胞内Ca~(2+)与吗啡依赖

<正>吗啡依赖机制复杂,目前尚未清楚.在发现脑内阿片受体后的十余年中,学者对阿片受体进行大量研究,试图用脑内受体密度、数目和亲和力的改变来解释吗啡依赖成因,但均告失败.近年来,许多学者的注意力逐渐转向了受体后效应在吗啡依赖中的作用.其中,G蛋白的活性、Ca~(2+)、cAMP等第二信使和蛋白磷酸化过程的改变.与受体偶联的胞内Ca~(2+),以及钙调素(CaM)、Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶(CaM-K)在吗啡依赖过程中具有重要作用.1 Ca~(2+)与吗啡依赖吗啡作为一种阿片类化合物与阿片受体相互作用,影响着受体门控性离子通道的关闭或开放.目前已知所有的阿片受体都是由鸟苷酸结合蛋白(G蛋白)介导而产生效应的.阿片类物质对神经元胞内Ca~(2+)有两种相反的作用.一是急性作用,即直接降低神经元胞内Ca~(2+)浓度.急性注射大剂量吗啡可减少大、小鼠脑突触中钙离子的含量.Toru等(1989)发现к、μ、δ受体激动剂都     

香茶菜甲素酯对依赖钙调素的环核苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

香茶菜甲素酯是香茶菜甲素的一种新的衍生物。研究发现该化合物能明显抑制CaM激活的PDE活性,其IC_(50)为75μmol/L。抑制动力学测定表明它以非竞争方式拮抗CaM对PDE的活化。CaM荧光测定显示,香茶菜甲素酯可以降低ca~(2+)诱导的CaM酪氨酸荧光强度,提示它可能通过改变Ca~(2+)—CaM构象而抑制CaM—PDE。     

小鼠脑Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的鉴定及苄普地尔对其酶活力的抑制作用

用DE_(52)、磷酸纤维素和Sephaery S—300柱层析从小白鼠脑中提纯了Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ并进行了鉴定。凝胶过滤法测定全酶分子量为55万,在SDS-PAGE中显示出两条区带,其亚基分子量分别为5万和5.7万。该酶活力依赖于Ca~(2+)和CaM,AC_(50)分别为28μmol/L和2.2μmol/L。苄普地尔对酶有抑制作用,IC_(50)约为250μmol/L。     

猪肝中环鸟苷酸刺激的磷酸二酯酶的提纯和性质

猪肝中环岛苷酸(cCMP)刺激的磷酸二酯酶(下简称cGMP-PDE)已经被提纯。纯酶的比活力增加约10,000倍,cGMP刺激活力增加20倍以上,PAGE、SDS-PAGE、等电聚焦和PDE活力染色均显示为单一区带,亚基Mr～115KDa,Sephacryl S-300凝胶过滤测得Mr为270KDa,Stokes半径5.41nm,表明这种酶至少由二个相同的亚基所组成。该酶的PI为4.3。以cAMP为底物,Km值存在或不存在cGMP时分别为30μM和210μM。该酶比较稳定,-20℃贮存五个月,酶的刺激活力仍无明显变化。     

同时分离纯化猪脑中钙调素和S—100

利用DEAE-Sephadex和Phenyl-Sepharose层析,同时从猪脑中分离纯化了两种钙结合蛋白,即S-100和CaM。分子量为10,500的钙结合蛋白对牛脑PDE无激活作用;与CaM抗体无交叉反应;在SDS-PAGE中,迁移速度不受Ca~(2+)的影响;而在碱性甘油PAGE中,迁移速度在有Ca~(2+)时比无Ca~(2+)时慢,并且出现多区带;在250、260、266、270、279和284nm处具有六个吸收峰。以上特征及其氨基酸组成分析表明,此蛋白为S—100。另一种钙结合蛋白分子量为18,000;对牛脑PDE的激活作用和电泳行为与标准CaM相同;与CaM抗体呈阳性反应。     

缺血及再灌注损伤中心肌组织钙调蛋白及环磷酸腺苷的变化

心肌细胞内大量Ca~(2+)聚集是心肌缺血及再灌注损伤的共同途径,是造成细胞不可逆性损伤的主要原因。钙调蛋白(CaM)和环磷酸腺苷(cAMP)均可通过增强肌浆网(SR)的Ca~(2+)摄取及加强肌膜的Ca~(2+)内流等方式调节     

钙调节蛋白

生物作用广泛的细胞信使主要是Ca~(2+)和cAMP。Ca~(2+)在生物体内通过其受体蛋白,即钙调节蛋白发挥功能。钙调节蛋白可分为两类:一类主要在胞外起作用,如与凝血有关的钙蛋白;另一类在胞内起作用,如多功能的钙媒介蛋白。后者具有特殊的、但非专一的钙结合区,正常生理条件下能与Ca~(2+)可逆性结合。形成的钙媒介蛋白·Ca~(2+)络合物可直接激活靶蛋白或酶,也可通过靶蛋白间接调节磷酸化和去磷酸化,从而发挥多种生物功能。     

[D-Pen~2,D-Pen~5]enkephalin在NG108-15细胞株对Bt_2cAMP和佛波醇酯促进的钙内流的影响

在NG108-15细胞株上,用荧光探针fura-2/AM测定细胞内游离钙([Ca~(2 )]1)浓度。结果表明:丁二酰cAMP(Bt_2cAMP)、腺苷酸环化酶激动剂forskolin和蛋白激酶C激动剂十四碳酰佛波醇酯(TPA)均能使([Ca~(2 )]i)升高。钙通道拮抗剂异搏定(verapamil)可以抑制forskolin、Bt_2cAMP和TPA引起的[Ca~(2 )]i增加。δ阿片受体激动剂[D-Pen~2,D-Pen~5)enkephalin(DPDPE)能抑制Bt_2cAMP和forskolin引起的[Ca~(2 )]i增加,但不影响TPA引起的[Ca~(2 )]i增加。提示DPDPE可抑制cAMP依赖的蛋白激酶引起的钙内流,而与蛋白激酶C(PKC)引起的钙内流无关。     

蛋白激酶对阿片耐受和依赖的调节作用研究进展

研究发现,阿片产生的耐受、依赖导致环磷酸腺苷cAMP通路的上调,cAMP通路的上调受腺苷酸环化酶（AC）活性及受体与其偶联的刺激型G蛋白的调节。长期阿片作用通过蛋白激酶C（PKC）、蛋白激酶A（PKA）、Ca2＋/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋/CaMKII）等蛋白激酶系统而影响神经分子的信号转导通路。阿片受体激动剂通过诱导受体内吞、下调、脱敏及AC超敏等效应导致了阿片耐受、依赖的产生。G蛋白偶联受体激酶、第二信使依赖的蛋白激酶对受体的磷酸化调节是产生阿片耐受、依赖的重要步骤。本文讨论了多种蛋白激酶在阿片耐受、依赖的信号转导通路中的作用。     

大黄蒽醌衍生物与环核苷酸磷酸二酯酶、钙调素相互作用的研究

大黄蒽醌衍生物与钙调素(CaM)依赖的磷酸二酯酶(PDE)的相互作用表明它们可作用于钙调素。其中大黄酸结合CaM并抑制CaM依赖的磷酸二酯酶(CaM-PDE);而大黄素、大黄酚和芦荟大黄素     

心肌钙蛋白Ⅰ的物种同源性

<正>肌钙蛋白(troponin)由三个亚单位组成:肌钙蛋白I(TnI)与抑制肌动蛋白Mg~(2+)-ATP酶有关,TnC结合于Ca~(2+)并解除TnI抑制,TnT为原肌球蛋白的结合亚单位。Ca~(2+)结合于TnC的调节位点后增强了TnT与TnC的相互作用,同时削弱了TnI对肌动蛋白的抑制。与其他收缩蛋白不同,TnI的心型异构体(isoform)-cTnI仅在心脏组织表达,在胎儿期表达较少,出生后增多,受生长、发育的调控,无论在胎儿、新生儿抑或成年期,其在心房、心室的分布相同:脊椎动物cTnI结构特征是在N末端含有一特异性cAMP依赖的蛋白激酶,与心肌细胞对β-肾上腺能刺激后的反应有关。     

原发性高血压患者红细胞膜Ca~(2+)—ATP酶活性的初步观察

细胞膜 Ca~(2+)—ATP 酶对细胞内 Ca~(2+)转运发挥泵的作用。本文观察了20例原发性高血压患者红细胞膜 Ca~(2+)-ATP 酶活性并与正常人比较,发现该酶话性明显低于正常人,提示高血压患者依赖 ATP 的 Ca~(2+)转运能力降低。并同时观察到高血压患者尿 Ca~(2+)排出量与正常人比较明显增加。     

基因克隆在抗生素研究上的应用

双苄基异喹啉类化合物拮抗钙调素(CaM),抑制CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶(PDE),研究表明:蝙蝠葛碱和小檗胺分子中12位羟基被芳香基团酯化或醚化时,芳香基团的电子云分布状态变化能增加或降低     

葡甲胺-cAMP对环核苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

葡甲胺环磷酸腺苷(MGM-cAMP)可被依赖钙媒介蛋白的环核苷酸磷酸二酯酶(CaM-PDE)所水解,其降解速度仅及天然底物cAMP的75％。原因在于葡甲胺配基对PDE本身有抑制作用,抑制率约25％。MGM—cAMP对PDE的抑制作用可减慢分解,有利于其在体内发挥治疗作用。     

RCAN1在外周血管疾病中作用的研究进展

<正>钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CN)又称蛋白磷酸酶2B(PP2B),是一种钙调素(Calmodulin,CaM)依赖重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白酶,其在细胞信号传递过程中直接受细胞内Ca~(2+)浓度的调节。活化的CN通过对下游NFAT、tau、CREB、BAD等底物去磷酸化作用~[1],参与心肌肥大、细胞凋亡、突触的可塑性以及记忆功能等多种信号活动的调节。钙调神经磷     

磷酸化蛋白质检测技术研究进展

蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一,其磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,受蛋白激酶和磷酸酶的协同作用控制.酶蛋白的磷酸化是在蛋白激酶的催化下,由ATP提供磷酸基及能量完成的,而去磷酸化则是由磷蛋白磷酸酶催化的水解反应.在哺乳动物细胞生命周期中,大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰;在脊椎动物基因组中,有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸(酯)酶[1].真核细胞的蛋白质磷酸化位点主要发生在丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基侧链的羟基上,不同的蛋白激酶可识别和修饰不同蛋白质的不同位点,生物体内能被磷酸化修饰的蛋白质组成磷酸化蛋白质组(phos-phoproteome),磷酸化蛋白质组将是蛋白质翻译后修饰的研究热点.     

~(60)Co-γ射线对小鼠十二指肠—空肠前列腺素含量的影响

前报已证实小鼠~(60)Co-γ射线照射后小肠中cAMP含量升高和cGMP含量降低,而且cAMP含量升高与DNA合成抑制关系密切。cAMP水平保持稳定是受两种酶控制的:腺苷环化酶(AC)和环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)。一般认为电离辐射使敏感组织中的AC活性增高而对PDE活性影响不大。至于AC活性增高的原因文献报导     

PP2A在细胞凋亡中的作用

细胞内信号转导途径控制着细胞的生长、发育、代谢、转化和凋亡等许多生理过程,而控制这些途径的重要机制是由蛋白激酶和磷酸酶共同调节的蛋白可逆性磷酸化。相对于蛋白激酶,目前蛋白磷酸酶作用通路研究并不是很清楚。蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase type 2A,PP2A)是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,在真核细胞中,从酵母到脊椎动物都广泛表达。它由三个亚基构成:一个36kD的催化亚基C、一个65kD的支架亚基A、一个调节亚基B。在哺乳动物中A、C亚基各有两种异构体(α和β),B亚基含有多种异构体,可分为三个基因家族,B/B55/PR55、B′/B56/PR61、B″/PR72/PR130。亚基A、C构成核心酶二聚体,     

氨利酮治疗充血性心力衰竭时淋巴细胞内环核苷酸和Ca~(2+)含量的变化与心功能的关系

测定了20例难治性充血性心力衰竭患者应用氨利酮冶疔前后淋巴细胞内环核苷酸和Ca~(2+)含量,同时用热稀释法测定其心指数。氨利酮治疗后淋巴细胞内cAMP和Ca~(2+)含量较治疗前明显升高且与心指数增加的时程相似,治疗前后cAMP和Ca~(2+)与心指数之间均呈显著正相关。提示氨利酮可能通过增加心肌细胞内cAMP和Ca~(2+)浓度发挥正性肌力作用。淋巴细胞cAMP和Ca~(2+)的测定对估计心衰严重程度及判断药物疗效可能有一定意义。     

霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响

目的研究霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响。方法采用灌服甲状腺素建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠阴虚状态的影响。检测各组小鼠温度趋向性和负重游泳时间的变化,酶联免疫吸附法测定小鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4)。放射免疫分析法检测血清乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),环磷酸腺苷(cAMP),环磷酸鸟苷(cGMP),计算cAMP/cGMP比值。比色法检测肝组织Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的含量。结果与正常组相比,模型组小鼠热区停留比例和负重游泳时间明显下降(P 0. 01),T3、T4、cAMP和cAMP/cGMP的含量明显升高(P 0. 01、P 0. 001),LDH显著降低(P 0. 05); CK、Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶显著增高(P 0. 001)。与模型组相比,霍山石斛A、B、C、D 4个剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组小鼠的热区停留比例和负重游泳时间明显增高(P 0. 01、P 0. 05、P 0. 001),cAMP/cGMP明显降低(P 0. 05、P 0. 01),Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶明显降低(P 0. 01、P 0. 001),霍山石斛B、C、D剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组T3、T4显著降低(P 0. 05、P 001、P 0. 001),霍山石斛B、C剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组的LDH显著增高,CK显著降低(P 0. 01、P 0. 05、P 0. 001)。结论霍山石斛具有滋阴清热的作用,能降低甲状腺素诱导的肾阴虚小鼠的代谢酶活性和甲状腺素水平,调节能量代谢速率,提高阴虚小鼠的负重游泳时间,具有抗疲劳作用,其机制与调节能量代谢酶作用相关,进一步验证了霍山石斛药性偏寒。