山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究山萘黄素(kaempferol)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以台盼蓝拒染法检测山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;采用Transwell小室法检测山萘黄素对HO-8910PM细胞的侵袭能力、趋化运动能力和黏附能力的影响。结果50μmol/L的山萘黄素作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基膜和趋化运动能力,抑制率分别为(10.53±2.71)%和(10.84±1.45)%,但与对照组相比,对黏附能力的影响无显著性差异。结论山萘菌素能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭和运动能力,对黏附能力无显著影响。     

熊果酸对卵巢癌细胞转移的抑制作用

目的 熊果酸(UA)对人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭及趋化运动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞黏附能力的影响;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭及运动的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白的表达的影响。结果 在黏附试验中,不同浓度熊果酸作用细胞24h后,抑制率分别为44.03%、46.62%和55.11%,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力,穿膜细胞数与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)。熊果酸处理后细胞趋化运动能力降低与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度熊果酸作用24小时后,HO-8910PM细胞MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量明显低于正常对照组(P＜0.05),Western blot结果显示:HO-8910PM细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量受到明显抑制(P＜0.05)。结论 熊果酸抑制人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭和转移的生物学行为,其作用机制可能与熊果酸显著抑制MMP-2、MMP-9表达水平有密切关系。     

大黄素、芹菜素抑制人卵巢癌细胞侵袭的体外实验研究

背景与目的:大黄素抑制酪氨酸蛋白激酶、酪蛋白激酶2的活性,抑制I-κB降解;芹菜素抑制丝裂原活化蛋白激酶、PI3K的活性。大黄素、芹菜素是否能抑制高恶性度肿瘤侵袭与转移的研究还未见报道,本研究选用大黄素、芹菜素,观察其对人卵巢癌细胞体外侵袭的作用。方法:台盼蓝活细胞拒染法观察药物对人卵巢癌细胞生长、增殖的影响;以人工重组基底膜(Matrigel)体外侵袭实验观察药物对细胞体外侵袭、粘附、运动能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法观察对Ⅳ型胶原酶分泌及活性的影响。结果:大黄素及芹菜素均抑制HO-8910PM细胞的生长、增殖,其48h的IC50分别为(35.30±3.50)μmol/L和(28.92±2.60)μmol/L。大黄素有效抑制HO-8910PM细胞体外侵袭、粘附、运动,在40μmol/L时,抑制率分别为(45.31±3.10)%、(25.42±1.70)%和(41.59±1.90)%;大黄素抑制基质金属蛋白酶-9(MMP-9)分泌,但不能直接抑制其活性。芹菜素能抑制细胞粘附、运动,在40μmol/L时,抑制率分别为(30.80±3.00)%和(29.04±1.70)%,但抑制细胞体外侵袭作用不显著,仅为(12.08±0.50)%,且不能抑制MMP-9分泌也不能直接抑制其活性。结论:大黄素、芹菜素对人卵巢癌HO-8910PM细胞均有一定的毒性,而大黄素更具有成为抗肿瘤侵袭药物的潜力。     

三种腺苷类似物抑制人高转移卵巢癌细胞侵袭的实验研究

背景与目的:腺苷作用于细胞信号转导系统,可抑制磷脂酰肌醇4-激酶活性、升高腺苷酸环化酶活性和细胞内cAMP水平、抑制血小板肌动蛋白聚合等。腺苷类似物有上述腺苷的生物活性,且不易为腺苷脱氨酶所降解,具有相对较长的生物半衰期。本研究拟观察2-氯腺苷、2-氯脱氧腺苷、2'-脱氧腺苷对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外侵袭的抑制作用。方法:以3种腺苷类似物处理HO-8910PM朱峰,等.三种腺苷类似物抑制人细胞、以5-氟尿嘧啶为细胞敏感对照,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞的毒性效应;以人工重组基底膜观察细胞的侵袭、粘附和运动能力;以明胶酶显影法观察细胞基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的分泌及活性;以RT-PCR检测细胞mta1mRNA、nm23H1mRNA表达。结果:2-氯腺苷和2-氯脱氧腺苷处理高转移卵巢癌细胞72h的IC50值分别为5.80μmol/L和2.61μmol/L,2'-脱氧腺苷对该细胞无明显抑制(对细胞的IC50值大于100μmol/L);6.0μmol/L的2-氯腺苷和2-氯脱氧腺苷对细胞侵袭的抑制率分别为(42.5±1.5)%(与对照组比较,P<0.01)和(9.9±0.5)%(P<0.05);对细胞运动的抑制率分别为(36.9±2.1)%(P<0.01)和(17.1±0.4)%(P<0.05);对细胞粘附的抑制率分别为(32.2±2.3)%(P<0.01)和(19.5±3.1)%(P<0.05)。而2'-脱氧腺     

慢病毒介导RhoA基因沉默对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:建立慢病毒介导RhoA基因稳定沉默卵巢癌HO8910细胞株,研究RhoA基因对HO8910细胞侵袭和迁移的影响。方法:构建靶向沉默RhoA基因的慢病毒载体Lenti-U6-shRhoA,将其感染HO8910细胞,经过嘌呤霉素筛选,建立稳定沉默RhoA基因的HO8910细胞。实时荧光定量PCR检测HO8910细胞中RhoA mRNA的表达;MTT检测HO8910细胞的增殖;Transwell体外迁移和侵袭实验检测RhoA基因沉默对HO8910细胞侵袭和迁移的影响。结果:成功构建靶向RhoA基因的慢病毒载体Lenti-U6-shRhoA,建立了RhoA基因稳定沉默的HO8910细胞。与Lenti-U6-NC对照组对比,RhoA基因稳定沉默HO8910细胞RhoA mRNA的表达明显降低[(30.7±5.40)%vs(95.9±6.53)%,P<0.05];沉默RhoA基因能降低HO8910细胞的存活率[(51.16±7.41)%vs(95.67±2.14)%,P<0.05];RhoA基因沉默组HO8910细胞的侵袭、迁移及黏附能力较Lenti-U6-NC对照组明显受到抑制[迁移穿过人工基底膜细胞数(31±6)vs(84±13)个,P<0.05;穿过微孔膜的细胞数(97±12)vs(689±23)个,P<0.05;黏附率(68.16±6.53)%vs(98.71±4.92)%,P<0.05]。结论:慢病毒介导的RhoA基因沉默能抑制卵巢癌HO8910细胞的侵袭和迁移。     

半边旗提取物5F对HO-8910PM细胞中NF-κB和FAK蛋白表达的影响

目的:研究半边旗(pteri semipinnataL, PsL)二萜类化合物5F对HO- 8910PM细胞内核因子- κB(nuclear factor kappaB, NF- κB)p65亚基、黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)表达及p FAK(phosphorylated FAK)水平的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制。方法:MTT法测定5F对细胞增殖的影响; Westernblot分析NF- κB(p65)、FAK蛋白表达及p FAK水平。结果: 12 50、25 00、50 00、100 00 和200 00μmol/L的5F作用HO- 8910PM细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为(28 .20±3 .66)%、(30 96±1 83)%、(41 .41±1 .65)%、(60. 67±2. 24)%和(73. 18±1. 24)%,并有一定的剂量效应关系,P< 0 .05 (P 值分别为0 .018、0. 000、0 .000、0 .000和0. 000)。25~100μmol/L的5F作用HO- 8910PM细胞24 h后,NF -κB(p65)蛋白表达水平明显下降;上调FAK蛋白表达,使FAK酪氨酸磷酸化程度降低(p FAK/FAK),P<0. 01(P 值分别为0. 000、0 .001 和0 .000)。结论:5F抗肿瘤侵袭转移与NF- κB(p65)表达以及FAK酪氨酸磷酸化程度降低有关。     

HMGA1基因小分子RNAi对卵巢癌转移抑制的实验研究

目的:探讨高迁移率蛋白家族A1(high mobility group A1,HMGA1)基因小分子干扰RNA对卵巢癌转移抑制的机理.方法:RT-PCR一步法检测3种不同的卵巢癌细胞株中HMGA1、E钙黏蛋白mRNA的表达水平;设计并合成HMGA1 siRNA,转染HO8910PM细胞:半定量RT-PCR分析法观察HMGA1 siRNA转染对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞株体外侵袭、运动的抑制作用.结果:RT-PCR半定量分析结果显示:OVCAR-3细胞中HMGA1 mRNA表达量相对较低(0.64±0.13),而E-钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR-3细胞中有表达;HO8910PM细胞稳定转染HMGA1 siRNA后,转染组、对照组HMGA1 mRNA表达水平分别为0.16±0.08、0.47±0.11(P＜0.01),E 钙黏蛋白mRNA表达水平分别 为0.38±0.07、0.09±0.05(P＜0.01);体外运动实验显示,跨膜细胞数转染组明显低于对照组(P＜0.05);重组细胞基底膜侵袭实验显示,穿透基底膜细胞数转染组明显低于对照组(P＜0.01).结论:HMGA1基因与卵巢癌转移密切相关,HMGA1 基因siRNA 可上调卵巢癌细胞中E钙黏蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的运动和侵袭,为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点.     

蛇葡萄素抗黑色素瘤侵袭和转移的作用

背景与目的：我们先前的研究发现蛇葡萄素在体外对几种人肿瘤细胞以及在体内对小鼠移植性B16黑色素瘤具有抑制作用。为了进一步研究其抑制肿瘤转移的作用。我们研究了蛇葡萄素在体内外抗B16小鼠黑色素瘤侵袭和转移的作用。方法：B16细胞由尾静脉注入C57BL／6小鼠体内,建立实验性肺转移模型,蛇葡萄素以3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药,连续18天,于停药后第2天观察肺转移瘤灶数,B16细胞经蛇葡萄素处理3天,用具有聚碳酸酯和重建基底膜（基质胶Matrigel)的Transwell小室侵袭模型,研究药物处理后细胞侵袭,趋化运动,粘附能力的改变。结果：150、200,250mg/kg的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成,与对照组比,抑制率分别为30．97％,40．58％,61．16％（P＜0．05）,经20,40,80μmol/L蛇葡萄素处理后,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为36．06％,59．58％和79．09％（P＜0．01）;对细胞的趋化运动抑制率分别为51．59％,56．51％和66．75％（P＜0．01）;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白,纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用,结论：蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。     

靶向RhoA shRNA对卵巢癌HO8910细胞体外侵袭能力影响的研究

目的:观察RNA干扰(RNAi)技术对卵巢上皮癌HO8910细胞株RhoA基因表达的抑制作用,探讨其对HO8910细胞侵袭、迁移的影响。方法:构建RhoA基因特异性短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RNAi后HO8910中RhoA的mRNA及蛋白表达水平变化,Transwell小室体外侵袭和划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA shRNA(质粒1、2和3)组的RhoA mRNA的表达明显弱于未转染任何质粒的空白组和对照组,P<0.05,且质粒2组表达最低(27.9%),抑制效率最高(72.1%),具有序列特异性。转染序列特异性RhoA shRNA的细胞(实验组)与对照组比较,RhoA蛋白的表达分别为(6.08±2.24)%和(59.25±17.96)%,P<0.05;细胞平均侵袭能力测值为18.82±2.61和35.25±5.12,P<0.05;愈合百分比为(43.80±6.21)%和(69.35±4.42)%,P<0.05。结论:靶向RhoA的shRNA可抑制卵巢癌HO8910细胞RhoA基因的表达,能降低细胞体外侵袭和迁移能力。     

Silencing of IQGAP1 by shRNA inhibits the invasion of ovarian carcinoma HO-8910PM cells in vitro

Background

IQGAP1 is a scaffolding protein and overexpressed in many human tumors, including ovarian cancer. However, the contribution of IQGAP1 to invasive properties of ovarian cancer cells remains unknown. Here, we investigated the effect of IQGAP1-specific short hairpin RNA (shRNA) expressing plasmids on metastatic potential of ovarian cancer HO-8910PM cells.

Methods

We used RT-PCR and Western blot analysis to characterize expression of IQGAP1 in three human ovarian cancer-derived cell lines SK-OV-3, HO-8910 and HO-8910PM. We then determined whether expression of endogenous IQGAP1 correlated with invasive and migratory ability by using an in vitro Matrigel assay and cell migration assay. We further knocked down IQGAP1 using shRNA expressing plasmids controlled by U1 promoter in HO-8910PM cells and examined the proliferation activity, invasive and migration potential of IQGAP1 shRNA transfectants using MTT assay, in vitro Matrigel-coated invasion assay and migration assay.

Results

IQGAP1 expression level seemed to be closely associated with the enhanced invasion and migration in ovarian cancer cell lines. Levels of both IQGAP1 mRNA and protein were significantly reduced in HO-8910PM cells transfected with plasmid-based IQGAP1-specific shRNAs. RNAi-mediated knockdown of IQGAP1 expression in HO-8910PM cells resulted in a significant decrease in cell invasion and migration.

Conclusion

Our findings support the hypothesis that IQGAP1 promotes tumor progression and identify IQGAP1 as a potential therapeutic strategy for ovarian cancer and some other tumors with over-expression of the IQGAP1 gene.     

基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸对卵巢癌细胞侵袭黏附能力的影响

目的 观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）反义寡核苷酸（ASODN）转染对卵巢癌细胞体外侵袭黏附行为的影响,并探讨其作用机制。方法 以Lipofectinmin介导的MMP-9反义寡核苷酸转染至经纤黏连蛋白诱导MMP-9表达的卵巢癌细胞株HO-8910PM,利用RT—PCR、Western blot及明胶酶谱法检测转染寡核苷酸后HO-8910PM细胞MMPO的mRNA、蛋白表达及酶活性的变化;通过细胞体外侵袭、迁移实验和黏附实验,检测细胞侵袭黏附能力的变化。结果 卵巢癌细胞HO-8910PM转染MMP-9反义寡核苷酸后,MMP-9的mRNA及蛋白的表达受到抑制,抑制率分别为34．8％和42．5％,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;明胶酶活性也受到了抑制。反义寡核苷酸的转染降低了肿瘤细胞体外侵袭、迁移和黏附能力,侵袭和迁移抑制率分别为22．4％和24．8％,在60min和90min黏附抑制率分别为49．8％和38．3％。结论 MMP-9反义寡核苷酸可抑制卵巢癌细胞的侵袭黏附能力,MMP-9有可能成为抗卵巢癌侵袭转移的分子靶点。     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖、迁徙和侵袭的影响

背景与目的:肿瘤间质活化的成纤维细胞能表达成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP),本研究通过体外实验研究FAP在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用。方法:人类卵巢癌细胞系HO-8910PM体外培养,加入不同浓度的FAP(30、100和300 pmol/L)处理,用MTT法检测FAP对HO-8910PM增殖的影响;细胞划痕实验检测FAP对HO-8910PM迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验来研究FAP对HO-8910PM侵袭能力的影响。结果:MTT法及细胞生长曲线显示FAP对卵巢癌细胞有促增殖作用,并呈时间、剂量依赖性;细胞划痕试验结果显示,不同浓度的FAP对卵巢癌细胞系的迁徙均有促进作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01);Transwell侵袭实验显示FAP对卵巢癌细胞有促侵袭作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01)。结论:FAP具有促进卵巢癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的作用。     

Knockdown of UHRF1 by Lentivirus-mediated shRNA Inhibits Ovarian Cancer Cell Growth

Human UHRF1 (ubiquitin-like PHD and RING finger domain-containing 1) has been reported to beover-expressed in many cancers, but its role in ovarian cancer remains elusive. Here, we determined whetherknockdown of UHRF1 by lentivirus-mediated shRNA could inhibit ovarian cancer cell growth. Lentivirusmediatedshort hairpin RNAs (lv-shRNAs-UHRF1) were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway. The efficiency of lentivirus-mediated shRNA infection into HO-8910 and HO-8910 PM cells wasdetermined using fluorescence microscopy to observe lentivirus-mediated GFP expressionand was confirmed to beover 80 percent. UHRF1 expression in infected HO-8910 and HO-8910 PM was evaluated by real-time PCR andWestern blot analysis. The Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay was used to measure cell viability; flow cytometryand Hoechst 33342 assay was applied to measure cell cycle arrest and apoptosis. Cell invasion was assessedusing transwell chambers. Our results demonstrated that the loss of UHRF1 promoted HO-8910 and HO-8910PM cell apoptosis, while inhibiting cell proliferation. In addition, UHRF1 knockdown significantly inhibitedthe invasion of human ovarian cancer cells. In the present study, we also showed that depleting HO-8910 cellsof UHRF1 caused activation of the DNA damage response pathway, with the cell cycle arrested in G2/M-phase.The DNA damage response in cells depleted of UHRF1 was illustrated by phosphorylation of CHK (checkpointkinase) 2 on Thr68, phosphorylation of CDC25 (cell division control 25) on Ser 216 and phosphorylation ofCDK1 (cyclin-dependent kinase 1) on Tyr 15.     

MTA1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞侵袭转移影响的研究

  目的  研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1, MTA1)表达与卵巢癌发生发展转移的关系, 研究MTA1对卵巢癌侵袭转移能力的影响, 并探讨抑制卵巢癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  免疫组织化学法检测110例卵巢癌组织中MTA1的蛋白表达水平, 分析MTA1蛋白表达与卵巢癌分化程度、临床分期及与腹腔转移的关系。并通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilenter2.0-MTA1-siRNA转染入人卵巢癌细胞系HO-8910PM, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对卵巢癌细胞侵袭转移能力的影响。  结果  MTA1随卵巢癌组织学分化程度的升高而降低, 呈负相关, MTA1的表达随着FIGO分期期别的增加而增加, 呈正相关, MTA1的表达随卵巢癌腹腔转移而增加, 呈正相关。RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制卵巢癌细胞系HO-8910PM中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  MTA1表达水平的增高与卵巢癌的分化程度、临床分期及远处转移密切相关, 体外研究显示抑制MTA1在卵巢癌细胞中的表达, 使细胞生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在卵巢癌的远处侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。      

C17orf76-AS1在卵巢上皮癌中的表达及其对卵巢上皮癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 检测C17orf76-AS1在正常卵巢上皮细胞与卵巢上皮癌细胞系中的表达情况并探讨C17orf76-AS1过表达对卵巢上皮癌细胞系SKOV3生物学功能的影响。方法 通过定量PCR（QPCR）方法检测C17orf76-AS1在在卵巢上皮细胞IOSE80及不同卵巢上皮癌细胞系（A2780、SKOV3、OVCAR3、HO-8910和HO-8910PM）中的表达。在pcDNA3.1基础上构建C17orf76-AS1过表达质粒并采用Lipo2000瞬时转染SKOV3细胞,QPCR检测SKOV3细胞中C17orf76-AS1的过表达效率;CCK-8实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞增殖的影响;Transwell法和划痕实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,C17orf76-AS1在A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910及HO-8910PM细胞中均呈低表达,分别下降了0.36、0.30、0.46、0.32、0.31倍（P＜0.05）。在SKOV3细胞中过表达C17orf76-AS1,CCK-8结果显示C17orf76-AS1过表达48 h后,SKOV3的增殖能力显著下降了约1.5倍;Transwell结果显示SKOV3细胞迁移能力下降约1.3倍,划痕实验也同样证实过表达C17orf76-AS1后,SKOV3细胞愈合能力显著低于对照组（P＜0.05）。结论 C17orf76-AS1在卵巢上皮癌细胞中异常低表达,其过表达显著降低了卵巢癌细胞增殖和迁移能力。