株,分析其基因类型;对产ESBLs大肠埃希菌TEM型进行耐药试验及基因突变类型的相关检测。结果 86例产ESBLs大肠埃希菌菌株中,TEM基因型49株(57.0%),SHV基因型16株(18.6%),CTX-M基因型21株(24.4%);TEM分型主要有TEM-1、TEM-2、TEM-105、TEM-116和TEM-128,其中TEM-1和TEM-2型例数最多,分别为18例和17例;TEM基因突变类型主要为缺失和碱基置换;产ESBLs大肠埃希菌菌株TEM型仅对亚胺培南/西司他丁和美罗培南敏感。结论探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌基因突变分型及药敏试验对抗菌药物的选择具有重要的临床价值。     

临床产ESBLs细菌耐药特性及其基因分型的研究

目的 了解并研究产超广谱β－内酰胺酶（ESBLs)细菌流行及耐药特点，应用聚合酶链反应（PCR）对产ESBLs细菌进行初步分型。方法 先后用nitrocefin及纸片扩散初筛法、纸片扩散确认法从临床分离的肺炎克雷伯氏菌及大肠埃希氏菌中检测产ESBLs菌株，用微量稀释法测定不同类抗生素对产ESBLs菌株的MIC值，并用聚合酶链反应对ESBLs基因进行初步分型。结果 我院临床分离肺炎克雷伯氏菌产ESBLs率为16．7％、大肠埃希氏菌产生ESBLs率为12．4％。产ESBLs细菌对青霉素类及第三代头孢菌素类耐药率约为70％－100％，加用酶抑制剂后它们的耐药率降为2％－60％。它们对磺胺甲E唑／甲氧苄氨嘧啶、环丙沙星及头孢吡肟的耐药率分别为69．23％、56．41％和20．51％，但它们对阿米卡星的耐药率为12．82％。而非典型β－内酰胺类抗生素头孢西丁、头孢美唑及拉氧头孢对产ESBLs菌株的敏感率分别为94．88％、92．32％和97．44％。碳青霉烯类的亚胺培南和美罗培南表现了最高的敏感率未发现耐药菌株。ESBLs对单独头孢哌酮的水解率为43．93％，而当结合了舒巴坦、克拉维维及三唑巴坦时对头孢哌酮的水解率分别下降为20．91％、18．13％及15．27％。产ESBLs肺炎克雷伯氏菌中产SHV型、TEM型、SHV和TEM型β－内酰胺酶基因的百分率依次为41．66％、8．33％和50％，而在大肠埃希氏菌中百分率依次为96．3％、0％和3．7％。结论 产ESBLs细菌对青霉素、头孢菌素类耐药率较高，并对不同类抗生素有多重耐药的特点。它们对头霉素类及氧头孢烯类表现出相当高的敏感率；碳青霉烯类是对产ESBLs细菌最有效的药物。酶抑制剂对产ESBLs细菌的体外效果以头孢吸酮为共同底物的情况下为三唑巴坦略优于克拉维酸，但两药都强于舒巴坦。产ESBLs细菌均携带SHV或TEM型β－内酰胺酶基因，其中大肠埃氏菌绝大部分产TEM型β－内酰胺酶，而对于产ESBLs肺炎克雷伯氏菌则主要以产SHV型β－内酰胺酶为主。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药的敏感性

目的：了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的发生率和耐药情况。方法：用确证试验对119株大肠埃希菌和73株肺炎克雷伯菌做ESBLs检测，K—B法做药敏试验。结果：119株大肠埃希菌检出产ESBLs54株，阳性率45．4％。73株肺炎克雷伯菌检出产ESBLs36株，阳性率49．3％。产ESBLs菌株对抗菌药的耐药率显著高于非产ESBLs菌株（P〈0．05）。结论：我院大肠埃希茵和肺炎克雷伯菌产ESBLs比例增高及对多种抗菌药呈交叉耐药和多重耐药。     

泌尿系感染病原菌产ESBLs菌株分离株的耐药性和基因型检测

目的研究鹤岗市人民医院2007年1月至2009年12月泌尿系病原茵菌株大肠埃希菌和肺炎克雷伯茵产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）进行确证和基因型分析,探讨ESBLs基因型的流行情况以及基因型和耐药表型的相关性。方法共收集泌尿系感染者2375例中段尿标本,采用法国生物梅里埃公司ATBExpression鉴定系统对菌株进行鉴定,采用纸片扩散法（Kirby—Bauer即K—B法）进行抗生素敏感性试验,采用双纸片协同试验筛选ESBLs菌株用CKSI推荐的确证试验进行确证,应用PCR分析,确定ESBLs基因型。结果我院ESBLs总检出率为24．2％,其中肺炎克雷伯的ESBLs检出率高达45．6％,大肠埃希菌的ESBLs检出率为21．1％。产ESBLs菌株基因型以CTX—M型为主,其次是SHV型。结论我院泌尿感染患者临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药情况严重,且耐药表型不同。治疗ESBLs感染首选碳青霉烯类抗菌素。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的 了解宁夏地区2所医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLs基因型分布.方法 采用微量肉汤法测定分离自宁夏地区两家医院的45株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对10种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),通过聚合酶链反应(PCR)法及克降测序分析其所产生ESBLs的基因型.结果 45株菌株对美罗培南全部敏感,对头孢嚷肟、奈替米星、氨苄西林、头孢噻吩、头孢曲松、复方磺胺甲噁唑、卡那霉素的耐药率均在64%以上.45株ESBLs菌株有41株产CTX-M型,其中CTX-M-14最多见,其次为CTX-M-28.结论 宁夏地区产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均存在严重的耐药性,ESBLs基因型以CTX-M-14型为主.     

产 ESBLs 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及分布

目的：了解医院临床分离的产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床分布特点及耐药状况,为临床合理用药提供参考依据。方法收集2014年医院临床分离的925株大肠埃希菌和363株肺炎克雷伯菌。使用法国生物－梅里埃 ATB 细菌鉴定系统,应用药敏测试仪及配套微生物检测试剂进行细菌鉴定和药敏试验。结果925株大肠埃希菌中分离出产 ESBLs 菌657株（占71．0％）;363株肺炎克雷伯菌中分离出产 ESBLs 菌150株（占41．32％）。产 ESBLs 大肠埃希菌来自尿标本266株（占40．49％）,产 ESBLs 肺炎克雷伯菌来自痰标本89株（占59．33％）。产 ESBLs 株的耐药率均普遍高于 ESBLs 阴性株;与产 ESBLs 肺炎克雷伯菌相比,产 ESBLs 大肠埃希菌对氟喹诺酮类抗生素耐药率较高;且二者对青霉素类、一到三代头孢菌素类抗生素耐药率均较高,而对厄它培南、亚胺培南、美罗培南等药高度敏感。结论某院产 ESBLs 大肠埃希菌主要引起泌尿道感染,产 ESBLs 肺炎克雷伯菌主要引起呼吸道感染。临床应高度重视产 ESBLs 菌的检测和药敏试验,根据药敏结果合理选择抗生素,减缓细菌耐药的发生,尤其要控制 ESBLs 菌的产生和爆发流行。     

广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs的调查

目的 对广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs进行调查,了解其种类、比例以及传播机制,为临床抗生素的使用提供指导.方法 对广州地区多家医院2007年到2008年临床分离的非重复的确证产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌进行研究,PCR方法确定CTX-M型ESBLs的基因型,MIC检测菌株对抗菌药物的敏感性;接合实验了解CTX-M型的ESBLs编码基因(blaCTX-M)所在质粒的大小.结果 检出携带blaCTX-M-15的菌株共86株(23.8%),其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为39株(21.5%)和47株(26.1%);大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中各检出1株携带blaCTX-M-27的菌株,比率均为0.55%,未发现携带blaCTX-M-16的菌株.接合实验发现,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-15的质粒分别是65Kb和92Kb大小的可接合性质粒;肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-27的质粒推测是大小为57Kb的可结合性质粒.结论 广州地区具有水解头孢他啶活性的CTX-M型ESBLs的类犁为CTX-M-15和CTX-M-27,且以CTX-M-15为主.耐药基因所在的质粒为可接合性质粒,能通过接合水平传播.鉴于CTX-M-15型ESBLs在临床菌株中检出率较高,治疗上应避免单独使用头孢他啶.     

多重耐药性大肠埃希菌质粒谱与ESBLs基因型分析

目的分析临床耐药大肠埃希菌质粒谱与基因型间关系，确定超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum bata lactarnase ESBLs）基因在细菌质粒谱上的座位。方法分离鉴定菌株，通过K-B法药敏实验确认产ESBLs菌株。凝胶电泳检测菌体质粒，并应用PCR技术扩增ESBLs基因。结果分离到产ESBLs细菌128株，检出率为78．0％，针对12种抗生素，产ESBLs细菌的耐药率在29％．71％之间；128株大肠埃希菌含11类不同谱型的质粒群，其中较大质粒（23kb、9．4kb）出现频率高（71．1％、26．6％）；PCR分型结果显示，单独携带TEM型ESBLs基因的菌株比例为24．2％，SHV型为19．5％，CTX-M型为53．1％。携带两种基因型以上的占18．8％。CTX-M型中三个亚型CTX-M-24、CTX-M-22型和CTX-M-3型比例分别是32．0％、28．1％和17．2％。结论质粒谱中，某些分子量相同或相近的较大质粒能稳定存在于菌体内并能导致相应耐药性的产生和播散。定位这类质粒上ESBLs基因的差异导致了菌株耐药性的不同。     

产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的探讨我院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性变化,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法分析我院2008—2009年从临床送检的各类标本中分离得到的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用MIC法进行药敏试验,双纸片确诊试验测定产ESBLs菌株。结果 2008年分离的764株大肠埃希菌中,产ESBLs的有312株,占40.8%;356株肺炎克雷伯菌中,产ESBLs的有133株,占37.4%。2009年分离得到的499株大肠埃希菌中,产ESBLs的有246株,占49.3%;298株肺炎克雷伯菌中,产ESBLs的有107株,占35.9%。产ESBLs菌株的耐药性显著高于非产ESBLs菌株（P〈0.05）。2009年产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南、头孢菌素类三代、四代药物的耐药率明显高于2008年（P〈0.05）,对喹诺酮类药物的耐药率低于2008年（P〈0.05）。2009年产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率较2008年上升了15.9%（P〈0.05）。结论产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呈多重耐药现象,必须加强耐药监测,防止产ESBLs菌株的增长、扩散与流行。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性的回顾性分析

目的了解产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药动态。方法对2003年国内公开发表的12种医学期刊所刊登的同时有关产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析文章共计15篇，进行了回顾性分析。结果大肠埃希菌2461株，产ESBLs大肠埃希菌为782株占31．8％；肺炎克雷伯菌1427株，产ESBLs肺炎克雷伯菌为402株占28．2％。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物均县有不同的耐药性．并显现出多重耐药现象。对亚胺培南的耐药率最小，均未超过2％；对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛的耐药率最高，均超过90％。结论随着第三代头孢菌素的广泛应用，耐药现象十分严重，产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药率显著增高，为避免耐药菌的产生最根本途径是合理使用抗菌药物。     

肝硬化并发自发性腹膜炎感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的 探讨肝硬化并发自发性腹膜炎(SBP)感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析.方法 选择肝硬化并发SBP患者腹水中分离出的42株大肠埃希菌和22株肺炎克雷伯菌,采用κ-B法检测其对常用抗生素的耐药率,采用复合纸片表型确证法测定超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).结果 从42株大肠埃希菌中检出产ESBLs菌株17株(40.5％).从22株肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs菌株8株(36.4％).产ESBLs菌株对头孢西丁、亚胺培南、哌拉西林/唑巴坦和和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均低于30％.结论 肝硬化并发SBP患者腹水感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗生素耐药的主要原因是产生ESBLs.头孢西丁、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦可作为治疗的首选药物.     

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶的检测

目的了解我院大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶产生情况.方法按NCCLS推荐的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）确证试验,对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果236株大肠埃希菌和135株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs大肠埃希菌104株和产ESBLs肺炎克雷伯菌29株,其中106株耐头孢西丁菌株检到3株产AmpC酶.结论我院这两种细菌主要耐药机制仍是产生ESBLs,耐头孢西丁可能是膜孔蛋白缺失所致.     

临床产超广谱β-内酰胺酶菌的分离情况及耐药性分析

目的 研究临床不同标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的检出情况及其耐药特点.方法 采用全自动细菌鉴定/药敏分析仪结合双纸片确证法对我院2005-2006年微生物室从各类标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌523株进行检测.结果 大肠埃希菌产ESBLs的发生率为26.1%,肺炎克雷伯杆菌产ESBLs的发生率为23.1%,中段尿、痰、伤口分泌物3种标本中分离的大肠埃希菌、克雷伯杆菌产ESBLs的发生率间差异均无统计学意义(P＞0.05);产ESBLs菌在ICU病房所占比例最大,其次为呼吸科病房,儿科病房所占比例最小;产ESBLs菌株对抗菌药物的耐药性较非产ESBLs菌株差异有统计学意义(P＜0.05),且呈现多重耐药.目前我院产ESBLs细菌主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌.结论 产ESBLs菌在我院各个病房、不同标本均有发生,对抗菌药物的耐药性明显高于非产ESBLs菌,除亚胺培南外,产ESBLs菌对多种抗菌药物均出现不同程度的耐药性.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究

目的：了解我院临床分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率及耐药性情况，为指导临床用药提供依据。方法：对我院1999—2005年分离的854株大肠埃希菌、300株克雷伯菌用标准纸片扩散确证法检测其ESBLs产生率；采用K-B法进行药敏检测。结果：1999年我院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为26．4％和21．9％，2005年的两者检出率分别增长为48．6％和47．7oA。除亚胺培南的耐药率为0％、产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对阿米卡星、呋喃妥因的耐药率分别为17．9％和6．2％外，2005年我院产ESBLs菌株对其他抗菌药物耐药率均达74．4％以上，且产ESBLs菌株的耐药率远高于非产ESBLs菌株。结论：医院应重视对产ESBLs菌株的检测，合理选用抗菌药物治疗感染。对于产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染的治疗，亚胺培南应作为首选药物。     

肺炎克雷伯菌临床分离株产广谱和超广谱β-内酰胺酶的基因型研究

目的 了解产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及其基因型分布特征,指导临床进行抗感染治疗,更好地控制耐药菌株的播散.方法 对38株经双纸片试验确认为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌采用纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用PCR法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBL基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别;同时采用PCR法检测整合酶基因,对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 38株产ESBLs的肺炎克雷伯菌对青霉素类和头孢菌素类耐药性十分严重,对庆大霉素和复方磺胺甲嚼唑的耐药率也均＞90%,未检测到耐亚胺培南和美罗培南的菌株.38株ESBLs阳性菌株检测到3种ESBLs型,分别为TEM型、SHV型和CTX-M型,VEB型和PER型没有被检出.CTX-M型、TEM型和SHV型阳性率分别为92.1%(35/38)、84.2%(32/38)、76.3%(29/38).整合酶基因阳性率为94.7%(36/38).经测序,所有TEM型均为TEM-1广谱β内酰酶.29株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12有19株,SHV-11有4株,SHV-2有3株,SHV-28有2株及SHV-1有1株.35株CTX-M型中,CTX-M-14有22株,CTX-M-15有13株.同时检测到3种基因的有22株(57.9%),同时检测到2种基因的有14株(36.8%).整合酶基因PCR产物经测序为Ⅰ类整合子.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性及多重耐药性严重,Ⅰ类整合子是其多重耐药和耐药性传播的主要原因;CTX-M-14及SHV-12为肺炎克雷伯菌产ESBLs的主要基因型.     

实时荧光定量PCR检测ESBLs基因型方法的研究

目的:建立一种快速检测革兰阴性杆菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs )耐药基因分型的SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR方法.方法:针对临床常见ESBLs的耐药基因SHV、TEM、 CTX-M、OXA及其同源性分析,设计了SHV、TEM 、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-1、OXA-2及OXA-10 共9对特异性引物,煮沸法提取DNA模板,建立并优化SYBR GREEN I实时荧光定量PCR反应体系,并对其精密度、线性范围进行测定.利用建立方法对51株表型阴性的多重耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行ESBLs耐药基因检测,并与改良三维实验进行对比.结果:从39株ESBLs表型阳性菌株及51株ESBLs表型阴性多重耐药菌株中扩增出除OXA-2外共8种耐药基因型并经测序证实.线性检测范围3×10~3~3×10~8拷贝/mL , r ＝ -0.994 7 ;批间重复性试验变异系数(CV)为9.6%.荧光定量PCR方法与改良三维实验方法比较差异无统计学意义( χ2 = 1.125,P > 0.05).结论:SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR检测ESBLs的耐药基因具有特异性强、灵敏度高、快速、简便的特点,适于临床监测革兰阴性杆菌产ESBLs 基因型.