硒对镉致脂质过氧化与金属硫蛋白诱导合成的影响

目的 比较亚硒酸钠(Na2SeO3)与硒代蛋氨酸(SeMet)对镉(Cd)毒性的拮抗效应，探讨脂质过氧化及金属硫蛋白(MT)的诱导合成在硒(Se)拮抗Cd毒性作用中的意义，为镉中毒的防护提供依据。方法 健康雄性Wistar大鼠36只，随机分6组。I组为正常对照组，Ⅱ组为Cd中毒组，Ⅲ组为Na2SeO3组，Ⅳ组为SeMet组，V组为Cd Na2SeO3组，Ⅶ组为Cd SeMet组。Cd按100μmol／kg体重，Se(Na2SeO3及SeMet)按10μmol／kg体重的剂量隔日1次经口灌胃，其中V组和Ⅵ组按先Se后Cd交替灌胃。Se、Cd均灌胃15次。实验时间为30d。结果 单独给Cd组大鼠肝脏和肾脏MT水平升高，而血清MT出现降低；2种Se化合物均使大鼠肾脏和肝脏MT含量轻度增高，但2个Se加cd组与单独给Cd组比较，MT水平差异不显著；染Cd大鼠仅见血清脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量明显升高，而2种Se化合物对其没有明显影响；无论是单独给Se组(Ⅲ、Ⅳ)，还是Se加Cd组(V、Ⅵ)，大鼠全血、肝脏及肾脏GSH-Px活力均明显增高。结论 Se能在一定程度上诱导机体合成MT，但在Se拮抗Cd毒性作用中MT的诱导合成可能不起主要作用；Se能提高机体的抗氧化能力。对拮抗Cd毒性具有一定的作用；SeMet与Na2SeO3对诱导MT的合成及提高GSH-Px的活力，其效应基本相似。     

六价铬对肝细胞内活性氧和腺苷酸转运体1转录水平的影响

目的探讨重金属六价铬[Cr(Ⅵ)]的体外肝毒性。方法 L-02肝细胞经Cr(Ⅵ)0,2,4,8,16和32μmol.L-1分别染毒12,24或36 h后,采用逆转录-荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和荧光光度法分别对腺苷酸转运体1(ANT1)mRNA表达水平和活性氧簇(ROS)水平进行检测。结果 Cr(Ⅵ)32μmol.L-1处理细胞12和24 h后,ROS水平明显升高,而处理36 h后,ROS水平明显下降。Cr(Ⅵ)2～32μmol.L-1处理细胞12和24 h后,细胞内ANT1 mRNA呈明显低表达水平,而处理36 h后,细胞内ANT1 mRNA表达水平明显增高,达正常对照组的2倍左右。结论 Cr(Ⅵ)在早期(12,24 h)可使L-02肝细胞内ROS水平升高,发生氧化应激,在后期(36 h)可诱导ANT1 mRNA表达水平升高,发生能量代谢应激,可能是Cr(Ⅵ)诱导细胞线粒体损伤的分子毒性机制之一。     

硒和镉联合作用对大鼠肝脏TERT mRNA表达的影响

目的研究亚硒酸钠、氯化镉及其联合作用对大鼠肝脏端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分组,每组动物5只。对照组,硒组(2.5、5和10μmol/kg Na2SeO3)、镉组(5、10和20μmol/kgCdCl2)以及硒镉联合作用组。染毒48h后取出肝脏,用RT-PCR方法检测TERT基因的表达。结果与对照组比较,3个剂量硒组的TERT mRNA虽有增高,但P>0.05,而3个剂量的镉组TERT mRNA表达均增多(P<0.01);在硒镉联合作用组中,虽然3个剂量的硒均可分别使3个剂量的镉诱导的大鼠肝脏TERT mRNA表达下降,但仅在2.5μmol/kg Na2SeO3 5μmol/kg CdCl2组、2.5μmol/kg Na2SeO3 10μmol/kg CdCl2组和5μmol/kg Na2SeO3 10μmol/kg CdCl2组,与相应剂量的镉组比较,TERT mRNA水平降低,差异具有显著性。10μmol/kg Na2SeO3 5、10和20μmol/kg CdCl2联合作用组与对照组相比,TERT mRNA水平均升高,与对应镉组相比,差异无显著性。结论镉在5~20μmol/kg的剂量条件下可以诱导大鼠肝脏高表达TERT mRNA,而一定剂量的硒对一定剂量镉引起的TERT mRNA的表达具有一定的拮抗作用。     

1-17 菲啰啉对氧化剂所致CHL细胞DNA链断裂的影响

目的了解金属螯合剂菲啰啉对不同氧化相关因素所致CHL细胞DNA损伤的影响,初步探讨损伤机制.方法CHL细胞用不同浓度菲啰啉处理30min后加入氧化相关因素培养一定时间(过氧化氢25min;重铬酸钾1h45min;阿霉素1h15min),然后用SCGE(单细胞凝胶电泳)测定DNA链断裂情况,分析菲啰啉对DNA氧化损伤的影响.结果0.4mmol/LH2O2、0.3mmol/LK2Cr2O2、0.5μmol/L阿霉素均可明显引起CHL细胞DNA链断裂.当菲啰啉浓度为3μmol/L时,对H2O2、K2Cr2O2所致的损伤即有明显的保护作用;当浓度升至12μmol/L时,则可完全消除这两种因素所致的DNA链断裂损伤.当菲啰啉浓度为10、30μmol/L时,对阿霉素所致的损伤有明显保护作用;但浓度直至60μmol/L,仍不能完全消除阿霉素的损伤作用.结论菲啰啉对三者所致DNA损伤有不同程度的防保作用,提示H2O2和K2Cr2O2所致DNA损伤主要与过渡金属离子参与的@OH产生有关,而阿霉素所致损伤只有部分与此有关.     

Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。     

低剂量的硒与镉联合作用对大鼠肝细胞DNA损伤的影响

目的 研究低剂量的亚硒酸钠和氯化镉联合作用对离体大鼠肝细胞DNA损伤的影响。方法 在2．185、4．375和8．750μmol／L的剂量条件下，亚硒酸钠和氯化镉联合作用，用单细胞凝胶电泳检测大鼠肝细胞DNA损伤。结果 2．185μmol／L的亚硒酸钠对2．185μmol／L的氯化镉引起的DNA损伤拮抗作用不明显，但有拮抗作用的趋势；4．375μmol／L亚硒酸钠对4．375μmol／L氯化镉引起的DNA损伤有明显的拈抗作用；而在8．750μmol／L的剂量下，亚硒酸钠与氯化镉存在相互拈抗的关系。结论 在硒和镉对大鼠肝细胞DNA损伤的联合作用中，较低剂量的亚硒酸钠对氯化镉没有拮抗作用，而在一定的剂量条件下，亚硒酸钠和氯化镉存在着相互拮抗的关系。     

维生素C对Cr(Ⅵ)诱导大鼠淋巴细胞DNA-蛋白质交联的时序效应

目的在体外试验系统,探讨维生素C不同加入顺序对六价铬(Cr(Ⅵ))诱导大鼠外周血淋巴细胞DNA蛋白质交联(DPCs)的影响。方法Cr(Ⅵ)染毒溶液用重铬酸钠配制,每种加入顺序设50、100和200μmol/L 3个维生素C质量浓度组,用KCl-SDS沉淀-荧光分光光度法检测维生素C在Cr(Ⅵ)染毒前、同时染毒和染毒后加入时的血淋巴细胞DPCs形成率。结果单独Cr(Ⅵ)处理组其细胞DPCs形成率随染毒质量浓度的增加而增加,维生素C(200μmol/L)处理对细胞DPCs形成率无影响。维生素C在Cr(Ⅵ)处理细胞前2 h加入,其DPCs形成率和DPCs系数明显高于阴性对照组与Cr(Ⅵ)处理组,二者差异有显著性(P<0.05);维生素C与Cr(Ⅵ)同时处理细胞,中、高质量浓度维生素C组DPCs形成率和DPCs系数明显低于Cr(Ⅵ)处理组,差异有显著性(P<0.05);在Cr(Ⅵ)处理后2 h加入维生素C,与Cr(Ⅵ)处理组比较,细胞DPCs形成率和DPCs系数无明显变化。结论维生素C加入顺序不同对Cr(Ⅵ)诱导细胞DPCs形成的影响不同,维生素C与Cr(Ⅵ)同时加入时对Cr(Ⅵ)引起的细胞DNA损伤有保护作用。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

镁硒联合对氟中毒小鼠切牙牙胚的影响

目的:观察镁硒联合预防氟牙症的效果及初步机理.方法:40只体质量18～24 g雄性小鼠,随机分为Ⅰ组(双蒸水、常规饲料)、Ⅱ组(饮用F-浓度为50 mg/L的双蒸水、常规饲料)、Ⅲ组(双蒸水、添加MgSO4·7H2O 162.5 mg/kg+Na2SeO3·5H2O 2 mg/kg饲料)、Ⅳ组(饮用F-浓度为50 mg/L的双蒸水、添加MgSO4·7H2O 162.5 mg/kg+Na2SeO3·5H2O 2 mg/kg饲料).每组10只.定期观察小鼠生长情况,42 d后处死,获取切牙标本,HE染色观察成釉细胞形态.结果:Ⅳ组分泌期成釉细胞形态较Ⅱ组有明显改善.结论:镁硒联合运用可拮抗过量氟对成釉细胞的损伤,对氟牙症有较好的预防作用.     

Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体ATP酶6和ATP酶8基因表达的影响以及与能量代谢障碍的关系

目的探讨Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体ATP酶6和ATP酶8基因表达水平与能量代谢的影响及其相互联系。方法用Cr(Ⅵ)2,8和32μmol·L-1分别处理体外培养的人胚L-02肝细胞24 h后,用细胞总RNA提取试剂盒分离RNA,线粒体ATP酶6和ATP酶8 mRNA表达水平用逆转录-荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定;细胞ATP含量、线粒体呼吸链复合体酶Ⅴ活性与细胞活性氧(ROS)含量分别用化学发光法、紫外分光光度法和荧光分光光度法检测。结果与正常对照组相比,Cr(Ⅵ)2,8和32μmol·L-1使ROS显著升高(P<0.05);与正常对照组相比,Cr(Ⅵ)2μmol·L-1可使ATP酶6和ATP酶8基因表达水平增高(P<0.05),Cr(Ⅵ)8和32μmol·L-1使之明显降低(P<0.05);而呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量均随Cr(Ⅵ)浓度的增加而显著降低(P<0.05)。ATP酶6和ATP酶8基因表达与呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量呈正相关(r=0.858,0.795,0.809,0.766,P<0.01),与ROS水平呈负相关(r=-0.738,-0.801,P<0.01)。结论 Cr(Ⅵ)能诱导肝细胞ATP酶6和ATP酶8基因表达水平改变,导致线粒体呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量降低。     

三氯乙酸染毒对肝L-02细胞的增殖作用及对DNA甲基化水平的影响

目的 检测三氯乙烯(TCE)主要代谢产物三氯乙酸(TCA)对人肝L-02细胞染毒24 h后的增殖作用,以及对DNA总体甲基化水平的影响,探索TCE对肝L-02细胞的表型遗传毒性.方法 选择0.1-0.9 mmol/L浓度TCA作为合适的染毒剂量对肝L-02细胞染毒24 h后分别进行下列试验:以CCK-8试剂盒观测细胞的生长曲线;以抗5-mC抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化总体水平(代A 0.9 mmol/L染毒24 h);以流式细胞仪(FCM)检测其对细胞周期的影响及凋亡情况;提取细胞DNA进行琼脂糖电泳分析其对DNA的损伤作用.以上试验必要时设置5-氮杂胞苷(5-aza-dC5 μmol/L)处理的L-02细胞为基因组DNA低甲基化的对照以及肝癌细胞作为细胞周期分析的对照.结果 TCE在0.1～0.9 mmol/L浓度下染毒24 h后可以促进肝L-02细胞生长,并在0.9 mmol/L浓度作用下24 h可致肝L-02细胞DNA总体甲基化水平降低,荧光强度和正常细胞比较明显减弱;细胞周期分析发现TCA处理24 h后再用正常培养基继续培养24 h后可使细胞S G2期中细胞比例增加(与肝癌细胞接近);DNA梯状电泳分析未发现DNA损伤性改变.结论 TCA染毒24 h可促进细胞生长,可诱导基因组DNA低甲基化,并造成细胞周期的改变.提示TCA对肝细胞的早期细胞毒性作用与表型遗传机制有关.     

双氯芬酸的抗增殖作用与细胞内环氧酶-2表达水平的关系

目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞系L02、QSG7701细胞以及正常人皮肤成纤维细胞Fb环氧酶2(cyclooxygenase 2,COX 2)mRNA的表达,观察环氧酶抑制剂双氯芬酸(diclofenac)对上述细胞增殖的影响,以探讨双氯芬酸抗增殖作用与细胞内COX-2表达的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测各种细胞系COX 2 mRNA的表达水平,采用cell counting kit 8(CCK 8)细胞计数法测定药物作用72 h后的细胞增殖活性,绘制生长曲线。结果肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02均高表达COX 2 mRNA,正常肝细胞QSG7701微弱表达COX 2 mRNA,正常人皮肤成纤维细胞Fb不表达COX 2 mRNA。双氯芬酸在10~200μmol.L-1内呈浓度依赖性地抑制HepG2、Hep3B和L02细胞的增殖,作用72 h的半数抑制浓度分别为76.41、35.21和87.44μmol.L-1。双氯芬酸对QSG7701的抑制作用较弱,半数抑制浓度为170.23μmol.L-1,对Fb细胞仅在浓度超过200μmol.L-1时才表现出细胞毒性。结论环氧酶抑制剂双氯芬酸特异性地抑制COX 2 mRNA高表达的肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02的增殖,提示双氯芬酸通过COX 2途径起抗增殖作用。     

基质金属蛋白酶2 DNA甲基化在同型半胱氨酸诱导肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 将人源肝细胞分为3组,对照组用正常含血清培养液处理细胞,实验组用100μmol·L-1 Hcy的含药血清处理细胞,干预组用含100μmol·L-1 Hcy和10μmol·L-15-氮杂胞苷的含药血清处理细胞,均...     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

NaAsO_2对L-02肝细胞Cyto-c释放和Caspase-3表达的影响

目的观察NaAsO2在诱导人胚肝细胞株(L-02)细胞凋亡过程中对细胞色素-C(Cytochrome C;Cyto-c)释放和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法分别以0(对照组)、50、100和150μmol/L的NaAsO2染毒L-02肝细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cyto-c和Caspase-3在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡过程中的变化。结果流式细胞术检测到0、50、100和150μmol/L浓度NaAsO2组细胞凋亡率为6.3%±0.40%、12.1%±0.89%、20.15%±0.50%和28.23%±4.77%。与对照组相比细胞凋亡率明显增高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。Western blot法检测Cyto-c的释放量分别是1.10%±0.35%,1.73%±0.73%、1.83%±0.67%和2.43%±0.74%,随染砷剂量的增加而增加,仅高剂量组差异具有统计学意义(P0.05);Caspase-3分别为0.41%±0.45%,0.74%±0.14%、0.76%±0.04%和1.02%±0.18%,随染砷剂量的增加而增加,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01);结论在该试验条件下,NaAsO2可诱导L-02肝细胞发生凋亡,Cyto-c和Caspase-3在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

沙棘油和亚硒酸钠对汞诱导的大鼠肝肾氧化损伤的影响

目的通过汞诱导大鼠肝肾氧化损伤,观察沙棘油(Sea Buckthorn Oil,SBO)和亚硒酸钠(Na2SeO3)干预效应。方法Wister大鼠随机分成对照组、单纯染汞组、SBO和Na2SeO3处理组。测定肝、肾及尿中汞含量,肝、肾中GSH、MDA、蛋白含量和SOD、GSH-PX活力。结果与单纯染汞组相比,SBO处理组尿汞含量增加(P<0.05),肝GSH-PX活力升高(P<0.01);Na2SeO3处理组肝汞增加,肾和尿汞含量下降,肝GSH-PX活力、GSH含量均升高(P<0.01),肝SOD活力和肾GSH-PX活力均增加(P<0.05),肾MDA含量下降(P<0.05)。结论沙棘油具有促进汞从肾脏排出的作用,对汞诱导的肝氧化损伤具有一定保护作用,对肾氧化损伤未表现出明显的保护作用。Na2SeO3可有效拮抗汞诱导的肝肾氧化损伤作用。     

N-乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉亚慢性毒性的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)和亚硒酸钠(Na2SeO3)对亚慢性染镉大鼠肝肾毒性的影响及其机制。方法32只Wistart大鼠随机分为4组,每组8只,第1组为对照组,第2组为单位染镉组,第3、4组为干预组。大鼠连续6周皮下注射7μmol/kg氯化镉,然后干预组分别腹腔注射1 mmol/kg NAC和10μmol/kg Na2SeO3,共2周;测定大鼠尿N-乙酰-β-苷酶(NAG)、碱性磷酸酶活力(ALP)和肝、肾皮质谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果亚慢性染镉使大鼠肝、肾皮质和尿镉含量显著升高,尿ALP、NAG和蛋白含量显著升高,肝、肾皮质GSH含量显著升高,GSH-Px活力显著降低。与单纯染镉组比较,NAC处理组尿镉、NAG和蛋白含量显著下降,肝、肾皮质GSH显著降低;Na2SeO3处理组尿镉、ALP及肝、肾皮质GSH含量显著下降,GSH-Px活力显著升高。结论NAC和Na2SeO3对镉致肾损伤的恢复具有促进作用,其机制可能与NAC或Na2SeO3改变体内GSH含量和GSH-Px活力有关。     

磷酸肌苷钠对人晶状体上皮细胞的保护作用

目的考察磷酸肌苷钠(sodium inosinmonophosphate,IMP-NA)对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞SRA01/04(human lens epithelial cells SRA01/04,HLEC SRA01/04)损伤的保护作用,为IMP-NA治疗白内障疾病提供科学依据。方法采用MTT法建立H2O2诱导的HLECSRA01/04氧化损伤模型,根据相应量-效曲线确定H2O2模型的最佳作用浓度及作用时间,同时进行一般形态学观察。考察IMP-NA对HLEC SRA01/04的保护作用。酶联免疫法检测IMP-NA调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达情况。结果 H2O2损伤模型最优条件下为最佳作用浓度200μmol.L-1、作用时间24 h,与H2O2处理组比较,浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μmol.L-1IMP-NA可显著提高HLEC SRA01/04的存活率(P<0.05)。酶联免疫结果显示,IMP-NA在浓度为1.0～100.0μmol.L-1内显著上调Bcl-2基因的表达、下调Bax基因的表达(P<0.01)。结论 IMP-NA对H2O2诱导的HLEC SRA01/04氧化损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达情况有关。     

RISK信号通路在β_2-肾上腺素受体激动剂Clenbuterol减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究β2-肾上腺素受体激动剂clenbuterol对原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及其是否与激活再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路有关。方法将原代培养的新生Wistar大鼠乳鼠心肌细胞分为8组,1正常培养组;2缺氧/复氧(A/R)组;3clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R;4ICI118,551(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;5美托洛尔metoprolol(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;6 metoprolol(10μmol·L-1)+A/R组;7 PD98059(20μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;8LY294002(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法检测心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)含量;Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡率;分子探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平;Western blot检测心肌细胞缺氧/复氧后ERK及p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与A/R组比较,clenbuterol+A/R组明显增高细胞存活率,降低LDH含量,降低细胞凋亡率,ROS产生减少,p-ERK1/2蛋白表达水平增高,而选择性β2受体阻断剂ICI 118,551可取消clenbuterol的上述作用,β1受体阻断剂Metoprolol对clenbuterol的作用无影响,PI3K抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059可阻断clenbuterol对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结论clenbuterol能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,加入选择性β2受体阻断剂ICI 118,551,PI3K抑制剂LY294002和ERK抑制剂PD98059均使clenbuterol的保护作用取消,表明clenbuterol可通过激动β2肾上腺素受体,激活RISK信号通路发挥抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。     

姜黄素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的双重作用

目的研究姜黄素(Cur)对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞ECV304的作用及可能机制;方法胎盘兰计数法分组观察在不同的时间点加入姜黄素后对H2O2诱导的ECV304细胞氧化损伤的作用。流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化,试剂盒检测一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量及超歧化物氧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性的变化。结果姜黄素0~100μmol·L-1与H2O2500μmol·L-1同时作用5h,随姜黄素浓度升高细胞存活率升高;25~100μmol·L-1姜黄素预先作用1h,再换为H2O2500μmol·L-1作用4h,细胞存活率明显下降;H2O2500μmol·L-1作用4h,再加入25~100μmol·L-1姜黄素作用1h,细胞存活率也升高。姜黄素对H2O2诱导的细胞凋亡没有明显的影响,但同时作用组、H2O2先作用组S期细胞所占比例升高,姜黄素先作用组S期细胞所占比例下降。同时作用组、H2O2先作用组的SOD、NO、GR水平相对升高,MDA水平下降,姜黄素先作用组的SOD、NO、GR水平相对下降,MDA水平升高。结论姜黄素对H2O2诱导的血管内皮细胞ECV304有双重效应,即有保护效应也有细胞毒效应,与其作用时间点有关。