慢性乙型肝炎肝组织表达FasL蛋白,mRNA及Fas的实验研究

目的研究ＦａｓＬ、Ｆａｓ在慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）肝组织中的表达及意义。方法采用ＦａｓＬ多克隆抗体、人工合成ＦａｓＬ寡核苷酸探针对ＣＨＢ及ＨＢＶ慢性携带者肝组织进行免疫组化和原位杂交检测。部分组织同时检测Ｆａｓ抗原。结果肝组织浸润单个核细胞及肝细胞都不同程度检测出ＦａｓＬ蛋白及其ｍＲＮＡ，表达程度随肝脏炎症坏死程度加重而增加。ＦａｓＬ、Ｆａｓ阳性肝细胞分布及表达程度有一致性。结论经ＦａｓＬ、Ｆａｓ介导的细胞凋亡机制在ＣＨ致病中起重要作用，不仅存在ＣＴＬｓ介导的细胞免疫作用，肝细胞也可能通过表达ＦａｓＬ发生细胞自杀和同胞相杀     

慢性肝病患者外周血细胞凋亡配体的表达及意义

慢性肝病患者外周血细胞凋亡配体的表达及意义陈乃玲刘倩邓涛张晓红陈天宝武珊珊病毒性肝炎时，除细胞坏死外，在肝细胞表达的Ｆａｓ和在细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬｓ）表达的Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）发生作用，导致凋亡也是机体清除病毒的重要原因。ＦａｓＬ的表达不限于ＣＴ...     

病毒性肝炎与肝细胞凋亡

病毒性肝炎与肝细胞凋亡骆抗先，朱幼芙一、Ｆａｓ／ＦａｓＬ与细胞凋亡肝炎病变主要是细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）介导的细胞毒效应，可以基于Ｆａｓ的凋亡或者基于穿孔素的坏死，都可经特异抗原激发［１］。ＣＴＬ介导的两种细胞毒效应是各自独立的：表达Ｆａｓ的靶细胞凋...     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中FasL的表达

Ｆａｓ(ＣＤ95 )和ＦａｓＬ(ＣＤ95Ｌ)是近年来发现的一对介导细胞凋亡的细胞表面分子 ,在慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)患者的肝脏浸润淋巴细胞中可以检出ＦａｓＬ。一般认为 ,ＦａｓＬ的表达与肝脏炎症活动程度呈正相关 ,即肝脏的炎症活动性越强 ,ＦａｓＬ表达亦越强[1] 。我们采用流式细胞仪检测慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中ＦａｓＬ表达阳性细胞的百分率 ,以期为肝病的预后判断及指导治疗提供一个客观而简便快速的检测方法。材料及方法一、研究对象慢性乙型肝炎病例均选自第二军医大学长征医院1998年 5月至 1999年 4月的住院患者 ,共 5 2…     

丙型肝炎肝组织Fas配体的免疫组化研究

以免疫组化法研究Ｆａｓ配体（Ｌ）在丙型肝炎病人肝组织内的表达情况，发现在碎屑样坏死（ＰＮ）、桥样坏死（ＢＮ）及灶性坏死性浸润的单个核细胞有明显的ＦａｓＬ表达，阳性率为４１．２％。ＦａｓＬ阳性细胞与肝脏炎症分级程度密切相关，Ｇ０－１组与Ｇ３－４组比较有显著差异。ＦａｓＬ在肝细胞内亦有表达，表达程度似与炎症程度有关。不论是Ｆａｓ或ＦａｓＬ在慢性丙肝中的表达均较急性肝炎显著，提示在病程慢性化中可能起着重     

乙型肝炎患者肝组织中Fas及Fas配体的表达

为探讨乙型肝炎肝组织中Ｆａｓ及Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）表达和分布的相互关系，采用免疫组织化学技术，以兔抗－Ｆａｓ及兔抗－ＦａｓＬ多克隆抗体，对６０例急性轻型肝炎、慢性活动性肝炎及活动性肝硬化患者石蜡包埋肝组织中的Ｆａｓ及ＦａｓＬ进行了检测。Ｆａｓ及ＦａｓＬ的检出率分别为７６．７％（４６／６０）及７０．０％（４２／６０），Ｆａｓ于肝细胞胞浆内表达，ＦａｓＬ多在肝组织中浸润的淋巴细胞胞浆内表达（３４／４２，８０．９％），也见于肝细胞胞浆中（２５／４２，５９．５％）。ＦａｓＬ阳性淋巴细胞主要分布于汇管区，肝小叶内很少见，ＦａｓＬ阳性肝细胞的分布类同Ｆａｓ阳性肝细胞；在急性轻型肝炎，阳性细胞多在小叶内弥散分布，在慢性活动性肝炎和活动性肝硬化则更多集聚于碎屑样坏死灶和假小叶的周边。免疫组化双标记染色显示，Ｆａｓ及ＦａｓＬ可在同一或不同肝细胞胞浆内表达，但多分布于同一区域。本研究在正常肝组织中未查见ＦａｓＬ的表达，提示在病理状态下，肝细胞才出现ＦａｓＬ的表达。Ｆａｓ及ＦａｓＬ在肝组织中的分布表明，Ｆａｓ－ＦａｓＬ系统在乙型病毒性肝炎肝细胞损伤中起着重要的作用。     

细胞凋亡在病毒性肝炎及原发性肝癌中的表达

目的：细胞凋亡（Ｆａｓ）参与免疫调节及清除病毒，本文就Ｆａｓ与慢性肝病中组织学活动指数、谷丙转氨酶及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸的关系作一分析，以期了解Ｆａｓ在慢性肝病中的意义。方法：以Ｋｉｙｏｓｈｉ半定量法对４９例慢性肝病患者肝组织的Ｆａｓ表达进行了分析，部分患者进行了随访。其中慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）２５例，肝硬化（ＬＣ）６例，原发性肝癌（ＨＣＣ）１８例。结果：２５例ＣＡＨ中１８例占７２％阳性，多呈弥漫型分布。门脉或门脉周围炎症重者阳性信号明显。ＡＬＴ升高、ＨＡＩ分值高者Ｆａｓ呈高表达。在ＣＡＨ细胞凋亡和坏死并存。原发性肝癌癌组织的Ｆａｓ表达为片状或点状分布。ＩＮＦ治疗后肝组织Ｆａｓ表达增虽。结论：Ｆａｓ介导的凋亡在病毒性肝炎发病机理上起着重要作用     

慢性肝病患者肝组织Fas抗原的表达及意义

Ｆａｓ是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的受体，效应细胞的ＦａｓＬ与靶细胞的Ｆａｓ结合时，可诱导靶细胞凋亡［１］．有研究报道［２］，病毒性肝炎患者肝细胞的Ｆａｓ抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨慢性乙型、丙型病毒性肝炎、肝...     

凋亡相关基因Fas、Fas配体及bax在慢性病毒肝炎组织中的表达及意义

为探讨凋亡相关基因Ｆａｓ、Ｆａｓ配体及ｂａｘ在慢性病毒性肝炎中表达的意义。采用免疫组化技术研究４８例慢性肝炎（乙型肝炎３３例,丙型肝炎１５例）组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ及ｂａｘ的表达。结果：慢性乙型肝炎和丙型肝炎组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ及ｂａｘ表达均较正常肝增加,以细胞坏死和炎细胞浸润区域增加明显。结论：凋亡相关基因Ｆａｓ、Ｆａｓ及ｂａｘ可能参与了肝炎病毒致肝细胞的损伤过程。     

乙型肝炎患者肝组织中FasL的检测

目的探讨乙型病毒性肝炎患者肝组织中Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的表达与分布及其与Ｆａｓ抗原的相互关系。方法应用免疫组织化学双标记技术，以免抗－ＦａｓＬ及兔抗一Ｆａｓ多克隆抗体，对４６例慢性肝炎及活动性肝硬化患者石蜡包埋肝组织中的ＦａｓＬ及Ｆａｓ进行了检测。结果Ｆａｓ及ＦａｓＬ的检出率分别为７１．７％（３３／４６）及６５．２％（３０／４６），Ｆａｓ于肝细胞胞浆内表达；ＦａｓＬ多在肝组织中浸润的淋巴细胞胞浆内表达（２３／３０，７ｔｉ，７％），也见于肝细胞浆中（２０／３０，６６．７％）。ＦａｓＬ阳性淋巴细胞主要分布于汇管区，肝小叫内很少见，ＦａｓＬ阳性肝细胞的分布类同Ｆａｓ阳性肝细胞：即多集聚于碎屑样坏死灶和假小叶的周边。免疫组化双标记染色显示Ｆａｓ及ＦａｓＬ可在同一或不同肝细胞胞浆内表达，但多分布于同一区域。结论病毒性肝炎肝组织中ＦａｓＬ的分布与Ｆａｓ抗原密切相关，Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统在肝细胞损伤中起了重要的作用，肝细胞内ＦａｓＬ表达的意义尚待进一步研究。     

In situ investigation of Fas/FasL expression in chronic hepatitis B infection and related liver diseases

To evaluate Fas/FasL expression in hepatitis B virus-related chronic liver disease, liver biopsies from 44 such cases were studied immunohistochemically. FasL was detected in the infiltrating lymphocytes and both FasL and Fas were found in the hepatocytes. The Fas and FasL-positive cells were mostly found at the advancing edges of interphase hepatitis, and Fas/FasL expression was closely correlated with the inflammatory activity. Unexpectedly, FasL was also expressed in liver cirrhotic nodules, particularly in those with hepatocellular carcinoma with or without inflammation. These results suggest that the factors which induce hepatocyte transformation might also trigger FasL expression and promote FasL/Fas-mediated apoptosis.     

肝细胞凋亡与慢性乙型肝炎病毒携带者肝组织病变的关系

目的 观察慢性HBV携带者（ASC）肝组织凋亡指数及Fas、FasL的表达,探讨肝细胞凋亡在ASC肝组织病变中的作用.方法 选取HBV携带者患者120例,并进行肝组织活检.采用原位末端转移酶标技术进行肝细胞凋亡情况检测,采用免疫组织化学技术检测肝组织中的Fas、FasL.结果 120例ASC肝组织完全正常者仅占11％,轻度肝炎组占59％,而中、重度肝炎组占30％.ASC患者的凋亡指数（AI）随着炎症程度加重而升高,正常组为1.50±1.04,而中度组、重度组分别为11.33 ±1.51和17.67 ±6.42,各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.肝组织免疫组化结果显示,Fas、FasL表达程度随炎症活动度加重而增强,尤其在汇管区周围碎屑状坏死区及周边小叶更明显,正常组基本无表达,而轻度组以无表达或阳性表达为主,仅见于界面炎症区的肝细胞及淋巴细胞上;中、重度肝炎组Fas、FasL则均为阳性及强阳性表达,除界面炎症区外,肝小叶中也弥漫分布.Fas强阳性表达率在中、重度组分别为34.8％和69.2％,FasL的强阳性表达率分别为30.4％和53.8％,均明显高于正常组和轻度组（P＜0.05）,同时中、重度组间比较差异亦有统计学意义,肝组织中Fas、FasL表达程度随炎症活动度加重而增强,两者间明显相关.结论 肝细胞凋亡在ASC肝组织病变的发生发展中可能起到重要作用.     

慢性HBV携带者肝组织Fas和Fas配体表达变化及其意义

目的：观察慢性HBV携带者（chronic asymptomatic HBV carrier,ASC）肝组织Fas和Fas配体（FasL）的表达和血清可溶性Fas（sFas）水平的变化。方法对120例ASC行肝穿刺,采用免疫组织化学法检测肝组织Fas和FasL表达,采用ELISA法检测血清sFas水平。结果120例ASC肝组织完全正常者仅占11%,轻度肝炎占59%,而中、重度肝炎占30%;表现正常的肝组织无Fas和FasL表达,轻度肝炎肝组织多无表达或仅限于界面炎症区的肝细胞及淋巴细胞阳性表达,而中、重度肝炎肝组织Fas和FasL多为阳性,Fas强阳性率分别达34.8%和69.2%,FasL强阳性率分别达30.4%和53.8%,均明显高于正常组和轻度炎症组（P〈0.05）,同时中、重度肝炎组间也存在显著性差异（P〈0.05）,其分布除界面炎症区外,肝小叶中也弥漫分布;肝组织表现正常的ASC血清sFas水平为（1.68±0.33） ng/L,而轻、中、重度肝炎患者则分别为（2.58±0.31）ng/L、（3.94±0.21）ng/L和（5.94±0.26）ng/L,均较正常组显著升高（F=218.01,P〈0.01）,各组间sFas水平也均具有统计学差异（P〈0.01）。结论 Fas和FasL介导的肝细胞凋亡在慢性HBV携带者肝组织病变中可能起到了重要作用。     

CC531s colon carcinoma cells induce apoptosis in rat hepatic endothelial cells by the Fas/FasL‐mediated pathway

The mechanisms involved in colorectal carcinoma with liver metastasis are not well known. Metastasizing colon carcinoma cells express more FasL than primary colon carcinoma cells and cancer cells induce apoptosis in hepatocytes by the Fas/FasL pathway. Therefore, this study focused on Fas/FasL expression and functionality in rat liver sinusoidal endothelial cells (LSECs) and CC531s colon carcinoma cells in vitro and in vivo. RT‐PCR and immunochemistry revealed Fas and FasL in LSECs and CC531s, respectively. Functionality of Fas was assessed in vitro by incubation with human recombinant FasL (1–100 ng/ml) with or without enhancer. At concentrations of 10 and 100 ng/ml with enhancer, respectively 21% and 44% of endothelial cells showed signs of apoptosis using Hoechst 33342/propidium iodide staining and electron microscopy. In co‐cultures, apoptosis could be detected in endothelial cells neighboring the CC531s and could be inhibited by an antagonistic FasL antibody. Moreover, 18 h after mesenteric injection of CC531s, the sinusoidal endothelium revealed disruption. In conclusion, (i) CC531s cells induce apoptosis in LSECs in vitro by using Fas/FasL; (ii) CC531s cells damage the sinusoidal endothelial lining in vivo; and (iii) this might provide FasL‐positive tumor cells a gateway towards the hepatocytes.     

Fas、FasL在慢性乙型肝炎患者肝细胞和外周血淋巴细胞上的表达

探讨慢性乙型肝炎患者肝细胞及外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达与乙型肝炎病毒（HBV）复制水平及肝组织炎症程度的关系。对30例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺肝组织病理检查及免疫组化SP法检测肝细胞中Fas、FasL表达强度。并采用单克隆抗体经流式细胞仪检测外周血淋巴细胞上Fas、FasL表达阳性百分率；同时，采用荧光实时标记法测定血清中病毒复制指标HBV DNA水平；采用Beckman全自动生化分析仪检测肝功能并研究其相关性。慢性乙型肝炎患者肝细胞中Fas、FasL表达强度随肝组织炎症活动度加重而增强（P均〈0．001），与白蛋白及丙氨酸转移酶（ALT）呈负相关（P〈0．005，P〈0．001），与球蛋白、总胆红质无明显相关性（P均〉0．05）。外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达阳性率与血清中肝炎病毒复制指标HBV DNA水平呈正相关；与慢性肝炎分度无明显的相关性。乙型肝炎病毒感染可诱导肝细胞及外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达。肝细胞Fas、FasL的表达随炎症活动度加重而表达增强，但其介导的凋亡并不引起肝细胞炎症损伤即ALT活性并不升高，相反减少；同时在某种程度上影响白蛋白的合成。提示Fas—FasL介导的肝细胞凋亡是以非细胞损伤方式参与慢性乙型肝炎的发病过程。同时，随血清HBV DNA水平增高，外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达亦增强，淋巴细胞的凋亡因而增多，是导致乙型肝炎慢性化的原因之一。由此可见，Fas、FasL介导的凋亡参与了慢性乙型肝炎的发病机制，且在慢性乙型肝炎的发生发展中起重要作用。     

慢性肝病中凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-2α、Bax的调节作用

目的 探讨凋亡蛋白Ｂｃｌ－２家族中Ｂａｘ及Ｂａｘ－２两个亚族各在慢性肝炎、肝硬化及肝癌发生、发展中对凋亡的调节作用。方法 １５６例慢性肝病患者中,慢性肝炎７２例,肝硬化２９例,肝癌５５例,采用免疫组化染色检测以上两亚族凋亡蛋白在其肝组织中的表达。结果 慢性肝炎组Ｆａｓ及Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）阳性表达率（８７．５％,９４．４％）明显高于肝癌组（５４．５％,５２．７％）,Ｐ〈０．０１,Ｆａｓ（＋）、（     

The regulation of apoptosis by Bcl-2, bcl-X(L), Bcl-2alpha and Bax in chronic liver disease]

OBJECTIVE: To analyse the expression of Fas and Fas ligand (FasL) in patients of chronic hepatitis, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma and to study the regulation of apotosis by Bax and Bcl-2 subfamilies. METHODS: The subfamily of Bcl-2 in the liver tissue was studied by immunohistochemistry. RESULTS: In 156 cases of chronic liver disease the expression levels of Fas and FasL in the chronic hepatitis group were significantly higher than that in hepatocellular carcinoma group(P < 0.01). The expression level of Bax subfamily in the chronic hepatitis group was significantly higher than that of Bcl-2 subfamily. CONCLUSION: It is suggested that Bcl-2 family is involved in the regulation of apoptosis in the chronic liver diseases.     

Transfection of apoptosis related gene Fas ligand in human hepatocellular carcinoma cells and its significance in apoptosis

AIM: To evaluate the expression of apoptosis related gene Fas ligand (FasL) in human hepatocellular carcinoma (HCC) cells HepG2 and its significance in apoptosis. METHODS: Levels of soluble Fas ligand (sFasL) in a group of patients with hepatitis B virus (HBV)-induced chronic hepatitis, HBV-positive liver cirrhosis and HCC were evaluated. In a further study, the recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1hisB-FasL was transfected into HCC cells HepG2 by lipofection, and then soluble FasL was examined in the supernatant of culture cells by EIA, FasL expression in HepG2 cells was detected by immuohistochemistry. After being stained by annexin V and propidium iodine, cells were passed through a flow cytometer and examined by a fluorescence microscope and a laser scanning microscope. RESULTS: The sFasL levels were significantly lower in patients with HCC when compared to the patients with hepatitis or liver cirrhosis. In comparison with untransfected cells, the soluble FasL could be detected in the supernatant of transfected cells. FasL was expressed on the membranes and cytoplasm of transfected cells. The apoptotic cell rate was 36.30% in transfected cells, and was 11.53% in untransfected cells. Moreover, the different stage of apoptotic cells could be distinguished by annexin V and propidium iodine staining. CONCLUSION: Fas ligand is an apoptotic pathway of HCC cells.