The dynamic balance of T-bet+VGATA-3+ and ROR-γt+ VFOXP3 + cells in rat liver allograft according to acute rejection severity

Objective To evaluate the dynamic balance of Th1, Th2, Th17 and iTreg cells in the process of acute rejection (AR) , orthotopic liver transplantation (OLT) was performed from LEW rats to BN rats. Methods OLT donated by male inbred LEW rats was performed on male inbred BN rats by Kamada' s two-cuff technique without liver arterial anastomosis, AR severity was graded using the Banff schema ,and the immunohistological method was applied to detect the expression of T-bet+, GATA-3+, RORγt+, and FOXP3+ cells in liver allografts. Results The number of T-bet+ cells (Control group: 19. 3±5. 1;Mild AR group: 63. 7±9. 7;Moderate AR group: 40. 9±13. 6;Severe AR group: 32. 3±3. 3) and RORγt + (Control group: 6. 5±1. 4;Mild AR group: 6.4±3. 1;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6±14. 1) was significantly increased in mild, moderate and severe AR groups as compared with control group (all P<0.01). The number of GATA-3+cells (Control group: 7. 1±1. 3;Mild AR group: 13. 5±4. 8;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6± 14. 1) showed no significant difference between mild AR group and control group (P>0. 05) , while it was significantly higher in moderate and severe AR group (P<0. 05 and P<0. 01). The number of FOXP3 + cells ( Control group;9.5±2.4;Mild AR group: 13. 5±4.8;Moderate AR group: 24.5 ±4.9;Severe AR group: 39.3±11.7) had no statistically significant difference (P>0. 05), but it was significantly decreased in moderate and severe AR group (all P<0.01). The ratio of T-bet + cells/GATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+ cells in the early stage. Conclusion There is dynamic change in T-het+,GATA-3+,RORγt+and FOXP3+cells in the liver allografts.The T-bet+,GATA-3,RORγt'and FOXP3+cells were involved in AR,and the ratio of T-bet+cell/sGATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+cells in the early stage.     

The dynamic balance of T-bet+VGATA-3+ and ROR-γt+ VFOXP3 + cells in rat liver allograft according to acute rejection severity

Objective To evaluate the dynamic balance of Th1, Th2, Th17 and iTreg cells in the process of acute rejection (AR) , orthotopic liver transplantation (OLT) was performed from LEW rats to BN rats. Methods OLT donated by male inbred LEW rats was performed on male inbred BN rats by Kamada' s two-cuff technique without liver arterial anastomosis, AR severity was graded using the Banff schema ,and the immunohistological method was applied to detect the expression of T-bet+, GATA-3+, RORγt+, and FOXP3+ cells in liver allografts. Results The number of T-bet+ cells (Control group: 19. 3±5. 1;Mild AR group: 63. 7±9. 7;Moderate AR group: 40. 9±13. 6;Severe AR group: 32. 3±3. 3) and RORγt + (Control group: 6. 5±1. 4;Mild AR group: 6.4±3. 1;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6±14. 1) was significantly increased in mild, moderate and severe AR groups as compared with control group (all P<0.01). The number of GATA-3+cells (Control group: 7. 1±1. 3;Mild AR group: 13. 5±4. 8;Moderate AR group: 23. 2±9. 1;Severe AR group: 42. 6± 14. 1) showed no significant difference between mild AR group and control group (P>0. 05) , while it was significantly higher in moderate and severe AR group (P<0. 05 and P<0. 01). The number of FOXP3 + cells ( Control group;9.5±2.4;Mild AR group: 13. 5±4.8;Moderate AR group: 24.5 ±4.9;Severe AR group: 39.3±11.7) had no statistically significant difference (P>0. 05), but it was significantly decreased in moderate and severe AR group (all P<0.01). The ratio of T-bet + cells/GATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+ cells in the early stage. Conclusion There is dynamic change in T-het+,GATA-3+,RORγt+and FOXP3+cells in the liver allografts.The T-bet+,GATA-3,RORγt'and FOXP3+cells were involved in AR,and the ratio of T-bet+cell/sGATA-3+cells was more significantly associated with AR than that of RORγt+cells/FOXP3+cells in the early stage.     

GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞分化的关系

目的 评价核蛋白转录因子GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的关系.方法 健康志愿者10名,年龄20 ～ 50岁,体重50 ～ 70 kg,清晨空腹采集外周静脉血样20 ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs).采用随机配伍设计,将每份血样分离出的PBMCs随机分为5组(n=10):常规培养组(C组)、刺激剂刺激分化组(P组)、吗啡50 μg/ml组(M组)、吗啡50μg/ml+纳洛酮50 μg/ml组(MN组)、纳洛酮50μg/ml组(N组).刺激剂孵育4h后分别收集细胞和上清液.应用流式细胞术检测Th1、Th2细胞亚群比例,计算二者比值(Th1/Th2);用酶联免疫吸附法检测上清液中干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的浓度;使用凝胶电迁移技术检测淋巴细胞核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性.结果 与P组比较,M组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性降低,MN组Th1细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ浓度降低(P ＜0.05或0.01);与M组比较,MN组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性升高(P＜0.05或0.01);N组与C组上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡通过激活阿片受体抑制Th细胞分化,而这种抑制作用与抑制核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性有关.     

氯胺酮对人Th细胞分化及其转录因子GATA-3和T-bet表达的影响

目的 观察氯胺酮对体外培养的人Th细胞分化的过程及其核蛋白转录因子GATA-3和T-bet表达的影响.方法 利用体外细胞培养技术建立人Th细胞培养体系,根据加入药物的不同分为六组:对照组(C组)、氯胺酮50 μg/ml组(K组)、氯胺酮50 μg/ml+N-甲基-D门冬氨酸(NM-DA)50 μg/ml组(KN1组)、氯胺酮50 μg/ml +NMDA 100 μg/ml组(KN2组)、氯胺酮50 μg/ml+NMDA 150 μg/ml组(KN3组)、NMDA 150 μg/ml组(N组).淋巴细胞经过PHA刺激48 h后,检测淋巴细胞中Th1细胞、Th2细胞亚群及其比值(Th1/Th2)、培养上清液中干扰素(INF)-γ和白细胞介素( IL)-4的含量及淋巴细胞中核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的表达.结果 与C组比较,K、KN1、KN2和KN3组Th1、Th2细胞亚群减少,但K、KN1组Th1/Th2升高(P＜0.05或P＜0.01);与K组比较,KN3组Th1、KN2和KN3组Th2细胞亚群增多,KN2和KN3组Thl/Th2降低(P＜0.05或P＜0.01).与C组比较,K、KN1、KN2和KN3组IFN-γ和IL-4含量均降低(P＜0.05或P＜0.01);与K组比较,KN2和KN3组IFN-γ和IL-4含量增高(P＜0.05或P＜0.01).K、KN1、KN2和KN3组GATA-3和T-bet表达明显低于C组,且KN2和KN3组GATA-3和T-bet表达高于K组(P＜0.01),并且呈现剂量依赖性.结论 氯胺酮通过作用于NMDA受体对Th1和Th2细胞的分化产生抑制作用,这种抑制作用是通过抑制核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的表达来实现的.     

CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌肝移植肿瘤复发中的作用

目的 探讨肝癌肝移植病人移植前后外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例变化及其临床意义.方法 用流式细胞仪检测肝癌肝移植病人和其他肝移植病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞的比例,并采用正常人作对照.用免疫组化法检测肝癌病人和非肝癌病人肿瘤组织中FoxP3的表达及CD8+T细胞浸润的比例.观察肝癌肝移植病人术后及肿瘤复发后调节性T细胞的变化及其对肿瘤复发的影响.结果 流式细胞检测显示肝癌肝移植、非肝癌肝移植的病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,分别为(10.15±1.00)%、(5.30±1.64)%和(3.20±1.18)%,P<0.05.肝癌肝移植肿瘤复发病人较未复发病人外周血CD4+CD25+FOXP3+T比例明显升高,分别为(15.15±1.50)%和(6.80±1.50)%,P<0.01.免疫组化检测显示肿瘤组织中FOXP3+T细胞增多,CD8+T细胞浸润明显减少.结论 肝癌肝移植肿瘤复发的病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例升高.调节性T细胞可能通过减少CD8+T细胞浸润,加速肿瘤复发.     

转录因子T-bet与GATA结合蛋白3的比值在大鼠肺移植急性排斥反应中的mRNA表达及其意义

目的 探讨T-bet(T-box expression in T cells)和GATA结合蛋白3(GATA-3)在大鼠肺移植急性排斥反应中的mRNA表达及其意义.方法 建立同种异体大鼠肺移植模型,实验分为正常对照组(n=5只)、同种异体移植3 d组(n=4只)和5 d组(n=6只),用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测移植后肺组织中T-bet和GATA-3的mRNA表达.结果 实时荧光定量RT-PCR检测T-bet和GATA-3的扩增效率为78%～85%,批内和批间实验循环阈值(Ct)变化均＜0.15.与止常对照和右侧非移植肺比较,同种异体移植术后3 d组,T-bet和GATA-3无显著性改变,但其比值明显高于右侧肺;同种异体移植术后5 d组,T-bet表达增高(9.31拷贝/106 18 S拷贝),但差异无统计学意义(P＞0.05),GATA-3表达下降(0.88拷贝/105 18 S拷贝),T-bet/GATA3的比值增高(1.12),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 实时荧光定量RT-PCR检测T-bet和GATA-3结果准确可靠.在急性排斥反应中,T-bet表达升高,GATA-3表达降低,其中GATA-3的表达起主导作用.T-bet/GATA-3的比值比单独检测T-bet或GATA-3更能客观地评价大鼠肺移植急性排斥反应.     

肝癌病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞表达水平的临床研究

目的 了解CD4+CD25+FOXP3+T调节性T细胞在肝癌病人外周血中的表达水平并探讨其临床意义.方法 应用流式细胞术测定18例肝癌病人外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比,并与26例l临床对照者和24例健康对照者进行比较.结果 肝癌病人外周血中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞百分比(4.25%±3.98%)明显高于临床对照组(1.34%±1.14%)及健康对照组(1.29%±0.95%)(P＜0.01),而两个对照组之间并无显著性差异(P＞0.05).CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌病人外周血所占CD4+T细胞比率(2.94%±0.91%)也较临床对照组(0.76%±0.34%)及健康对照组(0.81%±0.29%)显著升高(P＜0.001),且升高幅度强于CD4+CD25+T细胞水平,两个对照组之间并无显著性差异(P＞0.05).结论 CD4+CD25+FOXP3+T细胞是更为准确的调节性T细胞,其在肝癌病人外周血中表达水平明显升高,检测CD4+CD25+FOXP3+T水平对肝癌的预防治疗具有重要临床意义.     

结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞的检测与临床意义

目的 研究结直肠癌患者外周血CD4+T细胞亚群Th1和Th2细胞的比例以及相关特异性转录因子与细胞因子的表达水平,并观察其与临床分期之间的关系.方法 43名结直肠癌患者(肠癌组)与30名健康体检志愿者(对照组)作为研究对象.结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞占CD4+T细胞的比例运用流式细胞技术进行检测.采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR),检测外周血Th1/Th2细胞亚群特异性转录因子的相对基因表达量.血浆细胞因子的表达水平使用液相芯片技术方法定量检测.结果 肠癌组外周血Th2细胞占CD4+T细胞的比例和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05).肠癌组外周血Th1细胞特异性转录因子T-bet的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),但Th1细胞占外周血CD4+T细胞的比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05).血浆TNF-α、IL-1β和IL-15表达水平组间无显著差异(P>0.05).结直肠癌患者血浆IFN-γ、IL-4和IL-6的表达水平与病程分期有关(P<0.05).结论 结直肠癌患者外周血中Th1细胞比例变化不明显而Th2细胞比例明显升高.结直肠癌患者血浆细胞因子的不平衡表达可作为机体免疫状态转换与病情判断的指标.     

预输注经5-FU处理的同种异基因淋巴细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的初步研究

目的探讨预输注5-FU处理的同种异基因淋巴细胞对大鼠肝移植免疫耐受的影响。方法实验分4组,均行Wistar大鼠至SD大鼠的肝移植。对照组:仅行肝移植;单纯淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;低浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经7.5μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;高浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经15μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml。术后第7天处死SD大鼠观察移植肝的病理改变。结果低浓度5-FU+淋巴细胞组受体大鼠的肝组织病理改变呈急性轻度排斥反应,肝细胞条索状排列基本整齐,肝小叶结构存在;中央静脉血管周围少量炎性细胞浸润;汇管区少量淋巴细胞浸润。对照组肝组织呈急性重度排斥反应。单纯淋巴细胞组和高浓度5-FU+淋巴细胞组肝组织呈急性中度排斥反应。结论 预输注经低浓度5-FU处理的同种异基因淋巴细胞可以较好地诱导大鼠肝移植免疫耐受。     

肝移植术后潜在免疫耐受者外周血自然杀伤细胞、调节性T细胞和记忆性T细胞的表达及其临床意义

目的 探讨肝移植术后潜在免疫耐受者免疫状态,为临床指导抗排斥治疗提供依据.方法 纳入1999年1月至2007年12月在本中心行肝移植存活至今潜在免疫耐受者29例,分为3～5年组(3Y组)10例,5～11年组(5Y组)19例,另纳入肝移植术后反复排斥反应者(RJ)10例,年龄匹配健康对照组(HC)17例;流式检测外周血单个核细胞中自然杀伤(NK)细胞、记忆性T细胞、调节性T细胞(Treg)3个亚群的表达.结果 3Y、5Y组CD4+ CD25+T细胞(3Y:27.56±4.63;5Y:30.07±3.91)、静息性Treg占CD4+T细胞比例(3Y:0.22±0.05;5Y:0.17±0.03)比R J组明显升高(CD4+ CD25+ T:11.78±4.28;静息性Treg:0.05±0.02)(P＜0.05);5Y组NK细胞占淋巴细胞比例(29.11±3.31)比RJ组(13.92±3.11)明显升高(P＜0.05);效应性记忆性CD8+T细胞比例3Y组(12.92±2.05)比RJ组(8.74±1.69)明显升高(P＜0.05).结论 肝移植术后潜在免疫耐受者外周血NK细胞、静息性调节性T细胞和效应性记忆性CD8+T细胞比例相对排斥反应者明显升高,可作为潜在的耐受标志物.     

转化生长因子-β1差异性诱导CD4+和CD8+T细胞表达转录因子FOXP3的研究

目的 研究CD4+T细胞和CD8+T细胞被转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导表达转录因子FOXP3的差异性.方法 给予CD4+T细胞和CD8+T细胞抗T细胞受体(TCR)刺激的同时,加入TGF-β1培养4d后,通过胞内细胞因子染色,分析二者被诱导表达FOXP3的情况.同时通过CFSE标记实验检测被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞的增殖情况;通过annexin V流式染色检测TGF-β1对于T淋巴细胞凋亡的影响.结果 相对于CD8+T淋巴细胞,TGF-β1主要诱导CD4+T淋巴细胞阳性表达FOXP3[外周血单个核细胞(PBMC):29.66±3.624比7.430±0.643;癌旁组织浸润淋巴细胞(NIL):31.74±2.612比8.637±1.146].被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞增殖活跃(94.39±1.179),受到活化刺激后依旧能够有效分泌干扰素-γ(IFN-γ)效应细胞因子(39.58±1.611).TGF-β1能够有效降低CD8+T淋巴细胞活化后的细胞凋亡率(25.39±2.158比9.320±0.3219).结论 与肝癌患者FOXP3表达阳性的淋巴细胞＞95％(97.15±0.3807,n=10)集中在CD4+T淋巴细胞的结果一致,TGF-β1优先选择性诱导CD4+T细胞表达FOXP3.与天然Treg(调节性T细胞)低增殖活性和低细胞因子分泌活性不同,被TGF β1阳性诱导表达FOXP3的T细胞依旧具有活跃的细胞增殖和分泌IFN γ效应细胞因子的功能.CD8+T淋巴细胞相对于CD4+T淋巴细胞,更易发生活化后细胞凋亡,而TGF-β1能够有效降低这种细胞凋亡率.     

芒柄花黄素对骨关节炎软骨的保护作用及其机制

目的探究芒柄花黄素(FMN)对骨关节炎(OA)大鼠炎性反应、软骨损伤及辅助性T细胞17(Th17)/白细胞介素(IL)-26炎症轴的影响。方法将60只无特定病原体级别的健康雄性SD大鼠按照随机数表法分成4组, 每组15只, 其中对照组大鼠仅打开关节不进行其他操作实施假手术;OA组、OA+FMN组和OA+FMN+ABBV-157组大鼠构建OA模型。OA+FMN组和OA+FMN+ABBV-157组大鼠尾静脉注射FMN(10 mg/kg)干预, 每日1次, 连续4周。OA+FMN+ABBV-157组通过腹膜内注射维甲酸相关孤儿受体γt抗体(RORγt)激动剂ABBV-157(5 mg/kg)促进Th17分化功能, 每周2次, 连续4周。其余组注射等量生理盐水。检测各组大鼠的关节炎症、软骨退化情况, 检测Th17细胞比例以及维甲酸相关孤儿受体γt抗体(RORγt)和白介素-26(IL-26)蛋白水平。采用独立样本t检验、单因素方差分析、SNK-q检验等分析全部数据。结果 OA、OA+FMN、OA+FMN+ABBV-157组的国际骨关节炎研究会(OARSI)评分高于对照组[(4.23±0.56)...     

OX40信号调节抑制小鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞Foxp3的表达

目的 探讨共刺激信号OX40对体外诱导的小鼠CD4+ CD25+适应性调节性T淋巴细胞(iTreg)的Foxp3表达的影响.方法 制备C57BL/6小鼠淋巴细胞悬液,经免疫磁珠法分选,获得CD4+ CD25-静息T淋巴细胞,与抗CD3单克隆抗体、抗CD28单克隆抗体、转化生长因子β1、白细胞介素2共孵育,诱导产生Foxp3+ iTreg.在此基础上,于培养体系中加入OX40激动型抗体及其对照抗体,利用流式细胞仪分析研究OX40信号刺激对iTreg Foxp3表达的影响.结果 C57BL/6小鼠淋巴结中CD4+ CD25+天然调节性T淋巴细胞(Treg)比例为(5.0±0.4)％,体外诱导培养的CD4+CD25+ Treg比例为(71.8±13.4)％,其中Foxp3阳性表达占(74.9±1.9)％.OX40激动型抗体组CD4+ CD25+ Treg细胞比例为(80.0±1.6)％,其中Foxp3表达水平为(59.2±0.7)％;OX40激动型抗体对照抗体组CD4+ CD25+ Treg细胞比例为(86.0±1.4)％,其中Foxp3表达水平为(70.0±0.8)％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 静息T淋巴细胞可以在体外诱导培养获得高纯度iTreg;OX40信号刺激可以显著抑制CD25+ iTreg细胞Foxp3的表达.     

全身照射预处理供体对异基因大鼠肝移植的作用及对受体内CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的 探讨全身照射(TBI)预处理诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应的发生机制,及CD4~+ CD25~+调节性T细胞的变化在诱导免疫耐受中的作用.方法 以雄性Lewis、DA大鼠为供、受体,随机分为正常对照组、同种肝移植组、自发免疫耐受组、急性排斥反应组.观察各组受体的生存时间及生存率,检测受体术后外周血中ALT、TB含量、Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,检测受体术后第14天移植肝的病理变化和受体脾脏CTL杀伤活性.结果 自发免疫耐受组,术后经历短暂排斥反应最终获得免疫耐受并长期存活.急性排斥反应组,在术后第17～21天死亡,与其他组相比,外周血血清中ALT、TB含量明显升高,而Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞比例明显降低.TBI预处理大鼠供肝致受体外周血中CD3~+ CD4~+ T细胞上GITR表达降低,CD3~+CD8~+T细胞上GITR表达增加,提高CTL的杀伤活性.结论 通过TBI清除供体大鼠肝移植物中携带的旁路淋巴细胞,致受体外周血中Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达降低,而使CD3~+ CD8~+T细胞上GITR表达增加,共同诱导大鼠肝移植术后急性排斥反应发生和耐受障碍.     

Th1/Th2细胞因子mRNA的表达与心脏移植免疫耐受的关系

目的探讨Th1/Th2细胞因子信使核糖核酸(mRNA)表达改变与心脏移植免疫耐受的关系. 方法采用大鼠腹部心脏移植模型,将30只大鼠随机分成对照组、排斥反应组、免疫耐受组,每组10只.观察移植心脏存活时间,供心病理学改变,受者脾和心脏中Th1/Th2细胞因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10) mRNA表达水平. 结果免疫耐受组供心存活时间为85.28±7.48天,较排斥反应组的7.33±1.03天显著延长(P＜0.01);排斥反应组供心见大量炎性细胞浸润,免疫耐受组供心仅见少量炎性细胞浸润;排斥反应组Th1细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA表达较对照组增强,免疫耐受组减弱;排斥反应组Th2细胞因子IL-4、IL-10 mRNA表达较对照组减弱,免疫耐受组增强. 结论 Th1/Th2细胞因子的动态平衡在移植耐受中起重要作用,Th1向Th2偏离是移植耐受的机制之一.     

人肝移植术后移植肝脏热休克蛋白70的表达及意义

目的 观察人肝移植术后移植肝脏热休克蛋白70(HSP70)的表达,探讨其与急性排斥反应发生、发展的相互关系.方法 选取15例肝移植术后肝脏穿刺活检标本,根据组织病理改变分为: 对照组(无排斥反应)、轻度急性排斥反应组及中/重度急性排斥反应组,对其进行HSP70免疫组织化学染色和图像分析.结果 肝移植术后3组肝脏组织均有HSP70表达,主要定位于肝细胞胞质中.免疫组织化学染色HSP70累积光密度(IOD)图像分析提示: 对照组IOD值为30.99±11.14,明显低于轻度急性排斥反应组(68.84±21.37)和中/重度急性排斥反应组(71.82±19.99),P＜0.01; 而中/重度急性排斥反应组IOD值又高于轻度急性排斥反应组,P＜0.05.结论 HSP70对移植肝脏具有保护作用,其表达持续增高与急性排斥反应发生、发展密切相关.     

大黄素对大鼠肝移植后CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的研究大黄素对大鼠肝移植后CD4+CD25+调节性T细胞的比例以及对其免疫抑制功能的影响。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型,以大黄素和环孢素A(CsA)分别在术后腹腔给药,并以给予PBS作为模型对照组,观察不同药物移植后大鼠存活时间的影响,以及对移植术后大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregulatory cells,Treg)亚群的变化以及免疫功能的影响。结果大黄素能显著延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,大黄素组大鼠的平均存活时间(17.4±2.5)d与肝移植模型对照组(8.8±1.9)d相比差异具有统计学意义;大鼠肝移植后大黄素给药可显著上调受体大鼠外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的比例,并显著增强CD4+CD25+Treg抑制效应性T细胞的增殖能力(P0.05)。结论大黄素能够延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,并可能通过上调外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的数量及免疫抑制功能来实现移植后免疫排斥反应的抑制。     

大鼠肝移植术后输注ω-3多不饱和脂肪酸对T淋巴细胞的影响

目的 探讨大鼠肝移植术后应用ω-3多不饱和脂肪酸对移植肝脏功能、受体T淋巴细胞和急性排斥反应的影响.方法 行BN(RTln)大鼠到Lewis(RT11)二袖套法大鼠肝移植18例,术后颈内静脉插管,微量泵匀速输注液体.生理盐水NS组(n=6)输注生理盐水,肠外营养PN组(n=6)输注营养液,脂肪酸OM组(n=6)输注营养液+ω-3脂肪乳.术后第7天处死大鼠,留取肝组织标本病理检查,取血清检测生化指标.取抗凝血0.5 ml,流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+CD25+T细胞和CD8+CD28-T细胞.结果 大鼠肝移植术后输注ω-3脂肪酸的OM组CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD28-T细胞下降,与Ns组比较差异有统计学意义(t=4.28,P<0.01;t=2.63,P<0.05;t=2.59,P<0.05;t=8.86,P<0.01).OM组CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD28-T细胞下降,与PN组比较差异有统计学意义(分别t=8.06,t=3.57,t=5.35.t=7.98,均P<0.01).OM组CD4+/CD8+比值下降,与NS组和PN组比较差异有统计学意义(分别t=2.41,t=8.74,均P<0.01).病理学检查移植肝排斥反应强度(rejection activity index,RAI)评分,NS组为7.17±0.98,PN组为6.17±0.75,OM组为4.33±0.52,OM组与NS组、PN组比较排斥反应减轻(分别t=6.25,t=4.92,均P<0.01).结论 静脉输注ω-3多不饱和脂肪酸可以抑制T淋巴细胞,显著降低CD4+辅助性T细胞比例,减轻排斥反应.抑制性T细胞和调节性T细胞与ω-3脂肪酸减轻大鼠肝移植排斥反应的效应无关.     

大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素及白细胞介素10的表达及意义

目的 探讨大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素10(IL-10)的表达及意义.方法 采用改良的Kamada"二袖套法"制备大鼠原位肝移植模型,同系移植组供、受者均为SD大鼠;同种异体移植组的供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠;另设假手术组.术后7 d处死动物,观察移植肝脏的组织学变化,检测血清IFN-γ和IL-10的含量,以及移植肝脏内IFN-γ和IL-10 mRNA的表达.结果 同种异体移植组移植肝脏有较多坏死肝细胞,汇管区及中央静脉周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,胆管上皮细胞可见胞浆空泡变性、核固缩或碎裂,整个肝小叶结构紊乱.同系移植组肝脏组织结构仅有轻度缺血再灌注损伤表现,汇管区有较少炎症细胞浸润,胆管上皮细胞结构和肝小叶结构基本正常.同种异体移植组血清IFN-γ为(386.7±14.4)Pg/ml,明显高于同系移植组的(159.8±16.5)pg/ml(P<0.05);同种异体移植组血清IL-10为(126.3±13.1)pg/ml,明显低于同系移植组的(288.3±17.1)pg/ml(P<0.05).同种异体移植组移植肝组织内IF-γ mRNA表达水平明显高于同系移植组(P<0.05),而IL-10 rnRNA表达水平明显低于同系移植组(P<0.05).结论 大鼠肝移植排斥反应时IFN-γ表达明显升高,IL-10表达明显降低;T_H1/T_H2型细胞因子的动态平衡可能在大鼠肝移植排斥反应中起着重要作用.     

联合输注供体特异性不成熟树突状细胞及环胞素A对受体Th1/Th2淋巴细胞分化的影响

目的探讨联合应用体外培养供体特异性不成熟树突状细胞及环胞素A(CsA)对受体体内Th1 /Th2淋巴细胞分化的影响。方法建立大鼠同种异体原位肝移植模型 ,88只LWE大鼠和SD大鼠随机分为 3组 :(1 )对照组 :术后不予免疫抑制剂 ;(2 )CsA组 :术后第 2天起隔日腹腔内按1mg/ 1 0 0 g 体重注射CsA ,共 3次 ;(3)CsA DC组 :除术后按CsA组腹腔注射CsA外 ,第 8天阴茎背静脉注射 1 0 6个供体骨髓体外培养的不成熟树突状细胞 (DCim)。术后观察各组的生存时限及 5、1 0、1 5、2 5d分别取标本行肝脏免疫病理学检查、腹腔淋巴结中INF γmRNA、IL 6mRNA含量的检测。结果CsA DC组的生存时限为 (2 7 0± 1 0 )d ,较对照组及CsA组显著延长 (P <0 0 5 ) ;CsA DC组受体腹腔淋巴结中的INF γmRNA含量较对照组及CsA组低 (P <0 0 5 ) ,而IL 6mRNA含量则较前两组升高 (P <0 0 5 )。结论联合应用环孢素A和体外培养的供体特异性DCim后受体体内Th2型淋巴细胞含量升高 ,而Th1型淋巴细胞含量降低 ;通过调节受体体内Th1 /Th2淋巴细胞比例是其降低大鼠肝移植术后免疫排斥反应的机制之一