pEGFP-N1-TGF-β1重组质粒对结肠癌细胞增殖、细胞周期及侵袭性的影响

目的探讨在体外转化生长因子β1(TGF-β1)的真核表达载体对结肠癌细胞增殖?细胞周期及侵袭性的影响。方法将构建的重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1转染入结肠癌细胞系SW480中,应用荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测TGF-β1基因的表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析SW480细胞周期变化;Transwell侵袭实验验证TGF-β1对细胞侵袭能力的影响。结果转染重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot检测到TGF-β1基因的转录及蛋白表达增强(P0.05);细胞周期分析显示TGF-β1使细胞停留在G1期,S期细胞明显减少(P0.05),且SW480细胞的增殖受到明显抑制;Transwell侵袭实验显示:SW480细胞的侵袭能力明显增强(P0.01)。结论TGF-β1能抑制SW480细胞的增殖,使细胞停留在G1期,但同时能增强其侵袭能力。其作用可能与免疫抑制/逃逸、增加血管生成以及增加肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用有关。     

骨桥蛋白抑制FHIT表达促进结肠癌细胞增殖存活

目的构建骨桥蛋白(OPN)基因真核表达载体,转染人结肠癌细胞SW480,研究其对SW480细胞增殖及生存能力的作用机制。方法构建重组表达载体pEGFP-N1/OPN,转染人结肠癌SW480细胞。采用RT-PCR及免疫印迹法(Westernblotting)分别检测SW480细胞OPN基因及蛋白表达量;Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力。Western blotting检测脆性组氨酸三联体基因(FHIT)和蛋白激酶B(PKB/Akt)蛋白在SW480细胞中的表达。结果重组质粒pEGFP-N1/OPN转染SW480后,OPN基因获得很好转录,OPN蛋白表达增高,细胞增殖率(光吸收值)显著高于转染阴性组(P<0.05),细胞软琼脂克隆形成速度增快,数量明显多于对照组和空载体组(P<0.05);FHIT蛋白在实验组表达降低,Akt蛋白在各组中的表达无显著性差异。结论 OPN基因通过抑制FHIT基因表达,促进SW480细胞增殖、独立存活能力。     

IFITM1对结肠癌SW480细胞增殖和黏附的影响

目的:研究干扰素诱导的跨膜蛋白1(IFITM1)对结肠癌细胞SW480增殖和异质黏附的影响. 方法:构建pEGFP-C3/IFITM1 重组质粒,重组质粒转染结肠癌细胞株SW480,G418筛选获得亚克隆细胞株,用激光共聚焦扫描检查绿色荧光蛋白. 生长曲线法检测细胞的增殖,细胞黏附实验检测细胞的黏附性. 结果: pEGFP-C3/ IFITM1重组质粒的测序序列与IFITM序列完全一致,重组质粒转染SW480细胞后,通过G418持续压力筛选获得亚克隆细胞株IFITM1/SW480. 激光共聚焦显微镜检查结果显示表达的绿色荧光蛋白位于IFITM1/SW480的细胞膜上,提示转染后IFITM1正确表达. 细胞生长曲线显示转染后的IFITM1/SW480细胞增殖活性比对照组增殖活性明显降低. IFITM1/SW480细胞黏附数30,60 min分别为(3.93±0.08)×103和(6.10±0.21)×103,而对照组 pEGFP-C3/SW480细胞黏附数30,60 min分别为(4.61±0.25)×103, (7.17±0.22)×103,IFITM1/SW480细胞黏附数比对照组细胞黏附数显著降低(P＜0.05). 结论:IFITM1可抑制SW480细胞体外增殖和异质型黏附.     

转化生长因子β1基因转染对结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用.方法:以腺病毒为载体将人TGF-β1基因导入体外培养的人结肠癌细胞株SW480, 应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SW480细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及mRNA的表达情况.通过MTT法检测转染后细胞增殖的抑制情况.结果:转染hTGF-β1基因后,与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA在细胞中的表达均增强.SW480的增殖受到明显抑制(P<0.05),抑制率为60%～80%.结论:转染hTGF-β1基因对体外培养的结肠癌细胞SW480的增殖有明显抑制作用.     

人钠/碘转运体基因转染结肠癌SW480细胞及相关蛋白表达的检测

目的以重组人钠/碘转运体（hNIS）基因转染结肠癌SW480细胞并检测hNIS mRNA及蛋白的表达,为放射性碘治疗非甲状腺肿瘤提供新思路。方法将构建好的重组质粒（pcDNA3.1+-hNIS）进行酶切、测序鉴定并扩增、提取。SW480细胞分为重组质粒（pcDNA3.1+-hNIS）转染组、空白质粒（pcDNA3.1+）转染组、空白对照组,转染后以RT-PCR和Western blot检测各组细胞hNIS mRNA和蛋白的表达。结果酶切和测序结果显示插入的hNIS基因大小和方向均正确。RT-PCR和Western blot显示重组质粒转染组SW480细胞可见hNIS mRNA和蛋白的表达,而空白对照组和空白质粒转染组均未检测到hNIS mRNA和蛋白的表达。结论脂质体法可有效地将hNIS基因转染至SW480细胞并成功表达hNIS蛋白。     

Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480

目的 构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系。方法 提取正常人体胎盘组织总RNA,PCR扩增人野生型 Smad4基因,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建pcDNA3.1(+)-Smad4重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定,脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480,G418筛选稳定表达株,RT-PCR方法检测其mRNA表达水平。结果 Smad4基因的PCR电泳结果显示在1 700bp左右有一明显亮带,连接载体后经鉴定证实为人Smad4-cDNA;稳定转染Smad4基因的SW480细胞RT-PCR结果提示Smad4的mRNA表达水平比对照细胞组明显升高。结论 成功扩增野生型Smad4基因,构建Smad4真核表达质粒,并筛选出Smad4基因稳定表达的SW480结肠癌细胞系。     

高表达Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨高表达Kiss-1基因对结肠癌SW480细胞增殖及迁移的影响.方法 将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480细胞设为实验组,将pEGFP-N1质粒转染至SW480细胞设为阴性对照组,将SW480细胞设为空白对照组,采用Western blot法检测各组细胞中Kiss-1表达量;采用CCK-8法分析Kiss-1对SW480细胞增殖的影响;并用划痕实验评估Kiss-1对SW480细胞迁移能力的影响.结果 将pEGFP-N1和pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,检测实验组Kiss-1表达量增加,实验组细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05),且实验组细胞划痕损伤愈合的速度明显下降.结论 高表达Kiss-1可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,降低细胞迁移速度.     

过表达CCR9对SW480结肠癌细胞侵袭的影响

目的初步探讨人CCR9基因对SW480结肠癌细胞侵袭功能的影响。方法取人外周血单个核细胞提取总RNA逆转录为c DNA,扩增提取CCR9的CDS序列,连接p LVX-puro质粒,Lipo2000感染人SW480结肠癌细胞,嘌呤霉素筛选并建立稳定转染细胞株。免疫印迹证实CCR9基因在SW480结肠癌细胞高效表达。Transwell方法检测SW480结肠癌细胞侵袭。结果免疫印迹证实成功构建p LVX-puro-CCR9质粒,相比SW480细胞组,CCR9过表达SW480结肠癌细胞中CCR9显著表达[(26.0±10.7)vs(10.0±4.5),n=8,P=0.0078],且在体外能够促进SW480结肠癌细胞侵袭(P=0.0136)。结论成功构建CCR9稳定表达结肠癌细胞株,并能够在体外显著促进其侵袭功能。     

pCS2-MT/Axin及pEG FP-N3/APC重组质粒在结肠癌细胞系SW480中的表达

目的 在结肠癌细胞系SW480中成功表达Axin和APC基因片段.方法 双酶切鉴定重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5,利用脂质体介导法将质粒共转染结肠癌细胞系SW480,RT-PCR鉴定细胞中目的 基因APC和Axin mKNA的表达,western blotting鉴定标签蛋白GFP和myc的表达.结果 重组质粒双酶切得到的片段大小与预期相符,质粒共转染SW480后,RT-PCR检测到目的 基因APC和AxinmKNA的表达,western blotting检测到标签蛋白GFP和myc的表达.结论 重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5在结肠癌细胞中成功表达,为下一步研究APC和Axin基因在细胞内的功能奠定了实验基础.     

STAT3基因沉默对结肠癌细胞SW480凋亡的影响

目的:探讨转染信号传导和转录激活子3(STAT3)的短发夹RNA(shRNA)对结肠癌细胞SW480凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法:设计、构建针对STAT3的shRNA真核表达载体,脂质体法转染SW 480细胞,MTT法观察细胞增殖情况,流式细胞仪检测检凋亡,QRT-PCR检测STAT3、Bcl-2、Caspase-3mRNA的变化。结果:成功构建了携带STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确。重组质粒转染结肠癌细胞后,细胞增值活性明显减弱,细胞阻滞于G1→S期,并出现早期凋亡。重组质粒转染组STAT3 mRNA的表达与对照组相比明显减弱(P<0.01),同时Bcl-2表达增强、Caspase-3mRNA表达减弱(P<0.05)。结论:STAT3 shRNA能抑制结肠癌细胞的增值,促进其凋亡,其促凋亡机制可能与STAT3基因沉默后影响Bcl-2、Caspase-3凋亡基因的表达有关。     

外源性FHIT基因对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响

目的：研究三联脆性组氨酸基因（fragile histidine triad，FHIT）对胃癌细胞株MGC 803增殖与凋亡作用的影响，并探讨FHIT基因的抑癌机制。方法：通过脂质体介导把质粒pRC/CMV-FHIT及pRC/CMV转染到有FHIT基因表达缺失的胃癌细胞株MGC-803，用G418对转染后细胞进行筛选，用Western blot对获得G418抗性的细胞进行FHIT基因表达的鉴定。用MTT法、克隆形成试验及流式细胞术观察转染前后细胞生长特性的变化。 结果：转染FHIT基因的MGC-803细胞有外源性FHIT基因的表达，其增殖活性减弱、克隆形成能力降低、凋亡率增加、生长周期出现明显的G₀/G₁期阻滞,且与对照组差异均有统计学意义。结论：向胃癌细胞中导入外源性FHIT基因可以抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡并引起细胞生长周期阻滞。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

p16基因克隆及其对结肠癌细胞SW480生长的抑制作用

目的探讨p16基因对结肠癌细胞生长的抑制作用。方法采用亚克隆技术将p16基因克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,Lipofectamine法将p16基因转染入结肠癌细胞株SW480。采用MTT法检测未转染细胞(SW480组)、转染空质粒细胞(SW480-GFP组)和转染p16细胞(SW480-p16组)培养24、48和72 h后细胞的增殖率;Real-Time PCR和Western blotting分别检测3组细胞的p16、CDK4、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况。结果 p16基因克隆入真核表达载体,并成功转染结肠癌细胞后,在基因和蛋白质水平均有外源性p16基因表达,与SW480组比较,相对表达量均有显著增加(P<0.01)。MTT检测结果显示:培养48 h和72 h后,SW480-p16组的细胞相对增殖率均显著低于SW480组和SW480-GFP组(P<0.01)。Real-Time PCR检测结果显示:SW480-p16组的p16 mRNA相对表达量接近SW480-GFP组的2.38倍,接近SW480细胞的2.59倍,差异具有统计学意义(P<0.01);SW480-p16组的cyclin...     

Construction of Recombinant Adenovirus Carrying GRIM19 and Its Effect on SW480 Cells

In order to examine the effect of GRIM19 on colon cancer cell SW480, the recombinant adenovirus carrying GRIM19 gene was constructed and transfected into SW480 cells. GRIM19 cDNA was amplified by PCR with the template pcxn2-GRIM19 and cloned into the shuttle plasmid pAdTrack-CMV. The plasmid pAdTrack-CMV-GRIM19 was linearized by PmeⅠ and homologously recombined with bone plasmid pAdEasy-1 in BJ5183, followed by identification by enzyme digestion. After transfection of linearized pAd-GRIM19 with PacⅠ into HEK293 cells, Ad-GRIM19 was obtained and amplified by 3 circles. SW480 cells were infected with Ad-GRIM19. The apoptosis rate was detected by flow cytometry. Agarose electrophoresis revealed the bands of recombinant plasmids identified by enzyme digestion were in the right range corresponding with expectation. Under the fluorescent microscopy, the package of Ad-GRIM19 in HEK293 cells and the expression of Ad-GRIM19 in SW480 cells were observed. The transfection of Ad-GRIM19 into SW480 cells increased the apoptosis rate of SW480 cells as compared with controls, It was concluded that Ad-GRIM19 was successfully constructed and the overexpression of GRIM19 in colon cancer cell lines could promote the apoptotic cell death.     

FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附的影响

目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05),但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

LEF-1截短型基因真核荧光表达载体的构建及其在SW480细胞系中的功能研究

目的 构建LEF-1截短型基因的真核表达荧光质粒,在真核细胞中表达,并检测其对人结肠癌细胞系SW480增殖和凋亡的影响.方法 利用PCR方法从人淋巴结cDNA文库中克隆LEF-1截短型的编码基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1中,同时插入红色荧光示踪片段mRFP.用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-LEF-1-mRFP瞬时转染Hela细胞,通过Western blot和流式细胞仪检测LEF-1截短型的表达,同法瞬时转染SW480细胞,观察细胞形态变化,MTT检测对细胞生长的影响,CSFE染色检测细胞的增殖情况,Annexin V方法检测细胞凋亡情况,PI染色检测细胞周期.结果 克隆LEF-1截短型的编码基因,经测序比对证实与GenBank中给出的序列一致,以含有LEF-1截短型的编码基因的真核表达荧光载体瞬时转染Hela细胞.LEF-1截短型基因的表达产物通过Westemblot和流式细胞仪方法得到证实,转染SW480细胞.光镜下观察发现部分细胞中出现颗粒,失去正常形态,细胞数目明显减少;MTT检测显示细胞活性下降,流式检测显示细胞增殖受到抑制,凋亡水平增加,细胞在G_(0/1)期发生阻滞.结论 成功构建LEF-1截短型的编码基因的真核荧光表达载体,证实其在真核细胞HeM中可以表达.同时可以抑制SW480细胞的活性和增殖,促进其凋亡,细胞被阻滞在G_(0/1)期,

Abstract：

Objective To construct a eukaryotic fluorescent expression vector of truncated lymphoid enhancer-binding factor 1 (LEF-1) gene and investigate its effect on the proliferation and apoptosis of human colonic carcinoma cell line SW480. Methods Truncated LEF-1 gene was obtained by PCR and DNA recombination from human lymphoid node cDNA library. The PCR product of LEF-1 gene was inserted into the plasmid pMD-18T and sequenced. The truncated LEF-1 gene was inserted into the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 and fused with mRFP for tracing. Using Lipofectamine~(TM) 2000, the plasmid pcDNA3.1 -LEF-1 -mRFP was transfected into Hela cells and detected by Western blotting and fluorescence activated cell sorting (FACS). The changes in the growth, proliferation and apoptosis of the SW480 cells were observed after transfection with the plasmids. Results The truncated LEF-1 gene was successfully cloned. After transfection with the plasmid pcDNA3.1-LEF-1-mRFP, the Hela cells expressed the product of LEF-1 as detected by Western blotting and FACS. The growth and proliferation of SW480 cells was inhibited and the cell apoptosis increased after transfection with the plasmid pcDNA3.1-LEF-1-mRFP, which also caused cell cycle arrest in G_(0/1) phase. Conclusion The eukaryotic expression fluorescent vector pcDNA3.1-LEF-1-mRFP has been constructed and expressed in eukaryotic cell line successfully. The truncated LEF-1 protein expressed in the transfected SW480 cells results in inhibition of the cell growth and proliferation with increased cell apoptosis and cell cycle arrest in G_(0/1) phase.     

PAK1基因对大肠癌细胞体外侵袭能力的影响

目的 研究p21-activated kinase-1(PAK1)基因对大肠癌细胞系体外侵袭能力的影响.方法 把重组p21活化蛋白激酶1质粒用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和空载体对照组.于转染后48 h采用免疫印迹方法检测PAK1的蛋白表达水平,Boyden小室模型检测大肠癌细胞SW480在转染重组PAK1基因质粒后侵袭能力的变化.结果 SW480细胞转染p21活化蛋白激酶1重组质粒后,与空白对照和空载体对照相比,PAK1蛋白水平明显增加,细胞的体外侵袭能力增强.结论 转染pPAK1重组质粒能够有效上调PAK1基因,增强大肠癌细胞系体外侵袭潜能,提示PAK1基因高表达可能与大肠癌细胞的侵袭和转移等生物学行为相关.

Abstract：

Objective To observe the effect of p21-activated kinase-1(PAK1)gene transfection on the invasiveness of human colorectal carcinoma SW480 cells in vitro.Methods SW480 cells in routine culture were transfected with the recombinant plasmid EGFP-C1/PAK1 via Lipofectamine~(TM) 2000.The expression of PAK1 protein in SW480 cells was detected using Western blotting,and the changes of the invasiveness of SW480 cells were evaluated using Boyden chamber invasion assay.Results Forty-eight hours after transfection with pEGFP-C1/PAK1,the PAK1 protein expression increased significantly in comparison with those in negative and vector control groups.The invasiveness of the SW480 cells was significantly enhanced after the transfection. Conclusion The PAK1 gene transfection call increase the expression of PAK1 in SW480 cells and enhance the invasiveness of the cells.PAK1 can be associated with the invasiveness and metastasis of colorectal carcinoma cells.     

miRNA-451对结肠癌细胞侵袭力的影响研究

目的分析miRNA-451（miR-451）对结肠癌细胞SW480的影响,探讨miRNA-451对结肠癌细胞侵袭力的作用价值。方法化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染SW480细胞,分为miR-451转染组、无关序列转染组及对照组（未处理）,荧光染料标记法检测转染效率,细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞凋亡情况以及Transwell小室检测侵袭能力情况。结果 miRNA-451对结肠癌细胞SW480的增殖能力和凋亡情况无显著影响,但是对其侵袭力具有显著的抑制作用。结论 miR-451mimics对结肠癌细胞系SW480具有抑制作用,对结肠癌细胞侵袭力具有抑制效果,值得临床深入研究。     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.