PPARγ激动剂对MKN-45胃癌细胞系增殖及MMP-γ基因表达的影响

目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorγ,PPARγ)激活剂罗格列酮对人胃癌细胞系MKN45增殖和MMP7基因表达的影响。方法:不同浓度罗格列酮干预细胞后,用台盼蓝拒染法检测胃癌细胞株增殖活性,用RTPCR法检测MMP7基因表达情况。结果:罗格列酮作用24h明显降低MKN45细胞的存活率,与对照组比较有显著差异(P<0.05),细胞存活率随着药物浓度增加而降低;MMP7基因表达随着药物浓度增加而下降。结论:在胃癌细胞株MKN45中,罗格列酮与PPARγ作用而激活下级信号传导,抑制胃癌细胞的增殖,且下调MMP7基因的表达。     

吡格列酮对胃癌细胞生长的影响及其机制的研究

目的 :研究过氧化物酶增殖因子活化受体γ(PPARγ)在人胃癌细胞株MKN 45的表达 ;观察PPARγ激活剂吡格列酮对胃癌细胞生长的影响以及是否引起凋亡基因c myc表达的变化 ,探讨其作用机制。方法 :采用RT PCR法检测PPARγ的表达 ,以不同浓度的吡格列酮干预细胞的生长 ,四甲基偶氮唑盐比色法检测吡格列酮激活剂对胃癌细胞株增殖活性的效应 ,RT PCR法检测药物干预前后c myc基因表达的变化。结果 :PPARγ在胃癌细胞株MKN 45中有表达。 0 .0 1μmol·L- 1 吡格列酮对MKN 45细胞的增殖无明显影响 ;1μmol·L- 1 吡格列酮作用 48h则明显降低MKN 45细胞的存活率 ,与不加吡格列酮的对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,随着药物浓度增加和培养时间延长 ,这一作用愈加明显。随着药物浓度的增加 ,c myc基因的表达呈下降趋势。结论 :PPARγ在胃癌细胞株MKN 45中有表达 ,PPARγ激活剂吡格列酮抑制胃癌细胞的生长 ,且引起c myc基因表达的下调 ,其可能是PPARγ激活剂抑制MKN45细胞生长的机制之一     

罗格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外抗肿瘤作用

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长影响,以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力. 方法:噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDA-MB-231细胞体外生长抑制作用;应用PPARγ拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖影响与PPARγ受体关系;流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC和TUNEL法检测细胞凋亡. 结果:罗格列酮干预下MDA-MB-231细胞G0/G1期比例上升,而S期比例下降,呈量-效关系抑制其生长,IC50=5.2 μmol/L. PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用(P＜0.05);100 μmol/L罗格列酮还可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与Annexin V-FITC法检测的结果一致[(16.6±2.7)%](P＞0.05). 结论:罗格列酮通过PPARγ介导,使MDA-MB-231细胞G1期阻滞而抑制其增殖,高浓度时还可诱导其发生凋亡,罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.     

罗格列酮对大肠癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)在大肠癌细胞HT-29中的表达及PPARγ配体罗格列酮(Rosiglitazone,Rosi)对大肠癌细胞HT-29生长的影响.方法采用RT-PCR和免疫印迹(Western blot)法检测HT-29中PPARγmRNA及蛋白质的表达,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测罗格列酮对HT-29锚定依赖生长的影响,采用软琼脂集落形成试验检测罗格列酮对HT-29锚定非依赖生长的影响.结果大肠癌细胞HT-29中有PPARγmRNA及蛋白质的表达,MTT结果显示罗格列酮可抑制HT-29的锚定依赖生长,且具有时间、剂量依赖效应,软琼脂集落形成试验表明罗格列酮尚可抑制HT-29的锚定非依赖生长,且这种作用在一定时间内是不可逆的.结论 PPARγ在大肠癌细胞HT-29中有表达,PPARγ被其配体活化后可抑制大肠癌细胞的生长.     

PPAR激动剂罗格列酮对人子宫肌瘤细胞的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROT)对人子宫肌瘤的增值抑制作用及分子机制。方法给予原代培养的子宫肌瘤不同浓度的罗格列酮处理,以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定细胞生长抑制率;以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PPARγm RNA以及凋亡基因Bax、Bcl-2在子宫肌瘤细胞中的表达及罗格列酮对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响。结果罗格列酮可抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。RT-PCR提示罗格列酮可促进PPARγm RNA、Bax表达,抑制Bcl-2表达。结论过氧化物酶增殖物激活受体激动剂罗格列酮抑制子宫肌瘤的增值可能是通过上调PPARγ、Bax的表达及下调Bcl-2的表达来发挥作用的。     

艾恒与传统化疗药物在不同分化程度胃癌细胞株中敏感性的研究

目的:探讨不同分化程度胃癌细胞对艾恒、5-FU、MMC和VP-16的敏感性。方法:将不同浓度的化疗药物与两株不同分化程度的胃癌细胞株共同温育,采用MTT方法检测化疗各药物对胃癌细胞增殖的影响。结果:四种化疗药物对两株胃癌细胞的增殖均具有显著的抑制作用,MKN45细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>VP-16>艾恒>5-FU,而SGC7901细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>艾恒>VP-16>5-FU。中分化的SGC7901对艾恒、MMC、VP-16的敏感性均显著高于低分化的MKN45,而MKN45对5-FU的敏感性高于SGC7901。结论:不同分化程度的胃癌细胞对药物的敏感性不同。     

胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响

目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达。结果:PG(10-6mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强。同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量。结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达。提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关。     

多西他赛抑制胃癌MKN45细胞增殖的研究

目的: 探讨多西他赛治疗胃癌细胞的作用机制.方法: 采用不同浓度的多西他赛处理胃癌MKN45细胞后,四唑盐比色试验检测癌细胞生长,分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡,采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素(survivin)基因mRNA、蛋白表达情况.结果: 多西他赛抑制胃癌MKN45细胞的恶性增殖,且呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示,多西他赛处理组出现凋亡现象,且呈浓度依赖性.多西他赛处理组存活素基因mRNA、蛋白表达下调,且呈时间和浓度依赖性.结论: 多西他赛体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖,与诱导凋亡,下调存活素基因表达有关.     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞内皮素-1基因表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对经血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响,探讨罗格列酮对动脉粥样硬化过程中分子调控网络的作用。方法:罗格列酮干预AngⅡ处理后的HUVECs,通过RT-PCR、实时定量PCR检测内皮细胞PPARγ、ET-1基因mRNA表达,Western blot检测细胞PPARγ、ET-1前体蛋白、Akt、ERK1/2的表达,ELISA法检测细胞上清中TNF-α含量。结果:AngⅡ可上调HUVEC中PPARγmRNA及蛋白表达量、ET-1mRNA及ET-1前体蛋白表达,TNF-α分泌量呈浓度依赖性增高,ERK1/2的表达量增加;罗格列酮干预后细胞PPARγ表达量明显升高,ET-1表达量明显降低,细胞上清TNF-α含量明显降低,ERK1/2的表达被抑制。Akt的表达没有变化。结论:罗格列酮通过上调PPARγ基因的表达,抑制ERK1/2信号转导途径,影响AngⅡ处理的HUVECs中ET-1基因及其前体蛋白的表达,抑制炎症因子TNF-α的分泌。     

罗格列酮通过诱导DLK1表达预防大鼠胃癌发生

目的我们前期研究证实PPARγ配体罗格列酮（RSG）具有预防化学致癌剂N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍（MNNG）诱导大鼠胃癌发生的作用,本研究拟探讨罗格列酮防治胃癌的机制。方法采用微阵列技术对罗格列酮体内干预的大鼠胃癌实验模型进行基因表达谱的分析研究,筛选PPARγ配体抗肿瘤新的靶基因并予验证。结果采用微阵列技术在大鼠胃癌组织中筛选出79个上调的差异表达基因,其中RSG处理组大鼠胃癌组织中DLK1基因表达显著高于MNNG诱癌组。同时我们检测MNNG诱癌组14例大鼠胃癌组织及癌旁组织中DLK1的mRNA水平,发现胃癌组织中DLK1表达明显低于癌旁组织。体外实验结果显示罗格列酮诱导AGS细胞PPARγ及DLK1的表达,并呈剂量依赖,PPARγ桔抗剂GW9662能阻断罗格列酮诱导DLK1表达的作用。结论罗格列酮通过PPARγ依赖途径诱导AGS胃癌细胞DLK1的表达,诱导DLK1表达可能是罗格列酮预防胃癌发生机制之一。     

K-ras诱导Fascinl高表达对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响

目的:探讨K-ras诱导Fascinl高表达对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响。方法:将K-ras质粒(突变型)和阴性对照质粒转染人胃癌细胞系MKN45细胞,运用Western blotting、RT-PCR方法检测Fascinl的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:与对照组比较,实验组MKN45细胞在490nm处的A值转染后48、72h时有明显差异(P<0.05),即实验组细胞生长明显增加。用Western blotting及RT-PCR检测蛋白及mRNA表达,结果显示,与转染前比较,K-ras突变质粒转染MKN45后Fascinl的表达增加,差异有显著性(P<0.05)。结论:K-ras突变诱导Fascinl高表达促进了胃癌细胞的增殖能力。     

健脾中药胃肠安与5-FU相互作用的中效原理评价

目的:采用中效原理探讨健脾复方胃肠安(Weichang′an,WCA)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的相互作用,并观察体外对胃癌细胞MKN45的增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:本实验选取人胃癌细胞株MKN45为实验对象,用不同浓度的WCA、5-FU单药和两药11浓度配比联合作用于胃癌细胞(24 h,48 h,72 h),Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测药物对胃癌细胞抑制作用。根据中效原理分析两药联合作用的效应(Fa)与合用指数(CI)的关系,判定药物间的相互作用。以药物单用及合用的1/2倍中效浓度作用于MKN45细胞,流式细胞凋亡检测法评价药物对细胞周期、凋亡的影响,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态。结果:两种药物单独应用或联合应用均对胃癌细胞有明显的抑制作用,并且呈剂量效应依赖关系。由中效原理计算可知,两药联合应用抑制胃癌细胞增殖作用增强,存在协同效应。细胞周期检测提示WCA与5-FU均阻滞细胞周期于S期,两药联用时更加显著;流式细胞凋亡检测与Hoechst染色均发现单药组细胞凋亡现象较对照组明显,而联合组细胞凋亡现象更加明显。结论:健脾中药WCA与5-FU联合应用对胃癌MKN45细胞产生协同效应。     

小檗碱抑制人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞增殖及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ的关系

目的 探讨小檗碱对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231 体外生长的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系，以评价其在乳腺癌治疗中的应用潜力。方法 采用 MTT 法检测小檗碱对 MDA-MB-231 细胞的生长抑制效应；TUNEL 法检测细胞凋亡；联合 PPARγ拮抗剂 GW9662，分析小檗碱对 MDA-MB-231 细胞增殖的影响与 PPARγ受体的关系；实验同时采用罗格列酮作为阳性药进行平行比较分析。结果 小檗碱呈量-效和时-效关系抑制 MDA-MB-231 细胞生长，24 h 的半数抑制浓度 (IC₅₀) 为 0.21 μmol/L；小檗碱诱导 MDA-MB-231 细胞凋亡作用随药物浓度的增加而增强；PPARγ受体拮抗剂不能逆转小檗碱对细胞增殖的抑制作用。结论 小檗碱可明显抑制 MDA-MB-231 细胞生长，但与罗格列酮不同，其作用不通过 PPARγ受体介导；小檗碱诱导 MDA-MB-231 细胞凋亡的效应较罗格列酮更为显著；小檗碱可望成为治疗乳腺癌的有效药物。     

过氧化物酶增殖激活受体配体罗格列酮通过诱导Rin1表达上调预防胃癌发生

[目的]我们前期研究发现过氧化物酶增殖激活受体(PPARγ)配体罗格列酮(RSG)具有明显预防化学致癌剂N-甲基-N'-硝基-亚硝基胍(MNNG)诱导大鼠腺胃癌发生的作用,然机制不甚明确,本研究拟探讨RSG防治实验性胃癌的可能机制.[方法]采用微阵列技术比较RSG处理组和对照组大鼠腺胃癌组织基因表达谱的差异,筛选出PPARγ配体抗肿瘤的可能靶基因,并对该靶基因的作用进行验证.[结果]采用微阵列技术在大鼠腺胃癌组织中筛选出79个上调的差异表达基因,其中RsG处理组大鼠腺胃癌组织中Rin1(Ras interference 1,Rin1)基因表达显著高于对照组;检测人胃癌组织发现Rin1基因表达明显低于正常胃粘膜组织(P<0.05).体外实验结果显示RSG可诱导人胃癌细胞株AGS细胞的PPARγ及Rin1的表达,并呈剂量依赖,PPARγ拮抗剂(GW9662)能阻断RSG诱导Rin1的表达.[结论]PPARγ配体罗格列酮可能通过PPAEγ依赖途径上调Rin1基因的表达而预防大鼠实验性腺胃癌的发生.     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

PPAR-γ及CTGF对肝癌细胞生长的影响及相互作用的研究

目的 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)及结缔组织生长因子(CTGF)对肿瘤细胞的生物学行为都有一定的影响,本文旨在探讨二者对肝癌细胞生长的影响及二者之间的关系.方法 培养人肝癌细胞HepG-2,经不同浓度、不同时间的PPAR-γ激动荆罗格列酮(RGZ)及CTGF抗体封闭处理后.MTT法检测细胞活力,博依登小室测定细胞侵袭及迁移特性的改变.RT-PCR检测经RG乙处理前后CTGF mRNA表达的变化.结果 罗格列酮及CTGF抗体处理后肝癌细胞的增殖均受抑制,且呈时间和剂量依赖性,同时细胞的侵袭、迁移能力也受到抑制.且经RGZ处理后,CTGFmRNA的表达较处理前下降.结论 PPAR-γ和CTGF都可以影响肝癌细胞的增殖、侵袭及迁徒能力,PPAR-γ调控肝癌细胞的生长部分是通过调控CTGF的表达来实现的.     

PPARγ mRNA在卵巢颗粒细胞的表达调节及与多囊卵巢综合征的相关性

目的:研究PPARγmRNA在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞的表达,以及不同浓度的睾酮、胰岛素及罗格列酮对卵巢颗粒细胞细胞核过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)mRNA的表达调节。方法:分别提取5例PCOS患者和30例正常人卵巢颗粒细胞,对PCOS患者及5例正常人(对照组)颗粒细胞应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA表达;剩余25例正常人卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h后,分别用含不同浓度的睾酮、胰岛素及PPARγ激动剂(罗格列酮)的培养基培养颗粒细胞24 h后,应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA的表达。结果:PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达明显低于对照组(P<0.05)。睾酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达明显减少(P<0.05);睾酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达升高,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。胰岛素浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当胰岛素浓度为100 nmol/L时,PPARγmRNA的表达与胰岛素浓度为10 nmol/L时差异无统计学意义(P>0.05)。罗格列酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当罗格列酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较罗格列酮浓度为1 nmol/L时明显增加(P<0.05)。结论:卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达与睾酮的浓度有关,胰岛素诱导颗粒细胞PPARγmRNA的表达,颗粒细胞PPARγmRNA的表达受PPARγ的正向调节,PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达异常可能与PCOS的发生有关。     

曲格列酮诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的观察过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPAR-γ）的配体曲格列酮（troglitazone,TGZ）对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,SGC-7901细胞分为对照组和曲格列酮不同浓度（5、10、15、20μmol／L）加药组,应用流武细胞仪检测曲格列酮不同浓度对胃癌SGC-7901细胞凋亡率的影响;RT—PCR及Western blot方法观察PPARγ、p53的mRNA及蛋白表达变化。结果曲格列酮可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;曲格列酮干预后,p53的mRNA及蛋白在胃癌SGC-7901细胞中表达上调,而PPARγ的mRNA及蛋白表达水平无明显改变。结论曲格列酮依赖激活PPARγ能在体外诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调抑癌基因p53表达而实现,提示PPA即可能是胃癌治疗的一个新分子靶点。     

榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株PPARγ基因的影响

目的通过观察榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株生长以及对过氧化物酶体增殖激活物受体γ（PPARγ）mRNA表达的影响，探讨榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖的可能机制。方法用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞，CCK-8法观察细胞增殖抑制作用；RT—PCR法检测胃癌SGC-7901细胞中PPARγ mRNA表达的变化。结果榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖，呈浓度和时间依赖性；作用48h后明显抑制胃癌SGC-7901细胞PPARγ基因表达，呈浓度依赖性。结论榄香烯可能通过下调PPARγ mRNA表达抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖。     

脓毒症大鼠PPARγ与脂联素表达水平的相关性研究

目的 观察脓毒症大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)与脂联素(ADPN)表达水平的关系.方法 雄性SPF级SD大鼠30只,体重量180～200g,随机分为正常对照组、脓毒症组、脓毒症+PPARγ激动剂(罗格列酮)干预组,每组10只.采用尾静脉注射内毒素(LPS)方法制备大鼠脓毒症模型,24 h后取血分离外周血单核细胞(PBMC),RT-PCR和Western blot方法检测PBMC中PPARγ基因表达水平,ELISA检测血浆中ADPN水平变化趋势.结果 与正常对照组相比,脓毒症组大鼠PBMC中PPARγ表达水平和血浆中的ADPN水平明显降低,而罗格列酮(RSG)处理的脓毒症组则显著上升.结论 脓毒症大鼠PPARγ基因表达与ADPN水平降低,RSG干预的脓毒症大鼠PPARγ,基因表达与ADPN水平上升,两者呈正相关性;PPARγ表达水平下调可能是脓毒症大鼠血浆ADPN表达下调的机制之一.