原癌基因c-fos及c-myc在IL-13诱导Dami细胞分化中的表达关系

目的研究重组人白细胞介素-13(recombinant humaninterleukine-13,rhIL-13)诱导Dami细胞分化中原癌基因c-fos及c-myc表达,探索原癌基因c-fos及c-myc在IL-13信号传导通路中的作用。方法采用RT-PCR检测rhIL-13分别作用不同时间GPⅡb mRNA、c-fos mRNA和c-myc mRNA的表达;Western     

重组人白细胞介素-13对造血细胞白细胞介素-13受体α1表达的调控

目的 探讨白细胞介素-13受体α1(interleukine-13 receptor α1,IL-13,Rα1)在造血细胞的表达及其在重组人白细胞介素-13(recombmant human ineterleukine-13,rhIL-13)作用下的表达变化.方法 细胞培养, 提取细胞总RNA, 用RT-PCR及图象分析法检测Dami细胞白细胞介素-13受体ɑ1mRNA表达的水平.结果 Dami细胞均表达白细胞介素-13受体α1;rhIL-13作用Dami细胞4h后,白细胞介素-13受体α1 mRNA表达降低12h后,IL-13Rα1 mRNA表达恢复.结论 ①Dami细胞表达IL-13Rα1.②rhIL-13短暂下调Dami细胞IL-13Rα1的表达.     

原癌基因c—fos及c—myc在IL-13诱导Dami细胞分化中的表达关系

目的研究重组人白细胞介素-13（recombinant human interleukine-13,rhIL-13）诱导Dami细胞分化中原癌基因c-los及c—myc表达,探索原癌基因c-fos及c—myc在IL-13信号传导通路中的作用。方法采用RT—PCR检测rhIL-13分别作用不同时间GPⅡbmRNA、c-losmRNA和e-myc mRNA的表达;Western Blotting检测c—Fos和c—Mye的表达。结果IL-13促进巨核细胞表面标志物GPⅡb mRNA表达;诱导原癌基因c—fos mRNA和蛋白的表达,并随后下调原癌基因c-mycmRNA和蛋白的表达。结论原癌基因c—fos与c—myc参与了IL-13诱导的信号传导并具有相关性。     

Cyclin D1在结缔组织生长因子诱导肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨Cyclin D1在结缔组织生长因子(CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖中的作用.方法:分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞,实验使用第3～7代细胞.经鉴定的PASMCs给予浓度分别为5 ng/ml、10 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml CTGF培养48 h.采用WST-1检测细胞增殖;实时荧光RT-PCR和Western blot方法检测Cyclin D1mRNA及蛋白的表达.结果:随着CTGF浓度的增加,各组PASMCs的OD值均逐渐升高,当浓度达到5 ng/ml时与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),呈浓度依赖性;随着CTGF浓度的增加,各组PASMCs的Cyclin D1 mRNA和蛋白均较对照组表达升高.结论:CTGF通过上调Cyclin D1表达促进PASMC增殖.     

IL-13受体在白血病Dami细胞中的表达及IL-13对其表达的影响

目的 研究巨核细胞白血病Dami细胞是否表达IL-13受体α1和IL-4受体α以及IL-13对其表达的影响.方法 无血清培养Dami细胞,提取Dami细胞总RNA,反转录,形成第1条cDNA链,PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测,Quantity One软件分析电泳条带光密度,数据进行统计学处理.结果 Dami细胞表达IL一13 Rα1mRNA.4h IL-13组Dami细胞IL-13Rα.1mRNA的表达明显低于血清组、混合组和空白对照组(P<0.05).12h IL-13组IL-13Rα1mRNA表达与血清组、混合组和空白对照组IL-13Rα1mRNA表达无明显区别(P>0.05).Dami细胞表达IL-4RαmRNA,且不受IL-13的影响.结论 Dami细胞表达IL-13 Rα1 mRNA,IL-13短暂下调Dami细胞IL-13 Rα1 mRNA表达.     

巨噬细胞移动抑制因子对血管平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅲ mRNA体外表达的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与血管平滑肌细胞(VSMC)合成胶原之间的可能联系。方法 取大鼠主动脉中膜平滑肌进行原代细胞培养,用第4代传代细胞分为两组,用25、50、75、100ng/ml的MIF刺激VSMC生长为实验组,未用刺激VSMC生长为实验组,采用RT-PCR,PCR方法测定VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA含量。结果 与正常对照组相比,除25ng/ml外,其他3种不同浓度的MIF刺激SMC,胶原ⅠmRNA相对含量都显著增加(P<0.05)。100ng/ml的MIF刺激SMC,胶原ⅢmRNA相对含量较对照组显著增加(P<0.05),而其余各浓度胶原ⅢmRNA相对含量与对照组比较均无显著性差异。结论 MIF与VSMC合成胶原之间有关,MIF刺激可以促进体外培养的VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达。     

IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响

目的 探讨IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响.方法 分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-6,MTT法测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;流式细胞仪检测软骨终板细胞生长周期的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果 10、50、100 ng/ml IL-6对软骨终板细胞的增殖无影响,50 ng/ml IL-6对软骨终板细胞细胞周期无影响,10、50 ng/ml IL-6均对Aggrecan mRNA的表达无影响,仅50 ng/ml浓度时IL-6可降低Collagen Ⅱa mRNA的表达.结论 较大剂量IL-6时可抑制软骨终板基质合成,从而促进椎间盘的退变.     

Effects of Fucoidan on the expression of MMP2 and TIMP-2 in human mesangial cells cultured with growth factor β1

目的 观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义.方法 用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml +FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml + FPS 25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组.ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Realtime PCR技术检测HMC 的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达 (P＜0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P＜0.01,P＜0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展.     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

致敏豚鼠气道及肺组织c—myc基因的表达与哮喘发病的关系

研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法以卵蛋白致敏诱发豚鼠哮喘建立实验模型。用分子杂交技术分别观察正常及哮喘发作后ｃ－ｍｙｃ在豚鼠气道及肺组织中的表达水平。结果：原癌基因ｃ－ｍｙｃ在豚鼠哮喘发作后即刻表达增强，且呈时间依赖关系，并可被糖皮质激素部分抑制。     

外周血PBMC来源的树突状细胞的快速无血清培养方法及细胞信号转导机制

目的 探讨体外无血清条件下诱导人外周血单核细胞(PBMC)迅速生成树突状细胞(DC)的方法．并初步探讨钙离子载体(CI)诱导分化的信号转导途径与肿瘤坏死因子(TNF)-α所诱导的是否相同。方法 分离健康献血者的PBMC．给予无血清培养基及50ng／ml的rhGM-CSF过夜培养后，再分别给予100ng／ml的A23187或50ng／ml的TNF-α，或预先加入0．5μg／ml的环胞菌素A(CsA)30min后，再加入A23187、TNF-α，共培养40h。于相差显微镜下观察细胞形态的变化，流式细胞仪检测细胞的表面标志，MTT比色法检测不同方法处理的PBMC刺激同种异体T细胞的增殖作用。结果 健康献血者的PBMC在无血清条件下，给予rhGM-CSF及CI或TNF-α培养40h，均可获得DC的典型形态．包括CD14表达下调、CD83及共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体T细胞增殖的作用；上述由CI诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均可被CsA所抑制。而TNF-α所诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均不受CsA影响。结论 健康献血者的PBMCs在体外无血清条件下．司以被rhGM-CSF及CI或TNF-α迅速诱导成DC，但CI与TNF-α诱导PBMC分化为DC的细胞信号转导途径不同。     

脆性部位与原癌基因在乙型肝炎病人中的相关性

①目的 探讨脆性部位与原癌基因在乙型病毒性肝炎（乙肝）病人中的相关性及其与原发性肝癌发生的关系。②方法 用低叶酸、低小牛血清和较高ｐＨ值培养方法,常规外周血染色体制片,对２０例乙肝病人（病人组）和２０例健康正常人（对照组）进行染色体脆性部位分析。③结果 病人组检出３１种脆性部位,主要分布于Ａ,Ｂ,Ｃ组染色体,其表达率为８．９４％,与正常对照组（４．０５％）比较差异有显著性（ｕ＝５．８３,Ｐ〈０．０     

七氟醚对树突状细胞成熟及成熟树突状细胞活力的影响

目的探讨吸入性麻醉药七氟醚对脐血来源未成熟树突状细胞成熟及成熟树突状细胞(DCs)活力的影响。方法密度梯度离心法分离脐血来源单核细胞,并随机分为3组,即常规培养组(C组)作为对照组、未成熟DC组(I组)和成熟DC组(M组)。C组加入重组人粒细胞—单核细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)50 ng/ml和重组人白介素-4(rhIL-4)10 ng/ml共培养12d,然后加入肿瘤坏死因子(TNF-α)50ng/ml,持续培养至第14天。I组、M组分别于第6、13天用含2.5%七氟醚的混合气体处理,余同C组。倒置显微镜及扫描电镜下观察细胞形态,流式细胞技术(FCM)检测细胞表面免疫表型表达(CD80/CD86、CD83/HLA-DR),MTT法检测DC刺激T细胞增殖活力,ELISA法检测上清液中IL-12水平。结果 (1)DCs形态学:C组及M组细胞表面有大量较长突起,面I组细胞表面树突状突起短,分支少。(2)CD80/CD86、CD83/HLA-DR表达率:C组、M组、I组分别为(36.9±2.8)%和(12.9±2.4)%、(39.4±2.1)%和(14.4±3.0)%、(19.6±2.6)%和(7.1±1.4)%,I组与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而M组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)DCs刺激T细胞增殖活力:C组、M组、I组分别为1.44±0.23、1.37±0.10和0.56±0.12,I组与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而M组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)DCs分泌IL-12水平:C组、M组、I组分别为(958±321)pg/ml、(982±408)pg/ml和(377±312)pg/ml,I组与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而M组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论七氟醚可抑制脐血来源树突状细胞成熟,但对成熟树突状细胞活力影响不明显。     

急性非淋巴细胞白血病细胞中原癌基因c—myc的表达

研究急性非淋巴细胞白血病细胞中原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达及临床意义。方法采用蛋白质免疫印渍和单克隆抗体免疫细胞化学染色方法检测３０例ＡＮＬＬ细胞中原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达。结果１９例表达阳性，阳性率为６３％。ＡＮＬＬ中白血病细胞的阳性细胞百分率为２９％－９６％，ｃ－ｍｙｃ在不同病人的白血病细胞中表达水平不一样；ｃ－ｍｙｃ的表达和患者骨髓中白血病细胞百分率显著相关，和患者年龄，性别，外周血白细胞计数。     

补肾益气行血法对人软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响

目的：观察补肾益气行血中药复方含药血清对MMP-13、II型胶原表达的调控作用及相关意义。方法：将体外培养的人软骨细胞随机分为5组：对照组（正常血清）、低剂量IL-1组（10斗g／m1 IL-1β）、高剂量IL-1组（100Ixg／ml IL-113）、低剂量IL-1加中药组（10μg／ml IL-1p加含药血清）、高剂量IL-1加中药组（100斗g／mlIL-1p加含药血清）,应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及实时荧光定量PCR,比较补肾益气行血中药复方含药血清在不同剂量IL-1B作用下对MMP-13、II型胶原表达的调控作用。结果：中药含药血清纽均有抑制MMP,13的表达作用,对照纽表达阳性强度高于中药组,中药组II型胶原表达阳性强度高于对照组,统计学均有明显差异。不同剂量IL-1组均能促进MMP-13的表达,对照组阳性强度低于IL-1组,IL-1组II型胶原表达低于对照组,统计学均有明显差异。结论：体外条件下,补肾益气行血中药含药血清能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达;能对抗MMP-13抑制软骨细胞II型胶原合成,具有保护软骨细胞的作用。     

外周血PBMC来源的树突状细胞的快速无血清培养方法及细胞信号转导机制

目的 探讨体外无血清条件下诱导人外周血单核细胞(PBMC)迅速生成树突状细胞(DC)的方法,并初步探讨钙离子载体(CI)诱导分化的信号转导途径与肿瘤坏死因子(TNF)-α所诱导的是否相同。方法 分离健康献血者的PBMC,给予无血清培养基及50 ng/ml的rhGM-CSF过夜培养后,再分别给予100 ng/ml的A23187或50 ng/ml的TNF-α,或预先加入0.5 μg/ml的环胞菌素A(CsA)30 min后,再加入A23187、TNF-α,共培养40 h。于相差显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞的表面标志,MTT比色法检测不同方法处理的PBMC刺激同种异体T细胞的增殖作用。结果 健康献血者的PBMC在无血清条件下,给予rhGM-CSF及CI或TNF-α培养40 h,均可获得DC的典型形态,包括CD14表达下调、CD83及共刺激分子(CD80、CD86)表达上调,以及较强刺激同种异体T细胞增殖的作用;上述由CI诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均可被CsA所抑制。而TNF-α所诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均不受CsA影响。结论 健康献血者的PBMCs在体外无血清条件下,可以被rhGM-CSF及CI或TNF-α迅速诱导成DC,但CI与TNF-α诱导PBMC分化为DC的细胞信号转导途径不同。     

bFGF对牙周膜细胞合成纤维连接蛋白的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLF)合成纤维连接蛋白(Fn)的影响. 方法 取体外培养的PDLF,按加入的bFGF终浓度分为0 ng/ml(对照),1 ng/ml,10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml bFGF五组,继续培养72 h后应用免疫细胞化学方法 观察细胞胞质中Fn的合成情况. 结果 与对照组相比,PDLF中Fn的表达在1-100 ng/ml bFGF都明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05),其中在10-50 ng/ml bFGF时增加水平最为显著,达到最佳效果. 结论 bFGF有促进PDLC合成纤维连接蛋白的作用.