当归多糖对衰老模型小鼠造血干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨当归多糖(ASP)对衰老小鼠造血十细胞(HSCs) Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 6~8周雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为对照组、模型组和ASP组,每组10只。小鼠scD-半乳糖(D-Gal,120 mg/kg),每天1次,连续42 d,复制衰老小鼠模型;ASP(200 mg/kg)组ip给药,连续35 d。给药结束后第2天,免疫磁珠分离HSCs,衰老β半乳糖昔酶(SA-β-Gal)染色观察衰老HSCs百分率;造血祖细胞混介集落(CFU-Mix)培养检测HSCs形成集落能力;流式细胞术和激光共聚焦检测HSCs中活性氧(ROS)水平;Western blotting检测HSCs胞质β-catenin、胞核β-catenin. GSK-3β、Phospho-GSK-邓和TCF-4蛋自表达。结果与对照组比较,模型组HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平显著增加;胞质β-catenin、胞核p-catenin、Phospho-GSK-3β和TCF-4蛋自表达上调;CFU-Mix形成能力降低;GSK-3β蛋自表达下调。与模型组比较,ASP能显著降低衰老HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平;下调胞质β-catenin、胞核β-catenin、Phospho-GSK-邓和TCF-4蛋自表达;提高CFU-Mix形成能力;上调GSK-邓蛋自表达。结论 ASP能延缓或拮抗D-Gal致小鼠HSCs衰老,其机制可能与 ASP抑制Wnt/β-catenin信号通路过度激活有关。     

当归多糖调控人白血病干细胞衰老的机制研究

目的: 探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)体外诱导人白血病干细胞衰老的相关机制。 方法: 免疫磁性分选法分离人急性髓系白血病患者骨髓白血病干细胞(leukemia stem cells,LSCs);不同质量浓度的当归多糖(20~80 mg·L^-1)体外诱导LSCs 48 h,CCK-8检测LSCs增殖能力;甲基纤维素半固体培养法检测LSCs形成白血病细胞集落(CFU-LC)能力;透射电子显微镜分析细胞超微结构变化;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;qRT-PCR分析LSCs衰老相关基因p53,p21,p16和Rb表达;Western blotting 检测P16,Rb,CDK4和Cyclin E蛋白表达。 结果: 分选后LSCs纯度达(91.15±2.41)%,形态良好。经不同浓度当归多糖作用后,LSCs呈现明显的的浓度依赖性增殖抑制。40 mg·L^-1当归多糖作用LSCs 48 h,其SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高,CFU-LC形成能力下降;超微结构显示细胞线粒体肿胀,溶酶体数量增多,异染色质边集;衰老相关基因p53,p21,p16和Rb表达上调;衰老相关蛋白P16和Rb表达上调, CDK4和Cyclin E表达下调。 结论: 当归多糖在体外能诱导人LSCs衰老,推测其可能机制与当归多糖调控P16-Rb信号通路有关。     

当归多糖对小鼠衰老造血干细胞端粒、端粒酶及P53的影响

目的: 观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSC)端粒长度、端粒酶活性及P53表达的影响,探讨ASP调控HSC衰老的可能机制。 方法: C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组和干预组,衰老组采用X线全身均匀照射,建立小鼠HSC衰老模型;干预组在照射期间给予ASP灌胃;正常组给予NS灌胃。免疫磁珠分离HSC,运用细胞周期分析和β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察HSC衰老生物学变化; Western blot检测P53蛋白表达,Southern blot 和TRAP-PCR分别检测HSC端粒长度和端粒酶活性。 结果: 与正常组比较,X线能显著增加衰老组HSC G₁期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性细胞率及P53蛋白表达;降低端粒长度和端粒酶活性。与衰老组比较,ASP能显著抑制衰老HSC G₁期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性细胞率的增加;下调P53蛋白表达;增加端粒长度和端粒酶活性。 结论: ASP能够拮抗X线诱导的HSC衰老,其作用机制可能与增加端粒长度及端粒酶活性、下调P53蛋白表达有关。     

当归多糖联合阿糖胞苷诱导人白血病KG1α细胞株衰老的实验研究

作者实验室最新研究发现,当归多糖（Angelica sinensis polysaccharides,ASP）对延缓造血干细胞衰老有明确的调控作用。白血病是一种造血干细胞水平的恶性血液肿瘤,ASP对白血病细胞有无调控衰老的作用却未见相关报道。该研究以对数生长期人急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞株KG1α为研究对象,将其分为当归多糖组（ASP组）,阿糖胞苷组（Ara-C组）,当归多糖与阿糖胞苷联合组（ASP+Ara-C组）和对照组,分别加入不同浓度的ASP,Ara-C和ASP+Ara-C,作用不同时间,旨在研究当归多糖联合阿糖胞苷诱导人白血病细胞株KG1α衰老的作用及其相关机制。结果显示,ASP,Ara-C,ASP+Ara-C在体外能明显抑制KG1α细胞增殖,使细胞阻滞于G₀/G₁期;细胞呈现衰老形态学特点;衰老染色阳性细胞率显著增高;并能显著上调衰老相关蛋白P16与RB的表达,ASP+Ara-C组的上述指标更加显著。综上所述,ASP与Ara-C诱导KG1α细胞衰老的机制可能与调控衰老相关蛋白的表达有关,提示ASP与抗肿瘤药物联合用药在白血病治疗中可起到更好作用。     

当归多糖与阿糖胞苷联合注射对人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响

目的:探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响及其相关机制。方法:每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组和当归多糖组、阿糖胞苷组、当归多糖+阿糖胞苷组。从移植K562细胞第31d开始腹腔分别注射当归多糖(200 mg/kg、阿糖胞苷(2.5mg/kg)和当归多糖(200 mg/kg)+阿糖胞苷(2.5 mg/kg),共14d,模型组注射等时等量的生理盐水。药物注射完成第2d,取眼球血检测外周血白细胞总数与分类计数,取股骨测定每只股骨有核细胞(BMMCs)数,取脾脏测定脾指数并将新鲜小块脾制作成10μm冷冻切片,HE和TUNEL染色观察脾脏病理形态学与细胞凋亡情况。取0.04 g脾脏制备10%的组织匀浆,提取各组上清液并检测抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),氧化产物谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的蛋白浓度与炎症因子IL-1β、IL-6水平。结果:与模型组比较,无论是当归多糖、阿糖胞苷单独注射或当归多糖和阿糖胞苷联合用药均能有效降低外周血白细胞总数,降低中性粒细胞百分率,提高淋巴细胞百分率;降低股骨BMMCs数;减少脾指数;白血病细胞对脾浸润减少且凋亡率增加;脾脏抗氧化能力下降得以抑制,表现为GSH-Px与SOD活性升高,氧化产物GSH与MDA降低;炎症因子IL-1β、IL-6水平降低,且联合用药组效果更为明显。结论:当归多糖与阿糖胞苷能减少白血病细胞在脾脏内聚集,促进白血病细胞衰老凋亡,降低白血病细胞对脾结构与功能损伤,减轻脾脏炎症反应,提高脾组织抗氧化能力。     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。⁶⁰Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组:对照组、衰老模型组、Rg₁治疗衰老组、Rg₁延缓衰老组。荧光定量PCR检测受体鼠骨髓细胞Y染色体(Sry基因)表达,确定受体鼠重建造血细胞来源;观察受体鼠存活时间及外周血血象指标的恢复,确定受体鼠造血功能重建情况及Rg₁促进造血恢复情况;造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Sca-1⁺HSC/HPC衰老的生物学特点及Rg₁体内调控Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。结果:雌性受体鼠重建造血细胞来源于雄性供体鼠;连续移植后受体鼠30 d存活率明显降低,外周血象恢复延缓,Sca-1⁺HSC/HPC出现细胞衰老特征:G₀/G₁期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg₁治疗衰老组及Rg₁延缓衰老组受体鼠30 d存活率,WBC,HCT,PLT增高,Sca-1HSC/HPC G₀/G₁期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高。Rg₁延缓衰老组变化较Rg₁治疗衰老组明显。结论:人参皂苷Rg₁在HSC/HPC连续移植过程中具有延缓和治疗Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。Rg₁延缓衰老作用优于Rg₁治疗衰老作用。     

生脉胶囊对5-氟尿嘧啶致小鼠化疗性肠黏膜炎的保护作用研究

[目的]探讨生脉胶囊对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的小鼠结肠黏膜损伤的保护作用。[方法]将20只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、生脉组。除正常组外,其余2组均采用腹腔注射5-FU(25 mg/kg)诱导建立结肠黏膜损伤小鼠模型。正常组和模型组每日灌胃等量蒸馏水,生脉组每日灌胃等量生脉胶囊悬液(350 mg/kg)。每日监测小鼠体质量和腹泻情况;测量小鼠结肠长度;检测小鼠血清中二胺氧化酶(DAO)活性;苏木精-伊红染色法(HE)观察结肠的组织病理变化;免疫组化法检测小鼠结肠黏膜中ki67表达水平;过典酸雪夫氏染色法(PAS)检测小鼠结肠黏膜中杯状细胞数量。[结果]与模型组比较,生脉组腹泻情况得到明显改善;结肠长度显著增加(P＜0.05);血清中DAO活性显著下降(P＜0.01);结肠黏膜结构明显改善;结肠黏膜中ki67表达显著增加(P＜0.000 1);杯状细胞数量明显增加。[结论]生脉胶囊对5-FU诱导的结肠黏膜损伤具有明显的保护作用。     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中抗细胞衰老的作用机制

目的 探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞（HSC/HPC）连续移植中抗细胞衰老的作用机制。方法 免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。经⁶⁰Co γ射线致死剂量辐射的雌性受体小鼠分成4组：对照组、模型组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）治疗给药组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）预防给药组,每天给药1次,连续给药30 d。荧光定量PCR法检测各组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因的表达,Western blotting法检测p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CDK4、CDK2、CyclinD1、Cyclin E蛋白的表达。结果 与模型组比较,各代移植Sca-1⁺HSC/HPC雌性小鼠中,人参皂苷Rg₁治疗给药组及预防给药组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因及p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达下调;CDK4、CDK2、CyclinE蛋白表达上调。人参皂苷Rg₁预防给药组小鼠各项检测指标的改善均优于其治疗给药组。结论 人参皂苷Rg₁可能通过调控p16^INK4a-Rb和p19^Arf-p53-p21^Cip1/Waf1信号转导通路,对Sca-1⁺HSC/HPC连续移植衰老模型发挥拮抗作用。     

当归多糖对D-半乳糖致小鼠肾脏亚急性损伤的保护作用及机制

探讨当归多糖(ASP)对D-半乳糖诱导致小鼠肾脏亚急性损伤的保护作用及机制。雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组10只。模型组:小鼠皮下注射D-半乳糖(120 mg·kg^-1),qd×42;ASP组:从D-半乳糖模型复制的第8天起,腹腔注射ASP(100 mg·kg^-1),qd×35;正常对照组:小鼠皮下注射等时与等量生理盐水。药物注射完成第2天,采外周血检测尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、尿酸(UA)、胱抑素C(Cys-C)含量;取肾脏制备石蜡切片,HE染色观察肾脏组织形态学,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察肾组织中染色阳性细胞相对光密度(ROD),透射电镜观察肾脏超微结构变化;制备肾脏组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)的含量;ELISA方法检测肾脏晚期糖基化终产物(AGEs)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)的含量。结果表明与模型组相比较,ASP组小鼠血清中BUN,Crea,UA,Cys-C,AGEs和8-OH-dG含量显著下降;肾小球数目增多,硬化肾小球减少,肾小囊腔与肾小管管腔扩张不明显;SA-β-Gal染色阳性细胞的相对光密度降低且颗粒小;超微病理呈现肾小球系膜细胞减少,基底膜变薄,足细胞核糖体和粗面内质网明显增多,足细胞次级突起融合减少;SOD与GSH-PX活性显著增加;MDA含量下降。综上所述,当归多糖能拮抗D-半乳糖致小鼠肾脏亚急性损伤,其保护肾脏机制可能与抑制氧化应激损伤有关。     

当归多糖诱导人白血病干细胞衰老与调控端粒系统机制的研究

目的探讨当归多糖(ASP)调控人CD34+CD38-骨髓白血病干细胞(LSC)衰老的端粒与端粒酶机制。方法免疫磁性分选人骨髓CD34+CD38-LSC;CCK-8检测ASP对CD34+CD38-LSC增殖抑制能力;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;混合集落培养(CFU-Mix)检测细胞增殖能力;荧光定量RT-PCR检测端粒酶基因TERT变化;TRAP-PCR检测细胞端粒酶活性;Southern blotting检测细胞端粒长度变化。结果免疫磁性分选后人骨髓CD34+CD38-LSC纯度达(91.15±2.41)%,相差显微镜观察显示细胞形态饱满,透明度高,折光性强。ASP体外诱导CD34+CD38-LSC 48 h,能有效抑制其增殖且呈浓度依赖性(P<0.05),集落形成能力下降(P<0.01)。40μg/mL ASP作用CD34+CD38-LSC 48 h,SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高(P<0.01);CD34+CD38-LSC端粒酶基因TERT表达水平下降(P<0.05);端粒酶活性下降(P<0.05);端粒长度缩短(P<0.05)。结论 ASP在体外可能通过调控细胞端粒系统诱导人骨髓CD34+CD38-LSC衰老。     

多汁乳菇人工繁育及抗肿瘤活性

目的:人工繁育了多汁乳菇,提取其子实体多糖,对其抗肿瘤活性进行研究。方法:采用热水浸提法提取多汁乳菇子实体多糖,取培养至对数生长期的K562细胞(细胞密度为8.0×108/L)于96微孔板中,分别加入多汁乳菇多糖浓度为0,5,10,20,40,80,100 mg·L-1,分别培养12,24,48,72 h,每组处理重复3次,采用MTT比色法,检测多汁乳菇多糖抑制K562细胞活性,采用扫描电镜以及琼脂糖凝胶电泳方法,研究促进癌细胞凋亡。结果:成功繁育了多汁乳菇,胡萝卜,松根能刺激菌丝生长,第3年开始出菇。多汁乳菇多糖具有一定的抗肿瘤活性,多汁乳菇多糖浓度越高,抑制作用越显著。当其浓度为100 mg·L-1,作用时间为72 h时,达到最大的抑制率为88.2%。多汁乳菇多糖促进K562细胞凋亡的扫描电镜以及DNA ladder进行了验证,发现多汁乳菇多糖促进癌细胞凋亡,细胞形态收缩,微绒毛显著减少,同时出现了特征性的DNA ladder,并且随着多汁乳菇多糖浓度增加,产生较多的DNA ladder,诱导了细胞凋亡。结论:多汁乳菇可作为一种潜在的食用菌和药用菌而开发利用。     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。     

毛鸡骨草含药血清体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的:观察毛鸡骨草(Abrus mollis)含药血清体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采取中药血清药理实验方法,以HepG2.2.15细胞为研究模型,将毛鸡骨草含药血清加入HepG2.2.15细胞培养液中培养,分别在72 h和144 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞株表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBV DNA复制的影响。结果:毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的表达和HBV DNA复制都有不同程度的抑制,以给药剂量为30 g·kg-1·d-1的毛鸡骨草含药血清组作用144 h对HBsAg的抑制率和对HBV DNA复制的抑制率最明显,抑制率分别为34.4%和41.7%。结论:毛鸡骨草在体外有一定的抗HBV作用。     

益母草的化学成分及其抗人白血病K562细胞活性研究

目的:研究益母草的化学成分,评价益母草化学成分体外抗白血病K562细胞活性.方法:运用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶sephadex LH-20、聚酰胺柱色谱和大孔树脂等色谱方法对益母草化学成分进行分离纯化,利用核磁共振技术鉴定了它们的化学结构.通过测试体外最低抑制浓度评价有关物质的抗肿瘤活性.结果:分离、纯化并鉴定了8个化合物,分别为槲皮素-3-O-洋槐双糖苷(quercetin 3-O-robinobioside,1),芦丁(rutin,2),异槲皮苷(isoquercitrin,3),金丝桃苷(hyperoside,4),槲皮素(quercetin,5),芹菜素(apigenin,6),芫花素(genkwanin,7)和苯甲酸(benzoic.acid,8).结论:化合物1,3,4,8为首次从该属植物中分离得到,化合物2,5-7首次从该种植物中分离得到.化合物1-6,8显示出不同程度的抑制人白血病K562细胞活性.     

狼毒提取液对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞体内转移能力的影响

目的:探讨狼毒提取液对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞转移能力的影响。方法:分别以荷B16小鼠模型和小鼠恶性黑色素瘤B16细胞实验转移为模型,C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、狼毒15.0,20.0 g·kg-1组及环磷酰胺组,检测ip狼毒提取液(EFE)对小鼠B16细胞移植瘤生长和肺转移的影响。免疫组化法分析狼毒提取液对荷B16小鼠移植瘤中抑癌转移因子人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)及促转移因子蛋白激酶B(p-Akt)表达水平的影响。结果:狼毒提取液明显抑制B16细胞的生长,并能显著抑制其肺转移。ip狼毒提取液15.0,20.0 g·kg-1给药14 d,对B16生长的抑制率分别为52.9%,63.6%(环磷酰胺的抑制率为59.5%);对B16细胞肺转移的抑制率分别为37.4%,63.5%(环磷酰胺的抑制率为56.8%)。免疫组织化学法检测结果显示,狼毒提取液组胞质中p-Akt褐黄色颗粒较空白对照组少见,而PTEN胞浆着黄色则较空白对照组多见。结论:狼毒提取液的抗癌转移效果可能部分与其下调促转移因子p-Akt,上调抑癌转移因子PTEN的表达有关。     

木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究

目的探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxycinnamaldehyde,PHD)对黑素瘤B16细胞体内生长的抑制作用。方法应用MTS法检测PHD对B16细胞增殖的影响,倒置相差显微镜下观察形态变化。构建黑素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型,分为2组:治疗组小鼠ip 2 mg/kg PHD,模型组注射相同体积的生理盐水。观察2组小鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中酪氨酸酶(Tyr)、S-100B、MMP-9、p-P38和p-ERK蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法(HE)分析小鼠肝和肺组织的形态学变化。结果 PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的生长抑制作用(P0.01)。20μmol/L PHD处理B16细胞48 h后,细胞数量减少,呈典型分化形态。PHD治疗组的肿瘤体积和质量均明显低于模型组(P0.01)。与模型组相比,治疗组小鼠肿瘤组织中Tyr和p-P38蛋白的表达水平升高,MMP-9、S-100B和p-ERK蛋白表达水平则明显降低。治疗组小鼠肝和肺无明显组织形态学改变,模型组小鼠肺部有肿瘤转移。结论 PHD对小鼠体内黑素移植瘤的生长具有显著抑制作用。     

三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞株的抑制作用

目的:考察三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞AGS体外增殖的影响.方法:清洁级小鼠随机分为5组:三叶青水提物高、中、低(20,10,5 g ·kg-1)剂量组、环磷酰胺阳性对照( CTX,5 g·kg-1)组及阴性对照组(蒸馏水).各组均ig给药,每次20 mL· kg-1,每天2次,连续给药3d,最后1次给药后1h断头取血,4℃静置4h,3 000 r ·min-1离心20 min,分离血清,56℃灭活30 min后,用0.22 μm的滤膜过滤除菌,-20℃保存备用.对数生长期的AGS细胞经0.25％胰蛋白酶消化后,配成2.5×104/L的细胞悬液接种于96孔培养板,培养24 h后,加入不同浓度的三叶青水提物溶液及其含药血清,作用48 h后,采用MTT比色法在570 nm波长下测定A,观察不同浓度三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞的抑制作用.结果:1 ～40 g·L-1三叶青水提物对AGS细胞有显著的抑制作用(P＜0.01),IC50为13.15 g·L-1;三叶青水提物含药血清高、中、低(20,10,5 g·kg-1)剂量组也可显著地抑制AGS肿瘤细胞的增殖(P＜0.01),IC50为70.06 g·L-1.二者均呈现出剂量依赖性.结论:三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞均有较强抑制作用.     

宽叶荨麻中化学成分对MH7A细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨从具有抗类风湿关节炎作用的宽叶荨麻中分离到的9个化学成分对人类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响.方法:分别以从宽叶荨麻中分离得到的9个化学成分(0～400 mg·L-1):RoseosideⅡ(C1),(6S,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇-β-D-葡萄糖苷(C2),(6R,9R)-3-氧-α-紫罗兰醇β-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(C3),芹菜素-6,8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(C4),木樨草素-7-O-新橙皮糖苷(C5),木樨草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C6),芦丁(C7),异落叶松脂素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C8),5α,6β-二羟基-胡萝卜苷(C9)处理MH7A细胞(2.5×104/mL),24 h后采用MTT法检测细胞增殖率,并通过测定DNA片段化检测细胞凋亡率.结果:在被检测的9个化合物中,化合物5α,6β-二羟基-胡萝卜苷显示了较强的抑制MH7A细胞增殖的作用,其IC50值为140 mg·L-1.DNA片段化分析结果表明,其能显著诱导MH7A细胞凋亡.结论:宽叶荨麻中化学成分5α,6β-二羟基-胡萝卜苷能够显著抑制MH7A细胞增殖并能诱导MH7A细胞凋亡.     

木鳖子对羟基桂皮醛对黑素瘤B16细胞分化的影响及其机制

目的 探讨木鳖子Momrodica cochinchinensis中单体化合物,尤其是对羟基桂皮醛诱导黑素瘤B16细胞分化的作用.方法 以对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol处理B16细胞48 h后,磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞生长抑制率.以对羟基桂皮醛处理B16细胞24、48、72 h后,倒置相差显微镜和经瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;比色法检测给药后48 h B16细胞中黑色素量和酪氨酸酶活性;RT-PCR法检测酪氨酸酶基因表达.结果 5个单体化合物对B16细胞生长均具有抑制作用,其中对羟基桂皮醛对细胞生长的抑制作用最为明显,且具有浓度和时间相关性.对羟基桂皮醛处理B16细胞48 h后,经染色观察到细胞呈树突样生长,表现为典型的细胞分化形态特征,黑色素的量显著增加,酪氨酸酶活性显著增强,上述作用与对照组相比差异显著(P＜0.05).以对羟基桂皮醛处理B16细胞6、12、24h后,酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白-1和酪氨酸相关蛋白-2的基因表达明显上调(P＜0.01),且呈时间相关性.结论 对羟基桂皮醛能够抑制黑素瘤B16细胞增殖,其机制与诱导B16细胞分化相关.     

黄芪和当归配伍对环磷酰胺所致骨髓造血功能抑制小鼠造血功能的影响

目的探讨黄芪和当归不同比例配伍对环磷酰胺(CTX)所致骨髓造血功能抑制小鼠造血功能的影响,分析二者配伍的相互作用。方法采用CTX ip复制小鼠骨髓造血功能抑制模型,以重组人粒细胞集落刺激因子(NG-CSF)作为阳性对照药物,药物组分别ig给予当归、黄芪、当归一黄芪不同比例(10:1、5:1、2.5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10)配伍的提取物。测定外周血象,血清造血生长因子粒单系集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)的量,计数骨髓有核细胞数(BMNC),测定骨髓造血组织面积及脾指数(SI)。以综合指数法整合所有检测指标,采用多重线性回归分析法分析黄芪、当归2种药物间的相互作用。结果在连续注射CTX后的5~7d,小鼠外周血象显著降低,同时伴有血清GM-CSF、TPO量降低,骨髓BMNC减少,SI升高,骨髓造血组织面积减少。单用黄芪对外周血象、血清造血生长因子(HGF)量、骨髓造血组织面积和BMNC均无显著影响。单用当归可升高外周血中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)数,增加骨髓造血组织面积,但能不增加血清HGF的量和BMNC。黄芪-当归(5:1、2.5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10)配伍可升高外周血WBC、RBC、PLT数量,增加HGF的量、BMNC数量和骨髓造血组织面积,降低SI。综合效应分析表明,黄芪-当归1:1、1:2.5、1:5比例配伍时发挥促造血的作用最强。相互作用分析表明,黄芪-当归配伍后,当归发挥促造血作用的重要性大于黄芪,黄芪和当归配伍时其交互作用对药物效应的发挥产生了不可忽视的正面影响,二者配伍对促进造血具有增效作用。结论黄芪-当归配伍具有促进造血的作用,当归的促造血作用大于黄芪,黄芪配伍当归后对促进造血具有协同增效作用,黄芪与当归以1:1、1:2.5、1:5比例配伍时的促造血作用为佳。