广州地区携带blaCTX-M-15流行质粒的分子特征研究

目的 研究广州地区携带blaCTX-M-15质粒的分子特征.方法 以2007年到2008年期间来源于广州9家医院确证产CTX-M-15 ESBL的38株大肠埃希菌和47株肺炎克雷伯菌为研究对象,脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)法检测blaCTX-M-15阳性株的同源性,MIC法检测菌株对常用抗生素的敏感性.血清凝集试验确定大肠埃希菌血清型.接合试验了解携带blaCTX-M-15质粒的可接合性,限制性内切酶分析质粒的同源性.PCR分析大肠埃希菌的系统发育群,流行质粒的不相容群和耐药基因构成.结果 blaCTX-M-15阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别用PFGE确定为28个和30个基因型.携blaCTX-M-15大肠埃希菌的系统发育群以D群(67.8%)和A群(21.4%)为主.大肠埃希菌血清型呈散在分布,未发现O25:H4血清型.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ST型无明显集中趋势,大肠埃希菌中发现非O25血清型的ST131,肺炎克雷伯菌中发现2个新的tonB基因和2个新的ST型.58个独立克隆的代表菌株中有40株可将携blaCTX-M-15的质粒传递给受体菌E.coli C600(Rif),其中大肠埃希菌有19株,肺炎克雷伯菌有21株.57.9%(11/19)的大肠埃希菌中携带blaCTX-M-15的质粒大小为65 kb,85.7%(18/21)的肺炎克雷伯菌中携带blaCTX-M-15的质粒大小为92 kb.限制性内切酶分析显示,这2种质粒属流行质粒,分别命名为p15-e和p15-k.通过PCR调查,p15-e存在blaCTX-M-15和ISEcpI;p15-k上存在blaCTX-M-15、ISEcpI、aac(6')-Ⅰ b、aac(3')-Ⅲ、blaOXA-1、qnrB、qnrS、blaDHA-1、blaTEM-1.p15-k同时被证实属于质粒不相容群FⅡ群.结论 广州地区存在携带blaCTX-M-15流行质粒的传播,且流行质粒的大小和基因结构与国外报道不同;无克隆株传播证据.

Abstract：

Objective To study the molecular characteristic of the epidemic plasmids carrying blaCTX-M-15 in Guangzhou. Methods A total of 38 strains of E. coli and 47 strains of K. pneumoniae both producing CTX-M-15 ESBLs were collected from nine hospitals in Guangzhou from 2007 to 2008. The clonal relationship of isolates carrying blaCTX-M-15 was determined by PFGE and MLST. Antimicrobial susceptibility was determined by microdilution test for all isolates. Conjugative plasmids carrying blaCTX-M-15 were obtained by mating and were subject to restriction analysis. PCR was used to determine phylogenetic groups of E. coli,and to study replicon type and the genetic contexts of the plasmids harboring blaCTX-M-15. Serum agglutination test was used to detect the serotype of E. coli. Results The 37 strains of E. coli were classified into 28 genotypes, while the 47 strains of K. pneumoniae were divided into 30 genotypes. ST131 was found in E. coli but not O25 serotype. Two novel-alleles of tonB and new ST were determined in K. pneumoniae. Forty out of 58 isolates represented independent genotypes have been succeeded to transfer the plasmid carrying blaCTX-M-15 to the E. coli C600(Rif) by conjugation. The sizes of plasmids carrying blaCTX-M-15 are 65 kb in 57.9% isolates of E. coli and 92 kb in 87.5% isolates of K. pneumoniae. Two epidemic plasmids were detected in E.coli and K. pneumoniae by restriction enzyme, designated p15-e and p15-k respectively. The blaCTX-M-15 and ISEcpI were identified on p15-e, and the blaCTX-M-15 ,ISEcpI,aac(6')- Ⅰ b,aac(3')-Ⅲ ,blaOXA-1 ,qnrB,qnrS,blaDHA-1 , blaTEM-1 were determined on p15-k. The p15-k also was identified to belong to the incompatible group FⅡ. Conclusion The local dissemination of blaCTX-M-15 appears to be due to the spread of epidemic plasmids harboring blaCTX-M-15. No evidence supports the dissemination of clone strains which carried blaCTX-M-15.     

老年慢性肺源性心脏病合并冠心病的临床特点探讨

目的通过探讨老年慢性肺源性心脏病合并冠心病的临床特点,旨在为临床准确诊断有效治疗老年慢性肺源性心脏病合并冠心病提供理论依据。方法选择2011年1月-2014年1月在我院接受治疗的老年慢性肺源性心脏病合并冠心病患者46例为研究组,对照组选择46例同期在我院接受治疗的单纯慢性肺源性心脏病患者,对比两组患者临床表现和心电图检测情况,并总结治疗经验。结果研究组患者临床表现心绞痛、呼吸困难、心肌梗死发生率显著高于对照组,心电图结果显示研究组电轴左偏、缺血性ST-T异常、陈旧性心肌梗死发生率显著高于对照组,P〈0.05差异有统计学意义。结论掌握老年慢性肺源性心脏病合并冠心病患者心绞痛、呼吸困难、缺血性ST-T异常等临床特点,对于疾病早期诊断治疗有重要的意义。     

CTX-M-15型ESBLs的传播机制和基因环境的研究进展

CTX-M-15是一种同时具备水解头孢噻肟和头孢他啶能力的超广谱β-内酰胺酶,目前在世界各地广泛、快速的传播,甚至在局部地区出现暴发流行。本文就CTX—M-15酶的分子特点,流行病学及CTX-M-15编码基因（blaCTX-M-15）及其基因环境等研究方面作一综述。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸道感染的病原菌分布和药敏分析

目的分析慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)急性加重期呼吸道感染的病原菌分布和药敏分析,为临床初治提供依据。方法回顾性分析我院呼吸内科2012年1月至2014年12月期间的慢阻肺患者487例,痰液细菌培养结果及药敏分析。结果 487例慢阻肺急性加重期呼吸道感染患者中分离出病原菌334株,其中革兰氏阴性菌243株,占72.8%,革兰氏阳性菌58株,占17.3%,真菌33株,占9.9%;革兰氏阴性菌为主要病原菌,其中肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌为感染的主要病原菌,药敏结果显示对碳青酶烯类、氨基糖甙类、哌拉西林他唑巴坦敏感性高,对头孢他啶、头孢西丁、头孢呋辛、环丙沙星、左氧氟沙星耐药性高。患者住院次数2/年、住院时间2周、气管插管、机械通气、留置胃管为多重耐药菌感染的相关因素(P0.05)。结论慢阻肺急性加重期呼吸道感染以革兰氏阴性菌为主,注重多重耐药菌的危险因素,根据痰培养及药敏结果合理选用抗菌药物。     

小剂量血管加压素联合多巴胺治疗感染性休克的临床疗效及安全性分析

目的探讨分析小剂量血管加压素联合多巴胺治疗感染性休克的临床疗效及安全性分析。方法选取2014年5月‐2017年2月该院内科ICU收治的感染性休克患者149例为研究对象,按入院先后顺序将其分为研究组和对照组,其中,研究组患者液体复苏后泵入小剂量血管加压素联合多巴胺,对照组患者液体复苏后泵入多巴胺。对比观察两组患者应用血管活性药物前及用药6 h、12 h、24 h、48 h和72 h时心率(HR)、血压(BP)、尿量以及血乳酸含量,并计算乳酸清除率;记录分析两组患者在用药期间发生的不良反应(皮肤苍白、室性心律失常和水肿)。结果在临床疗效(心率、收缩压、尿量、血乳酸含量和乳酸清除率)方面研究组患者比对照组患者优势明显(P0.05);研究组患者在用药期间皮肤苍白及水肿发生率为16.44%(12/73)及9.59%(7/73),均低于对照组患者的32.89%(25/76)及21.05%(16/76)(P0.05);研究组患者在用药期间室性心律失常发生率为6.85%(5/73),略低于对照组患者的7.89%(6/76)(P0.05)。结论小剂量血管加压素联合多巴胺在治疗感染性休克方面,疗效显著,且不良反应较少。     

深静脉埋入式导管用于自发性闭合型气胸治疗18例分析

临床上对于自发性闭合型气胸的治疗,主要有保守治疗和手术治疗.对于手术治疗主要有抽气、闭式胸腔引流、外科手术.我院于2006年开始至2008年尝试用深静脉埋入式导管(贝朗管)对自发性闭合型气胸进行治疗18例,其中17例治愈,1例因引流不畅改用传统硅胶管引流,取得很好疗效,并发现深静脉埋入式导管(贝朗管)相比传统硅胶管引流用于自发性闭合型气胸治疗的一些优势,现总结如下.     

铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力相关蛋白的差异表达

目的 分析铜绿假单胞菌在耐药性变化时菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)毒力相关蛋白的表达差异,结合患者的临床资料,探讨耐药性变化与细菌毒力变化的相关性.方法 筛选源于同一患者呼吸道、多次分离、药敏谱发生动态改变的铜绿假单胞菌,用肠杆菌基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法确定菌株的同源性,以同一克隆的菌株体系为研究对象,Kirby-Bauer纸片法检测菌株对药物的敏感性,PCR方法检测T3SS系统和菌株的毒力基因型,双向蛋白电泳比较菌株的全菌蛋白表达谱,质谱分析差异蛋白点,并在蛋白质数据库进行检索.收集患者临床信息,了解临床特征、细菌耐药性、毒力相关蛋白三者间的关系.结果 筛选出1例慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺炎的患者符合入选条件,其1年内3次呼吸道分离出铜绿假单胞菌,药敏谱依次为:敏感→多重耐药(MDR)→泛耐药(PDR).3株菌株毒力基因属exo U+/exo S-型,经ERIC-PCR证实为同一克隆.双向凝胶电泳显示3株菌有21个差异表达蛋白.质谱分析发现其中11个蛋白功能明确(9个与细菌基础代谢有关).仅毒力相关蛋白二硫化物氧化还原酶A(DsbA)在PDR株时表达明显上调,在敏感株表达最低.临床信息显示该患者在分离出PDR时,肺部感染最重,并于1个月后死亡.结论 在长期定植、感染过程中,生存环境的变化可能导致铜绿假单胞菌的耐药表型发生变化,同时菌株毒力加强,共同导致感染难于控制.DsbA在铜绿假单胞菌毒力变化中可能发挥了重要的作用.     

广州地区肺炎克雷伯菌携带CTX-M-14质粒同源性分析

目的研究广州肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia,Kp)CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的质粒同源性特征。方法收集2007～2008年广州地区9家医院临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌,PCR检测ESBLs分子表型;用肠杆菌科基因间重复序列PCR(Enterobacteriaceae repetive intergenic consensus-PCR,ERIC-PCR)分析产CTX-M-14型ESBLs菌株的分子同源性;取产CTX-M-14型ESBLs的Kp的所有非克隆株,通过结合试验、质粒图谱、PCR分析blaCTX-M-14基因环境。结果产ESBLsKp共181株,69.1%(125/181)的产ESBLs株为CTX-M表型;其中产CTX-M-14型ESBLs株的检出率为28.2%(51/181),经ERIC-PCR分析,共分为33个基因型;基因环境显示,75.7%(25/33)blaCTX-M-14位于90 kb的可接合质粒上,其他耐药基因blaSHV、blaDHA-1、blaOXA-1、qnr、aac(6’)-Ib-cr等均未检到;有28株菌的blaCTX-M-14位于ISEcp1-like插入序列下游,ISEcp1-like末端与blaCTX-M-14间距均为42 bp,有2株菌ISEcp1末端与blaCTX-M-14起始区间距也为42 bp;但在ISECP1中间有一个S10插入序列。结论广州地区ESBLs主要分子表型为CTX-M型,主要流行为CTX-M-14型,携blaCTX-M-14质粒的传播,可能是本地区CTX-M型ESBLs高发生率的主要原因。     

腺素治疗去甲肾上感染性休克对患者血流动力学与心脏的影响

目的探讨去甲肾上腺素治疗感染性休克对患者血流动力学与心脏的影响。方法选取2016年1月‐2017年6月收治的90例感染性休克患者为研究对象,以随机数字表法将其分为对照组(45例)与研究组(45例)。两组患者均采取常规对症支持治疗,在此基础上对照组患者应用小剂量去甲肾上腺素,研究组患者应用大剂量去甲肾上腺素治疗。观察对比两组患者治疗前与治疗8 h后血流动力学与心脏指标的变化,以及治疗期间的药物副反应情况。结果经相应治疗后,研究组患者心率(HR)、平均动脉压(MAP)水平均低于对照组患者(P0.05);研究组患者心脏指数(CI)、心搏指数(SI)及全身血管阻力指数(SVRI)均高于对照组患者(P0.05);研究组患者治疗期间药物副反应的发生率为17.78%(8/45),高于对照组患者的4.44%(2/45)(P0.05)。结论大剂量去甲肾上腺素能够快速改善感染性休克患者的血流动力学与心脏指标,但药物副反应较强,治疗时应密切监测患者的各项指标,酌情调整用药量,以便发挥最佳的药效。     

基质金属蛋白酶-9与血管内皮细胞生长因子在肺腺癌中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肺腺癌表达的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(SP)法检测MMP-9、VEGF在30例肺腺癌组织和12例癌旁正常组织中的表达。Western blot检测MMP-9单克隆抗体阻断MMP-9后肺腺癌A549细胞VEGF蛋白表达水平的变化,以及VEGF克隆抗体阻断VEGF后肺腺癌A549细胞MMP-9蛋白表达水平的变化。结果MMP-9在腺癌组织表达率为63.3%,正常组织表达率为16.7%,差异有统计学意义(P0.05);VEGF在腺癌组织表达率为70%,正常组织表达率为25%,差异有统计学意义(P0.05);肺腺癌组织MMP-9水平与VEGF表达率存在正相关关系(r=0.709 4,P0.01),并与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况相关(P0.05)。VEGF高表达率与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况相关(P0.05)。用MMP-9单克隆抗体阻断MMP-9可降低VEGF蛋白表达水平,用VEGF单克隆抗体阻断VEGF可降低MMP-9蛋白表达水平。结论 VEGF、MMP-9在肺腺癌高表达,在促进腺癌侵袭转移中具有协同作用。