滇黄精中多糖的分离与抗氧化活性研究

目的分离纯化滇黄精Polygonatum kingianum中的均一多糖,并阐释其理化性质和抗氧化活性。方法通过水提醇沉、分级醇沉得滇黄精总多糖(PKS)的50%和70%醇沉部位,再经DEAE-琼脂糖凝胶FF离子交换柱和Sephadex G-100柱色谱法分离纯化得到均一多糖,并利用柱前衍生化HPLC、高效凝胶渗透色谱法和红外光谱法分别对其单糖组成、相对分子质量和结构进行研究;同时采用总还原力实验、1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟基自由基(·OH)清除法对其抗氧化活性进行评价。结果从50%和70%醇沉部位分离纯化得到3个均一多糖(PKS-1、PKS-2和PKS-3),其单糖组成均含有D-甘露糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖、D-阿拉伯糖和L-岩藻糖,其中PKS-1及PKS-3还分别含有D-核糖和L-鼠李糖;相对分子质量分别为85 017.83、266 084.76和474 799.22;PKS、PKS-1和PKS-2的总还原能力、·OH及DPPH自由基的清除能力为PKS PKS-2PKS-1。结论从滇黄精50%和70%醇沉部位分离到3个均一多糖,均为含有β构型的吡喃环酸性多糖,其单糖组成相似,PKS、PKS-1和PKS-2均有一定的抗氧化活性,为滇黄精抗氧化活性成分的研究及抗衰老药物和功能性食品的开发利用奠定了科学基础。     

三七药渣中主要多糖成分的分离纯化及其抗氧化活性研究

目的 分离纯化三七药渣中主要多糖组分,分析其单糖组成,并对比研究各组分多糖的抗氧化活性。方法 采用水提醇沉法提取三七药渣粗多糖;经DEAE Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G-50柱色谱法进行分离纯化。采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法测定其相对分子质量及纯度,通过扫描电子显微镜（ScanningElectronMicroscope,SEM）、傅里叶变换红外光谱仪（Fourier TransformInfraredspectroscopy,FT-IR）、HPLC-衍生化等方法对各组分多糖的单糖组成和初级结构进行分析。分析其抗氧化能力以及对RAW 264.7细胞氧化损伤的保护作用。结果 分离得到3个多糖组分（PNPS-0、PNPS-0.2、PNPS-0.3）,3者的单糖组成和比例存在差异：PNPS-0主要由D-葡萄糖（52.28%）和D-半乳糖（34.14%）组成;PNPS-0.2主要由D-半乳糖（40.89%）、D-阿拉伯糖（19.38%）和D-葡萄糖（12.25%）组成;PNPS-0.3主要由D-葡萄糖醛酸（40.43%）、D-半乳糖（22.61%）和D-葡萄糖（...     

吴茱萸多糖的分离和组成研究

目的 对吴茱萸中多糖进行提取、分离和纯化,进一步研究吴茱萸多糖主要组分的单糖组成.方法 采用水提醇沉法提取粗多糖,H2O2脱色、Sevag法除蛋白、透析制备精制品,用DEAE-32纤维素阴离子交换柱、Sephacryl S-400 SF型凝胶柱分离纯化多糖,经酸水解后,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化HPLC法分析单糖组成.结果 从吴茱萸中分离纯化得两个主要多糖组分ERPS2a、ERPS3,二者的单糖组成均为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,ERPS2a的单糖物质的量比为2.1:2.6:3.4:1.0:7.9:4.9,ERPS3的单糖物质的量比为1.0:17.6:2.7:3.2:19.8:9.4.结论 吴茱萸多糖得到有效分离纯化,两纯组分所含单糖种类相同,仅各单糖的组成比例不同.     

白茅根多糖IC1的分离及其相对分子质量和单糖组成的测定

目的:分离纯化白茅根多糖,建立白茅根多糖相对分子质量的测定方法,并通过高效液相色谱法测定其单糖组成和摩尔比.方法:通过多次醇沉的方法对白茅根多糖进行分离纯化,得到白茅根多糖IC1;采用高效液相色谱法,以右旋糖酐为标样,绘制多糖分子量的标准曲线,测定白茅根多糖IC1的相对分子质量;通过酸水解,使IC1水解成单糖,分析这些单糖的组成及其摩尔比.结果:经测定,白茅根多糖IC1的相对分子质量为8 292.2;白茅根多糖IC1由鼠李糖,木糖,果糖,甘露糖,葡萄糖5种单糖组成,其摩尔比为1∶11.45∶1.26∶1.02∶59.23.结论:多次醇沉的方法对白茅根多糖进行分离,效果良好,操作简便.高效液相法测定白茅根多糖分子质量及单糖组成灵敏度高,重复性好.     

太子参均一多糖的分离与表征

目的:对太子参抗二型糖尿病多糖活性部位(PF40),进行分离纯化得到均一多糖并对其进行结构表征。方法:太子参粉碎后,通过水提醇沉法(40%乙醇)得到太子参粗多糖,采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱对其分离纯化,得到一种均一多糖,采用高效凝胶渗透色谱法测定分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)-柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成。结果:分离得到一种均一多糖,由葡萄糖组成,分子量为18400Da,命名为HPh-1-1。结论:太子参均一多糖HPh-1-1是一种葡聚糖。     

亮菌多糖的分离纯化

目的 通过醇沉、色谱等分离提取技术对发酵得到的亮菌胞内多糖进行分离纯化,并对纯化的多糖进行结构及部分性质研究.方法 采用水提、醇沉、除蛋白等方法得到亮菌胞内粗多糖,然后通过离子交换色谱、分子筛色谱对粗多糖进行进一步的分离纯化,得到单一多糖.同时采用红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振法对该单一多糖进行结构研究,确定其单糖组成及糖链的连接方式.结果 通过去蛋白、醇沉、离子交换色谱和凝胶滤过色谱的方法得到亮菌胞内多糖IPS-B2,该多糖为直链α-D-(1→6)-吡喃型葡聚糖,不含蛋白质、多肽和氨基酸.结论 通过纯化得到了直链α-(1→6-葡聚糖(IPS-B2),该多糖在体内具有较好的抑瘤效果.     

响应面法优化水提醇沉玄参多糖工艺及其含量分析

目的:优化水提醇沉法提取纯化玄参多糖的工艺条件,建立多糖酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定玄参多糖单糖组成和含量的方法。方法:在单因素试验基础上,选择溶媒量(A)、提取时间(B)和醇沉浓度(C)为考察因素,应用Box-Behnken响应面中心组合法进行三因素三水平设计,以多糖含量为指标,优化玄参多糖的提取工艺;玄参多糖用三氟乙酸(TFA)水解后,以PMP对水解单糖进行衍生化,并建立6种单糖的HPLC分离和含量测定方法。结果:玄参多糖的最佳提取工艺条件为50倍溶媒量,提取时间1 h,醇沉浓度90%;玄参多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成;各单糖的平均质量比为0.48∶1.40∶1.00∶69.80∶93.00∶2.20;玄参多糖平均质量分数为16.80%。结论:优选的玄参多糖水提醇沉提取纯化工艺可将玄参中的多糖提取完全,用于后续分析;PMP柱前衍生化HPLC单糖测定法的精密度、重复性和准确性良好,适用于玄参多糖的组成及含量测定。     

板蓝根多糖的系统分离纯化与组成分析

目的建立板蓝根多糖的系统分离纯化方法,并对分离得到的均一多糖进行组成测定。方法以抗病毒活性较好的80%醇沉板蓝根粗多糖为研究对象,对其进行DEAE-Sepharose Fast Flow柱色谱、Sephacryl-200葡聚糖凝胶柱色谱以及高效凝胶色谱系统分离纯化。分别采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)和邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC法对分离得到的板蓝根均一多糖进行单糖组成和氨基酸组成测定。结果利用系统分离纯化策略,从80%醇沉板蓝根粗多糖中分离得到2种均一板蓝根多糖(IRPS1A和IRPS1B)和2种均一板蓝根糖蛋白(IRPS2A和IRPS3A)。其中,IRPS1A与IRPS1B的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;IRPS2A的单糖组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖;IRPS3A的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。糖蛋白IRPS2A与IRPS3A均含有天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸,共14种氨基酸残基。同时,IRPS2A还含有酪氨酸残基。结论该系统分离纯化的策略可应用于板蓝根均一多糖(糖蛋白)的获取,为板蓝根多糖的结构分析及药理活性研究奠定基础。     

不同分离提纯工艺对冬凌草多糖提取率与免疫活性的影响

目的:优选分离冬凌草多糖的方法,探究不同分离方法对冬凌草多糖分离效果的影响。方法:分别以DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法、乙醇分级醇析法对冬凌草粗多糖进行分离纯化,以不同分离组分中多糖含量及其免疫活性比较优选冬凌草粗多糖的分离工艺。结果:DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法分离得到5个组分,通过乙醇分级醇沉初步得到4个冬凌草多糖组分,前者分离产品纯度较高,而后者产品在体外小鼠脾淋巴T细胞的增殖实验中表现出较强生物活性。结论:为进一步研究冬凌草多糖的生物活性,可选用乙醇分级醇沉法对冬凌草多糖进行分离纯化。     

不同品种小通草多糖的含量及单糖组成研究

目的:比较来源分别为喜马山旌节花、中国旌节花和青荚叶的小通草药材中多糖含量及单糖组成。方法:用水回流提取多糖,依次用醇沉、酶水解、Sevage法透析纯化多糖并用硫酸全水解;多糖采用3,5-二硝基水杨酸法测定各品种小通草中多糖含量;采用薄层色谱法(TCL)比较不同品种小通草多糖的单糖组成。结果:喜马山旌节花、中国旌节花和青荚叶三种小通草多糖含量分别为3.44%、4.33%、0.98%,多糖组成分别为L-鼠李糖、果糖、半乳糖,L-鼠李糖、果糖、半乳糖,半乳糖。结论:来源为青荚叶的小通草多糖含量最低,且单糖组成与另两种小通草比较有明显不同。     

正交设计法优选六月青多糖胶囊提取及醇沉工艺

目的:优选六月青多糖胶囊提取、醇沉工艺条件。方法:以多糖含量为指标,采用正交试验考察料液比、煎煮次数及煎煮时间对六月青多糖胶囊提取工艺的影响;以多糖含量及多糖收率为综合评价指标,选取醇沉时间、醇沉次数、加醇量及醇沉浓度为考察因素,通过正交试验优选醇沉工艺;采用苯酚-浓硫酸法测定总多糖含量。结果:六月青多糖胶囊最佳提取工艺为加10倍量水煎煮3次,每次煎煮2 h。最佳醇沉条件为水提液过滤后浓缩至0.5 g.mL-1,加7倍量95%乙醇沉淀12h,沉淀1次。醇沉后多糖纯度达71.05%,收率6.83%。结论:优选的提取及醇沉工艺条件稳定合理,可为六月青多糖胶囊的生产提供实验依据。     

六味地黄方醇沉工艺研究

目的 通过对六味地黄方醇沉工艺合理化研究,得到稳定的、可产业化的醇沉工艺.方法 以马钱苷、芍药苷、莫诺苷、甘露三糖、多糖质量分数、相对分子质量分布及浸出物等为评价指标,对乙醇加入方式、离心方式及是否加入乙醇洗涤工艺进行考察,筛选出最佳醇沉工艺.结果 醇沉工艺中以体积计算加入乙醇的量较合理;采用乙醇洗涤法可有效完成多糖部位与醇沉上清液的分离;改进工艺后,多糖浸出物质达标,苷类、甘露三糖的质量分数达标.结论 经优化后的乙醇醇沉工艺具有易操作、可控性好、重复性好的特点,可以开展产业化推广.     

不同提取方法对玄参多糖单糖组分和抗氧化活性的影响

目的研究不同提取方法对玄参多糖的提取率、纯度、单糖组分和体外抗氧化活性的影响,为玄参多糖的提取方法及多糖活性差异提供必要的参考。方法传统水提法、稀碱浸渍法、微波辅助法、酶辅助提取法、超声辅助法被用来提取玄参多糖;采用苯酚硫酸法测定多糖的提取率和纯度;采用高效液相色谱法检测多糖完全水解后单糖的组成;DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和总还原力为指标评价玄参多糖的体外抗氧化能力。结果酶辅助提取法获得多糖提取率为7.35±0.43,多糖纯度为54.43%±3.43%,其单糖质量摩尔比例中葡萄糖醛酸和半乳糖酸含量最高,分别为12.1%和8.8%;多糖体外抗氧化活性研究发现,酶辅助法获得多糖清除DPPH自由基能力和超氧阴离子自由基清除能力最高,玄参多糖对羟基自由基的清除不太稳定,其与多糖浓度并不成正相关,还原能力比较发现酶辅助法多糖还原能力最强。结论不同方法提取中酶辅助提取法获得多糖的纯度最高,体外抗氧化活性最强,推测其抗氧化活性和单糖组分比例有关。     

柱前衍生HPLC分析黄连多糖的单糖组成

目的:建立柱前衍生HPLC测定黄连多糖中的单糖组成,并分析3种黄连多糖的单糖差异。方法:采用水提醇沉法提取黄连多糖,经硫酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,再利用HPLC法分析单糖的PMP衍生物。结果:黄连多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其中半乳糖醛酸含量最高,葡萄糖次之。另外,雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖的平均摩尔比分别为1∶2.34∶0.38∶17.58∶12.40∶6.11∶5.93,1∶2.43∶0.25∶16.76∶15.18∶6.51∶9.78和1∶3.25∶0.40∶22.35∶12.96∶6.66∶10.28。结论:建立的方法简便、准确,重复性好,可用于黄连多糖中单糖的组成分析和含量测定。雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖含量有差异。     

响应面分析法优化苦豆子多糖的醇沉工艺

目的:优化苦豆子多糖的醇沉工艺.方法:在单因素试验基础上,以多糖提取率为指标,依据响应面法原理,使用Design Expert软件的中心组合设计建立试验数学模型,考察醇沉时间、乙醇体积分数及用量对醇沉工艺的影响.采用苯酚-浓硫酸法测定苦豆子多糖含量.结果:最佳醇沉工艺条件为加4.3倍量97％乙醇醇沉26 h,苦豆子多糖提取率6.98％,与预测值(7.03％)的相对误差0.71％.结论:响应面法可有效用于优化苦豆子多糖的醇沉工艺.     

党参多糖单糖组成与其对HepG2细胞毒活性的相关分析

目的探究党参多糖的单糖组成与其对肝癌HepG2细胞毒活性之间的相关性。方法 26批不同产地的党参样品,采用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法测多糖的量、气相色谱法和间羟基联苯法同时测定半乳糖醛酸的量、糖腈乙酸酯衍生化法分析单糖种类及量、三甲基硅醚衍生化法测果糖的量,MTT法研究党参多糖对HepG2细胞的细胞毒活性,采用聚类分析法对26批党参样品进行聚类分析,以偏最小二乘法(PLS)探究样品中各单糖种类和量与其对HepG2细胞毒活性的相关性。结果 26批党参多糖样品均显示一定的HepG2细胞毒活性,且以甘肃文县的8号党参多糖的细胞毒活性最强(其抑制率为36.36%)。26批党参多糖中各类单糖的量存在差异。聚类分析结果表明,党参多糖的单糖种类及量不能作为党参分类的指标。党参多糖的单糖组成与HepG2细胞毒活性的相关性研究表明,半乳糖醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖与HepG2细胞毒活性呈正相关,而甘露糖、木糖和葡萄糖与HepG2细胞毒活性呈负相关。结论党参多糖对HepG2的细胞毒活性与其单糖的种类存在相关性,含有半乳糖醛酸相对较高的党参多糖的细胞毒活性较强。     

铁苋菜多糖体外抗氧化研究

目的:研究不同醇沉浓度下铁苋菜多糖的体外抗氧化活性.方法:用质量浓度为30％,45％,60％,75％,80％的无水乙醇分级沉淀的方法得到不同组分的铁苋菜多糖,分别采用高铁还原法、对二苯代苦味酰基(DPPH·)体系、光照核黄素法、硫代巴比妥酸法比较它们的总还原力(T-AOC)、对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O2-·)、羟基自由基(·OH)的清除作用及对卵黄脂蛋白脂质过氧化物(LPO)的抑制效果.结果:醇沉浓度为75％时对DPPH·的清除率达到了73.85％,其余各组分多糖都有良好的抗氧化效果,其中对O2-·和·OH的清除作用最为明显,清除率分别达到了92.47％和95.89％,几乎与抗坏血酸的清除作用相当,75％醇沉条件下的多糖对LPO也有较强的抑制作用.结论:铁苋菜各组分多糖都有较强的抗氧化作用.     

维药芜菁籽多糖体外抗氧化活性研究

目的：通过体外清除自由基试验初步研究芜菁籽多糖的抗氧化活性。方法：采用脱脂,水提,除蛋白,脱色,醇沉等方法提取多糖。利用4种常见的体外抗氧化活性测试方法,即清除DPPH·自由基,羟自由基,超氧阴离子自由基以及总还原能力等来衡量芜菁籽多糖的抗氧化能力,并与维生素C（Vc）进行对照。结果：芜菁籽多糖提取率为2.34%,并具有一定的抗氧化活性,抗氧化能力与浓度之间有很好的量效关系,浓度越大,抗氧化活性越强。其中芜菁籽多糖的总还原能力较强,清除超氧阴离子自由基的能力较弱。结论：芜菁籽多糖具有天然抗氧化能力,在以芜菁籽为原料开发多糖类功能食品方面有较现实的实际意义。     

乌头母根、子根、须根多糖的比较

目的:研究乌头母根、子根、须根的多糖含量及单糖组成.方法:分别以精制多糖测得多糖对葡萄糖的换算因子,以苯酚-硫酸分光光度法测定乌头母根、子根、须根的多糖含量;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定多糖中的单糖组成.结果:乌头母根、子根、须根的多糖含量分别为22.0%,33.5%,6.1%;母根、子根、须根的多糖中主要含有葡萄糖,另外含有少量的半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖,子根中还含有甘露糖,须根中还含有甘露糖、鼠李糖、木糖.结论:多糖含量检测方法简便、快速,测定结果更客观、准确;须根中多糖含量最低,且单糖组成与母根、子根有明显不同.