左归丸调控Cx43对血清饥饿诱导MC3T3-E1细胞凋亡的保护作用

目的:论证左归丸含药血清抗MC3T3-E1细胞凋亡的机制与其调控Cx43表达及功能有关。方法:将培养细胞分为:正常A组、对照B组、左归丸含药血清C组。后两组采用血清饥饿法诱导细胞凋亡。流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot法检测Caspase3蛋白表达;RT-PCR、Western blot法分别检测Cx43mRNA、蛋白表达;免疫荧光染色检测细胞爬片Cx43蛋白分布及定量;放免法检测细胞上清液c AMP含量。结果:左归丸可明显降低血清饥饿诱导的细胞凋亡、减少caspase3蛋白表达,B、C组比较P0.01或P0.05。血清饥饿还导致Cx43mRNA及蛋白表达、蛋白荧光分布及MOD值、细胞上清液c AMP含量显著减少,而左归丸可显著提高上述指标,B、C组比较P0.05。结论:左归丸含药血清通过调控Cx43表达及功能,发挥抗MC3T3-E1细胞凋亡的保护作用。     

沉默Cx43基因对左归丸促MC3T3-E1细胞分化作用的影响

目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用的影响。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,将培养细胞分为正常对照A组、含药血清B组、基因沉默C组。细胞培养第3、5、7、9天进行ALP活性测定、第21天矿化结节茜素红染色,进行组间对比。结果:左归丸含药血清可以促进MC3T3-E1细胞的分化,与A组比较:ALP活性增强,其中第5、7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积增加(P0.01)。C组与B组比较:ALP活性降低,其中第7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积明显减少(P0.05)。结论:沉默细胞Cx43基因导致左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用明显下降。     

JNK通路对左归丸含药血清调控MC3T3 成骨细胞Runx2 mRNA表达的影响

目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01);SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.     

六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

左归丸含药血清对BMSCs成骨分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响

目的:研究左归丸含药血清对培养大鼠BMSCs成骨向诱导分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响。方法:密度梯度离心法制取BMSCs培养传代,通过血清药理学方法,设立正常对照A组、左归丸含药血清B组、缝隙连接阻滞C组。培养过程中进行细胞形态学观察;第14天分别采用RT-PCR、FRAP技术检测Cx43、β-catenin、BGPmRNA表达及细胞GJIC功能;第21天茜素红染色检测矿化结节形成情况。结果:左归丸含药血清能明显促进Cx43、β-catenin、BGPmRNA表达,与A组比较,P0.05;加用AGA后,Cx43、β-cateninmRNA表达无明显影响,而BGPmRNA明显下降,与B组比较,P0.05。FRAP检测镜下观察B组细胞内荧光恢复明显,其平均荧光恢复率与A、C组比较差异显著,P0.01。钙结节相对面积定量分析,B组显著高于A、C组,P0.05。结论:左归丸含药血清能增强BMSCs成骨向诱导分化过程中Cx43表达及GJIC功能,并与β-catenin、BGP基因在此过程中发挥协同作用。这可能是其促进BMSCs成骨分化成熟的重要机制。     

补肾活血固齿方对大鼠MC3T3-E1细胞BMP2表达及超微结构的影响

目的:研究补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)BMP2表达及超微结构的影响,探讨该方剂治疗牙周炎的作用机理。方法:MC3T3-E1细胞分别于补肾活血固齿方含药血清、无药血清中培养24、48、72 h,ELISA法检测MC3T3-E1细胞BMP2的表达;培养14 d后,透射电镜观察MC3T3-E1细胞超微结构的变化。结果:含药血清组培养上清液的光密度值明显高于无药血清组,统计结果显示差异有显著性(P0.05)。MC3T3-E1细胞经药物作用后呈现成骨细胞样表型,细胞表面突起变多,核卵圆形、较大,核膜凹陷,核仁明显;胞质丰富,粗面内质网扩张明显,网腔内充满低电子密度絮状物;高尔基复合体、线粒体发达,具有良好的的分泌功能,细胞代谢活跃。结论:补肾活血固齿方能促进MC3T3-E1细胞分泌BMP2,参与诱导成骨作用;补肾活血固齿方能诱导MC3T3-E1细胞呈成骨细胞样表型,促进成骨细胞的分化生长。     

温胆汤含药血清对谷氨酸条件下星形胶质细胞Cx43和GJIC功能的影响

目的:探讨温胆汤含药血清在10μmol/ml谷氨酸条件下对星形胶质细胞细胞缝隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法:将40只清洁级SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20 mg/kg组、温胆汤40 g/kg组、温胆汤30 g/kg组、温胆汤20 g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平20 mg/kg组ig氯氮平20 mg/kg,温胆汤40、30、20 g/kg组分别ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。星形胶质细胞在10μmol/ml谷氨酸条件下经含药血清处理,即10μmol/ml谷氨酸对照组、正常鼠血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40、30g、20 g/kg血清组,处理24、36、48 h后,采用细胞划痕染料标记示踪技术(scrape-loading and dye transfer,SLDT),以荧光染料在细胞间的扩散程度作为评价缝隙连接通讯的指标;Western blotting法检测星形胶质细胞中Cx43磷酸化和非磷酸化的表达。结果:10μmol/ml谷氨酸条件下,星形胶质细胞24h之后细胞凋亡数量明显,36h之后80%以上细胞处于凋亡坏死状态;划痕染料标记示踪技术直接检测GJIC中,温胆汤40、30 g/kg血清组在3个时间段不同程度的明显增加细胞GJIC,温胆汤20 g/kg血清组只在36h时间段增加细胞GJIC;10μmol/ml谷氨酸条件下,温胆汤40 g/kg含药血清使Cx43磷酸化下调和非磷酸化升高。结论:温胆汤含药血清可减少星形胶质细胞的凋亡;促进星形胶质细胞细胞缝隙连接通讯(GJIC);下调星形胶质细胞Cx43磷酸化,升高Cx43非磷酸化程度,从而对细胞缝隙连接通讯功能具有促进作用,这可能与其引起细胞内Cx43的异常活化有关。     

左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究

目的 探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响.方法 选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平;孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性;孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01);与左归丸组比较,左归丸加 SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14d的矿化结节的促进作用(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路.     

接骨1号方含药血清对MC3T3-E1细胞NF-κb信号通路的影响

目的:通过研究接骨1号方含药血清对MC3T3-E1细胞NF-κb信号通路的影响,探讨接骨1号方促进骨折愈合的可能机制。方法:分别以接骨1号方高、中、低剂量、阳性对照药补佳乐和生理盐水予大鼠灌胃以制备大鼠含药血清,共5组,分别为JG1-H组、JG1-M组、JG1-L组、Est组、Control组,对MC3T3-E1细胞进行干预,7 d后,观察细胞形态,并采用RealTime RT-PCR法检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κb(Nuclear factorκb,NF-κb)mRNA表达,用Western blot法检测OPG、TNF-α和NF-κb蛋白的表达。结果:JG1-M组与Est组MC3T3-E1细胞OPG mRNA和蛋白表达水平均显著高于Control组(P0.01)。JG1-M组MC3T3-E1细胞TNF-α和NF-κb mRNA和蛋白的表达均水平低于Control组(P0.01)。结论:接骨1号方含药血清可能通过调控NF-κb信号通路促进MC3T3-E1细胞的成骨分化;接骨1号方可能通过抗炎促进骨折愈合。     

葛根素对3T3-L1前脂肪细胞分化及胰岛素抵抗模型糖代谢的影响

目的:研究葛根素(Pur)对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响,以及在胰岛素抵抗状态下对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢的影响。方法:不同浓度Pur干预3T3-L1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响;油红O染色法检测其对前脂肪细胞分化过程及成脂的影响;地塞米松诱导3T3-L1细胞建立胰岛素抵抗模型,用不同浓度Pur进行干预,测定细胞的葡萄糖消耗量。结果:Pur(3～300μmol/L)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无明显影响;Pur(30～300μmol/L)促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,且具有量效关系。结论:Pur能够促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,改善胰岛素抵抗。     

An efficient conversion of (3R,3'R,6'R)-lutein to (3R,3'S,6'R)-lutein (3'-epilutein) and (3R,3'R)-zeaxanthin

Two dietary carotenoids, (3R,3'R,6'R)-lutein (1) and (3R,3'R)-zeaxanthin (2), and their metabolite (3R,3'S,6'R)-lutein (3'-epilutein) (3) accumulate in human serum, milk, and ocular tissues. There is increasing evidence that compounds 1 and 2 play an important role in the prevention of age-related macular degeneration. Therefore, the availability of these carotenoids for metabolic studies and clinical trials is essential. Compound 1 is isolated from extracts of marigold flowers (Tagete erecta) and is commercially available, whereas 2 is only accessible by a lengthy total synthesis, and a viable method for synthesis of 3 has not yet been developed. This report describes an efficient conversion of technical grade 1 to 2 via 3. Acid-catalyzed epimerization of 1 yields an equimolar mixture of diastereomers 1 and 3. The mixture was separated by enzyme-mediated acylation with lipase AK from Pseudomonas fluorescens that preferentially esterified 3 and after alkaline hydrolysis yielded this carotenoid in 90% diastereomeric excess (de). Compound 3 was also separated from 1 in 56-88% de by solvent extraction and low-temperature crystallization, Soxhlet extraction, or supercritical fluid extraction. Base-catalyzed isomerization of 3 gave 2 in excellent yield, providing a convenient alternative to the total synthesis of this important dietary carotenoid.     

(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇的合成工艺研究

目的 对(2S,3R)- 1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇合成工艺进行研究.方法 以3-戊酮为起始原料,经Mannich反应、手性拆分、Grignard反应等步骤合成(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇,并对化学拆分进行工艺优化.结果 合成(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇,总收率为30.6％.结论 工艺改进后提高了目标产物的收率,同时也减少了原料的浪费.     

芦丁对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用

目的探索芦丁对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用3T3-L1前脂肪细胞分化模型和油红O染色法,选用罗格列酮作为阳性对照药,观察芦丁对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用,于510 nm波长下测定芦丁对脂含量的影响。利用流式细胞仪测定芦丁对分化的脂肪细胞吸收葡萄糖的影响。结果芦丁在0.5μmol/L和1μmol/L两个浓度下均能促进3T3-L1前脂肪细胞分化过程,提高脂含量,并促进了葡萄糖吸收。结论芦丁能够促进3T3-L1前脂肪细胞分化,并促进了分化的脂肪细胞吸收葡萄糖。     

Salacia reticulata inhibits differentiation of 3T3-L1 adipocytes

Aim of the study

The purpose of this study was to define antidiabetic effects of fruit of Vaccinium arctostaphylos L. (Ericaceae) which is traditionally used in Iran for improving of health status of diabetic patients.

Materials and methods

Firstly, we examined the effect of ethanolic extract of Vaccinium arctostaphylos fruit on postprandial blood glucose (PBG) after 1, 3, 5, 8, and 24 h following a single dose administration of the extract to alloxan-diabetic male Wistar rats. Also oral glucose tolerance test was carried out. Secondly, PBG was measured at the end of 1, 2 and 3 weeks following 3 weeks daily administration of the extract. At the end of treatment period the pancreatic INS and cardiac GLUT-4 mRNA expression and also the changes in the plasma lipid profiles and antioxidant enzymes activities were assessed.Finally, we examined the inhibitory activity of the extract against rat intestinal α-glucosidase.

Results

The obtained results showed mild acute (18%) and also significant chronic (35%) decrease in the PBG, significant reduction in triglyceride (47%) and notable rising of the erythrocyte superoxide dismutase (57%), glutathione peroxidase (35%) and catalase (19%) activities due to treatment with the extract. Also we observed increased expression of GLUT-4 and INS genes in plant extract treated Wistar rats. Furthermore, in vitro studies displayed 47% and 56% inhibitory effects of the extract on activity of intestinal maltase and sucrase enzymes, respectively.

Conclusions

Findings of this study allow us to establish scientifically Vaccinium arctostaphylos fruit as a potent antidiabetic agent with antihyperglycemic, antioxidant and triglyceride lowering effects.     

Effect of ginsenosides Rg3 and Re on glucose transport in mature 3T3-L1 adipocytes

Ginsenosides, the active component of Panax ginseng, have been shown to evidence a variety of biological activities associated with hyperglycemia, obesity and type 2 diabetes mellitus. This study evaluated the effects of the ginsenosides, Rg3 and Re, on glucose uptake and the glucose transport system in mature 3T3‐L1 cells. The results demonstrated that the glucose uptake of ginsenosides Rg3 and Re at concentrations of 1–10 µM significantly increased by approximately ～10% and ～12%, respectively. Furthermore, the glucose transporter 4 (GLUT4) mRNA expression of ginsenosides Rg3 and Re at 10 µM was increased by approximately ～1.73 and 1.43 fold, respectively. It was further confirmed in a series of experiments that ginsenosides Rg3 and Re stimulated the mRNA expression of insulin receptor substrate (IRS‐1) and the expression of phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3K)‐110α protein, which is involved in downstream events in the insulin signaling pathway. These findings demonstrate that ginsenosides Rg3 and Re may stimulate glucose uptake via the PI3K pathways involving IRS‐1. Further, our results suggest that both of these ginsenosides might prove useful as effective antidiabetic and antihyperglycemic agents. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

14-3-3蛋白在神经系统疾病中的研究进展

14—3—3蛋白发现于1967年，在脑组织中大量表达，已经在不同的神经系统疾病患者的脑脊液中检测到这种蛋白。最初认为14—3—3蛋白与促癌基因蛋白和信号蛋白有关，神经递质合成的一种介质，25年后发现14—3—3蛋白在细胞中发挥重要的作用。14—3—3蛋白存在于所有的真核生物细胞中，由于14-3-3蛋白能和100多种分子相互作用，因此，14—3—3蛋白参与调节许多蛋白的活动，如细胞周期蛋白、转录调控蛋白、信号转导蛋白、细胞内交通蛋白和离子通道蛋白的调节。这些相互作用的研究在某些过程如凋亡和神经变性疾病之中也发挥着重要的作用。