体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达

目的对体外培养的星形胶质细胞（AC）进行缺氧／复氧及亚低温干预。观察兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）、谷氨酰胺合成酶（GS）的表达及亚低温干预对其的影响。方法选用新生大鼠的大脑皮层组织培养的AC。分为对照组（C）、缺氧／复氧组（H／R）、亚低温组（H／M＋R）,缺氧12h后H／R组及H／M＋R组分别于37℃及32℃复氧。每组设复氧2h、4h、8h、12h、24h、48h等时间点。MTT测定细胞活力,Western—blot半定量分析EAAT2、GS的表达情况。结果①MTT法检测细胞活力：H／R组与H／M＋R组的细胞活力均比C组的细胞活力低,而H／M＋R组的细胞活力较H／R组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）Western—blot检测结果：H／R组与H／M＋R组的EAAT2表达与C组相比较,均先减少,后随着复氧时间延长逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的EAAT2表达与H／R组相比较,表达量下降趋势小,差异有统计学意义（P〈0．05）;H／R组与H／M＋R组的GS表达量随着复氧时间延长。均呈现增高趋势,与C组比较增高显著,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的GS表达量与H／R组比较增高趋势更加明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺氧／复氧及亚低温干预可引起星形胶质细胞EAAT2、GS表达的改变：32℃～35℃亚低温干预可以抑制缺氧／复氧损伤后兴奋性氨基酸的释放,这可能是脑保护作用的重要机制之一。     

西维来司钠在离体星形胶质细胞缺血性损伤中的作用研究

目的研究中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂西维来司钠对缺血再灌注造成的星形胶质细胞损伤是否有保护作用。方法采用离体原代星形胶质细胞培养,用缺氧复氧模拟缺血再灌注损伤,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒,AQP4蛋白表达等方法检测。结果西维来司纳药物干预组与缺血组、缺血 中性粒细胞损伤组比较,离体星形胶质细胞的损伤程度有明显的改善,并在1×10-8~1×10-6mol·L-1的浓度之间存在量效关系。结论NE抑制剂西维来司纳在星形胶质细胞缺血性损伤中具有保护作用。     

大鼠伽玛刀照射后AQP4的表达及其与脑水肿的相关性研究

目的探讨大鼠伽玛刀照射后AQP4的表达及其与脑水肿的相关性。方法Wistar大鼠随机分成对照组和实验组。实验组通过伽玛刀照射尾状核头部（100Gy，4mm）制成大鼠脑水肿模型。观察时间点选定于照射后1、3、7、15、30和45d。干湿比重法检测脑含水量，免疫组化、原位杂交检测AQP4及其mRNA的表达。结果AQP4及其mRNA在软脑膜下星形胶质细胞、脉络膜丛、室管膜及血管周围星形胶质细胞胞膜上均有表达。照射后，上述部位AQP4及其mRNA表达显著增强，30d达高峰。AQP4 mRNA及AQP4，AQP4与脑含水量的变化呈显著正相关。结论伽玛刀照射大鼠尾状核后，可促使特定区域内AQP4及其mRNA表达增加，其意义之一可能在于参与脑水肿的发生发展。     

热休克蛋白70封闭后对星形胶质细胞反应性增生的影响

目的 探讨用抗体封闭热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)后对星形胶质细胞反应性增生的影响. 方法 原代培养并纯化星形胶质细胞,采用划痕损伤法构建细胞损伤模型,通过培养液内加入HSP70抗体来进行干预.在不同时间点对损伤对照组和损伤干预组进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,观察细胞增生情况及形态学变化,并用RT-PCR检测GFAP mRNA的表达. 结果 与对照组相比,干预组细胞面积、突起数目及突起长度均减小(P<0.05或0.01),GFAP mRNA的表达也明显降低(P<0.05). 结论 星形胶质细胞损伤后,HSP70有促进星形胶质细胞反应性增生的作用.用抗体封闭HSP70后,能够一定程度上抑制星形胶质细胞的反应性增生.     

载脂蛋白E基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用

目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用.方法 原代培养APOE基因野生鼠、APOE转基因鼠(ε3、ε4)的星形胶质细胞,并纯化鉴定;利用缺氧法构建星形胶质细胞缺氧损伤模型,透射电镜观察细胞及线粒体形态变化,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率及线粒体膜电位变化情况.结果 缺氧6h后,通过电镜观察到各组细胞足突肿胀,线粒体形态不规则、空泡化、嵴不规则,各组细胞之间形态变化无明显差异;APOEε4组细胞早期凋亡率、线粒体膜电位下降程度明显高于APOEε3组、APOE野生组(P＜0.05).结论 缺氧损伤后早期,与APOEε3组、APOE野生组比较,APOEε4组星形胶质细胞线粒体膜电位下降程度更大,这可能是导致更多的星形胶质细胞凋亡的原因之一.     

缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及NAC对其干预研究

 目的 研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响.方法 选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)NAC干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达、RT-PCR法测定细胞ICAM-1 mRNA表达.结果 缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,ICAM-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;NAC呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制ICAM-1蛋白和mRNA表达的上调.结论 缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导ICAM-1表达上调;NAC可以通过抑制细胞内氧化应激抑制ICAM-1的上调.     

缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞刷状缘二肽转运载体生物学功能的改变及生长激素的调控作用

目的　探讨缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞模型Caco 2细胞刷状缘二肽转运载体 (PepT1)生物学功能的变化及重组人生长激素(rhGH)对PepT1的调控作用。方法　建立Caco 2细胞单层培养模型和缺氧复氧损伤模型 ,比较常规培养的Caco 2细胞单层及缺氧复氧损伤后Caco 2细胞模型对底物头孢氨苄转运和摄取功能的变化 ;用rhGH对两种细胞模型进行干预 ,比较两者对底物的转运和摄取能力改变 ;同时分别比较各种情况下PepT1mRNA的变化。结果　缺氧复氧损伤后Caco 2细胞PepT1mRNA水平明显下降 ,对底物的摄取能力明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;正常培养的Caco 2细胞经rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显强于对照组 (P <0 0 5 ) ;缺氧复氧损伤后的Caco 2细胞用rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显提高 ,与单纯损伤组比较差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　缺氧复氧损伤后PepT1mRNA下降 ,在基因水平下调了肠上皮细胞刷状缘PepT1对二肽的转运和摄取能力 ;rhGH对正常培养的Caco 2细胞和缺氧复氧损伤的Caco 2细胞的二肽载体转运和摄取功能均有上调作用 ;rhGH是在基因水平调节PepT1的生物学功能     

细胞周期调控对缺血缺氧性脑损伤后星形胶质细胞增殖的影响

目的探讨局灶性脑梗死后细胞周期调控对星形胶质细胞增殖的影响。方法光化学方法制作大鼠缺血模型，腹腔注射细胞周期抑制剂Olomoucine进行干预。应用免疫组织化学法观察缺血后30d假手术组、对照缺血组和干预组（按8mg／kg给予Olomoucine）损伤侧皮层病灶周围胶质纤维酸性蛋白（glial fibriliary acidic proten，GFAP）阳性表达；免疫印迹法（Westem blot）观察GFAP和增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）蛋白的表达；半定量逆转录一聚合酶链反应法（RT-PCR）观察GFAP mRNA的表达；HE染色测定皮层中风囊的体积。结果缺血后30d缺血组损伤侧皮质有明显的中风囊，形成胶质瘢痕，且周围胶质细胞增殖、活化呈密集型改变；对照组GFAP mRNA的表达最明显（P〈0．05）；干预组损伤侧皮质中风囊体积明显减小（P〈0．05），胶质细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05），且GFAP和PCNA蛋白表达明显减弱（P〈0．05）。结论细胞周期调控可部分抑制胶质细胞的活化、增殖及瘢痕的形成。     

大鼠颅脑爆炸伤后水通道蛋白4的表达变化

目的 研究大鼠颅脑爆炸伤后水通道蛋白4（aquaporin 4，AQP4）表达变化及其与脑水肿的关系。方法Wistar成年大鼠96只随机分为爆炸伤组和假手术组（各48只），右侧颞顶部开直径为1cm的骨窗后用80mgTNT电雷管在5cm垂直距离爆炸，于伤后4，12h、1，2，5，7d分别检测损伤区脑含水量，病理学变化、血脑屏障通透性改变、AQP4 mRNA和蛋白的表达变化。结果爆炸伤后损伤区脑含水量呈进行性增加，并于伤后2d达高峰。AQP4的表达也明显升高，开始局限于损伤中心，而后增高的区域扩大，AQP4表达增高的区域与光、电镜下脑水肿区域一致，单位面积表达的量于伤后2d出现峰值，之后有所下降，但直到第7天其表达的量仍高于假手术组（P〈0．05），且与脑含水量呈正相关。爆炸伤后4h和12h，伊文思蓝渗出主要局限于损伤中心，随时间延长，尽管脑水肿程度加重，但伊文思蓝渗出范围无明显扩大。结论爆炸伤早期以血管源性脑水肿为主要表现，继发性细胞毒性脑水肿可能是爆炸伤后期脑水肿的主要原因，AQP4表达增加参与了爆炸伤后细胞毒性脑水肿的形成过程。     

低氧诱导肾细胞癌786-O细胞HIF-1α的表达变化及意义

目的探讨缺氧条件下肾透明细胞癌786-O细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化及意义。方法786-O细胞在缺氧条件下培养不同时间（0、8、16、24h）后，RT-PCR法检测HIF-1α mRNA的转录情况；Western blot法检测HIF-1α蛋白表达变化。结果常氧状态下HIF-1α mRNA和蛋白均有一定表达。缺氧处理一定时间（8、16、24h）后786-O细胞HIF-1α mRNA表达没有明显改变（P〉0．05），而HIF-1α蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）。结论缺氧条件下786-O细胞HIF-1α表达变化主要在翻译水平而非转录水平。在蛋白水平对HIF-1α表达进行调控可作为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

阿托伐他汀对心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的探讨阿托伐他汀保护心肌细胞缺氧／复氧损伤的机制,为临床防治缺血再灌注损伤寻找新思路。方法分离SD乳鼠（出生1～3d）心肌细胞进行原代培养,建立H/R模型,取培养第3d的心肌细胞随机分成3组：正常对照组（CON组）、H,R组、H／R＋ATV组。应用MTS法检测心肌细胞的存活率;化学发光免疫分析法检测心肌细胞特异性损伤指标肌钙蛋白I（cTnI）的含量;采用SYBRGREEN荧光定量PCR检测各组HIF—1a、VEGFmRNA表达水平。结果与CON组比较,H／R组心肌细胞存活率明显降低（P〈0．05）,血清肌钙蛋白I明显升高（P〈O．05）,HIF—1a和VEGFmRNA表达水平显著升高（P〈0．05）;用阿托伐他汀预处理后心肌细胞存活率明显升高（P〈0．05）,血清肌钙蛋白I明显降低（P〈0．05）,HIF-1d和VEGFmRNA表达水平进一步升高（P〈0．05）。结论阿托伐他汀可能通过上调HIF-1a及VEGF的表达水平进而保护缺氧／复氧损伤的心肌细胞。     

布美他尼对心脏骤停复苏后大鼠海马神经细胞水通道蛋白-4表达及凋亡的影响

目的观察布美他尼对心脏骤停复苏后大鼠海马神经细胞水通道蛋白一4（AQP4）表达及凋亡的影响。方法将40只成年雄性健康的SD大鼠随机分为3组：空白对照组、心肺复苏组、布美他尼干预组。空白对照组只行气管插管、股动脉置管等操作,机械通气1h后处死取脑。心肺复苏组在行气管插管、股动脉置管等操作后,建立窒息致心脏骤停复苏模型。复苏后至观察时间点处死取脑。布美他尼组在心肺复苏组的基础上在复苏后立即予布美他尼干预,至观察时间点处死大鼠取脑。利用实时逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术测定各组大鼠海马组织AQP4mRNA和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）mRNA的表达量,并对结果进行统计学分析。结果心肺复苏组的AQP4mRNA和caspase-3mRNA表达量较空白对照组有显著升高（P〈0．05）,同时布美他尼组AQP4mRNA和caspase-3mRNA表达量较相对应观察时间点的心肺复苏组有明显下降（P〈0．05）。结论布美他尼能抑制心脏骤停复苏后引起的脑神经细胞AQP4的表达,并能减少神经细胞的凋亡。     

促红细胞生成素和甲泼尼龙对损伤星形胶质细胞增殖的影响

目的研究在促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）和甲泼尼龙（Methylprednisolone,MPSS）干预下对损伤星形胶质细胞增殖的影响,探讨EPO和MPSS联合应用在脊髓损伤中的作用。方法取自SD大鼠大脑原代培养星形胶质细胞,缺营养培养3h后分别在促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）和甲泼尼龙（erythropoietin,EPO）的培养基中培养24、48小时后,MTT法检测星形胶质细胞增殖活性的变化。结果缺营养可抑制星形胶质细胞增殖,促红细胞生成素和甲泼尼龙对正常细胞增殖无明显影响作用,EPO和MPSS均促进损伤细胞增殖,两者联合减量应用对细胞增殖有明显影响作用。结论 EPO＋MPSS（半量组）联合减量应用对星形胶质细胞增殖作用表达的升高作用优于单独应用甲泼尼龙。     

尿毒症患者左心室功能的变化

目的：应用多普勒组织显像技术和声学定量技术评价尿毒症患者心功能的变化。方法：应用多普勒组织显像技术和声学定量技术测定30例尿毒症患者二尖瓣环运动速度（Ve/Va）和左室射血分数（LVEF）,并与20例正常人对照。结果：尿毒症患者的二尖瓣环运动速度（Ve/Va）值明显低于健康对照组（P〈0.05）,尿毒症患者与健康对照组间EF值未见显著性差异（P〉0.05）。结论：尿毒症患者在无心脏收缩功能影响时已经存在舒张功能受损。     

急性重复缺氧小鼠海马CA1区的超微结构观察

 目的 从亚细胞水平了解小鼠在不同次数急性重复缺氧时海马CA1区神经细胞、星形胶质细胞和毛细血管的变化规律.方法 将昆明小鼠随机分成1次、2次及4次急性重复缺氧实验组及对照组,存活7 d后麻醉,立即灌杀,取海马CA1区组织,常规电镜制片,透射电镜下观察.结果 与对照组相比,不同缺氧次数实验组均呈不同程度变化,主要表现为神经元胞核染色质有大、小不等团块凝集的凋亡倾向.星形胶质细胞出现微管、微丝明显减少甚至消失,严重者胞浆结构除线粒体外全无;胞核缩小,核染色质在核膜周围有明显团块凝集,呈"半月形",严重者胞核结构全无;凋亡、坏死;突起的出现微管、微丝模糊或消失,线粒体结构不清的退行性变.D 7 H4实验组上述表现明显.毛细血管无病理变化.结论 急性重复缺氧有累加损伤作用,海马CA1区星形胶质细胞是缺氧易损细胞.     

Oxidative stress in humans during and after 4 hours of hypoxia at a simulated altitude of 5500 m

BACKGROUND: High-altitude hypoxia may induce oxidative stress in humans. However, the effect of acute, severe, and non-acclimatized short-term hypobaric hypoxia exposure in humans has not been described. Additionally, little is known regarding the confounding role of reoxygenation in the extent of oxidative stress and damage markers in hypoxia. Our goals were to analyze the effect of of hypobaric hypoxia and reoxygenation on plasma oxidative stress and oxidative damage. METHODS: There were six male volunteers exposed to a simulated altitude of 5500 m (52.52 kPa) in the INEFC-UB hypobaric chamber over 4 h and returned to sea level (SL) in 30 min. Data were collected at baseline SL at 1 h and 4 h of hypoxia at 5500 m and immediately after return to sea level (RSL). RESULTS: Elevated scores of acute mountain sickness (13) and significant changes in arterial oxygen saturation (97.5 +/- 0.5; 53.3 +/- 1.9; 97.1 +/- 0.3%, p < 0.05 at SL, 4 h, and RSL, respectively) were observed. Significant reductions (p < 0.05) on total glutathione (TGSH) content were measured from SL and 1 h vs. 4 h and RSL. The percentage of oxidized glutathione (%GSSG) as an indicator of redox oxidative changes increased significantly (SL vs. 1 h; 1 h vs. 4 h, and RSL). Lipid peroxidation (TBARS), protein oxidation (SH protein groups), and total antioxidant status (TAS) followed the redox changes suggested by the glutathione system throughout the protocol. CONCLUSIONS: Hypobaric hypoxia increased the burden of plasma oxidative stress and damage markers all through the hypoxia period. However, no additional changes were observed with reoxygenation at the end of the reoxygenation period.     

N-myc 下游调节基因-2在大鼠肠缺血再灌注肺损伤中的表达及其与 NF-κBp65的相关研究

目的通过建立大鼠肠缺血再灌注肺损伤(IIRI)模型,观察大鼠肠缺血再灌注肺损伤,肺组织中N-myc下游调节基因-2(NDRG2)表达水平的变化。方法 50只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)(其中根据缺血再灌注时间又分4个亚组),每组10只。缺血再灌注4个亚组选择缺血60min后分别再灌注30、60、120和180min,获取样本肺组织。术后样本行病理(HE)、湿干重比例(W/D)检测,免疫组化、Western-blot对NDRG2、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)检测,RT-PCR方法对NDRG2在mRNA水平含量进行检测,TUNEL法对凋亡细胞进行检测。结果缺血再灌注组与对照组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D比值显著性升高(P<0.05),免疫组化显示NF-κBp65发生核转位现象,NF-κBp65蛋白水平表达明显升高(P<0.05),肺组织NDRG2在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低(P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDRG2的表达,NDRG2可能通过对NF-κB通路进行调控,是导致缺血再灌注后肺损伤的靶向调控位点,对肠缺血再灌注肺损伤的大鼠起保护作用。     

Immunohistochemical examination of intracerebral aquaporin-4 expression and its application for differential diagnosis between freshwater and saltwater drowning

Human brain samples were collected from 70 autopsy cases including 22 freshwater drowning (FWD), 26 saltwater drowning (SWD), and 22 non-drowning cases as controls. Then, immunohistochemical study combined with morphometry was carried out in order to examine the differential expression of AQP1 and AQP4 in the brain samples. Immunohistochemically, star-shaped cells bearing highly branched processes, often surrounding blood vessels, showed positive reactions for AQP1 and AQP4 in FWD, SWD, as well as control groups. Additionally, with double-color immunofluorescence analysis, AQP1- or AQP4-positive cells could be identified as GFAP-positive astrocytes. Moreover, AQP1-positive reaction was also observed in blood vessels. Morphometrically, there were no significant differences in AQP1 expression in astrocytes or in blood vessels among the three groups. In contrast, the average value of AQP4-positive astrocytes was significantly higher in FWD cases than in SWD and control groups. Moreover, AQP4 expression was significantly lower in SWD than in the control group (p < 0.05). Moreover, there was no significant correlation between post-submerged interval and AQP expression in drowning cases. Therefore, immunohistochemical analysis of intracerebral AQP4 expression would be forensically useful for differentiation between FWD and SWD.