瘦素对成骨细胞增殖及Collagen I和Cbfa1 mRNA表达的影响

目的 研究瘦素在体外对原代培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖及对CollagenI(I型胶原蛋白)和Cbfa1 mRNA表达的影响.方法 培养乳鼠成骨细胞,以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,采用MTT法检测不同浓度瘦素(0、40、80和160 ng/ml)作用于成骨细胞后的增殖情况;通过RT-PCR方法检测不同浓度瘦素对CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达的影响.结果 瘦素作用于成骨细胞后,可促进其增值,OD值显著增加(P<0.01);瘦素增加CollagenI和Cbfa1 mRNA的表达,呈剂量效应关系.结论 瘦素促进成骨细胞增殖,同时通过调节CollagenI和Cbfa1的表达,促进成骨细胞分化,进而促进骨形成.     

瘦素对成骨细胞增殖及CollagenⅠ和Cbfa1 mRNA表达的影响

目的研究瘦素在体外对原代培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖及对CollagenⅠ(Ⅰ型胶原蛋白)和Cbfa1 mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,采用MTT法检测不同浓度瘦素(0、40、80和160ng/ml)作用于成骨细胞后的增殖情况;通过RT-PCR方法检测不同浓度瘦素对CollagenⅠ和Cbfa1 mRNA的表达的影响。结果瘦素作用于成骨细胞后,可促进其增值,OD值显著增加(P0.01);瘦素增加CollagenⅠ和Cbfa1 mRNA的表达,呈剂量效应关系。结论瘦素促进成骨细胞增殖,同时通过调节CollagenⅠ和Cbfa1的表达,促进成骨细胞分化,进而促进骨形成。     

白藜芦醇与化疗药物体内体外合用对小鼠肝癌细胞生长的影响

本实验检测白藜芦醇单用及与化疗药物合用对体外培养鼠肝癌细胞株H2 2(腹腔接种传代 )生长的影响 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :白藜芦醇购自Sigma公司(用二甲基亚酚溶解 ) ;小鼠肝癌H2 2细胞由本校免疫病理教研室提供 ,在含10 %小牛血清RPMI 164 0 (购于Gibco公司 )中培养 ;76只BALB/C小鼠 (购于西安交通大学医学院实验动物中心 )雌雄兼用 ;体重 (2 0± 2 ) g。 5 Fu购于西安交通大学第一医院西药房。2 .方法 :(1)将肝癌细胞H2 2细胞数(2× 10 4/孔 )接种在 96孔培养板上 ,在5 %CO2 、3 7.0℃培养箱中温育 12h后 ,分…     

碘仿混合物绷带填塞治疗肝外伤时可能的局部副作用的实验观察

本实验通过对大白兔肝外伤术前、术后肝功能变化的对比研究 ,探讨碘仿混合物绷带填塞对肝功能的影响及其可能作用机制 ;同时通过对肝脏组织常规病理及免疫组织化学研究 ,探讨碘仿混合物对肝细胞的直接作用。材料与方法1.材料和实验动物 :碘仿混合物绷带 (自制 ) ;增殖细胞核 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)抗体 (小鼠抗兔 )(美国CALBIOCHEM ) ,ABC试剂盒 (武汉博士德公司 ) ,DAB显色剂 (美国SIGMA) ;清洁级新西兰大白兔 2 1只 (雄性 8只 ,雌性 13只 ) ,重 2 3～ 3 0kg ,购自第一军医大学实验动物中心。2 .实验分组及动…     

低温和复温影响鼠肠缺血再灌注损伤后粘膜绒毛的微循环

小肠对缺血 再灌注 (Ｉ/Ｒ)损害极为敏感 ,低温虽可减少细胞损伤 ,但对肠Ｉ/Ｒ后粘膜绒毛微循环的影响限度则了解不多 ,为此作下列实验研究。取ＰＶＧ鼠使其中心体温在 3 6～ 3 8℃ ( 1 2只鼠 )或 3 0～ 3 2℃ ( 2 4只鼠 ) ,小肠缺血历时 3 0分钟。其中第 1组使动物在常温下行缺血 再灌注实验 ,第 2组在低温下钳夹肠系膜上动脉使之缺血 3 0分钟 ,去除钳夹后使再灌注 1 2 0分钟 ;第 3组 ,在冷灌注后 90分钟复温至 3 6～ 3 8℃(在 3 0分钟内 ) ;第 4组 (对照组 )和第 1组正常体温Ｉ/Ｒ动物均维体温于 3 6～ 3 8℃。外置一段回肠 ,观察粘膜表…     

人工肝生物反应器的研究现状

体外人工肝支持系统 (简称人工肝 )是国外近年来发展起来为肝衰竭患者提供体外肝功能支持的装置 ,这一技术的出现与发展为肝衰竭的治疗开辟了新途径。在各类人工肝装置中 ,以体外培养肝细胞作为生物成分的新型生物人工肝被认为是最有前途的 ,己在动物实验及临床应用中取得了较好的疗效[1] 。其基本原理是将体外培养增殖的肝细胞 (人肝细胞、哺乳动物肝细胞或肝细胞株 )置于体外循环装置 (生物反应器 )中 ,患者血液 (血浆 )流过生物反应器时 ,通过容器内的纤维素半透膜或直接与肝细胞进行物质交换 ,从而达到人工肝支持的目的。生物反应器是生…     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子抑制肿瘤生长(英)

细胞素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)具有刺激骨髓细胞生成活力,是一14kD的糖蛋白,由活化T细胞、内皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞所分泌.为了阐明其抗肿瘤作用,作者在鼠癌肿模型中进行实验性研究.取60只雌性C57/B16J鼠,在右胁皮下接种Lewis肺癌细胞,接种后7～10天均出现可们及的肿瘤,14天时其容积可达0. 4cm~3,随机注射GM-CSF 1μg/d(22只)、0.5μg/d(24只)和盐水(14只)作为对照,均注肘10天,21天后处死.另在CD-1鼠作体内细胞毒性试验,随机在腹腔内注射GM-CSF0.5μg/d(7只)或盐水(9只),共5天,杀死动物,获取腹膜细胞作其抗肿瘤活力评估.并取GD-1鼠的腹膜细胞(30只)加入GM-CSF 50 ng/ml或不加入GM-CSF一起培养24小时(超氧化物基)或72小时(氮氧化物)作体外细胞毒性分析.     

Fas介导肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的研究

肝脏缺血再灌注 (Ｉ/Ｒ)损伤常见于临床上入肝血流阻断肝切除术和肝移植。我们通过复制肝硬化大鼠肝Ｉ/Ｒ模型 ,测定Ｆａｓ凋亡途径上游Ｆａｓ ｍＲＮＡ表达和下游Ｃａｓｐａｓｅ 3活性及不同Ｉ/Ｒ条件下的肝细胞凋亡 ,探讨Ｆａｓ是否参与了肝Ｉ/Ｒ条件下的肝细胞凋亡。一、材料与方法1.实验动物及肝硬化模型的复制[1] :7～ 8周龄雄性ＳＤ大鼠 (中山医科大学动物中心提供 ) ,40只体重 2 0 0～2 3 0 ｇ。腹腔内注射硫代乙酰胺 (中国医药上海化学试剂公司 ,剂量为 2 0 0ｍｇ/ｋｇ体重 ) ,隔天 1次 ,共 10周 ,大鼠自由进食。造模成功后 2周开始…     

人参皂苷Rb1对体外条件下大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

本研究旨在观察人参皂苷Rb1在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响.一、材料与方法实验于南方医科大学实验中心完成.1.材料:5周龄SD大鼠6只,体质量150～200 g.试剂:人参皂苷Rb1干粉由中国药品生物制品检定所提供.     

高原体外生物人工肝治疗急性肝衰竭

我们在高原环境条件下以体外培养猪肝细胞构建生物人工肝(BAL),探讨其对动物急性肝衰竭(AHF)的支持治疗效果. 一、材料与方法 随机选取已适应本地高原环境的健康长白仔猪(体质量28.5-33.0 kg,雌雄不拘)4头用于分离肝细胞制备中空纤维型生物反应器[1],6头用于以3％硫代乙酰胺(TAA)制备AHF模型[2].     

乳猪肝细胞旋转培养的意义

我们采用普通培养箱对乳猪肝细胞进行旋转培养 ,旨在探讨保持肝细胞良好功能和体外大规模培养的简便方法 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :本地杂种小猪 4头 ,雌雄不限 ,猪龄 10～ 15ｄ ,体重 2 .5～ 2 .9ｋｇ。2 .肝细胞分离 :采用改良的原位两步胶原酶灌注法。3 .旋转培养 :分离的肝细胞用含体积分数为 10 %的新生小牛血清、2 0 0μｇ/Ｌ氢化可的松 ,2 0 0 μｇ/Ｌ肝细胞生长因子、10 μｇ/Ｌ表皮生长因子、10 μｇ/Ｌ神经生长因子、10 0 μｇ/Ｌ胰岛素、2 0 0μｇ/Ｌ先锋必、10万Ｕ /Ｌ青霉素和 10 0μｇ/Ｌ链霉素的ＲＰＭＩ 1…     

肝细胞生长因子对大鼠颌下腺细胞增殖的影响

目的　研究肝细胞生长因子 (HGF)对体外培养大鼠颌下腺细胞增殖的剂量 效应及时间 效应。方法　采用体外颌下腺细胞培养在含 1 0 %胎牛血清的合成培养液 (DMEM) ,实验组分别加入不同浓度的HGF ,利用噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞的增殖能力 ,研究HGF对颌下腺细胞增殖的影响。结果　在 1 0 %胎牛血清配制的DMEM含HGF(1 .0～ 1 0 0 0 .0 μg/L)可促进培养细胞的增殖 (P <0 .0 1 ) ,且在一定浓度范围内HGF(1 .0、5 .0、1 0 .0、50 .0、1 0 0 .0 μg/L)呈剂量 效应关系 ,最大效应剂量为 1 0 0 .0 μg/L。加入HGF第 3天开始显示出明显的促增殖效应。 结论　HGF在 1 0 %胎牛血清DMEM培养条件下能够促进颌下腺细胞的增殖和分化 ,经体外条件培养的颌下腺细胞可以作为组织工程学研究中的细胞来源     

胶原凝胶包埋肝细胞体外培养和腹腔移植的研究

目的　研究改进肝细胞腹腔移植的方法。方法　用胶原凝胶包埋大鼠肝细胞 ,并在体外培养 ,测定培养液中总蛋白 (TP)和尿素氮 (BUN)水平。将胶原培养液与鼠肝细胞混合后注入大鼠腹腔 ,混合物在腹腔内形成凝胶并包埋肝细胞。用含酶的培养液将受者鼠腹腔内的移植肝细胞洗出 ,再置于无葡萄糖培养液中培养 ,测定培养液中葡萄糖含量。对照组处理过程与实验组相同 ,但不用胶原。结果　胶原凝胶包埋肝细胞组的TP、BUN和葡萄糖含量均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。胶原培养液与肝细胞混合物在注入腹腔 2 4h后变为凝胶。结论　胶原凝胶可促进体外培养或腹腔移植的肝细胞生长 ;胶原培养液腹腔注射和腹腔内胶原凝胶包埋细胞法 ,使肝细胞的腹腔移植更简便、安全、实用。     

异丙酚预处理对乳鼠肝细胞氧-糖缺失/恢复时凋亡的影响

目的探讨异丙酚预处理对乳鼠肝细胞氧-糖缺失/恢复时凋亡的影响及其机制。方法出生1～3 d健康SD乳鼠30只、体重7～11 g,雌雄不拘,提取乳鼠肝细胞,用10%胎牛血清的高糖DMEM培养基孵育6 d后,随机分为5组（n=6）,空白对照组（C组）;单纯氧-糖缺失/恢复组（O组）建立氧-糖缺失/恢复模型;不同浓度异丙酚预处理组（P25组、P50组、P100组）分别用含终末浓度为25、50、100μmol/L的异丙酚培养液预处理后建立氧-糖缺失/恢复模型。观察肝细胞凋亡情况,采用免疫组织化学方法测定肝细胞Bcl-2蛋白、p53蛋白的表达。结果与C组比较,O组、P25组、P50组、P100组的肝细胞凋亡率增加,Bcl-2蛋白表达下调,p53蛋白表达上调;与O组比较,P25组、P50组、P100组的肝细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调,p53蛋白表达下调（P〈0.01）,且呈浓度依赖性。结论异丙酚25、50、100μmol/L预处理对氧-糖缺失/恢复的乳鼠肝细胞具有保护作用,且呈浓度依赖性,其机制可能与下调p53蛋白的表达和上调Bcl-2蛋白的表达有关。     

颌下腺细胞在不同孔隙率支架材料上相容性的研究

目的　研究颌下腺细胞与支架材料体外复合培养中 ,支架材料的孔隙率对颌下腺细胞黏附、增殖及分化的影响。方法　体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传至第 2代 ,将细胞浓度为 5 0× 1 0 6/ml的颌下腺细胞分别接种在孔隙率为 76 .3%、81 .4 %、90 .6 %、95 .8%的胶原海绵支架上。于培养后 1 ,3,5 ,7天取材 ,HE染色、扫描电镜观察及细胞计数检测等 ,评价何种孔隙率的胶原海绵支架适宜颌下腺细胞的增殖与分化。结果　SD鼠颌下腺细胞在孔隙率 76 .3%及 81 .4 %的支架上增殖、分化较慢 ;在孔隙率为 90 .6 %及 95 .8%的支架上生长良好 ,增殖较快 ,细胞周围分泌较多细胞外基质。结论　颌下腺细胞在孔隙率为 90 %～ 95 %的支架材料上 ,形成的细胞支架复合物较佳。     

γ-亚麻酸膀胱灌注治疗大鼠膀胱癌的实验研究

为了探讨γ-亚麻酸诱导大鼠膀胱癌细胞凋亡的机制,我们采用γ-亚麻酸对膀胱癌荷瘤大鼠行膀胱灌注,观察灌注前后肿瘤细胞中丙二醛(MDA)浓度的变化,增殖细胞核抗原(PCNA)以及Fas和FasL的表达情况,现报告如下. 材料与方法 8～10周龄SPF级雌性SD大鼠60只,体质量250～300 g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供.应用N-甲基亚硝基脲(MNU,美国Sigma公司)膀胱灌注,9周后诱导出大鼠膀胱癌动物模型[1].1％戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉,手术切取部分膀胱癌组织,缝合膀胱.术后1周,60只大鼠随机分为2组,每组30只.实验组:膀胱灌注浓度为2.5 mg/ml的γ-亚麻酸(美国Sigma公司),每只每次用量0.4 ml(1mg/次),保留2h.隔日1次,共3次.     

人肝细胞生长因子修饰的BMSCs对大鼠同种异体肝移植免疫排斥的影响

目的观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)修饰的BMSCs对大鼠同种异体肝移植后免疫排斥反应的影响,探讨其诱导免疫耐受的机制。方法 3～4周龄清洁级雄性SD大鼠8只,体重75～85 g,用于分离培养BMSCs;成年清洁级雄性SD大鼠64只,体重200～250 g,作为供体;成年清洁级雄性Wistar大鼠64只,体重230～280 g,作为受体。建立稳定的同种异体肝移植动物模型并随机分为4组(n=16),A、B、C、D组分别立即经门静脉注入1 mL生理盐水、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs/绿色荧光蛋白、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs/hHGF。术后作实验动物生存曲线分析;术后7 d检测实验动物肝功能,并取肝脏组织行病理组织学观察,RT-PCR检测肝组织内hHGF mRNA表达,ELISA法检测血清中hHGF、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ细胞因子的表达,TUNEL法检测肝组织内细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在肝组织内的表达。结果 D组生存时间显著高于A、B、C组(P<0.01);B、C组生存时间明显高于A组(P<0.01),但B、C组间生存时间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR示检测D组肝组织内有hHGF mRNA表达,ELISA检测血清中hHGF水平达(6.2±1.0)ng/mL。相比B、C组,D组疗效更显著,肝功能明显改善,病理学无急性排斥反应或仅为轻度;IL-2、IFN-γ水平降低,IL-4、IL-10水平升高,细胞凋亡明显减少,PCNA表达显著升高,除IL-4水平比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过门静脉输注BMSCs/hHGF至大鼠同种异体肝移植模型能成功诱导免疫耐受。与单纯应用BMSCs相比,BMSCs/hHGF在移植肝局部形成高浓度hHGF免疫抑制微环境,能更显著抑制急性排斥反应,延长移植受体存活时间。BMSCs/hHGF的免疫抑制作用与诱导Th1细胞向Th2细胞偏移、减少肝细胞凋亡、促进肝细胞增殖有关。     

白细胞介素 - 1β对体外培养及在体脊神经节感觉神经元的作用

目的研究白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）对体外培养大鼠背根神经节感觉神经元的作用,及其对周围神经损伤后脊神经节感觉神经元的保护作用。方法(1)取乳鼠背根神经节行体外培养,培养基中分别加入IL-1β、PBS,培养48h后于相差显微镜下观察神经元的生长情况,MTT法测定神经元的活性。(2)Wistar大鼠20只,按手术先后顺序随机分成2组。切断右侧坐骨神经后用硅胶管套接神经的近端,管内分别注入1ng/ml的IL-1β(实验组10只大鼠)和PBS液15μl(对照组10只大鼠)。术后2周取材,用图像分析系统测定神经元存活数目、胞体的直径和面积。结果(1)两组间MTT值的差异,有非常显著性意义（t=9.403,P＜0.01)。(2)两组损伤侧脊神经节感觉神经元存活率的差异有非常显著性意义（t=3.932,P＜0.01)。(3)对照组损伤侧与正常侧神经元胞体的直径和面积,两者差异有非常显著性意义(t=9.188、8.379,P＜0.01);而实验组损伤侧与正常侧相比,两者差异无显著性意义(t=0.832、0.598,P＞0.05)。结论IL-1β可明显促进体外培养的背根神经节感觉神经元的存活。外源性IL-1β对周围神经损伤后脊神经节内感觉神经元具有保护作用。     

在继发性肝癌的实验模型中肿瘤S期活力、核苷酸参数和RNA值在肝动脉闭塞后的变化

人体和实验动物原发性和继发性肝癌的血供主要来自肝动脉,间歇阻断肝动脉1/2～2小时已用作有效的治疗方法,取Wistar雄鼠作肝动脉阻断后的分子生物学观察.将含1.0×10~6二甲基肼诱发的结肠癌活细胞混悬液直接种植至动物的肝左外侧叶,5天后在肝动脉周围置微阻断器,并结扎输入肝脏的侧支循环,取4只鼠作对照,次日开始阻断肝动脉,计30分钟、60分钟和120分钟,每组各4只鼠;测定肿瘤组织 RNA(mg/mg DNA)和各种核苷酸(nmol/mg DNA),如尿苷三磷酸(UTP)、鸟苷三磷酸(GTP)、尿苷二磷酸(UDP)、腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)和辅酶1(NAD).在实验二中,观察再灌流后的变化,取5只鼠作为对照,阻断30分钟后复流2小时(5只鼠)、阻断2小时(5只鼠)、阻断2小时后复流2小时(2只鼠)、阻断2小时后复流22小时(6只鼠)和阻断2小时后复流40小时(2只鼠),分别作实验一的各项测定.     

小鼠成体肝脏干细胞体外培养模型的建立

目的 观察正常成体小鼠肝细胞的增殖能力和分化潜能,分离成体小鼠肝脏内可能存在的干细胞或祖细胞,建立细胞培养模型.方法 应用改良的Seglen二步法灌注和离心分离肝脏细胞,用含血清的改良DMEM培养基进行培养,持续观察超过60 d.应用免疫荧光技术对肝细胞及其形成的克隆进行Albumin、AFP和CKl9染色.结果 部分肝脏细胞培养第2～3天后活化,迅速增殖并形成细胞克隆,培养30 d后克隆内出现类似成熟的肝细胞,细胞克隆持续扩增超过60d.该类细胞培养第1天强阳性表达肝细胞标记物Albumin,培养第5天细胞克隆开始表达肝脏干细胞标记物AFP,第55天表达胆管细胞标记物CKl9.结论 在成体小鼠未损伤肝脏内存在一种成体肝脏祖细胞(adult hepatic progenitor cells,AHPCs),该细胞体外培养具有较强的增殖能力,可分化为肝细胞和胆管细胞,并成功建立了AHPCs的体外培养模型.