转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究

目的　本研究探讨转化生长因子-β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ-β）体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓ-ｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）的表达。方法　原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,ＭＴＴ法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入２０ｎｇ·ｍＬ－１ ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３,分别于１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ检测α-ＳＭＡｍＲＮＡ,Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果　与对照组相比,ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）,其中ＴＧＦ-β１促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强（Ｐ＜０．０５）;ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３均增加α-ＳＭＡ的表达（均为Ｐ＜０．００１）,ＴＧＦ-β３促进α-ＳＭＡ表达作用最强（Ｐ＜０．００１）。结论　ＴＧＦ-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。     

转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的　探究转化生长因子-β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β２,ＴＧＦ-β２）诱导人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）层细胞上皮-间质转分化中ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达变化及意义。方法　使用不同浓度ＴＧＦ-β２刺激ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ,ＦＮ）、神经钙粘连蛋白（ｎｅｒｖｅｃａｌｃｉｕｍａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏ-ｔｅｉｎ,Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达。采用ＲＴ-ＰＣＲ检测不同浓度ＴＧＦ-β２及不同时间ＴＧＦ-β２（５μｇ·Ｌ－１）刺激ＲＰＥ细胞后ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达。结果　ＴＧＦ-β２刺激后的ＲＰＥ细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内（１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１）,随着ＴＧＦ-β２浓度的增加ＦＮ、Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ及相应ｍＲＮＡ随之增加,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ-β２在一定浓度范围内（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,在ＴＧＦ-β２浓度为５μｇ·Ｌ－１时ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达量最低。ＴＧＦ-β２在一定时间范围内（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ）以时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ组与０ｈ相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　一定范围内ＴＧＦ-β２以剂量和时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达,为进一步研究ｍｉＲＮＡ-２９ｂ与ＴＧＦ-β２在ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。     

SnoN蛋白及TGF-β在早期糖尿病大鼠视网膜组织中表达及意义

目的　观察ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β在糖尿病大鼠视网膜上的表达,探讨ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β与糖尿病视网膜病变（ｄｉａ-ｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的关系,为ＤＲ发病机制的研究提供新的理论依据。方法　选择健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只,随机分为正常对照组与糖尿病（ＤＭ）组,每组各１０只。采用一次性腹腔注射５０ｍｇ?ｋｇ－１链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＺ）的方法建立ＤＭ大鼠模型,正常对照组一次性给予等体积柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液腹腔注射。分别于造模后８周和１２周处死各组大鼠,均完整摘除各组大鼠的左眼球制成眼杯,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白及ＴＧＦ-β蛋白的表达。结果　造模后８周和１２周,ＤＭ组大鼠血糖值分别为（２２．６４±３．５７）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（２４．０８±１．６０）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,均明显高于正常对照组的（４．６４±０．９１）ｍｍｏｌ?Ｌ－１、（４．５０±０．６６）ｍｍｏｌ?Ｌ－１,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β无表达或弱表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＴＧＦ-β的ＯＤ值分别为０．１２１０±０．００５６、０．１５５０±０．００７０,均较正常对照组（０．０２２０±０．００７９、０．０２５０±０．００７０）明显增加（均为Ｐ＜０．０１）。正常对照组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ蛋白高表达,在造模后８周和１２周时,ＤＭ组大鼠视网膜上ＳｎｏＮ的ＯＤ值分别为０．４１２０±０．０１１３、０．２１４０±０．００６９,均较正常对照组（０．９４５０±０．００７０、０．９４４０±０．００５１）明显降低（均为Ｐ＜０．０１）,且随着病程的延长,降低更明显。结论　ＳｎｏＮ蛋白对ＴＧＦ-β信号通路起负反馈抑制作用,能降低ＴＧＦ-β信号的强度和持续时间,因此对ＤＲ的防治具有重要意义。     

视网膜下液生长因子含量与增生性玻璃体视网膜病变关系

目的 探讨生长因子与增生性玻璃体视网膜病变形成和发展的关系。方法 选４１例孔源性视网膜脱离伴ＰＶＲ患者,采用放射免疫方法测其ＴＮＦ,ＦＧＦ,ＴＧＦ－β,ＥＧＦ的含量。结果 ＰＶＲ患者视网膜下液中ＴＮＦ,ＥＧＦ,ＦＧＦ浓度明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）。ＴＮＦ,ＥＧＦ,ＦＧＦ浓度Ｃ组高于Ｂ组,Ｂ组高于Ａ组,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。视网膜下液中ＴＮＦ,ＥＧＦ浓度各组高于血浆中ＴＮＦ,ＥＧＦ浓度,     

SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响

目的　探讨转化生长因子-β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和ＳＢ４３１５４２（ＴＧＦ-β１受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（ｔｈｙｒｏｉｄ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ,ＴＡＯ）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）基因表达的影响,为ＴＡＯ眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法　实验分为３组。第１组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ,ＲＴ-ＰＣＲ）检测不同浓度ＴＧＦ-β１（０μｇ?Ｌ－１、１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴ-ＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第２组:采用ＲＴ-ＰＣＲ检测１０μｇ?Ｌ－１ＴＧＦ-β１在不同的时间点（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第３组（分为４小组处理）:眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２刺激眼眶成纤维细胞、１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１ 单独刺激眼眶成纤维细胞、３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２联合１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１刺激眼眶成纤维细胞（ＳＢ４３１５４２预先刺激眼眶成纤维细胞１ｈ,然后再加入ＴＧＦ-β１）,采用ＲＴ-ＰＣＲ检测α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达。结果　ＴＧＦ-β１在一定的浓度范围内（１～１０μｇ?Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着浓度增加ｍＲＮＡ表达增加,各浓度组（１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）与空白对照组（０μｇ?Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＴＧＦ-β１在一定的时间范围内（０～２４ｈ）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着时间延长ｍＲＮＡ表达增加,各时间组（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）与０ｈ相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β１诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ在２４ｈ达到峰值,而ＣＴＧＦｍＲＮＡ在１２ｈ即可达到峰值。ＳＢ４３１５４２对眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达均有抑制作用。结论　一定范围内,ＴＧＦ-β１以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达,ＳＢ４３１５４２可抑制其表达。     

TGF-β介导的Smad信号通路在增生型糖尿病视网膜病变中的作用和意义

目的　本研究旨在观察转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-ｂｅｔａ,ＴＧＦ-β）介导的Ｓｍａｄ信号通路在增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）中的作用和意义,进而阐明其可能的发病机制。方法　收集正常人和糖尿病患者的血液标本,将糖尿病患者依据视网膜受累程度分为２组:无糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉ-ｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ）组、糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）组,根据眼底改变又分为非增生型糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ）组和增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）组。分别用ＥＬＩＳＡ检测正常人和糖尿病患者血浆中的ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测血浆中ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、Ｓｍａｄ３和ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量,比较各组差异。结果　与对照组比较,糖尿病患者各组ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２分泌量和ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量均明显升高（均为Ｐ＜０．０５）;与ＮＤＲ组比较,ＤＲ各组上述指标均显著增高（均为Ｐ＜０．０５）;ＰＤＲ组上述指标均显著高于ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＧＦ-β介导的Ｓｍａｄ信号通路参与了ＤＲ的发生,可能是介导ＰＤＲ发生的重要机制。     

视网膜色素变性与血管内皮──血小板功能变化

对６５例视网膜色素变性（ＲＰ）患者和３３例正常人进行血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮前列腺素Ｆ（１α）（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α））、血浆丙二醛（ＭＤＡ）、红细胞超氧化物歧化酶（ＳｏＤ），全血谷脱甘肽过氧化物酶活性（ＧＳＨ－ｐＸ）等指标的测定，发现ＲＰ患者血浆ＴＸＢ２以及ＴＸＢ＿２和６－Ｋ－ＰＧＦ１α比值Ｔ／Ｋ均较正常人升高（Ｐ＜０．０５）．６－Ｋ－ＰＧＦ１α和ＳＯＤ较正常人降低（Ｐ＜０．０１）。而ＭＤＡ、ＧＳＨ－ＰＸ无明显改变，表明ＲＰ患者病理过程中存在血管内皮──血小板功能改变以及自由基的损伤。但对ＳＯＤ与ＴＸＢ２、Ｔ／Ｋ比值、６－Ｋ－ＰＧＦ１α的相关分析表明，它们之间无相关性（Ｐ＞０．０５），表明ＲＰ患者虽有血管内皮──血小板功能紊乱，但非自由基损伤所致。     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

消炎痛防治电光性眼炎的研究

采用放免方法测定正常家兔角膜上皮内ＰＧＥ１、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２α、ＰＧＩ２、ＴＸＡ２等前列腺素含量。并在紫外线照射前后分别采用０．２５％消炎痛油型滴剂滴眼。６小时后再次测定兔角膜上皮内ＰＧ５，发现ＰＧＥ、ＰＧＥ２、ＰＧＩ２和ＴＸＡ２合成均受到明显抑制（Ｐ＜０．０５－０．０１），且角膜炎症症反应较轻。但照射前后用药对角膜上皮内ＰＧ５合成的抑制无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示前列腺素在电光性眼炎     

β－转化生长因子的提纯及其对内毒素诱发的葡萄膜炎的抑制作用

目的：探讨β－转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）对内毒素诱发的葡萄膜炎（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｕｖｅｉｔｉｓ，ＥＩＵ）的预防作用。方法：用生物凝胶Ｐ－６０层析的方法从人血小板提取纯化ＴＧＦ－β，用其处理内毒素对大鼠点眼或腹腔注射，进行临床观察和比较。结果：用生物凝胶Ｐ－６０层析获得了高纯度的ＴＧＦ－β，用其点眼或腹腔注射，使ＥＩＵ的发生推迟约４小时，炎症的严重程度显著减轻、持续时间缩短３天。结论：ＴＧＦ－β对ＥＩＵ有明显的预防和抑制作用     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

增殖性糖尿病视网膜病变患者玻璃体中血管内皮细胞生长因子含量的检测

目的检测增殖性糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ，ＰＤＲ）患者玻璃体中血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）的含量并与正常人进行对比研究，探讨ＶＥＧＦ在ＰＤＲ病理过程中的作用。方法应用酶联免疫吸附测定法（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）对７例正常人及１９例ＰＤＲ患者玻璃体中的ＶＥＧＦ进行定量分析研究。结果７例正常人玻璃体中，ＶＥＧＦ的含量为０．１８～０．６０ｎｇ／ｍｌ，平均值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。１９例ＰＤＲ患者玻璃体中ＶＥＧＦ的含量升高，范围为０．８４～１５．６４ｎｇ／ｍｌ，平均值为５．６６ｎｇ／ｍｌ。两组比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５），其中男性组玻璃体中ＶＥＧＦ的含量为０．８４～１５．６４ｎｇ／ｍｌ，平均值为４．８３ｎｇ／ｍｌ；女性组为１．３４～１２．３４ｎｇ／ｍｌ，平均值为７．０８ｎｇ／ｍｌ，两组比较，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＰＤＲ患者玻璃体中ＶＥＧＦ的含量升高，在ＰＤＲ的病理过程中起一定作用     

过氧亚硝酸根联合碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平的影响

目的　探讨过氧亚硝酸根（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ,ＯＮＯＯ－）和重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）磷酸化水平的影响。初步探讨ＯＮＯＯ－导致白内障发生的可能机制。方法　将培养的ＨＬＥＣ细胞分为４组,对照组（未经ＯＮＯＯ－和ｂＦＧＦ处理）、ｂＦＧＦ单独处理组、ｂＦＧＦ＋ＯＮＯＯ－处理组［ｂＦＧＦ预处理１ｈ后加入不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理１ｈ］和ＯＮＯＯ－ ＋ｂＦＧＦ处理组［不同浓度ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）预处理１ｈ后加入ｂＦＧＦ处理１ｈ］。检测各组细胞内ＥＲＫ磷酸化水平的变化。结果　ｂＦＧＦ单独处理组和ｂＦＧＦ ＋ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为５．１７±０．３５、４．４２±０．１２、３．９１±０．１５和０．４９±０．０８,与对照组（１．００±０．０５）相比差异有统计学意义（Ｆ＝４０２．８３,Ｐ＜０．００１）,结果显示ＯＮＯＯ－可以抑制由ｂＦＧＦ诱导的ＥＲＫ磷酸化水平的增加（Ｆ＝３１０．３４,Ｐ＜０．０５）。ＯＮＯＯ－（５０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ｂＦＧＦ处理组中磷酸化ＥＲＫ相对表达值分别为３．３６±０．０４、３．３２±０．０６和２．９２±０．０８,与对照组（１．００±０．０２）相比,所有处理组的ＥＲＫ磷酸化水平均显著增加（Ｆ＝５１８．９４,Ｐ＜０．００１）;５０μｍｏｌ·Ｌ－１和１００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理细胞后经ｂＦＧＦ处理,ＥＲＫ磷酸化水平较ｂＦＧＦ单独处理组（３．０４±０．０５）显著增加（Ｆ＝３５．５３,Ｐ＜０．０５）,而２００μｍｏｌ·Ｌ－１ＯＮＯＯ－处理组与ｂＦＧＦ单独处理组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＯＮＯＯ－诱导的白内障的发生可能与ＥＲＫ磷酸化的紊乱有关。     

白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子在视网膜瞬间缺血重新灌注前后的定量分析

目的 观察瞬间性视网膜缺血重新灌注对大鼠视网膜白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）含量的影响。方法 实验对象为２１只（４２眼）ＳＤ大鼠。以升高眼压的方法造成瞬间性视网膜缺血重新灌注的模型。视网膜内ＩＬ－１β和ＴＮＦα的含量用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）的方法定量。结果 正常的视网膜内含有少量的ＩＬ－１β和ＴＮＦα；视网膜缺血１ｍｉｎ和５ｍｉｎ组，视网膜内ＴＮＦα在缺血重新灌注的过程中与正常视网膜内的含量比较，均无显著性差异（Ｐ〉０．０５），但视网膜内的ＩＬ－１β在缺血重新灌注后６ｈ则比正常视网膜含量显著性增加（Ｐ〈０．０５）。结论 瞬间性视网膜缺血重新灌注可以影响大鼠视网膜ＩＬ－１β和ＴＮＦα含量的改变，这种改变与视网膜缺血的程度有关。     

β—转化生长因子的提纯及其对内毒素诱发的葡萄膜炎的抑制作用

目的：探讨β－转生化因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）对内毒素诱发的葡萄膜炎（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｕｖｅｉｔｉｓ，ＥＩＵ）的预防作用，方法：用生物凝胶Ｐ－６０层析的方法从人血小板提取化ＴＧＦ－β用其处理内毒素对大鼠点眼或腹腔注射，进行临床观察和比较，结果：用生物凝胶Ｐ－６０层析获得了高纯度的ＴＧＦ－β用其点眼或腹腔注射，使ＥＩＵ的发生的推迟约４小     

血清可溶性肿瘤坏死因子受体与2型糖尿病视网膜病变相关性研究

目的　研究血清可溶性肿瘤坏死因子受体（ｓｏｌｕｂｌｅｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ,ｓＴＮＦＲ）与２型糖尿病视网膜病变的相关性。方法　６６例２型糖尿病患者通过眼底检查和眼底荧光血管造影按照ＥＤＴＲＳ分期分为３组:无糖尿病视网膜病变（ｎｏｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ;ｎ＝２２）组、非增殖型糖尿病视网膜病变（ｎｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ;ｎ＝２４）组和增殖型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ;ｎ＝２０）组。２１名健康人作为对照组。检测４组研究对象血清中肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）-α、ｓＴＮＦＲ-１、ｓＴＮＦＲ-２水平。组间统计分析采用非参数Ｍａｎｎ-ＷｈｉｔｎｅｙＵ检验。结果　血清中ＴＮＦ-α中位数分别为:对照组０ｐｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组３．４５ｐｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组３．９２ｐｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组８．１２ｐｇ·ｍＬ－１。对照组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、ＮＤＲ组与ＰＤＲ组（Ｐ＝０．００８）比较差异均有统计学意义。血清中ｓＴＮＦＲ-１水平中位数:对照组１．５０ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组１．８８ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组２．５８ｎｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组３．００ｎｇ·ｍＬ－１。对照组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、对照组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、ＮＤＲ组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＝０．００７）、ＮＤＲ组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）比较,差异均有统计学意义。血清中ｓＴ-ＮＦＲ-２中位数分别为:对照组３．８８ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组５．０１ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组５．２１ｎｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组６．３３ｎｇ·ｍＬ－１。除了ＮＤＲ组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＝０．０７０）间差异无统计学意义外,其他组间差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　血清中ｓＴＮＦＲ与２型糖尿病视网膜病变密切相关,表明ｓＴＮＦＲ在糖尿病视网膜病变的发生发展中起到了一定的作用。对ｓＴＮＦＲ进行进一步研究可以寻找治疗糖尿病视网膜病变新的靶点。     

通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的作用

目的　观察通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路的影响。方法　４０只ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠随机分为模型组、通心络低（１ｇ?ｋｇ－１）、中（２ｇ?ｋｇ－１）、高（４ｇ?ｋｇ－１）剂量组,每组各１０只,１０只Ｃ５７ＢＬ／６小鼠为对照组。通心络组按相应剂量灌胃给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天１次,连续１２周。测定体质量、空腹血糖值（ｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕ-ｃｏｓｅ,ＦＢＧ）,伊文思蓝法（ｅｖａｎｓｂｌｕｅｍｅｔｈｏｄ,ＥＢ）测定血-视网膜屏障的通透性,ＨＥ染色法观察视网膜形态学变化,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定ＩＫＫβ、ＩＫＢα、ＮＦ-κＢｍＲＮＡ和蛋白的表达及Ｐ-ＩＫＢα和核ＮＦ-κＢ蛋白的表达。结果　通心络高剂量组较中、低剂量组细胞结构更致密,排列更有序。通心络低、中、高剂量组ＥＢ含量分别（２０．８２±３．８８）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．４３±２６０）ｎｇ?ｍＬ－１、（１６．１４±２．４２）ｎｇ?ｍＬ－１,较模型组（２５．５３±３．５７）ｎｇ?ｍＬ－１明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。通心络中、高剂量组ＩＫＫβｍＲＮＡ和蛋白表达量较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）;通心络组ＩＫＢαｍＲＮＡ,通心络中、高剂量组ＩＫＢα蛋白以及Ｐ-ＩＫＢα蛋白的表达均较模型组显著下降（均为Ｐ＜０．０１）,通心络低、中、高剂量组核ＮＦ-κＢ蛋白表达量为０．５２±０．０５、０４３±００５、０３４±０．０４,显著低于模型组（０．６１±０．０７）（均为Ｐ＜０．０５）。结论　通心络胶囊可明显改善ＫＫ／Ｕｐｊ-Ａｙ小鼠视网膜病变,其机制与抑制ＩＫＫβ／ＩＫＢα／ＮＦ-κＢ通路相关。     

MTT法检测转化生长因子—β对人角膜基质

目的 探讨转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对体外培养的人角膜基质细胞增殖的影响。方法 体外培养的传２～３代人角膜基质细胞,分别加入０．０１,０．１,１,５ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β,采用ＭＴＴ法研究ＴＧＦ－β对人角膜基质细胞增殖的影响。结果 ＴＧＦ－β以剂量依赖方式促进人角膜基质细胞增殖,其作用在第２天达到高峰。结论 ＴＧＦ－β能明显促进人角膜基质细胞增殖,因而可能成为促进角膜溃疡愈合的新方法。     

miRNA-184在TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达

目的　研究ｍｉＲＮＡ-１８４（ｍｉＲ-１８４）在转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦ-β２）诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法　应用不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２ 诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察转分化相关分子波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、钙黏附蛋白Ｅ（Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达;应用ｑＲＴ-ＰＣＲ检测ｍｉＲ-１８４在不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２、不同作用时间（０ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）ＴＧＦ-β２（１０μｇ·Ｌ－１）诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果　随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞胞浆中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ荧光强度增强;Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达逐渐减少,各组细胞间Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝８７．６１７,Ｐ＜０．０１）;Ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝６８．９２３,Ｐ＜０．０１）。随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增多,在１０μｇ·Ｌ－１ＴＧＦ-β２诱导组达到峰值;随着ＴＧＦ-β２诱导时间的延长,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增加,在２４ｈ表达达到峰值。结论　ＴＧＦ-β２诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内ｍｉＲ-１８４表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究ｍｉＲ-１８４在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。     

兔自身免疫性干眼模型的建立及泪腺炎症因子研究

目的　通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法　通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。结果　与正常对照组相比,干眼模型组泪液分泌显著减少（ｔ＝１１５．６,Ｐ＜０．０５）,泪膜破裂时间缩短（ｔ＝９２．５,Ｐ＜０．０５）。荧光素钠染色显示角膜弥漫性点状着色,正常对照组基本无着色。泪腺组织ＨＥ染色显示淋巴细胞浸润,正常对照组很少。ＲＴ-ＰＣＲ结果显示,干眼模型组泪腺中炎性因子ＩＦＮ-γ、ＩＬ-６、ＩＬ-１７ｍＲＮＡ相对表达量显著升高（ｔ＝２６．２、１８．７、８．４;均为Ｐ＜０．０５）,抑炎因子ＩＬ-１０、ＴＧＦ-βｍＲＮＡ相对表达量显著降低（ｔ＝２２．１、１４．２;均为Ｐ＜０．０５）。结论　经兔泪腺上皮细胞激活的自体外周血淋巴细胞静脉回输后,成功诱发干燥综合征样自身免疫泪腺炎,建立了稳定的兔自身免疫性干眼模型。泪腺组织中细胞因子ＩＬ-６、ＩＬ-１７、ＩＦＮ-γ、ＴＧＦ-β、ＩＬ-１０参与泪腺内炎症反应的发生和发展。