肝病大鼠创伤弧菌脓毒症基质金属蛋白酶-9的动态变化

目的 探讨血清MMP-9水平与酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症进展的关系.方法 制作酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型,分脓毒症组及抗菌药物干预组.观察脓毒症组大鼠在染菌后2 h、6 h、12 h、24 h各时间点的脓毒症表现及光镜下肺组织病理改变,并以ELISA法测定脓毒症组及抗菌药物干预组大鼠染菌后各时间点血清MMP-9水平.计量资料采用(x±S)表示.采用SPSS 10.0进行统计,各组血清MMP-9值作t检验,多组间差异采用单囚素方差分析处理.P＜0.05为差异有统计学意义.结果 脓毒症组大鼠染菌后6 h开始出现较明显的毒血症状,并随时间的延长加剧,24 h达高峰,濒临死亡.光镜下肺组织损伤以炎症细胞浸润及肺泡壁水肿充血为主,6 h较轻,12 h损伤加重,到24 h可见大量的炎细胞浸润,淋巴滤泡形成,伴肺泡腔出血.脓毒症组血清MMP-9水平染菌后6 h明显升高(P＜0.01),12 h达高峰,24 h已明显下降(P＜0.01,与12 h组比).抗菌药物干预组大鼠血清MMP-9变化曲线与脓毒症组一敛,但与脓毒症组相应时间点比较,仅6 h时MMP-9水平明显减低(P＜0.01).结论 MMP-9可能不是酒精性创伤弧菌脓毒症后期病情恶化的主要参与因素,血清MMP-9水平不能准确地反应酒精性肝病创伤弧菌脓毒症病情轻重及全身器官损伤的程度.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织核转录因子-κB活性表达及抗菌药物的影响

目的探讨创伤弧菌(VV)脓毒症大鼠肝组织NF-κB活性以及抗菌药物头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星对其的干预效应。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),使用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定各组大鼠肝组织NF-κB活性。结果正常大鼠肝组织NF-κB活性较低,VV组染菌2h的肝组织NF-κB活性即达到高峰,较NC组明显增高(P<0.05),后肝组织NF-κB活性逐渐减少,但VV组染菌6、9、12、16h肝组织NF-κB活性仍明显高于NC组(P<0.05)。AA组染菌后9、12h肝组织NF-κB活性仍显著高于NC组(P<0.05),后逐渐减低,染菌16h、36h、2周的肝组织NF-κB活性与NC组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与相应时间点的VV组相比,AA组染菌9、12、16h的肝组织NF-κB活性明显降低(P<0.05)。结论创伤弧菌脓毒症早期肝组织NF-κB活性即达高峰,及早使用头孢哌酮钠和乳酸左氧氟沙星可明显减低创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织NF-κB活性。     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4及核转录因子-κB表达的影响

目的 观察血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达和核转录因子-κB(NF-κB)活性的干预作用.方法 将110只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、血必净干预组,后两组再分为染菌后1、6、12、24、48 h亚组,每组10只大鼠.于大鼠左后肢皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型;血必净组于染菌后0.5 h腹腔注射血必净注射液4 ml/kg.各时间点处死大鼠取肺组织,检测肺组织湿/干重比值(W/D比值)、TLR4 mRNA表达、NF-κB活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 模型组大鼠肺组织W/D比值于染菌后6、12、24、48 h明显高于正常对照组,而血必净组24 h、48 h较模型组明显减小(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达在染菌后6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组6 h较模型组明显减少(均P<0.05).模型组大鼠肺组织NF-κB活性在染菌后1、6、12 h明显高于正常对照组,而血必净组1 h、6 h较模型组明显降低,24 h、48 h较模型组明显升高(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TNF-α于染菌后1、6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组12 h较模型组明显降低(均P<0.05).结论 TLR4-NF-κB通路参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的早期病理生理过程;血必净注射液能抑制TLR4-NF-κB活化,减轻创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤.     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的 研究血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量的影响及意义.方法 将110只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组和血必净组.皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型.分别于术后1、6、12、24、48 h活杀10只动物,留取肺组织,检测iNOS活性、NO含量、髓过氧化物酶(MPO)活性,并观察肺组织病理变化.结果 模型组肺组织iNOS活性(U/mg)在染菌后1、6、12、24 h(分别为12.57±3.20、22.17±7.29、19.73±6.23、14.37±3.78)均明显高于正常对照组(6.69±1.87,均P<0.01);血必净组6、12、24 h iNOS活性(分别为14.97±3.48、15.15±5.46、10.28±4.13)明显低于同时间点模型组(P<0.05或P<0.01).模型组肺组织NO含量(μmol/g)在染菌后1、6、12、24、48 h(分别为14.53±3.82、31.52±7.01、41.32±7.28、32.82±5.42、24.82±6.01)均显著高于正常对照组(4.94±1.48,均P<0.01);血必净组肺组织NO含量在12 h、24 h(分别为30.93±5.19、25.25±4.67)与同时间点模型组比较均明显下调(均P<0.01).模型组肺组织MPO活性(U/g)在染菌后1、6、12、24 h(分别为1.21±0.32、2.11±0.28、2.05±0.24、1.07±0.36)也明显高于正常对照组(0.55±0.18,均P<0.01);血必净组MPO活性在6 h、12 h(分别为1.69±0.47、1.37±0.42)与同时间点模型组比较明显下调(均P<0.01).染菌后24 h,模型组大鼠肺组织损伤明显,血必净组大鼠肺损伤较模型组有所减轻.结论 iNOS和NO参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的病理生理学过程;血必净注射液干预治疗能显著下调肺组织iNOS活性及NO生成,减轻创伤弧菌感染所致的肺损伤.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织因子和组织因子途径抑制物的基因表达及抗生素的影响

目的 研究创伤弧菌(VV)脓毒症大鼠肝组织的组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)基因表达及抗生素头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星对其的影响.方法 110只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(NC组,10只)、创伤弧菌脓毒症组(VV组,分5个哑组,每亚组10只)、创伤弧菌脓毒症药物干预组(AA组,分5个亚组,每亚组10只).构建创伤弧菌脓毒症模型及药物干预模型.RT-PCR检测大鼠肝组织TF mRNA和TFPI mRNA的基因表达水平.应用SPSS 12.0进行t检验、方差分析等处理.结果 与NC组相比,VV组染菌后2 h,6 h,9 h,12 h,16 h TF mRNA表达均明显升高(P<0.05),其中染菌6 h表达最高;从组染菌后9 h,12 h的TF mRNA仍明显高于NC组(P<0.05),后逐渐减少.VV组与AA组的肝组织TFPI mRNA与NC组相比,均无明显改变(P>0.05).与相同时间点的VV组相比,AA组16 h TF mRNA明显降低(P相似文献   

血必净对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB p65表达作用的研究

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)p65基因及蛋白表达,并探讨血必净对其的干预作用.方法 SD大鼠110只,随机分为正常组(A组,n＝10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n＝50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型)和血必净治疗干预组(C组,n＝50,感染后半小时腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组于染菌后1、6、12、24、48 h活杀(各时间点n=10),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 法、Western blot法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测大鼠肺组织NF-κB p65的基因与蛋白表达及IL-10的含量,数据采用单因素方差分析.结果 与A组比较,B组大鼠肺组织创伤弧菌感染后6、12 h NF-κB p65 mRNA表达量与6、12、24和48 h肺组织NF-κB p65蛋白表达量均明显增高 (P<0.05);与B组相同时间点比较,C组6 h肺组织NF-κB p65 mRNA表达量与12、24及48 h肺组织NF-κB p65 蛋白表达量明显减少(P<0.05); 与A组比较,B组创伤弧菌菌感染12、24和48 h IL-10的含量明显增加(P<0.05),与B组相同时间点比较,C组24 h(52.444±9.605)肺组织IL-10的含量明显增高(P<0.05);感染后48 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,肺泡腔塌陷,血必净干预后,肺组织损伤有所减轻.结论 NF-κB参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤过程;血必净能抑制NF-κB p65的表达,从而起到保护创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织的作用.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝细胞Fas mRNA表达的动态变化研究

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV) 脓毒症时肝细胞Fas mRNA表达量的动态变化情况。 方法制作大鼠VV 脓毒症模型(VV 组), RT-PCR法测定染菌后各时间点大鼠肝细胞Fas mRNA表达量。结果VV模型组感染创伤弧菌后大鼠肝细胞Fas mRNA其表达量明显增加 (P﹤0.05)，染菌后2 h、6 h的表达量最高，9 h后开始降低，但在染菌16 h的表达量仍明显高于正常对照组(P﹤0.05)。结论VV脓毒症可致肝组织中Fas mRNA表达量增加，早期明显增高，并持续维持在高水平。     

抗菌药物联合乌司他丁对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症的作用

目的探讨抗菌药物联合乌司他丁对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症的实验治疗作用。方法采用酒精灌胃联合自由饮酒制作大鼠酒精性肝病模型,右下肢皮下注射创伤弧菌感染肝病大鼠,制作酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型15只,随机分1～3组,分别于染菌后12h经腹腔注射药物,1次／12h,治疗10d。第1组用等量生理盐水作为对照,第2组应用头孢哌酮和左氧氟沙星,第3组应用头孢哌酮和左氧氟沙星联合乌司他丁。观察大鼠的活动、皮肤黏膜颜色、右下肢感染创口、存活数等。第1组大鼠死亡后,第2组和第3组治疗10d后颈动脉取血液及患肢病变组织进行细菌培养,取大鼠右大腿肌肉、肝脏、肺脏的电镜标本,观察治疗前后细胞超微结构改变。结果各组大鼠12h后,皮温升高,右下肢明显肿胀,皮肤发紫,精神萎靡,活动减少,呼吸急促。第1组大鼠均在24～48h内死亡,血液及患肢病变组织培养出创伤弧菌。2、3组大鼠药物治疗后,精神萎靡状态及呼吸急促等明显改善,3～5d后患侧大腿病变处溃破糜烂,10d后两组大鼠均存活,血液及患肢病变组织培养均为阴性。第3组与第2组比较,前者状态恢复好。抗菌药物治疗前后主要脏器细胞的超微结构改变明显减轻,抗菌药物联合乌司他丁对细胞超微结构改变减轻更为显著。结论应用足量头孢哌酮和左氧氟沙星对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症具有显著的疗效,头孢哌酮和左氧氟沙星联合乌司他丁的疗效更佳,为临床治疗创伤弧菌脓毒症提供了可靠依据。     

头孢哌酮钠联合左氧氟沙星治疗对大鼠创伤弧菌脓毒症血中mCD14的影响

目的探讨头孢哌酮钠与乳酸左氧氟沙星联用对大鼠创伤弧菌(V ibrio vu ln ificus,VV)脓毒症外周血中膜性脂多糖(LPS)受体mCD14的影响。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔抗体对外周血细胞进行免疫染色,流式细胞仪测定各组FITC-CD14阳性细胞数及其荧光强度,同时观察各组染菌大鼠行为学改变情况。结果VV组FITC-CD14细胞阳性数在染菌6 h后明显升高(P<0.01),荧光强度增强;AA组在染菌6 h时,FITC-CD14细胞阳性数明显升高(P<0.01),但药物干预后FITC-CD14细胞阳性数开始减低,至染菌后12 h FITC-CD14细胞阳性细胞数为(10.967±3.135)%(P>0.05);与VV组相比,AA组在染菌后12 h和16 h的FITC-CD14细胞阳性细胞数明显减低(P<0.01)。VV组染菌4 h,大鼠出现呼吸急促,皮温升高,下肢肿胀,且症状进行性加重,染菌12 h后大鼠出现紫绀、间断抽搐等;AA组在药物干预后上述症状逐渐减轻至消失,未见抽搐,大鼠均存活。结论创伤弧菌脓毒症血中mCD14的表达水平随脓毒症的进展而升高,头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星时血中mCD14的表达水平明显减低且改善临床症状,有明显的治疗作用。     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的动态变化研究

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症时肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达量的动态变化情况。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组),RT-PCR法测定染菌后各时间点大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达量。结果感染创伤弧菌后大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA表达量明显下降(P﹤0.05);Bax mRNA其表达量明显增加(P﹤0.05),染菌后2 h明显增高,在染菌16 h的表达量仍明显高于正常水平(P﹤0.05)。结论创伤弧菌脓毒症可致肝组织中Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量增加,早期明显增高,并持续维持在高水平。     

脓毒症大鼠肺基质金属蛋白酶-2/9表达与血必净干预

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺基质金属蛋白酶(MMP)-2/9和组织型金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1/2的动态表达及血必净干预.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠110只,随机(随机数字法)分为正常对照组(A组,n=10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作创伤弧菌脓毒症大鼠模型)及血必净干预组(C组,n=50,感染后0.5 h腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组大鼠于染菌后1,6,12,24,48 h麻醉后活杀,留取右肺标本.观察大鼠行为学变化,采用考马斯亮蓝法测肺通透性,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测肺MMP-2/9,TIMP-1/2 mRNA的表达,免疫组化法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测肺MMP-2/9和TIMP-1/2的表达.数据采用单因素方差分析,并用LSD-t法进行组间两两比较,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 B组和C组肺通透性显著高于A组,C组显著低于B组.B组和C组MMP-2/9,TIMP-1/2mRNA显著升高,B组分别于6 h(0.344±0.108),6 h(1.230±0.377),12 h(0.523±0.098),12 h(0.280±0.070)达高峰(P＜0.05),C组分别于12 h(0.256±0.074),6 h(0.968±0.225),12 h(0.746±0.316),12 h(0.356±0.035)达高峰(P＜0.05),C组MMP-2/9mRNA升高趋势显著低于B组(P＜0.05),TIMP-1/2mRNA显著高于B组(P＜0.05).B组和C组MMP-2/9,TIMP-1/2蛋白也升高,B组分别于12 h(0.692±0.191),12 h(0.061±0.017),24 h(1384.42±91),24 h(41.04±3.60)达高峰(P＜0.05);C组分别于24 h(0.217±0.065),12 h(0.045±0.013),24 h(1617.22±103),24 h(47.66±3.58)达高峰(P＜0.05);C组MMP-2/9蛋白升高趋势低于B组(P＜0.05),TIMP-1/2蛋白早期与B组差别不大,后期显著高于B组(P＜0.05).结论 MMP/TIMP比例失衡是创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤机制之一,血必净可促进MMP/TIMP比例恢复平衡,对创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤具有保护作用.

Abstract：

Objective To detect the expression of MMP-2/9 and TIMP-1/2 in the lung of Vibrio vulnificus sepsis rats and observe the intervention of Xuebijing injection. Method One hundred and ten SD rats of clean grade were randomly(random number) divided into normal control group (group A, n = 10),Vibrio vulnificus sepsis group (group B, n = 50. Sepsis was reproduced in rats with subcutaneous injection in left lower limb with Vibrio vulnificus) and Xuebijin intervention group ( group C, n = 50. Rats were intraperitoneal(ip) with the dose of Xuebijing 4mL/kg at the time of 30 min later after infection). The rats in group B and C were sacrificed at 1 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h after infection, the expression of MMP-2/9 and TIMP-1/2 were examined by PCR, Immunohistochemistry or ELISA methods, the lung permeability were measured by Coomassie Brilliant Blue method. Experimental data used single factor analysis of variance, and between groups by LSD method for pairwise comparison,P ＜0.05 statistically significant difference. Results The lung permeability increased both in group B and C compared with group A,and in group B were relatively higher. The lung MMP-2/9, TIMP-1/2mRNA expression in groups B and C compared with in group A was markedly higher, and reached the peak at 6 h(0. 344 ± 0. 108 ),6 h ( 1. 230 ± 0.377 ), 12 h (0.523 ±0.098),12 h(0.280±0.070) (P＜0.05) in group B while at 12 h(0.256 ±0.074),6 h(0.968±0.225) ,12 h(0.746 ±0. 316) ,12 h(0.356 ±0.035) (P ＜0. 05) in group C; the MMP-2/9mRNA expression in group C decreased(P＜0. 05) compared with the group B while the TIMP-1/2mRNA expression increased(P＜0. 05). The lung MMP-2/9, TIMP-1/2 protein expression in groups B and C compared with the group A(0.345±0.109) also increased, and the peak was at 12 h (0. 692 ± 0. 191 ), 12 h (0. 061 ±0.017) ,24 h(1384.42 ±91) ,24 h(41.04 ±3.60)in group B while at 24 h(0. 217 ±0.065) ,12 h(0. 045± 0. 013 ) ,24 h ( 1617.22 ± 103 ) ,24 h (47.66 ± 3.58 )in group C, the MMP-2/9 protein expression in group C was lower than in group B(P＜0.05), the TIMP-1/2 protein expression in group C was similar to in group B early while marked increased(P＜0.05)later. Conclusions MMP/TIMP imbalance was one of the mechanisms of the lung injury in the rats with Vibrio vulnificus sepsis, Xuebijing could restore the balance of MMP/TIMP ratio.     

气腹及腹腔镜手术对腹膜影响的临床研究

目的探讨腹腔镜与开腹手术中腹膜纤维蛋白溶酶的变化。方法在腹腔镜与开腹手术前、手术后立即、分别测量腹膜组织中组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)浓度及t-PA活性。结果腹膜组织中t-PA浓度在腹腔镜手术和传统腹部手术2组术中均下降,但在传统腹部手术组下降更显著(P<0.05)。而腹膜组织中PAI-1水平在腹腔镜手术组术前较高(P<0.05),PAI-1浓度在传统腹部手术组术中明显升高,但在手术后,2组PAI-1浓度无显著差异。t-PA活性在2组术前、术后均无明显差异,但术中2组均显著下降(P<0.05)。结论本次临床研究结果表明:腹腔镜手术和传统腹部手术对腹膜的影响是相似的,腹腔镜手术中最初的腹膜组织中PAI-1浓度的升高由CO2气腹造成并影响腹膜组织的修复。     

早期脓毒症大鼠脑氧代谢与乳酸的变化

目的 观察早期脓毒症大鼠脑氧代谢及乳酸水平变化规律及其临床意义.方法 选用64只清洁级雄性SD大鼠,分为随机(随机数字法)对照组和脓毒症组,各组再分为3,6,12,24 h时间组(n=8),脓毒症组腹腔注射格兰氏阴性菌脂多糖(LPS)溶液建立脓毒症大鼠模型,对照组注射等量生理盐水,在各时间点抽取颈内静脉和腹主动脉血送检血气分析,测定颈内静脉血氧饱和度(SjvO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)及乳酸(LA)含量,并计算动脉-颈内静脉氧含量差(AVDO2)和脑氧摄取率(OEF),分析SjvO2,AVDO2,OEF及乳酸含量的变化.结果 脓毒症组AVDO2,OEF在3,6,12 h高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),在24 h低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);SjvO2在3,6,12 h低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);SjvO2在24 h回升,与对照组比较,无统计学意义(P>0.05).脓毒症组各时间点LA含量与对照组相比均有不同程度升高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 脓毒症早期可出现脑贯注及脑氧摄取的增强;Sjv02,AVDO2,OEF结合LA水平的监测,能更准确的评估脓毒症早期脑供氧、耗氧和脑贯注状态.

Abstract：

Objective To observe the change of cerebral oxygen metablism and the level of blood lactate in early stage of sepsis in rats.Method Sixty-four SD rats were randomly(random number)divided into septic group and control group.The sepsis model of rat was made by lipopolysaccharide (LPS,10 mg/kg)injected intra-abdominally,and rats of control group were treated with the same amount of physiological saline instead.And each group was further divided into 4 sub-groups of4 h,6 h,12 h and 24 h after treatment.At each interval,blood samples were obtained via jugular vein for detecting blood oxygen saturation (Sjv02)and blood lactate(LA).The blood oxygen saturation(Sa02)of ventral aorta was also measured.Arteriovenous oxygen content difference (AVD02) and oxygen extraction fraction (OEF) were studied.These four variables were analyzed and compared between two groups.Results The AVD02 and OEF in sepsis group were higher than those in control groups of 3 h,6 h and 12 h (P<0.05) ,but lower than those in control group of24 hours (P<0.05).The Sjv02 in sepsis group was lower than that in control groups of 3 h,6 h and 12 h (P<0.05),but increased to that in control group of 24 h (P>0.05).LA in sepsis group was higher than that in control group in each interval (P<0.05).Conclusions In early stage of sepsis,cerebral perfusion,cerebral oxygen supply and cerebral oxygen extraction increase.The global oxygen metabolic variables(Sjv02,AVD02 and OEF)and the level of LA can be used to objectively and accurately evaluate the cerebral oxygen metabolic dysfunction in early stage of sepsis.     

脓毒症大鼠肺高迁移率族蛋白B1的表达及意义

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达和肺损伤的动态变化,并探讨HMGB1在创伤弧菌脓毒症肺损伤中作用.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠60只,随机分为正常组(A组,n=10)和创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50),采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液(浓度为6×108cfu/mL,剂量为0.1 mL/100 g)制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型),B组于染菌后1、6、12、24、48 h后活杀(各时间点n=10),采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测大鼠肺组织HMGB1基因与蛋白的表达,检测肺含水分数和光镜观察肺组织病理变化,数据采用单因素方差分析,并用LSD法进行组间两两比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 B组染菌后12 h(1.161±0.358,P=0.013)、24 h(1.679±0.235,P=0.000)及48 h(1.258±0.274,P=0.004)大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达量较A组(0.652±0.177)明显增高(P＜0.05),并于24 h达到高峰;与A组(0.594±0.190)比较,B组HMGB1蛋白表达量于感染后6 h(1.408±0.567,P=0.026)(P＜0.05)逐渐增加,24 h达到高峰(2.415±1.064,P=0.000);与A组(0.699±0.054)比较,B组大鼠肺含水分数于感染后6 h(0.759±0.030,P=0.001)、12 h(0.767±0.023,P=0.000)、24 h(0.771±0.043,P=0.000)和48 h(0.789±0.137,P=0.000)明显增大(P＜0.05),呈逐渐递增趋势;感染后12 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,且逐渐加重,到48 h肺泡腔塌陷明显,肺泡间隔分界不清.结论 大鼠创伤弧菌脓毒症可导致肺脏损伤,HMGB1的表达增加可能是创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织损伤的机制之一.

Abstract：

Objective To observe the dynamic changes of high mobility group protein B1 ( HMGB1 )expression in the lung of rats with Vibrio vulnificus sepsis so as to unravel the role of HMGB1 in lung injury.Methods Sixty rats of clean grade were randomly divided into normal control group ( A group, n = 10) and Vibrio vulnificus sepsis group (B group, n =50). Sepsis model was made in rats with subcutaneous injection of Vibrio vulnificus with concentration of 6 × 108 cfu/ml in dose of 0. 1 ml/100 g into left lower limb.The rats of group B were sacrificed 1 h, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h after infection for taking lung tissues to detect the water content of lung and to observe the histopathological changes in lung under light microscope.The expression of HMGB1 mRNA and the level of HMGB1 protein in the lungs were detected by RT-PCR and Western blot, respectively. Data were analysed with ANOVA and LSD method for comparison between groups, and P ＜0.05 was considered statistically significant. Results Compared with the group A (0.652±0. 177), the expressions of HMGB1 mRNA in lung of rats of group B were significantly higher in 12 hours (1. 161 ±0.358, P=0.013), 24 hours (1.679 ±0.235, P =0.000) and 48 hours (1.258 ±0.274, P=0.004) and reached the peak in 24 h. Compared with group A (0.594 ±0. 190), the level of HMGB1 protein in rats of group B 6 h after infection ( 1. 408 ± 0. 567, P = 0. 026) was significantly increased (P＜0.05), and it reached peak in 24 h (2.415 ± 1.064, P =0.000) after infection. Compared with group A (0.699 ± 0.054), the lung water contents in rats of group B were significantly increased in 6 h (0.759±0.030, P=0.001), in 12 h (0.767 ±0.023, P =0.000), in 24 h (0.771 ±0.043, P=0.000) and in 48 h (0.789 ±0.137, P=0.000) after infection. Compared with group A, the pathological changes in the lung of rats in group B showed clearly marked pulmonary vascular congestion, interstitial edema and inflammatory cell infiltration, and those changes became more and more serious until alveolar sacs entirely collapsed and the boundaries of the alveolar septa could not be clearly identified in 48 h. Conclusions Vibrio vulnificus sepsis leads to the lung injury of infected rats, and the increase in the expression of HMGB1 mRNA in lung might be one of the mechanisms of lung injury in rats with Vibrio vulnificus sepsis.     

胍丁胺对脓毒症大鼠免疫细胞凋亡的影响

目的:通过建立内毒素诱导的脓毒症大鼠模型,探讨胍丁胺对脓毒症大鼠脾细胞与树突状细胞凋亡的影响。方法:取健康清洁级雄性SD大鼠90只,随机（随机数字法）分为对照组、内毒素组、胍丁胺组,每组30只;对照组经股静脉注射生理盐水（10 mL/kg）、内毒素组经股静脉注射脂多糖（10 mg/kg）、胍丁胺组经股静脉注射脂多糖（10 mg/kg）并同时腹腔注射胍丁胺（200 mg/kg）;三组大鼠于建模后0 h、12 h、24 h分别随机抽取10只（标记为0 h、12 h、24 h亚组）麻醉处死;称取脾脏重量;HE染色观察脾脏病理;流式细胞术检测脾细胞与树突状细胞的总凋亡率;结果运用SPSS 17.0软件进行统计分析,采用独立样本 t检验进行分析,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:内毒素组中12 h（1.2633±0.0652）、24 h亚组（1.5576±0.0711）的脾脏重量（g）与对照组中相应亚组[(0.8876±0.0361)、(0.9079±0.0425)]相比明显升高（ P<0.05）,胍丁胺组中12 h（1.1052±0.0585）、24 h亚组（1.3262±0.0682）的脾脏重量与内毒素组中相应亚组相比明显降低（ P<0.05）;HE染色见内毒素组脾脏组织炎症反应与对照组相比明显加重（ P<0.05）,胍丁胺组与内毒素组相比明显减轻（ P<0.05）;内毒素组中12 h、24 h亚组的脾细胞[(13.31±1.26)、(19.53±1.68)及树突状细胞[(19.5±1.52)、(16.09±1.15)]的总凋亡率与对照组中相应亚组[(6.27±0.71)、(6.01±0.67)及(4.99±0.51)、(5.30±0.66)]相比均明显升高（ P<0.05）,胍丁胺组中12 h [(9.19±0.95)、(12.19±1.25)]、24 h亚组[(12.71±1.19)、(10.76±1.09)]的上述检测指标与内毒素组中相应亚组相比均明显降低（ P<0.05）;内毒素组及胍丁胺组中24 h亚组的脾细胞凋亡率与同组中12 h亚组相比较明显升高（ P<0.05）,而树突状细胞凋亡率与同组中12 h亚组相比较明显降低（ P<0.05）。 结论:脾细胞、树突状细胞的凋亡与脓毒症的发生发展密切相关,胍丁胺可抑制脓毒症大鼠脾细胞、树突状细胞的凋亡。     

乌司他丁对肠源性脓毒症大鼠D-二聚体和蛋白C系统的影响

目的：观察乌司他丁（ulinastatin，UTI）对肠源性脓毒症大鼠D-二聚体（DD）、蛋白C（PS）系统的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为4组，假手术组（SH组，n=36）、脓毒症组（SEP组，n=30）、UTI3h给药组（UTI3h组。n=30）和12h给药组（UTI12h组，n=18）。利用经典盲肠结扎穿孔法建立肠源性脓毒症大鼠模型，分别于正常对照组及制模后6、12、24、48及72h组心脏取血测定DD、PC和蛋白S（PS）。结果：与SH组相比，SEP组大鼠DD在造模后逐渐升高，PC、PS含量降低，差异有显著性（P〈0．05）。与SEP组相比，UTI3h,UTI12h组大鼠的DD降低，PC含量下降趋势减弱，差异有显著性（P〈0．05）。结论：UTI能有效改善脓毒症期间的抗凝抑制和继发性纤溶亢进。     

NGAL、KIM-1、TIMP-2对脓毒症所致AKI早期诊断价值的前瞻性临床队列研究

目的评估血浆中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（pNGAL）、尿中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（uNGAL）、尿肾损伤分子-1（KIM-1）和尿金属蛋白酶抑制物-2（TIMP-2）对脓毒症急性肾损伤（AKI）的早期诊断价值。 方法收集2015年6月至2016年1月期间入住苏北人民医院重症医学科（ICU）的脓毒症患者,连续观察72 h,以是否出现AKI进行分组,即脓毒症AKI组及脓毒症非AKI组,收集各组患者的一般资料,入ICU时（0 h）,入ICU后6、12、24、48、72 h时的外周静脉血及尿液样本,并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各时刻pNGAL、uNGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2的表达水平,绘制受试者工作特征（ROC）曲线,计算曲线下面积（AUC）,评价pNGAL、uNGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2对脓毒症AKI的早期诊断价值。 结果研究期间共有522例患者入住我院ICU,最终纳入符合研究标准的脓毒症患者共90例,其中38例发生AKI,占42.22%。脓毒症AKI组患者pNGAL、uNGAL水平在入住ICU后6 h开始升高（P<0.05）,12 h开始明显升高,24 h达到峰值,在6、12、24、48、72 h时pNGAL浓度明显高于同时刻脓毒症非AKI组患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。脓毒症AKI组患者尿KIM-1、尿TIMP-2水平在入住ICU后6 h开始升高（P<0.05）,12 h开始明显升高并达到峰值,在6、12、24、48、72 h时尿KIM-1水平明显高于同时刻脓毒症非AKI组患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。ROC曲线显示pNGAL、uNGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2的ROC的AUC分别为0.862、0.858、0.788、0.771,其诊断截断值分别为119.30、120.36、90.07、3299.50 ng/L。各时间点绘制ROC曲线显示,在T-12 h时,pNGAL、尿KIM-1及尿TIMP-2的ROC的AUC分别为1.00、0.96、0.92,在T-18 h时,uNGAL的ROC的AUC为0.95。 结论脓毒症AKI患者pNGAL、uNGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2表达水平明显早于血肌酐升高,早于AKI临床诊断标准,有望用于脓毒症AKI的早期诊断。     

Regulation of local availability of active tissue-type plasminogen activator in vivo in man.

Free, biologically active tissue-type plasminogen activator (tPA) is the main initiator of intravascular fibrinolysis, but little is known about the regulation of active tPA on the organ level. The aim was to investigate if the local availability of active tPA on the organ level depends on the local release rate of tPA or the arterial input of tPA and plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1). Also, we wanted to evaluate if plasma levels predict capacity for endothelial release of fibrinolytic proteins. Invasive perfused-forearm studies were performed in 96 healthy subjects. Local release rates of fibrinolytic proteins were assessed at baseline and during endothelial stimulation. Stimulation by methacholine and desmopressin induced a 6- and 12-fold increase in total tPA release rates, respectively. With increasing local release rates of tPA a gradually closer correlation emerged between the total tPA secretion and the forearm output of active tPA (from r = 0.102, ns to r = 0.85, P < 0.0001). Forearm availability of active tPA was not related to arterial input of either tPA or PAI-1. Release rates and plasma levels of tPA were not correlated. Baseline release rates of active tPA increased to noon. The major determinant for the local availability of active tPA is the capacity of the endothelium to release tPA rather than the arterial input of PAI-1 or tPA. Despite a molar excess of PAI-1, the majority of tPA released during stimulation does not undergo local inactivation. The capacity to release tPA locally cannot be predicted from its plasma concentration.