PP2A在细胞凋亡中的作用

细胞内信号转导途径控制着细胞的生长、发育、代谢、转化和凋亡等许多生理过程,而控制这些途径的重要机制是由蛋白激酶和磷酸酶共同调节的蛋白可逆性磷酸化。相对于蛋白激酶,目前蛋白磷酸酶作用通路研究并不是很清楚。蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase type 2A,PP2A)是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,在真核细胞中,从酵母到脊椎动物都广泛表达。它由三个亚基构成:一个36kD的催化亚基C、一个65kD的支架亚基A、一个调节亚基B。在哺乳动物中A、C亚基各有两种异构体(α和β),B亚基含有多种异构体,可分为三个基因家族,B/B55/PR55、B′/B56/PR61、B″/PR72/PR130。亚基A、C构成核心酶二聚体,     

生物技术Ⅰ类新药重组人表皮生长因子凝胶研制成功

包括EGF、FGE、EPO、G-CSF、IL-2、IL-11等在内的多种生长因子在近年获准临床使用完全取决于有关因子和受体的基础研究取得了重大进展。人表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)是50年代由Cohen和Montalcini在研究鼠神经生长因子时发现的一种多肽生长因子,由53个氨基酸组成。1975年由人尿中又纯化出了人表皮生长因子,其可抑制胃酸分泌故又称抑胃素。它们均有广泛的刺激细胞增殖的作用。而这种作用是通过结合细胞膜上的表皮生长因子受体产生的。近年来。在国内外,天然的与重组的表皮生长因子已应用于角膜、皮肤损伤和胃肠溃疡的临床试验。     

EGF结构与功能研究

表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)在1962年首次由Cohen报道发现,其后的三十余年,对这一小分子蛋白进行了广泛而深入的研究。人和小鼠的EGF由53个氨基酸组成的、分子量为6KDa,有三对保守的二硫键,没有糖基化位点,二级结构中没有α-螺旋。迄今发现的众多的与EGF同源的蛋白,可分为EGF家族成员与EGF相关蛋白,结构与EGF相似,并能结合EGF受体、表现出相似的生物学功能的蛋白质,同归类于EGF家族,包括TGF-α、HB-EGF(heparin-binding EGF-like growth factor)、AR(am-phiregulin) BTC(betacellulin)、NRG(neuroreguin)、HRG(heregulin)、与EPR(epiregulin)。一些蛋白含有一个或多个EGF样结构域,它们属于EGF相关蛋白,包括:组织型纤溶酶原激活物、哺乳类凝血因子Ⅸ和     

神经营养素-4及其受体的研究进展

神经营养素-4(NT-4)作为神经营养素家族的新成员,与其他家族成员-神经生长因子(NGF),脑源性神经生长因子(BDNF),神经营养素-3(NT-3),神经营养素-5(NT-5),神经营养素-6(NT-6)一起对神经元的生存及发育起重要作用。近来的研究结果显示,它在基因结构,氨基酸序列,生理功能等方面与其他家族成员相比有进化的保守性,又有自己进化的特殊性。它在哺乳动物体内有广泛表达,通过低亲和力NGF受体(P75~(LNCFR)),高亲和力trkA受体,高亲和力trkB受体发挥作用。NT-4在神经退行性疾病中的临床应用价值也在研究中。     

Snapin与TrkA相互作用对神经递质释放影响的研究

神经营养素能够影响脊椎动物神经元的增殖、分化、凋亡、存活等生命过程,但其功能的发挥则需要Trk和p75NTR两种膜受体的存在。TrkA受体是一种酪氨酸激酶受体,同其它酪氨酸激酶受体一样,其受体膜内区的酪氨酸磷酸化后,可以被其它信号分子识别,为信号的传导提供有关蛋白的募集位点。肝细胞生长因子的受体Met也是一种酪氨酸激酶受体,它的酪氨酸激酶区同TrkA相比具有37％的同源性,有报道发现Met与神经递质释放和内分泌过程中的一个关键调节蛋白——Snapin有相互作用,且Trk受体可以调节突触囊泡的胞吞和胞吐的过程,影响神经递质受体的活性,所以我们推测Snapin和TrkA之间也可能存在相互作用。在此前提下我们开展了一系列实验并且取得了初步的实验结果,通过酵母双杂交实验验证了TrkA的功能区TrkAICD、TrkA—ATP、TrkA-775、TrkA-790均能够与Snapin相互作用,免疫共沉淀实验也证明了TrkAICD与Snapin能够相互作用。     

用逆转录—聚合酶链反应法对类胰岛素生长因子cDNA的扩增

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法是将PCR方法与逆转录法结合应用,可快速高效地扩增某一基因的全cDNA。类胰岛素生长因子-I(IGF-I)在人染色体中只有一个基因,全长超过45kb,并有内含子,其cDNA却只有几百个bp,为了表达得到IGF-I,本文利用RT-PCR方法,从胎肝提出的混合mRNA中,筛选并扩增了IGF-I的cDNA。经过分子克隆与测序,证明不需制备胎肝cDNA库,即可快速获得IGF-I的cDNA。     

皮下注射血管内皮生长因子基因提高大鼠背部随意皮瓣活力的实验研究

目的 探索基因治疗在组织移植方面的方法。应用 构建并体外扩增表达质粒pcDNA3.1/Zeo( )-VEGF165，以之直接皮下注射转染SD大鼠背部随意皮瓣模型。通过与对照组相比较，观察其对皮瓣活力的影响，并采集组织行免疫组化检查。结果 基因转染组在毛细血管周围及肌间隙可见VEGF的沉积，与对照组相比皮瓣的平均成活面积显著增加。结论 皮下注射的基因在组织中能够表达VEGF，增加皮瓣活力，是一种简单有效的基因治疗方法。     

神经营养因子受体Trk和p75NTR的信号传递途径

神经营养因子是一类对特定类型的中枢和外周神经系统神经元的生存和发展至关重要的生长因子家族。至今在     

表皮生长因子应用简介

鼠表皮生长因子(mEGF)是一个具有53个氨基酸的促细胞分裂多肽,分子量为6045,含有由6个半胱氨酸组成的二硫键。人的表皮生长因子(hEGF)已于1974年由人尿中提纯出来,由于它具有抗胃酸分泌作用又称抑胃素,与mEGF同源。 表皮生长因子(EGF)主要由颌下腺,十二指肠Brunner氏腺合成。在人体的绝大多数体液中均已发现hEGF,在乳汁、尿液、精液中的含量特异性地增高。它在人血清中的浓度为0.2～2.0ng/ml。 EGF可以刺激或抑制细胞的增殖、促进细胞的分化,它与其细胞膜上受体的结合导致了一系列生化事件的发生,首先是EGF受体酪氨酸激酶活性的激活,然后是内在化和磷酸脂酶C的活性增加等等,其中酪蛋白激酶Ⅱ的改变有着相当重要的作用。EGF的作用有时是难以区分为直接或间接作用于靶细胞的。     

一种简单有效的平端PCR产物克隆方法

介绍一种使用ｐＵＣ质粒做为载体进行平端ＰＣＲ产物连接的方法。首先将特异的ＰＣＲ扩增产物纯化，不经任何处理，与用ＳｍａⅠ内切酶消化的载体ｐＵＣ质粒进行连接，并在连接体系中加入ＳｍａⅠ内切酶，２３℃连接１８～２０小时。转化宿主菌后，挑选白色菌落进行重组鉴定。在ＰＣＲ产物＜５００ｂｐ的ＤＮＡ片段重组阳性率占转化菌白色菌落的７０％，而＞１０００ｂｐ的ＤＮＡ片段重组阳性率占转化白色菌落的１０～２０％。